JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا البروتوكول تطبيق العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) في نموذج الفئران لداء المبيضات الفموي. تم إجراء aPDT باستخدام خليط قابل للذوبان في الماء من الكركمينويدات وضوء LED الأزرق.

Abstract

تم التحقيق على نطاق واسع في العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) في المختبر ، والنماذج الحيوانية قبل السريرية للعدوى مناسبة لتقييم العلاجات البديلة قبل التجارب السريرية. تصف هذه الدراسة فعالية aPDT في نموذج الفئران لداء المبيضات الفموي. تم تثبيط أربعين فأرا بحقن بريدنيزولون تحت الجلد ، وتم تلقيح ألسنتهم باستخدام مسحة فموية غارقة مسبقا في تعليق خلية C. albicans . تم إعطاء التتراسيكلين عن طريق مياه الشرب أثناء التجربة. بعد خمسة أيام من التلقيح الفطري ، تم توزيع الفئران بشكل عشوائي إلى ثماني مجموعات. تم تضمين مجموعة تاسعة من الفئران غير المصابة غير المعالجة كعنصر تحكم سلبي (ن = 5). تم اختبار ثلاثة تركيزات (20 ميكرومتر و 40 ميكرومتر و 80 ميكرومتر) من خليط من الكركمينويدات باستخدام ضوء LED أزرق (89.2 ميغاواط / سم2 ؛ ~ 455 نانومتر) وبدون ضوء (مجموعات C + L + و C + L- ، على التوالي). تم تقييم الضوء وحده (C-L +) ، وعدم العلاج (C-L-) ، غير المصابة بالعدوى كعناصر تحكم. تم تحليل البيانات باستخدام اختبارات ويلش ANOVA و Games-Howell (α = 0.05). تم تأسيس داء المبيضات الفموي في جميع المصابة وتصوره مجهريا من خلال وجود بقع بيضاء مميزة أو أغشية كاذبة على ظهر الألسنة. أكدت المقاطع النسيجية المرضية وجود كبير للخميرة والخيوط المقتصرة على الطبقة الكيراتينية للظهارة في مجموعة C-L ، وانخفض وجود الخلايا الفطرية بصريا في الصور التي تم الحصول عليها من الفئران المعرضة ل aPDT إما مع 40 ميكرومتر أو 80 ميكرومتر curcuminoids. aPDT بوساطة 80 ميكرومتر كوركومينويدس عززت انخفاض 2.47 سجل10 في عدد المستعمرات مقارنة بتلك الموجودة في مجموعة C-L- (p = 0.008). لم تظهر جميع المجموعات الأخرى أي انخفاض ذي دلالة إحصائية في عدد المستعمرات ، بما في ذلك مجموعات التحسس الضوئي (C + L-) أو الضوء وحده (C-L +). قلل aPDT بوساطة الكركمينو من الحمل الفطري من ألسنة الفئران.

Introduction

داء المبيضات الفموي (OC) هو العدوى الفطرية الرئيسية في تجويف الفم. وهو ناتج عن فرط نمو المبيضات النيابة. تشمل العوامل المؤهبة ل OC ضعف الغدد الصماء ، واستخدام المضادات الحيوية واسعة الطيف ، والعلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي ، ونقص التغذية ، وجفاف الفم (انخفاض تدفق اللعاب) ، واستخدام أطقم الأسنان ، وسوء النظافة ، وخاصة كبت المناعة1. من بين أنواع المبيضات ، المبيضات البيض هي الأكثر انتشارا وضراوة. تم العثور عليها كنوع متعايش في جسم الإنسان وكعامل ممرض انتهازي. C. albicans لديه القدرة على تغيير مورفولوجيته من الخمائر المتعايشة (الأريمية) إلى خيوط مسببة للأمراض (خيوط وخيوط كاذبة)2. يمكن للأشكال الخيطية ، وخاصة الخيوط ، أن تغزو ظهارة المضيف عن طريق الاختراق الخلوي أو الاختراق النشط ، مما يسبب العدوى3. تشمل عوامل الفوعة الأخرى ل C. albicans الالتصاق ، وتكوين الأغشية الحيوية ، وإفراز الإنزيمات والسموم المحللة للدهون والمائية ، مثل الليباز ، والفوسفوليباز ، والبروتينات ، والمبيضات4.

تتضمن علاجات OC استخدام العوامل المضادة للفطريات ، وخاصة البولينات الموضعية والأزول (النيستاتين والميكونازول)5. ومع ذلك ، فإنها تظهر فقط فعالية قصيرة الأجل ، والتكرار متكرر. بالإضافة إلى ذلك ، أدى الإفراط في استخدام مضادات الفطريات إلى ظهور مشكلة تطور المقاومة المضادة للفطريات وانتشارها6. لذلك ، هناك حاجة إلى علاجات بديلة ، مثل العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) ، والذي يجمع بين محسس ضوئي (PS) وضوء بطول موجي مناسب (مثل امتصاص PS) في وجود الأكسجين. ترتبط PSS بالخلايا أو تمتصها ، وعندما يتم تنشيطها بواسطة الضوء ، تنتج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) السامة للخلايا الحساسة7.

في aPDT ، أحد المحسسات الضوئية (PSs) المستخدمة هو الكركمين (CUR) ، وهو مركب طبيعي مستخرج من جذور نبات الكركم (Curcuma longa L.) يمتلك الكركمين العديد من السمات العلاجية ، بما في ذلك القدرات المضادة للالتهابات ومضادات الأكسدة والمضادة للسرطانومضادات الميكروبات 8,9. وجد تحقيق سابق أن aPDT باستخدام CUR قلل بشكل فعال من C. albicans في نموذج الفئران من داء المبيضات الفموي دون التسبب في أي ضرر لأنسجة المضيف10. CUR هو الكركمين الرئيسي المستخرج من الكركم ، ولكن توجد أيضا بوليفينول أخرى ، مثل ديميثوكسيكوركومين وثنائي ديميثوكسي كوركومين ، في هذا النبات. أظهر aPDT بوساطة الكركمينو نشاطا مضادا للبكتيريا ضد الأغشية الحيوية للمكورات العنقودية الذهبية المزروعة في القسطرة11. ومع ذلك ، على حد علمنا ، لا يزال نشاطه المضاد للفطريات ضد C. albicans غير واضح. لذلك ، في هذه الدراسة ، قمنا بتقييم aPDT بوساطة ملح الكركمينويد ضد C. albicans في نموذج الفئران من OC.

Protocol

تمت الموافقة على بروتوكول البحث لاستخدام الفئران من قبل لجنة أخلاقيات استخدام (رقم الحالة 05/2008 و 09/2020) في كلية طب الأسنان ، أراراكورا ، UNESP. تم استخدام C. albicans (ATCC 90028) كسلالة مرجعية. تم استخدام إناث الفئران السويسرية البالغة من العمر ستة أسابيع (ن = 45) ، مع نطاق كتلة الجسم من 20-30 جم ، في هذه الدراسة. تم توفير من قبل جامعة ولاية ساو باولو ، UNESP ، بوتوكاتو.

1. إعداد PS واختيار مصدر الضوء ل aPDT

  1. قم بإعداد PS وفقا لمواصفات المادة المراد اختبارها.
    ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم استخدام خليط قابل للذوبان في الماء من الكركمينويدات (خليط الملح القابل للذوبان في الماء12 القائم على CUR) باعتباره PS (انظر جدول المواد والشكل 1). تم تحضير التخفيفات عند 20 ميكرومتر و 40 ميكرومتر و 80 ميكرومتر (15.6 و 29.2 و 58.4 مجم / لتر على التوالي) في ماء فائق النقاء مباشرة قبل الاستخدام وحفظت عند 5 درجات مئوية.
  2. حدد جهازا ضوئيا بطول موجي مناسب (مثل طول امتصاص PS) قادر على إضاءة الهدف الحساس للضوء بالكامل بشكل موحد وفي وقت واحد دون تسخين الأنسجة.
    ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم استخدام قبضة تحتوي على صمام ثنائي باعث للضوء (LED ، انظر جدول المواد) ، تم تصميمه في معهد Física de São Carlos (جامعة ساو باولو ، ساو كارلوس ، SP ، البرازيل). كانت طاقة الخرج الناتجة عن الضوء 89.2 ميغاواط / سم2 بطول موجي أزرق يبلغ حوالي 455 نانومتر.

2. إعداد لقاح C. albicans

  1. احتفظ بالسلالة المرجعية C. albicans (ATCC 90028) في الخميرة والببتون والجلوكوز (YEPD ، انظر جدول المواد) مع 50٪ من الجلسرين عند -80 درجة مئوية حتى الاستخدام.
  2. قم بإذابة السلالة المجمدة في درجة حرارة الغرفة ، وانشر حصة 100 ميكرولتر على طبق بتري مع أجار سكر العنب Sabouraud (SDA) مع الكلورامفينيكول (انظر جدول المواد) ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
  3. انقل خمس مستعمرات إلى 10 مل من مرق نيتروجين الخميرة مع وسط جلوكوز 2٪ (YNBg) وتنمو هوائيا عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة.
  4. تمييع ثقافة الخميرة في YNBg الطازجة (1:10) واحتضانها هوائيا عند 37 درجة مئوية حتى تصل الكثافة البصرية إلى مرحلة منتصف النمو اللوغاريتمي.
    ملاحظة: توحيد منحنى النمو الميكروبي لكل مختبر سابقا. في البحث الحالي ، سمح للمزارع بالتحضين لمدة 8 ساعات تقريبا ، حتى وصلت إلى مرحلة منتصف اللوغاريتم للنمو كما هو موضح في الكثافة الضوئية عند 540 نانومتر (OD540) ، بقيمة متوسطة تبلغ 0.536 ± 0.062 وحدة تعسفية (متوسط ± الانحراف المعياري [SD]).
  5. قم بطرد مركزي للمزرعة عند 5000 × جم في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق ، وتخلص من المادة الطافية واغسل الحبيبات مرتين بنفس الحجم من المحلول الملحي المعقم المخزن بالفوسفات (PBS ؛ 0.136 M NaCl ، 2 mM KCl ، 1 mM KH2PO4 ، 10 mM Na2HPO4 ، pH 7.4).
  6. استخدم حصص 100 ميكرولتر لأداء أربعة تخفيفات متسلسلة 10 أضعاف في PBS ، ونشر التخفيفات على لوحات SDA ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة لعدد المستعمرات. كمعيار ، يتم استخدام المعلقات الفطرية بتركيزات حوالي 4.5 × 107 وحدات تشكيل مستعمرة لكل مليلتر (CFU / mL)].

3. تحريض OC في الفئران

ملاحظة: تم وصف المنهجية التالية سابقا بواسطة Takakura et al.13 وتم استنساخها من قبل مجموعتنا10،14 ، مع بعض التعديلات.

  1. توزيع الفئران عشوائيا في تسع مجموعات (ن = 5) ، المقابلة لنفس العدد من العلاجات (الملف التكميلي 1).
    ملاحظة: يجب أن يكون تجويف الفم للفئران سلبيا لنمو المبيضات . يجب التحقق من ذلك عن طريق مسح تجويف الفم وطلاء العينة على SDA.
  2. احتفظ بالحيوانات في صناديق البروبيلين10 (5 فئران لكل صندوق كحد أقصى) ، مع نشارة الخشب لتغطية الأرضيات ، في حظيرة يتم التحكم في درجة حرارتها عند 23 ± 2 درجة مئوية تحت دورة ضوء / مظلمة 12/12 ساعة. ولا يلزم توفير تخصيب محدد.
  3. الحفاظ على الفئران على النظام الغذائي للفأر المبثوق والمياه المفلترة ad libitum.
  4. حقن تحت الجلد الدواء المثبط للمناعة ، بريدنيزولون (100 ملغم / كغم من وزن الجسم ، انظر جدول المواد) ، لأول مرة في اليوم الأول لجميع أعضاء المجموعات C + L + 20 ، C + L + 40 ، C + L + 80 ، C + L- 20 μM ، C + L- 40 ، C + L- 80 ، C-L + ، و C-L- (الملف التكميلي 1).
    ملاحظة: احتفظ بالفئران من نفس المجموعة في نفس الصندوق وراقبها يوميا بحثا عن أي علامة على الإجهاد وفقدان الوزن. اطلب المشورة البيطرية للحصول على طعام / ماء مسكن أو معدل إذا لوحظ الإجهاد أو فقدان الوزن.
  5. بدءا من اليوم الأول وحتى نهاية التجربة ، قم بتوفير هيدروكلوريد التتراسيكلين في مياه الشرب عند 0.83 مجم / مل13.
  6. تلقيح ألسنة الفئران في اليوم الثاني ، بما في ذلك المجموعات C + L + 20 و C + L + 40 و C + L + 80 و C + L- 20 و C + L- 40 و C + L- 80 و C-L + و C-L- (الملف التكميلي 1) ، مع لقاح C. albicans . لا تقم بتلقيح تلك الفئران من مجموعة التحكم السلبية (NCtrl).
    1. تخدير عن طريق الحقن العضلي ل 10 مغ/كغ كلوريد كلوربرومازين (انظر جدول المواد) على كل عضلة من عضلات الفخذ قبل إجراء التلقيح.
    2. إجراء التلقيح داخل الفم للفئران عن طريق نقع مسحة معقمة (واحدة لكل) في تعليق موحد طازج (أي معد مباشرة قبل التلقيح) من C. albicans.
    3. ضع الفئران المخدرة في وضع ضعيف. اسحب ألسنتهم برفق من أفواههم باستخدام ملقط معقم. فرك لسان كل فأر بمسحة مبللة لمدة 30 ثانية. راقب الفئران حتى تتعافى من التخدير.
  7. في اليوم الخامس، يتم تطبيق حقنة تكميلية تحت الجلد من بريدنيزولون (100 ملغ/كغ من وزن الجسم) للحفاظ على كبت المناعة.
    ملاحظة: هذا البروتوكول كاف للحفاظ على العدوى لمدة 7 أيام بعد التلقيح داخل الفم. يظهر الجدول الزمني للبروتوكول في الشكل 2.

4. العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات واستعادة C. albicans من آفات الفم

  1. في اليوم السابع، وقبل العلاج، يتم تخدير باستخدام حقن هيدروكلوريد الكيتامين داخل الصفاق (100 ملغم/كغ من وزن الجسم) مع الزيلازين (10 ملغم/كغ من وزن الجسم) (انظر جدول المواد).
  2. ضع كل في وضع ضعيف على جهازوسادة 14,15 مزود بأسلاك من الفولاذ المقاوم للصدأ يمكن لفها حول القواطع لإبقاء الفم مفتوحا.
    ملاحظة: يوصى باستخدام منصات متساوية الحرارة لتدفئة الفئران أثناء تخديرها ، ومنع انخفاض حرارة الجسم في درجة حرارة الغرفة وتجنب الوفيات المرتبطة بالتخدير15. يجب مراقبة كل مخدر من خلال عدم وجود منعكس انسحاب عند قرص أصابع القدم لتأكيد عمق التخدير. يمكن إعطاء جرعة صيانة واحدة من الكيتامين عند 1/3 الجرعة الأصلية (بدون زيلازين) إذا لزم الأمر.
  3. مع تراجع الفك السفلي والخدين ، ضع اللسان برفق خارج الفم.
  4. بالنسبة للفئران من مجموعات C + L + ، ماصة 70 ميكرولتر من PS على ظهر اللسان (في أحد التركيزات المختبرة). الحفاظ على الفئران في بيئة مظلمة لمدة 20 دقيقة كفترة ما قبل التشعيع. تأكد من أنه خلال هذا الوقت ، يظل لسان كل في مكانه داخل تجويف الفم لمنع تناول المحسس الضوئي (PS).
  5. بعد فترة التحسس الضوئي ، اسحب اللسان من الفم للإضاءة. ضع جهاز LED على ظهر اللسان وأضيء بسرعة 37.5 جول / سم2 (7 دقائق مع الجهاز الحالي) (الشكل 3).
  6. بالنسبة للحيوانات من مجموعات C + L- ، ماصة 70 ميكرولتر من PS في أحد التركيزات المختبرة على ظهر اللسان ، والحفاظ على هذه الفئران في الظلام لمدة 27 دقيقة.
  7. بالنسبة للحيوانات من مجموعة C-L + (المعالجة بالضوء دون أي حساسية ضوئية سابقة) ، ماصة 70 ميكرولتر من محلول ملحي معقم على ظهر اللسان. أبق الفئران في الظلام لمدة 20 دقيقة ثم أضيء ألسنتها بسرعة 37.5 جول / سم2 (7 دقائق بالجهاز الحالي).
  8. بالنسبة للفئران من مجموعة C-L (غير المعالجة ب PS ولا بالضوء) ، ماصة 70 ميكرولتر من محلول ملحي معقم على ظهر اللسان والاحتفاظ بها في الظلام لمدة 27 دقيقة.
  9. استعادة C. albicans من ألسنة جميع الفئران مباشرة بعد العلاج. مسحة الظهر من اللسان لمدة 1 دقيقة مع مسحة القطن معقمة.
  10. ضع كل عينة مسحة في أنبوب يحتوي على 1 مل من محلول ملحي معقم ودوامة لمدة دقيقة واحدة لإعادة تعليق الخلايا الميكروبية.
  11. قم على الفور بإجراء تخفيفات تسلسلية 10 أضعاف في PBS ولوحة 25 ميكرولتر على لوحات SDA في نسختين. احتضان الألواح هوائيا عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
  12. بعد 48 ساعة ، استخدم عداد مستعمرة رقمي (انظر جدول المواد) لتحديد عدد مستعمرات الخميرة. احسب حمل C. albicans (CFU / mL) لكل.
  13. تحويل قيم CFU / mL إلى log10 وتحليلها بشكل صحيح وفقا لتصميم التجربة وافتراضات البيانات.
    ملاحظة: في التحقيق الحالي ، تم استخدام اختبار ويلش أحادي الاتجاه ANOVA و Games-Howell اللاحق (α = 0.05) 16 .

5. التحليلات النسيجية المرضية

  1. في اليوم الثامن ، تخدير الفئران بالكيتامين عند 100 مغ / كغ مع زيلازين عند 10 ملغم / كغم عن طريق الحقن داخل الصفاق والقتل الرحيم بجرعة زائدة من الكيتامين (200 ملغم / كغم تدار عن طريق داخل السماق). تأكيد الوفاة عن طريق التحقق من عدم وجود حركة تنفسية (انقطاع النفس) ، وغياب ضربات القلب (الانقباض).
  2. قرصة اللسان بعناية وسحبه من فم. باستخدام مشرط يدوي ، قم بعمل شق قبل الحليمات المحيطة لإزالة اللسان بالكامل جراحيا دون التسبب في أي إصابات للمناطق الأمامية والوسطى.
  3. ثبت اللسان في 10٪ من الفورمالين المخزن (درجة الحموضة 7.2-7.4) لمدة 24 ساعة واغسله بالماء الجاري لمدة ساعتين.
  4. المضي قدما في إدراج في عملية البارافين: الجفاف ، والتوضيح ، والتشريب10،14.
  5. قم بقص المقاطع التسلسلية (بسمك 5 ميكرومتر) باستخدام ميكروتوم ، ثم ضع المقاطع على شرائح زجاجية. المضي قدما في تلطيخ هذه الأقسام باستخدام حمض شيف الدوري والهيماتوكسيلين (PAS-H) للفحص النسيجي المرضي وتحديد الفطريات من خلال الملاحظة تحت المجهر الضوئي.
  6. اطلب من أخصائي علم الأمراض ، ويفضل أن يكون أعمى عن المجموعات التي تمت دراستها ، فحص تفاعل الأنسجة بسبب عدوى C. albicans .
  7. وصف الخصائص النسيجية للنسيج (الظهارة والنسيج الضام) ، وخاصة الاستجابات الالتهابية المحلية ذات الشدة المتفاوتة.

النتائج

أظهر نموذج الفئران من OC بقع بيضاء نموذجية وأغشية كاذبة على لسان جميع الفئران المصابة (الشكل 4A). أكدت C. albicans المستعادة من C-L- استعمار الأنسجة بواسطة هذه الكائنات الحية الدقيقة (تراوحت القيم من 1.62 × 104 إلى 4.80 × 105 CFU / mL). كما هو متوقع ، لم تظهر من مجموعة NCtr أي تغيرا...

Discussion

ارتبطت C. albicans بالتهابات الفم والمريء لدى الأفراد الذين يعانون من نقص المناعة ، ومرض السكري ، والاستخدام المطول للمضادات الحيوية ، وسوء نظافة الفم1،3. تتطلب دراسة الأمراض المعدية البشرية تحقيقات في المختبر وفي الجسم الحي قبل أن يتم تصميم التج?...

Acknowledgements

يشكر المؤلفون الدعم المالي من FAPESP (مؤسسة أبحاث ساو باولو ، رقم العملية FAPESP # 2013 / 07276-1 (CePID CePOF) و 2008 / 00601-6. كما نشكر الدكتورة آنا باولا سيلفا على تقديم المعلومات حول الملح القابل للذوبان في الماء القائم على CUR.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
C. albicansATCC (Rockville, Md, USA)90028Used to prepare the Candida inoculum
Centrifuge Eppendorf Centrifuge 5804/5804R,B. Braun, Melsungen, Hesse, Germany022628146 (NA)Used to prepare the Candida inoculum
Chlorpromazine chloride 2 mg/mLCompounding pharmacy, Araraquara, SP, Brazil -  Used to sedate animals during candida inoculation
Curcumin-based water-soluble saltPDTPharma, Cravinhos, Brazil - Consisting of 53.4% of natural curcumin, and  46.6% of other curcuminoids (demethoxycurcumin and bis-demethoxycurcumin). Prepared in water and N-MethylD-Glucamine (final average molecular weight of 730.32 g.mol−1)
Digital colony counterCP 600 Plus, Phoenix Ind Com Equipamentos Científicos Ltda, Araraquara, SP, Brazil - Used to count colonies on agar plates
Extruded mouse chowBenelab food, Industry Qualy Animal Nutrition and Commerce Ltda., Lindóia, São Paulo State, Brazil. -Used for the feeding of the mice
Ketamine Hydrochloride 10%Ketamina Agener, União Química Farmacêutica Nacional S/A, Embu-Guaçu, SP, Brazil - Used to anesthetize animals before  treatments and for euthanasia
Light-emitting diode handpiece (prototype)Instituto de Física de São Carlos, University of São Paulo, São Carlos, SP, Brazil - Fabricated with LXHL-PR09, Luxeon III Emitter, Lumileds Lighting, San Jose, California, USA
Methylprednisolone acetate 40 mgDEPO-MEDROL, Pfizer, New York - Used as an immunosuppressant
MicrotomeLeica Microsystems, Bannockburn, IL, USASM2500Used to cut the serial sections of the tongues
Propylene boxes (cages housing) H13 x L20 x D30 cmBonther Equipaments, Ribeirão Preto, SP, Brazil - Used to keep the animals throughout  the experimental period
Sabouraud Dextrose Agar with ChloramphenicolHiMedia, Mumbai, IndiaMM1067-500GCulture medium for yeast growth (agar)
SpectrophotometerSpectrophotometer Kasvi K37-VIS , São José dos Pinhais, PR, BrazilK37-VIS Used to standardize the inoculum concentration
Tetracycline hydrochloride Compounding pharmacy, Araraquara, SP, Brazil - Antibiotic given to induce oral dysbiosis
Wood shavingsJ.R. Wood Shavings, Comerce of Sawdust Ltda., Conchal, São Paulo State, Brazil -Used for floor covering inside the housing boxes
Xylazine 2%Calmiun, União Química Farmacêutica Nacional S/A, Embu-Guaçu, SP, Brazil - Used in combination with ketamine for anesthesia
Yeast Nitrogen Broth Difco, InterLab, Detroit, MI, USADF0919-07-3 Culture medium for yeast growth (broth)
Yeast Peptone Dextrose BrothNutriSelect Basic, Sigma AldrichY1375Culture medium for maintaining the strains at -80°C and grow

References

  1. Vila, T., Sultan, A. S., Montelongo-Jauregui, D., Jabra-Rizk, M. A. Oral candidiasis: a disease of opportunity. Journal of fungi (Basel, Switzerland). 6 (1), 15 (2020).
  2. Sudbery, P. E. Growth of Candida albicans hyphae. Nature Reviews Microbiology. 9 (10), 737-748 (2011).
  3. Moyes, D. L., Richardson, J. P., Naglik, J. R. Candida albicans-epithelial interactions and pathogenicity mechanisms: scratching the surface. Virulence. 6 (4), 338-346 (2015).
  4. Lopes, J. P., Lionakis, M. S. Pathogenesis and virulence of Candida albicans. Virulence. 13 (1), 89-121 (2022).
  5. Quindós, G., et al. Therapeutic tools for oral candidiasis: Current and new antifungal drugs. Medicina oral, patologia oral y cirugia buccal. 24 (2), e172-e180 (2019).
  6. Nishimoto, A. T., Sharma, C., Rogers, P. D. Molecular and genetic basis of azole antifungal resistance in the opportunistic pathogenic fungus Candida albicans. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 75 (2), 257-270 (2020).
  7. Gholami, L., Shahabi, S., Jazaeri, M., Hadilou, M., Fekrazad, R. Clinical applications of antimicrobial photodynamic therapy in dentistry. Frontiers in Microbiology. 13, 1020995 (2013).
  8. Trigo-Gutierrez, J. K., Vega-Chacón, Y., Soares, A. B., Mima, E. G. O. Antimicrobial activity of curcumin in nanoformulations: a comprehensive review. International Journal of Molecular Sciences. 22 (13), 7130 (2021).
  9. Santezi, C., Reina, B. D., Dovigo, L. N. Curcumin-mediated Photodynamic Therapy for the treatment of oral infections-A review. Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 21, 409-415 (2018).
  10. Dovigo, L. N., et al. Curcumin-mediated photodynamic inactivation of Candida albicans in a murine model of oral candidiasis. Medical Mycology. 51 (3), 243-251 (2013).
  11. Zangirolami, A. C., Carbinatto, F., Filho, J. D. V., Bagnato, V. S., Blanco, K. C. Impact of light-activated curcumin and curcuminoids films for catheters decontamination. Colloids and SurfacesB: Biointerfaces. 213, 112386 (2022).
  12. Santezi, C., Tanomaru, J. M., Bagnato, V. S., Júnior, O. B., Dovigo, L. N. Potential of curcumin-mediated photodynamic inactivation to reduce oral colonization. Photodiagnosis Photodynamic Therapy. 15, 46-52 (2016).
  13. Takakura, N., et al. A novel murine model of oral candidiasis with local symptoms characteristic of oral thrush. Microbiology and immunology. 47 (5), 321-326 (2003).
  14. Mima, E. G., et al. Susceptibility of Candida albicans to photodynamic therapy in a murine model of oral candidosis. OralSurgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology and Endodontology. 109, 392-401 (2010).
  15. Solis, N. V., Filler, S. G. Mouse model of oropharyngeal candidiasis. Nature Protocol. 7 (4), 637-642 (2012).
  16. Marôco, J. . Análise Estatística com o SPSS Statistics 25. , (2018).
  17. Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS Microbiology Letters. 283 (2), 129-139 (2008).
  18. Samaranayake, Y. H., Samaranayake, L. P. Experimental oral candidiasis in animal models. Clinical Microbiology Reviews. 14, 398-429 (2001).
  19. Chamilos, G., Lionakis, M. S., Lewis, R. E., Kontoyiannis, D. P. Role of mini-host models in the study of medically important fungi. The Lancet Infectious Diseases. 7, 42-55 (2007).
  20. Carmello, J. C., et al. Treatment of oral candidiasis using Photodithazine- mediated photodynamic therapy in vivo. PLoS One. 11 (6), e0156947 (2016).
  21. Sakima, V. T., et al. Antimicrobial photodynamic therapy mediated by curcumin-loaded polymeric nanoparticles in a murine model of oral candidiasis. Molecules. 23 (8), 2075 (2018).
  22. Abe, S., et al. A glucocorticoid antagonist, mifepristone affects anti-Candida activity of murine neutrophils in the presence of prednisolone in vitro and experimental candidiasis of prednisolone-treated mice in vivo. FEMS Immunology and Medical Microbiology. 13 (4), 311-316 (1996).
  23. Jones, J. H., Russell, C., Young, C., Owen, D. Tetracycline and the colonization and infection of the mouths of germ-free and conventionalized rats with Candida albicans. Journal Antimicrobial Chemotherapy. 2 (3), 247-253 (1976).
  24. Russell, C., Jones, J. H. Effects of oral inoculation of Candida albicans in tetracycline-treated rats. Journal of Medical Microbiology. 6 (3), 275-279 (1973).
  25. Teichert, M. C., Jones, J. W., Usacheva, M. N., Biel, M. A. Treatment of oral candidiasis with methylene blue- mediated photodynamic therapy in an immunodeficient murine model. OralSurgery, Medicine, Pathology, Radiology and Endodontology. 93, 155-160 (2002).
  26. Totti, M. G. A., Santos, E. B., Almeida, O. P., Koga-Ito, C. Y., Jorge, A. O. C. Oral candidosis by Candida albicans in normal and xerostomic mice. Brazilian Oral Research. 18, 202-207 (2004).
  27. Hidalgo, K. J. R., et al. Antimicrobial photodynamic therapy in combination with nystatin in the treatment of experimental oral candidiasis induced by Candida albicans resistant to fluconazole. Pharmaceuticals (Basel). 12 (3), E140 (2019).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

APDT C albicans LED Welch s ANOVA Games Howell

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved