العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات بوساطة الكركمينويد على نموذج الفئران لداء المبيضات الفموي

Summary

يصف هذا البروتوكول تطبيق العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) في نموذج الفئران لداء المبيضات الفموي. تم إجراء aPDT باستخدام خليط قابل للذوبان في الماء من الكركمينويدات وضوء LED الأزرق.

Abstract

تم التحقيق على نطاق واسع في العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) في المختبر ، والنماذج الحيوانية قبل السريرية للعدوى مناسبة لتقييم العلاجات البديلة قبل التجارب السريرية. تصف هذه الدراسة فعالية aPDT في نموذج الفئران لداء المبيضات الفموي. تم تثبيط أربعين فأرا بحقن بريدنيزولون تحت الجلد ، وتم تلقيح ألسنتهم باستخدام مسحة فموية غارقة مسبقا في تعليق خلية C. albicans . تم إعطاء التتراسيكلين عن طريق مياه الشرب أثناء التجربة. بعد خمسة أيام من التلقيح الفطري ، تم توزيع الفئران بشكل عشوائي إلى ثماني مجموعات. تم تضمين مجموعة تاسعة من الفئران غير المصابة غير المعالجة كعنصر تحكم سلبي (ن = 5). تم اختبار ثلاثة تركيزات (20 ميكرومتر و 40 ميكرومتر و 80 ميكرومتر) من خليط من الكركمينويدات باستخدام ضوء LED أزرق (89.2 ميغاواط / سم² ؛ ~ 455 نانومتر) وبدون ضوء (مجموعات C + L + و C + L- ، على التوالي). تم تقييم الضوء وحده (C-L +) ، وعدم العلاج (C-L-) ، غير المصابة بالعدوى كعناصر تحكم. تم تحليل البيانات باستخدام اختبارات ويلش ANOVA و Games-Howell (α = 0.05). تم تأسيس داء المبيضات الفموي في جميع المصابة وتصوره مجهريا من خلال وجود بقع بيضاء مميزة أو أغشية كاذبة على ظهر الألسنة. أكدت المقاطع النسيجية المرضية وجود كبير للخميرة والخيوط المقتصرة على الطبقة الكيراتينية للظهارة في مجموعة C-L ، وانخفض وجود الخلايا الفطرية بصريا في الصور التي تم الحصول عليها من الفئران المعرضة ل aPDT إما مع 40 ميكرومتر أو 80 ميكرومتر curcuminoids. aPDT بوساطة 80 ميكرومتر كوركومينويدس عززت انخفاض 2.47 سجل₁₀ في عدد المستعمرات مقارنة بتلك الموجودة في مجموعة C-L- (p = 0.008). لم تظهر جميع المجموعات الأخرى أي انخفاض ذي دلالة إحصائية في عدد المستعمرات ، بما في ذلك مجموعات التحسس الضوئي (C + L-) أو الضوء وحده (C-L +). قلل aPDT بوساطة الكركمينو من الحمل الفطري من ألسنة الفئران.

Introduction

داء المبيضات الفموي (OC) هو العدوى الفطرية الرئيسية في تجويف الفم. وهو ناتج عن فرط نمو المبيضات النيابة. تشمل العوامل المؤهبة ل OC ضعف الغدد الصماء ، واستخدام المضادات الحيوية واسعة الطيف ، والعلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي ، ونقص التغذية ، وجفاف الفم (انخفاض تدفق اللعاب) ، واستخدام أطقم الأسنان ، وسوء النظافة ، وخاصة كبت المناعة¹. من بين أنواع المبيضات ، المبيضات البيض هي الأكثر انتشارا وضراوة. تم العثور عليها كنوع متعايش في جسم الإنسان وكعامل ممرض انتهازي. C. albicans لديه القدرة على تغيير مورفولوجيته من الخمائر المتعايشة (الأريمية) إلى خيوط مسببة للأمراض (خيوط وخيوط كاذبة)². يمكن ل....

Protocol

تمت الموافقة على بروتوكول البحث لاستخدام الفئران من قبل لجنة أخلاقيات استخدام (رقم الحالة 05/2008 و 09/2020) في كلية طب الأسنان ، أراراكورا ، UNESP. تم استخدام C. albicans (ATCC 90028) كسلالة مرجعية. تم استخدام إناث الفئران السويسرية البالغة من العمر ستة أسابيع (ن = 45) ، مع نطاق كتلة الجسم من 20-30 جم ، في هذه الدراسة. تم توفير من قبل جامعة ولاية ساو باولو ، UNESP ، بوتوكاتو.

1. إعداد PS واختيار مصدر الضوء ل aPDT

1. قم بإعداد PS وفقا لمواصفات المادة المراد اختبارها.
   ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم استخدام خليط قابل للذوبان في الماء من الكركمينويدات (خليط الملح القابل للذوبان في الماء¹²

النتائج

أظهر نموذج الفئران من OC بقع بيضاء نموذجية وأغشية كاذبة على لسان جميع الفئران المصابة (الشكل 4A). أكدت C. albicans المستعادة من C-L- استعمار الأنسجة بواسطة هذه الكائنات الحية الدقيقة (تراوحت القيم من 1.62 × 10⁴ إلى 4.80 × 10⁵ CFU / mL). كما هو متوقع ، لم تظهر من مجموعة NCtr أي تغيرا.......

Discussion

ارتبطت C. albicans بالتهابات الفم والمريء لدى الأفراد الذين يعانون من نقص المناعة ، ومرض السكري ، والاستخدام المطول للمضادات الحيوية ، وسوء نظافة الفم^1،3. تتطلب دراسة الأمراض المعدية البشرية تحقيقات في المختبر وفي الجسم الحي قبل أن يتم تصميم التج?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
C. albicans	ATCC (Rockville, Md, USA)	90028	Used to prepare the Candida inoculum
Centrifuge	Eppendorf Centrifuge 5804/5804R,B. Braun, Melsungen, Hesse, Germany	022628146 (NA)	Used to prepare the Candida inoculum
Chlorpromazine chloride 2 mg/mL	Compounding pharmacy, Araraquara, SP, Brazil	-	Used to sedate animals during candida inoculation
Curcumin-based water-soluble salt	PDTPharma, Cravinhos, Brazil	-	Consisting of 53.4% of natural curcumin, and  46.6% of other curcuminoids (demethoxycurcumin and bis-demethoxycurcumin). Prepared in water and N-MethylD-Glucamine (final average molecular weight of 730.32 g.mol−1)
Digital colony counter	CP 600 Plus, Phoenix Ind Com Equipamentos Científicos Ltda, Araraquara, SP, Brazil	-	Used to count colonies on agar plates
Extruded mouse chow	Benelab food, Industry Qualy Animal Nutrition and Commerce Ltda., Lindóia, São Paulo State, Brazil.	-	Used for the feeding of the mice
Ketamine Hydrochloride 10%	Ketamina Agener, União Química Farmacêutica Nacional S/A, Embu-Guaçu, SP, Brazil	-	Used to anesthetize animals before  treatments and for euthanasia
Light-emitting diode handpiece (prototype)	Instituto de Física de São Carlos, University of São Paulo, São Carlos, SP, Brazil	-	Fabricated with LXHL-PR09, Luxeon III Emitter, Lumileds Lighting, San Jose, California, USA
Methylprednisolone acetate 40 mg	DEPO-MEDROL, Pfizer, New York	-	Used as an immunosuppressant
Microtome	Leica Microsystems, Bannockburn, IL, USA	SM2500	Used to cut the serial sections of the tongues
Propylene boxes (cages housing) H13 x L20 x D30 cm	Bonther Equipaments, Ribeirão Preto, SP, Brazil	-	Used to keep the animals throughout  the experimental period
Sabouraud Dextrose Agar with Chloramphenicol	HiMedia, Mumbai, India	MM1067-500G	Culture medium for yeast growth (agar)
Spectrophotometer	Spectrophotometer Kasvi K37-VIS , São José dos Pinhais, PR, Brazil	K37-VIS	Used to standardize the inoculum concentration
Tetracycline hydrochloride	Compounding pharmacy, Araraquara, SP, Brazil	-	Antibiotic given to induce oral dysbiosis
Wood shavings	J.R. Wood Shavings, Comerce of Sawdust Ltda., Conchal, São Paulo State, Brazil	-	Used for floor covering inside the housing boxes
Xylazine 2%	Calmiun, União Química Farmacêutica Nacional S/A, Embu-Guaçu, SP, Brazil	-	Used in combination with ketamine for anesthesia
Yeast Nitrogen Broth	Difco, InterLab, Detroit, MI, USA	DF0919-07-3	Culture medium for yeast growth (broth)
Yeast Peptone Dextrose Broth	NutriSelect Basic, Sigma Aldrich	Y1375	Culture medium for maintaining the strains at -80°C and grow