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Method Article
Ici, nous décrivons les étapes nécessaires à l’établissement d’un modèle EVLP chez le rat et montrons le profil inflammatoire associé aux poumons perfusés. L’objectif est de propager les connaissances et les expériences sur le modèle EVLP du rat, permettant la compréhension intégrale des réponses biologiques associées à cette technique révolutionnaire.
Depuis la mise en place de la transplantation pulmonaire comme stratégie thérapeutique pour les maladies pulmonaires avancées, la communauté scientifique est confrontée au problème d’un faible nombre de poumons considérés comme viables pour le processus de don. Au cours des dernières décennies, cependant, ce scénario a été positivement modifié, compte tenu du développement de la perfusion pulmonaire ex vivo (EVLP) comme stratégie d’évaluation et de reconditionnement des poumons marginaux. La mise en place de l’EVLP dans les grands centres de transplantation a favorisé une augmentation du nombre de greffes pulmonaires, à la fois en augmentant la précision diagnostique de la fonction pulmonaire et en constituant une plateforme efficace pour le reconditionnement des greffes pulmonaires. Dans ce contexte, face à des enjeux éthiques et logistiques, ainsi que dans l’étude des facteurs immunologiques associés à la transplantation pulmonaire, le développement de modèles EVLP de rongeurs est devenu important, compte tenu de leur fiabilité, de la possibilité de manipulation génétique et de la baisse des coûts. Cet article décrit un protocole pour établir un modèle EVLP chez le rat et montre le profil inflammatoire associé aux poumons perfusés. Cela aidera à propager les connaissances sur le modèle EVLP du rat, favorisant ainsi notre compréhension des réponses biologiques associées à cette technique révolutionnaire.
La transplantation pulmonaire a été reconnue comme une stratégie thérapeutique pour les maladies en phase terminale avec des améliorations dans les méthodes chirurgicales et l’immunosuppression au cours des dernières décennies. Malgré la forte demande, le nombre de donneurs de poumons décédés acceptables est inférieur à celui des autres organes solides, ce qui converge vers le nombre plus faible de greffes de poumons effectuées 1,2,3. Pour remédier à la pénurie de donneurs, la communauté médicale a élargi les critères de don de poumons, transformant des organes auparavant considérés comme non viables en organes potentiels pour la transplantation. Cependant, les critères élargis nécessitent des efforts différents pour une meilleure compréhension et une meilleure intervention compte tenu des conséquences systémiques possibles provenant de l’organe donné. La perfusion pulmonaire ex vivo (EVLP) est apparue comme une technique qui permet la préservation normothermique des poumons, l’évaluation des fonctions pulmonaires et le reconditionnement des poumons auparavant considérés comme irréalisables pour le processus de don 4,5,6.
Compte tenu du nombre croissant de transplantations pulmonaires depuis la mise en place de l’EVLP dans les grands centres de transplantation, les stratégies de préservation et de réparation des poumons sont de plus en plus étudiées. En ce sens, face aux enjeux éthiques et logistiques, ainsi qu’à l’étude des facteurs immunologiques associés à la transplantation pulmonaire, le développement de modèles EVLP de rongeurs est devenu important, compte tenu de leur fiabilité, de la possibilité de manipulation génétique et de la réduction des coûts 7,8,9. Ici, nous décrivons les étapes nécessaires pour établir un modèle EVLP chez le rat et montrons le profil inflammatoire associé aux poumons perfusés.
Les expériences sur les animaux ont été effectuées conformément au protocole d’utilisation des animaux approuvé par le Comité de protection des animaux du Réseau universitaire de santé. Des rats Lewis mâles (255-330 g) ont eu accès ad libitum à de la nourriture et à de l’eau. Ensuite, ils ont été maintenus dans un environnement contrôlé (18-22 °C) avec un cycle jour-nuit de 12 h. Voir le tableau des matériaux pour plus de détails sur tous les matériaux, solutions et instruments utilisés dans ce protocole.
1. Initialisation du système de perfusion pulmonaire ex vivo
2. Procédure d’acquisition de poumons de donneur
3. Procédure de perfusion pulmonaire ex vivo
4. Paramètres et gestion des échantillons
Tous les poumons avec une CIT allant de 20 min à 18 h ont pu être perfusés pendant 4 h (Figure 2)13. L’observance était stable dans la plupart des groupes, à l’exception de l’IT de 18 h, qui a progressivement diminué au cours de la période de perfusion de 4 h (Figure 2A). Malgré cela, aucune différence significative n’a été observée dans la résistance vasculaire, l’oxygénation du g...
Cette étude a décrit les étapes nécessaires à l’établissement d’un protocole EVLP pour le rat. Ici, nous montrons que les poumons du donneur peuvent être perfusés pendant 4 h après une conservation statique à froid jusqu’à 18 h à 4 °C. Cela a été démontré en évaluant la compliance pulmonaire, la résistance vasculaire pulmonaire, la concentration de glucose/lactate perfusé et le rapport P/F.
L’essor de la plateforme EVLP en tant qu?...
MC est actionnaire de Traferox Technologies Inc. et consultant pour Lung Bioengineering Inc. MC reçoit un soutien à la recherche de Beyond Air Inc. et de Synklino. Les auteurs déclarent qu’il n’y a pas eu d’intérêts concurrents qui auraient pu influencer le résultat rapporté dans cet article.
La figure 1 a été créée avec BioRender.com (confirmation des droits de publication et de licence [Contrat : BT25KGSKWF]).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
14 G intravenous catheter | BD | 381167 | Orotracheal intubation |
16 G intravenous catheter | BD | 381157 | Catheter to flush the lung |
2-0 Suture Sofsilk | Covidien | S-305 | Tracheal tube fixation |
3-0 Suture Sofsilk | Covidien | S303 | Fixation of arterial and atrial cannulas |
IPL-2 Core Isolated Perfused Lung System for Rat | Harvard Apparatus | 734276 | Ex Vivo Lung Perfusion (EVLP) system |
Ketamine (Narketan) | Vetoquinol | 440894 | Sedation/anesthesia |
Large Pulmonary Artery Cannula | Harvard Apparatus | 73-0711 | |
Left Atrial Cannula | Harvard Apparatus | 73-0712 | |
Low potassium dextran glucose solution (Perfadex) | XVIVO | 19811 | Preservation solution |
Methylprednisolone sodium succinate (SOLU-MEDROL) | Pfizer | 14705 | Anti-inflammatory |
Prostaglandin E1 (Prostin VR) | Pfizer | RX297945 | |
Small Animal Ventilator (Model 683) | Harvard Apparatus | 55-0000 | |
Sodium heparin | Leo Pharma | 453811 | |
Steen Solution | XVIVO | 19004 | Buffered extracellular solution to perfuse lungs during EVLP |
Sugita Aneur clip curv | Mizuho | 07-940-86 | Tracheal clamp |
Tracheal Cannula | Harvard Apparatus | 73-3384 | |
Xylazine (Rompun) | Bayer Healthcare | 2169592 | Sedation/anesthesia |
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