نموذج خارج الجسم الحي للورم الخبيث البريتوني لسرطان المبيض باستخدام الثرب البشري

Summary

يصف هذا البروتوكول إنشاء نموذج ثلاثي الأبعاد (3D) خارج الجسم الحي للتفاعل بين الخلايا السرطانية والثرب. يوفر النموذج منصة لتوضيح الآليات المؤيدة للورم داخل المكانة الدهنية ولاختبار العلاجات الجديدة.

Abstract

سرطان المبيض هو أكثر الأورام الخبيثة النسائية فتكا. يلعب الثرب دورا رئيسيا في توفير بيئة دقيقة داعمة لخلايا سرطان المبيض النقيلي بالإضافة إلى الإشارات المعدلة المناعية التي تسمح بتحمل الورم. ومع ذلك ، لدينا نماذج محدودة تحاكي عن كثب التفاعل بين خلايا سرطان المبيض والأنسجة الغنية بالدهون. لمزيد من الفهم للآليات الخلوية والجزيئية التي يوفر بها الثرب بيئة دقيقة مؤيدة للورم ، قمنا بتطوير نموذج 3D ex vivo فريد من نوعه للتفاعل بين الخلايا السرطانية والثرب. باستخدام الثرب البشري ، نحن قادرون على زراعة خلايا سرطان المبيض داخل هذه البيئة المكروية الغنية بالدهون ومراقبة العوامل المسؤولة عن نمو الورم وتنظيم المناعة. بالإضافة إلى توفير منصة لدراسة هذه البيئة المكروية الغنية بالورم الدهني ، يوفر النموذج منصة ممتازة لتطوير وتقييم مناهج علاجية جديدة لاستهداف الخلايا السرطانية النقيلي في هذا المجال. النموذج المقترح سهل الإنشاء وغير مكلف وقابل للتطبيق على التحقيقات الانتقالية.

Introduction

سرطان المبيض هو أكثر الأورام الخبيثة النسائية فتكا في جميع أنحاء العالم¹. يبلغ خطر الإصابة بهذا السرطان مدى الحياة حوالي 1 من كل 70 ، مع متوسط عمر التشخيص عند 63 عاما². تصنف أورام المبيض الخبيثة الأولية نسيجيا على أنها إما ظهارية أو غير ظهارية. تمثل سرطانات المبيض الظهارية (EOC) أكثر من 90٪ من الأورام ، والنوع الفرعي الأكثر شيوعا هو السرطان المصلي عالي الدرجة (HGSC) ، والذي يمثل حوالي 70٪ -80٪ من EOCs. حاليا ، لا توجد طرق فحص فعالة للكشف عن المرض مبكرا. لذلك يتم تشخيص معظم المرضى في مرحلة متقدمة (أي الاتحاد الدولي لأمراض النساء والتوليد [FIGO] المرحلة الثالثة أو الرابعة) بعد انتشار السرطان في جميع أنحاء التجويف البريتوني....

Protocol

تمت مراجعة بروتوكول البحث التالي والموافقة عليه من قبل مجلس المراجعة المؤسسية بجامعة واين ستيت (IRB). تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المرضى قبل الجراحة. يوضح الشكل 1 الخطوات العامة الثلاث في هذا البروتوكول.

1. إعداد أنسجة الثرب البشري

1. تحضير وسائط زراعة الثرب (DMEM / F12 + 10٪ مصل بقري جنيني + 1٪ بنسلين ستربتومايسين) وتخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية. القسمة 30-40 مل من هذه الوسائط في أنبوب مخروطي معقم سعة 50 مل أو حاوية عينة جراحية.
2. الحصول على عينات جراحية من خزعة الأذن أو جراحة استئصال الثرب. اغمر العينة المعقمة في وسائط زراعة الثرب فور إزالتها في غرفة العمليات. إ....

النتائج

كان التأسيس الناجح لخلايا سرطان المبيض في عينات الثرب واضحا بحلول اليوم 14 تقريبا (الشكل 3A-C). تم تحضير ما لا يقل عن 24 نسخة مكررة وحقنها لكل عينة تم جمعها للسماح بإجراء مزيد من التجارب. تمت مراقبة نمو الورم عن طريق التقاط صور الفلورسنت (الشكل 3D

Discussion

باستخدام هذا البروتوكول ، تم تطوير نموذج قبل السريري لسرطان الصفاق لسرطان المبيض باستخدام مزيج من التقنيات الأساسية في المختبر وخارج الجسم الحي. لوحظ نمو تدريجي للورم على مدار 50 يوما من الثقافة المشتركة بعد بذر عينات الثرب بخلايا سرطان المبيض البشري mCherry + OCSC1-F2. تم تطوير هذه الطر.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05% Trypsin-EDTA (1x)	Gibco	25300054
1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needle	BD	329652
10 mL Serological Pipets	CELLTREAT	229010B
100 mm Tissue Culture Dish	Fisherbrand	FB012924
15 mL Centrifuge Tube	CELLTREAT	229411
24 Well Cell Culture Plate	Costar	3524
50 mL Centrifuge Tube	CELLTREAT	229421
75 cm2 Tissue Culture Flask	CELLTREAT	229341
Corning Cell Counter	Corning	9819000
Cytation 5 imager	Biotek
DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium Bicarbonate	Gibco	11320033
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	1043028
Matrigel	Corning	356230	Basement membrane matrix
No. 10 Stainless Steel Disposable Scalpel	Integra-Miltex	4410
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x)	Gibco	10010023
Revolve microscope	Echo