A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
هنا ، نصف الخطوات اللازمة لإنشاء نموذج EVLP للفئران ونظهر المظهر الالتهابي المرتبط بالرئتين المنفصة. الهدف هو نشر المعرفة والخبرات حول نموذج EVLP للفئران ، مما يتيح الفهم المتكامل للاستجابات البيولوجية المرتبطة بهذه التقنية الثورية.
منذ إنشاء زراعة الرئة كاستراتيجية علاجية لأمراض الرئة المتقدمة ، يواجه المجتمع العلمي مشكلة انخفاض عدد الرئتين التي تعتبر قابلة للتطبيق لعملية التبرع. ومع ذلك ، في العقود الأخيرة ، تم تغيير هذا السيناريو بشكل إيجابي ، نظرا لتطور تروية الرئة خارج الجسم الحي (EVLP) كاستراتيجية لتقييم وتجديد الرئتين الهامشية. أدى إنشاء EVLP في مراكز زراعة الأعضاء الكبيرة إلى زيادة عدد عمليات زرع الرئة ، سواء من خلال زيادة الدقة التشخيصية لوظائف الرئة أو من خلال تشكيل منصة فعالة لإعادة تجديد ترقيع الرئة. في هذا السياق ، في مواجهة القضايا الأخلاقية واللوجستية ، وكذلك في دراسة العوامل المناعية المرتبطة بزراعة الرئة ، أصبح تطوير نماذج EVLP للقوارض أمرا مهما ، نظرا لموثوقيتها ، وإمكانية التلاعب الجيني ، وانخفاض التكاليف. تصف هذه الورقة بروتوكولا لإنشاء نموذج EVLP للفئران وتظهر الملف الالتهابي المرتبط بالرئتين المنفوختين. سيساعد هذا في نشر المعرفة حول نموذج EVLP للفئران ، مما يعزز فهمنا للاستجابات البيولوجية المرتبطة بهذه التقنية الثورية.
تم التعرف على زراعة الرئة كاستراتيجية علاجية لأمراض المرحلة النهائية مع تحسينات في الأساليب الجراحية وتثبيط المناعة خلال العقود الماضية. على الرغم من ارتفاع الطلب ، فإن عدد المتبرعين الرئويين المتوفين المقبول أقل من الأعضاء الصلبة الأخرى ، حيث يتقارب مع العدد الأقل من عمليات زرع الرئة التي يتمإجراؤها 1،2،3. لمعالجة النقص في مجموعة المتبرعين ، قام المجتمع الطبي بتوسيع معايير التبرع بالرئة ، وتحويل الأعضاء التي كانت تعتبر سابقا غير قابلة للحياة إلى أعضاء محتملة للزرع. ومع ذلك، تتطلب المعايير الموسعة جهودا مختلفة من أجل فهم وتدخل أفضل في ضوء العواقب المنهجية المحتملة التي تنشأ عن العضو المتبرع به. ظهر نضح الرئة خارج الجسم الحي (EVLP) كتقنية توفر الحفاظ على الرئة الحرارية العادية ، وتقييم وظائف الرئة ، وتجديد الرئتين التي كانت تعتبر سابقا غير مجدية لعمليةالتبرع 4،5،6.
نظرا للعدد المتزايد من عمليات زرع الرئة منذ إنشاء EVLP في مراكز زراعة الأعضاء الكبيرة ، فقد تم التحقيق بشكل متزايد في استراتيجيات الحفاظ على الرئة وإصلاحها. بهذا المعنى ، في مواجهة القضايا الأخلاقية واللوجستية ، وكذلك في دراسة العوامل المناعية المرتبطة بزراعة الرئة ، أصبح تطوير نماذج EVLP للقوارض أمرا مهما ، نظرا لموثوقيتها ، وإمكانية التلاعب الجيني ، وانخفاض التكاليف7،8،9. هنا ، نصف الخطوات اللازمة لإنشاء نموذج EVLP للفئران وإظهار الملف الالتهابي المرتبط بالرئتين المنفوختين.
تم إجراء التجارب على وفقا لبروتوكول استخدام المعتمد من قبل لجنة رعاية في الشبكة الصحية الجامعية. تم منح ذكور فئران لويس (255-330 جم) إمكانية الوصول إلى الغذاء والماء. بعد ذلك ، تم الحفاظ عليها في بيئة خاضعة للرقابة (18-22 درجة مئوية) مع دورة نهارا وليلا لمدة 12 ساعة. راجع جدول المواد للحصول على التفاصيل المتعلقة بجميع المواد والحلول والأدوات المستخدمة في هذا البروتوكول.
1. تهيئة نظام نضح الرئة خارج الجسم الحي
2. إجراء شراء الرئة من المتبرعين
3. إجراء نضح الرئة خارج الجسم الحي
4. المعلمات وإدارة العينات
يمكن أن تتدفق جميع الرئتين مع CIT التي تتراوح من 20 دقيقة إلى 18 ساعة لمدة 4 ساعات (الشكل 2) 13. كان الامتثال مستقرا في معظم المجموعات باستثناء 18 ساعة CIT ، والتي انخفضت تدريجيا خلال فترة التروية التي استمرت 4 ساعات (الشكل 2 أ). على الرغم...
وصفت هذه الدراسة الخطوات اللازمة لإنشاء بروتوكول EVLP للفئران. هنا ، نوضح أنه يمكن نشر رئتي المتبرع لمدة 4 ساعات بعد الحفاظ على الكهرباء الساكنة الباردة لمدة تصل إلى 18 ساعة عند 4 درجات مئوية. وقد تم إثبات ذلك من خلال تقييم امتثال الرئة ، ومقاومة الأوعية الدموية الرئوية ، وت?...
MC هي مساهم في Traferox Technologies Inc ومستشارة لشركة Lung Bioengineering Inc. تتلقى MC دعما بحثيا من Beyond Air Inc. و Synklino. ويعلن المؤلفان أنه لم تكن هناك مصالح متنافسة يمكن أن تؤثر على النتيجة الواردة في هذه الورقة.
تم إنشاء الشكل 1 ب BioRender.com (تأكيد حقوق النشر والترخيص [الاتفاقية: BT25KGSKWF]).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
14 G intravenous catheter | BD | 381167 | Orotracheal intubation |
16 G intravenous catheter | BD | 381157 | Catheter to flush the lung |
2-0 Suture Sofsilk | Covidien | S-305 | Tracheal tube fixation |
3-0 Suture Sofsilk | Covidien | S303 | Fixation of arterial and atrial cannulas |
IPL-2 Core Isolated Perfused Lung System for Rat | Harvard Apparatus | 734276 | Ex Vivo Lung Perfusion (EVLP) system |
Ketamine (Narketan) | Vetoquinol | 440894 | Sedation/anesthesia |
Large Pulmonary Artery Cannula | Harvard Apparatus | 73-0711 | |
Left Atrial Cannula | Harvard Apparatus | 73-0712 | |
Low potassium dextran glucose solution (Perfadex) | XVIVO | 19811 | Preservation solution |
Methylprednisolone sodium succinate (SOLU-MEDROL) | Pfizer | 14705 | Anti-inflammatory |
Prostaglandin E1 (Prostin VR) | Pfizer | RX297945 | |
Small Animal Ventilator (Model 683) | Harvard Apparatus | 55-0000 | |
Sodium heparin | Leo Pharma | 453811 | |
Steen Solution | XVIVO | 19004 | Buffered extracellular solution to perfuse lungs during EVLP |
Sugita Aneur clip curv | Mizuho | 07-940-86 | Tracheal clamp |
Tracheal Cannula | Harvard Apparatus | 73-3384 | |
Xylazine (Rompun) | Bayer Healthcare | 2169592 | Sedation/anesthesia |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved