A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يصف هذا البروتوكول إنشاء نموذج ثلاثي الأبعاد (3D) خارج الجسم الحي للتفاعل بين الخلايا السرطانية والثرب. يوفر النموذج منصة لتوضيح الآليات المؤيدة للورم داخل المكانة الدهنية ولاختبار العلاجات الجديدة.
سرطان المبيض هو أكثر الأورام الخبيثة النسائية فتكا. يلعب الثرب دورا رئيسيا في توفير بيئة دقيقة داعمة لخلايا سرطان المبيض النقيلي بالإضافة إلى الإشارات المعدلة المناعية التي تسمح بتحمل الورم. ومع ذلك ، لدينا نماذج محدودة تحاكي عن كثب التفاعل بين خلايا سرطان المبيض والأنسجة الغنية بالدهون. لمزيد من الفهم للآليات الخلوية والجزيئية التي يوفر بها الثرب بيئة دقيقة مؤيدة للورم ، قمنا بتطوير نموذج 3D ex vivo فريد من نوعه للتفاعل بين الخلايا السرطانية والثرب. باستخدام الثرب البشري ، نحن قادرون على زراعة خلايا سرطان المبيض داخل هذه البيئة المكروية الغنية بالدهون ومراقبة العوامل المسؤولة عن نمو الورم وتنظيم المناعة. بالإضافة إلى توفير منصة لدراسة هذه البيئة المكروية الغنية بالورم الدهني ، يوفر النموذج منصة ممتازة لتطوير وتقييم مناهج علاجية جديدة لاستهداف الخلايا السرطانية النقيلي في هذا المجال. النموذج المقترح سهل الإنشاء وغير مكلف وقابل للتطبيق على التحقيقات الانتقالية.
سرطان المبيض هو أكثر الأورام الخبيثة النسائية فتكا في جميع أنحاء العالم1. يبلغ خطر الإصابة بهذا السرطان مدى الحياة حوالي 1 من كل 70 ، مع متوسط عمر التشخيص عند 63 عاما2. تصنف أورام المبيض الخبيثة الأولية نسيجيا على أنها إما ظهارية أو غير ظهارية. تمثل سرطانات المبيض الظهارية (EOC) أكثر من 90٪ من الأورام ، والنوع الفرعي الأكثر شيوعا هو السرطان المصلي عالي الدرجة (HGSC) ، والذي يمثل حوالي 70٪ -80٪ من EOCs. حاليا ، لا توجد طرق فحص فعالة للكشف عن المرض مبكرا. لذلك يتم تشخيص معظم المرضى في مرحلة متقدمة (أي الاتحاد الدولي لأمراض النساء والتوليد [FIGO] المرحلة الثالثة أو الرابعة) بعد انتشار السرطان في جميع أنحاء التجويف البريتوني....
تمت مراجعة بروتوكول البحث التالي والموافقة عليه من قبل مجلس المراجعة المؤسسية بجامعة واين ستيت (IRB). تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المرضى قبل الجراحة. يوضح الشكل 1 الخطوات العامة الثلاث في هذا البروتوكول.
1. إعداد أنسجة الثرب البشري
كان التأسيس الناجح لخلايا سرطان المبيض في عينات الثرب واضحا بحلول اليوم 14 تقريبا (الشكل 3A-C). تم تحضير ما لا يقل عن 24 نسخة مكررة وحقنها لكل عينة تم جمعها للسماح بإجراء مزيد من التجارب. تمت مراقبة نمو الورم عن طريق التقاط صور الفلورسنت (الشكل 3D
باستخدام هذا البروتوكول ، تم تطوير نموذج قبل السريري لسرطان الصفاق لسرطان المبيض باستخدام مزيج من التقنيات الأساسية في المختبر وخارج الجسم الحي. لوحظ نمو تدريجي للورم على مدار 50 يوما من الثقافة المشتركة بعد بذر عينات الثرب بخلايا سرطان المبيض البشري mCherry + OCSC1-F2. تم تطوير هذه الطر.......
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
يتم تمويل هذه الدراسة جزئيا من قبل مؤسسة جانيت بوروس التذكارية. نحن نعترف بالمرضى وقسم الأورام النسائية في معهد كارمانوس للسرطان لجمع عينات الثرب. كما نعترف بالبنك الحيوي وجوهر العلوم المترابطة في معهد كارمانوس للسرطان لتنسيق توظيف المرضى وإعداد شرائح علم الأمراض. يتم دعم البنك الحيوي وجوهر العلوم المرتبطة جزئيا من خلال منحة مركز المعاهد الوطنية للصحة P30 CA22453 لمعهد كارمانوس للسرطان في جامعة واين ستيت.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.05% Trypsin-EDTA (1x) | Gibco | 25300054 | |
1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needle | BD | 329652 | |
10 mL Serological Pipets | CELLTREAT | 229010B | |
100 mm Tissue Culture Dish | Fisherbrand | FB012924 | |
15 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229411 | |
24 Well Cell Culture Plate | Costar | 3524 | |
50 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229421 | |
75 cm2 Tissue Culture Flask | CELLTREAT | 229341 | |
Corning Cell Counter | Corning | 9819000 | |
Cytation 5 imager | Biotek | ||
DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium Bicarbonate | Gibco | 11320033 | |
Fetal Bovine Serum, Qualified | Gibco | 1043028 | |
Matrigel | Corning | 356230 | Basement membrane matrix |
No. 10 Stainless Steel Disposable Scalpel | Integra-Miltex | 4410 | |
Penicillin Streptomycin | Gibco | 15140122 | |
Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x) | Gibco | 10010023 | |
Revolve microscope | Echo |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved
We use cookies to enhance your experience on our website.
By continuing to use our website or clicking “Continue”, you are agreeing to accept our cookies.