A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Summary

يصف هذا البروتوكول إنشاء نموذج ثلاثي الأبعاد (3D) خارج الجسم الحي للتفاعل بين الخلايا السرطانية والثرب. يوفر النموذج منصة لتوضيح الآليات المؤيدة للورم داخل المكانة الدهنية ولاختبار العلاجات الجديدة.

Abstract

سرطان المبيض هو أكثر الأورام الخبيثة النسائية فتكا. يلعب الثرب دورا رئيسيا في توفير بيئة دقيقة داعمة لخلايا سرطان المبيض النقيلي بالإضافة إلى الإشارات المعدلة المناعية التي تسمح بتحمل الورم. ومع ذلك ، لدينا نماذج محدودة تحاكي عن كثب التفاعل بين خلايا سرطان المبيض والأنسجة الغنية بالدهون. لمزيد من الفهم للآليات الخلوية والجزيئية التي يوفر بها الثرب بيئة دقيقة مؤيدة للورم ، قمنا بتطوير نموذج 3D ex vivo فريد من نوعه للتفاعل بين الخلايا السرطانية والثرب. باستخدام الثرب البشري ، نحن قادرون على زراعة خلايا سرطان المبيض داخل هذه البيئة المكروية الغنية بالدهون ومراقبة العوامل المسؤولة عن نمو الورم وتنظيم المناعة. بالإضافة إلى توفير منصة لدراسة هذه البيئة المكروية الغنية بالورم الدهني ، يوفر النموذج منصة ممتازة لتطوير وتقييم مناهج علاجية جديدة لاستهداف الخلايا السرطانية النقيلي في هذا المجال. النموذج المقترح سهل الإنشاء وغير مكلف وقابل للتطبيق على التحقيقات الانتقالية.

Introduction

سرطان المبيض هو أكثر الأورام الخبيثة النسائية فتكا في جميع أنحاء العالم1. يبلغ خطر الإصابة بهذا السرطان مدى الحياة حوالي 1 من كل 70 ، مع متوسط عمر التشخيص عند 63 عاما2. تصنف أورام المبيض الخبيثة الأولية نسيجيا على أنها إما ظهارية أو غير ظهارية. تمثل سرطانات المبيض الظهارية (EOC) أكثر من 90٪ من الأورام ، والنوع الفرعي الأكثر شيوعا هو السرطان المصلي عالي الدرجة (HGSC) ، والذي يمثل حوالي 70٪ -80٪ من EOCs. حاليا ، لا توجد طرق فحص فعالة للكشف عن المرض مبكرا. لذلك يتم تشخيص معظم المرضى في مرحلة متقدمة (أي الاتحاد الدولي لأمراض النساء والتوليد [FIGO] المرحلة الثالثة أو الرابعة) بعد انتشار السرطان في جميع أنحاء التجويف البريتوني....

Protocol

تمت مراجعة بروتوكول البحث التالي والموافقة عليه من قبل مجلس المراجعة المؤسسية بجامعة واين ستيت (IRB). تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المرضى قبل الجراحة. يوضح الشكل 1 الخطوات العامة الثلاث في هذا البروتوكول.

1. إعداد أنسجة الثرب البشري

  1. تحضير وسائط زراعة الثرب (DMEM / F12 + 10٪ مصل بقري جنيني + 1٪ بنسلين ستربتومايسين) وتخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية. القسمة 30-40 مل من هذه الوسائط في أنبوب مخروطي معقم سعة 50 مل أو حاوية عينة جراحية.
  2. الحصول على عينات جراحية من خزعة الأذن أو جراحة استئصال الثرب. اغمر العينة المعقمة في وسائط زراعة الثرب فور إزالتها في غرفة العمليات. إ....

النتائج

كان التأسيس الناجح لخلايا سرطان المبيض في عينات الثرب واضحا بحلول اليوم 14 تقريبا (الشكل 3A-C). تم تحضير ما لا يقل عن 24 نسخة مكررة وحقنها لكل عينة تم جمعها للسماح بإجراء مزيد من التجارب. تمت مراقبة نمو الورم عن طريق التقاط صور الفلورسنت (الشكل 3D

Discussion

باستخدام هذا البروتوكول ، تم تطوير نموذج قبل السريري لسرطان الصفاق لسرطان المبيض باستخدام مزيج من التقنيات الأساسية في المختبر وخارج الجسم الحي. لوحظ نمو تدريجي للورم على مدار 50 يوما من الثقافة المشتركة بعد بذر عينات الثرب بخلايا سرطان المبيض البشري mCherry + OCSC1-F2. تم تطوير هذه الطر.......

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

يتم تمويل هذه الدراسة جزئيا من قبل مؤسسة جانيت بوروس التذكارية. نحن نعترف بالمرضى وقسم الأورام النسائية في معهد كارمانوس للسرطان لجمع عينات الثرب. كما نعترف بالبنك الحيوي وجوهر العلوم المترابطة في معهد كارمانوس للسرطان لتنسيق توظيف المرضى وإعداد شرائح علم الأمراض. يتم دعم البنك الحيوي وجوهر العلوم المرتبطة جزئيا من خلال منحة مركز المعاهد الوطنية للصحة P30 CA22453 لمعهد كارمانوس للسرطان في جامعة واين ستيت.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.05% Trypsin-EDTA (1x)Gibco25300054
1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needleBD329652
10 mL Serological PipetsCELLTREAT229010B
100 mm Tissue Culture DishFisherbrandFB012924
15 mL Centrifuge TubeCELLTREAT229411
24 Well Cell Culture PlateCostar3524
50 mL Centrifuge TubeCELLTREAT229421
75 cm2 Tissue Culture FlaskCELLTREAT229341
Corning Cell CounterCorning9819000
Cytation 5 imagerBiotek
DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium BicarbonateGibco11320033
Fetal Bovine Serum, QualifiedGibco1043028
MatrigelCorning356230Basement membrane matrix
No. 10 Stainless Steel Disposable ScalpelIntegra-Miltex4410
Penicillin StreptomycinGibco15140122
Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x)Gibco10010023
Revolve microscopeEcho

References

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Wagle, N. S., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 73 (1), 17-48 (2023).
  2. Berek, J. S., Renz, M., Kehoe, S., Kumar, L., Friedlander, M. Cancer of the ovary, fallopian tube, and peritoneum: 2021 update.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

We use cookies to enhance your experience on our website.

By continuing to use our website or clicking “Continue”, you are agreeing to accept our cookies.

Learn More