Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Burada, bir sıçan EVLP modeli oluşturmak için gerekli adımları açıklıyoruz ve perfüze akciğerlerle ilişkili inflamatuar profili gösteriyoruz. Amaç, sıçan EVLP modeli hakkındaki bilgi ve deneyimleri yaymak ve bu devrim niteliğindeki teknikle ilişkili biyolojik tepkilerin bütünsel olarak anlaşılmasını sağlamaktır.
Akciğer naklinin ilerlemiş akciğer hastalıkları için terapötik bir strateji olarak kurulmasından bu yana, bilim camiası, bağış süreci için uygun olduğu düşünülen düşük sayıda akciğer sorunuyla karşı karşıyadır. Bununla birlikte, son yıllarda, marjinal akciğerleri değerlendirmek ve yenilemek için bir strateji olarak ex vivo akciğer perfüzyonunun (EVLP) geliştirilmesi göz önüne alındığında, bu senaryo olumlu yönde değişmiştir. EVLP'nin büyük nakil merkezlerinde kurulması, hem akciğer fonksiyonunun tanısal doğruluğunu artırarak hem de akciğer greftlerinin yenilenmesi için etkili bir platform oluşturarak akciğer nakli sayısında bir artışa yardımcı olmuştur. Bu bağlamda, etik ve lojistik konularla karşı karşıya kalmanın yanı sıra, akciğer nakli ile ilişkili immünolojik faktörlerin incelenmesinde, güvenilirlikleri, genetik manipülasyon olasılığı ve daha düşük maliyetleri göz önüne alındığında, kemirgen EVLP modellerinin geliştirilmesi önemli hale gelmiştir. Bu makale, bir sıçan EVLP modeli oluşturmak için bir protokolü açıklar ve perfüze akciğerlerle ilişkili inflamatuar profili gösterir. Bu, sıçan EVLP modeli hakkındaki bilginin yayılmasına yardımcı olacak ve bu devrim niteliğindeki teknikle ilişkili biyolojik tepkileri anlamamızı teşvik edecektir.
Akciğer transplantasyonu, son yıllarda cerrahi yöntemlerdeki gelişmeler ve immünsüpresyon ile son dönem hastalıklar için terapötik bir strateji olarak kabul edilmiştir. Yüksek talebe rağmen, kabul edilebilir ölen akciğer donörlerinin sayısı diğer katı organlara göre daha düşüktürve gerçekleştirilen daha düşük akciğer nakli sayısına yakınsar 1,2,3. Donör havuzu eksikliğini gidermek için tıp camiası, akciğer bağışı kriterlerini genişletti ve daha önce cansız olduğu düşünülen organları nakil için potansiyel organlara dönüştürdü. Bununla birlikte, genişletilmiş kriterler, bağışlanan organdan kaynaklanan olası sistemik sonuçlar göz önüne alındığında, daha iyi bir anlayış ve müdahale için farklı çabalar gerektirmektedir. Ex vivo akciğer perfüzyonu (EVLP), normotermik akciğer korunması, akciğer fonksiyonlarının değerlendirilmesi ve daha önce bağış süreci için mümkün olmadığı düşünülen akciğerlerin yenilenmesini sağlayan bir teknik olarak ortaya çıkmıştır 4,5,6.
EVLP'nin büyük nakil merkezlerinde kurulmasından bu yana artan akciğer nakli sayısı göz önüne alındığında, akciğer koruma ve onarım stratejileri giderek daha fazla araştırılmaktadır. Bu anlamda, etik ve lojistik konularla karşı karşıya kalmanın yanı sıra, akciğer nakli ile ilişkili immünolojik faktörlerin incelenmesinde, güvenilirlikleri, genetik manipülasyon olasılığı ve daha düşük maliyetleri göz önüne alındığında, kemirgen EVLP modellerinin geliştirilmesi önemli hale gelmiştir 7,8,9. Burada, bir sıçan EVLP modeli oluşturmak için gerekli adımları açıklıyoruz ve perfüze akciğerlerle ilişkili inflamatuar profili gösteriyoruz.
Hayvan deneyleri, Üniversite Sağlık Ağı'nda Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanan Hayvan Kullanım Protokolü'ne uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Erkek Lewis sıçanlarına (255-330 g) yiyecek ve suya ad libitum erişim verildi. Daha sonra, 12 saatlik gündüz-gece döngüsü ile kontrollü bir ortamda (18-22 °C) muhafaza edildiler. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, çözümler ve araçlarla ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.
1. Ex vivo akciğer perfüzyon sisteminin başlatılması
2. Donör akciğer tedarik prosedürü
3. Ex vivo akciğer perfüzyon prosedürü
4. Parametreler ve numune yönetimi
20 dakika ile 18 saat arasında değişen CIT'li tüm akciğerler 4 saat boyunca perfüze edilebilir (Şekil 2)13. Uyum, 4 saatlik perfüzyon perfüzyon periyodu boyunca kademeli olarak azalan 18 saatlik CIT hariç çoğu grupta stabildi (Şekil 2A). Buna rağmen, gruplar arasında vasküler direnç, akciğer greft oksijenasyonu ve glukoz seviyelerinde anlamlı bir fark gözlenmedi (?...
Bu çalışma, bir sıçan EVLP protokolü oluşturmak için gerekli adımları açıklamıştır. Burada, donör akciğerlerinin 4 ° C'de 18 saate kadar soğuk statik korumadan sonra 4 saat boyunca perfüze edilebileceğini gösteriyoruz. Bu, akciğer kompliyansı, pulmoner vasküler direnç, perfüzat glikoz/laktat konsantrasyonu ve P/F oranının değerlendirilmesiyle gösterildi.
EVLP platformunun akciğer fonksiyonunun değerlendirilmesinde ve greft yen...
MC, Traferox Technologies Inc.'in hissedarı ve Lung Bioengineering Inc.'in danışmanıdır. MC, Beyond Air Inc. ve Synklino'dan araştırma desteği almaktadır. Yazarlar, bu yazıda bildirilen sonucu etkileyebilecek herhangi bir rekabet çıkarı olmadığını beyan etmektedir.
Şekil 1 , BioRender.com ile oluşturulmuştur (yayın ve lisans haklarının onayı [Sözleşme: BT25KGSKWF]).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
14 G intravenous catheter | BD | 381167 | Orotracheal intubation |
16 G intravenous catheter | BD | 381157 | Catheter to flush the lung |
2-0 Suture Sofsilk | Covidien | S-305 | Tracheal tube fixation |
3-0 Suture Sofsilk | Covidien | S303 | Fixation of arterial and atrial cannulas |
IPL-2 Core Isolated Perfused Lung System for Rat | Harvard Apparatus | 734276 | Ex Vivo Lung Perfusion (EVLP) system |
Ketamine (Narketan) | Vetoquinol | 440894 | Sedation/anesthesia |
Large Pulmonary Artery Cannula | Harvard Apparatus | 73-0711 | |
Left Atrial Cannula | Harvard Apparatus | 73-0712 | |
Low potassium dextran glucose solution (Perfadex) | XVIVO | 19811 | Preservation solution |
Methylprednisolone sodium succinate (SOLU-MEDROL) | Pfizer | 14705 | Anti-inflammatory |
Prostaglandin E1 (Prostin VR) | Pfizer | RX297945 | |
Small Animal Ventilator (Model 683) | Harvard Apparatus | 55-0000 | |
Sodium heparin | Leo Pharma | 453811 | |
Steen Solution | XVIVO | 19004 | Buffered extracellular solution to perfuse lungs during EVLP |
Sugita Aneur clip curv | Mizuho | 07-940-86 | Tracheal clamp |
Tracheal Cannula | Harvard Apparatus | 73-3384 | |
Xylazine (Rompun) | Bayer Healthcare | 2169592 | Sedation/anesthesia |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır