ヒト大網を用いた卵巣癌腹膜転移の Ex vivo モデル

要約

このプロトコルは癌の細胞大網の相互作用の三次元(3D) ex vivo モデルの確立を記述する。このモデルは、脂肪ニッチ内の腫瘍誘発メカニズムを解明し、新しい治療法をテストするためのプラットフォームを提供します。

要約

卵巣がんは、最も致命的な婦人科悪性腫瘍です。大網は、転移性卵巣がん細胞に支持的な微小環境を提供するだけでなく、腫瘍耐性を可能にする免疫調節シグナルを提供する上で重要な役割を果たします。 しかし、卵巣がん細胞と脂肪に富む組織との相互作用を厳密に模倣したモデルは限られています。大網が腫瘍誘発性の微小環境を提供する細胞および分子メカニズムをさらに理解するために、私たちは癌細胞と大網の相互作用の独自の3D ex vivo モデルを開発しました。ヒト大網を用いて、この脂肪に富む微小環境の中で卵巣がん細胞を増殖させ、腫瘍の増殖や免疫調節に関与する因子をモニターすることができます。このモデルは、この脂肪に富む腫瘍微小環境を研究するためのプラットフォームを提供することに加えて、このニッチな転移性がん細胞を標的とする新しい治療アプローチの開発と評価のための優れたプラットフォームを提供します。提案モデルは、生成が容易で安価であり、トランスレーショナル調査に適用できます。

概要

卵巣がんは^{、世界で最も致命的な}婦人科悪性腫瘍です1。このがんを発症する生涯リスクは約70人に1人で、診断年齢の中央値は63歳です²。原発性卵巣悪性腫瘍は、組織学的に上皮性または非上皮性のいずれかに分類される。上皮性卵巣がん(EOC)は腫瘍の90%以上を占め、最も一般的なサブタイプは高悪性度漿液性がん(HGSC)であり、EOCの約70%〜80%を占めています。現在、病気を早期に発見するための有効なスクリーニング方法はありません。そのため、ほとんどの患者は、がんが腹膜腔全体に拡がった後、進行した病期(すなわち、国際婦人科産科[FIGO]ステージIIIまたはIV)で診断^{されます2。}

標準的な最前線治療は、目に見える肉眼的病変をすべて切除する細胞縮小手術と、その後、残存する顕微鏡的病変を破壊するための補助プラチナ製剤ベースの化学療法です。過去20年間で卵巣がんの治療には多くの進歩がありましたが、進行した疾患の患者の約70%^が治療後3年以内に再発します3。これらの患者の全体的な予後不良を考えると、EOCにおける進行中および将来のトランスレーショナルリサーチの取り組みは、早期発見のためのバイオマーカーの特定、転移の予防、耐性を回避するための現在の治療法の改善、および新しい個別化がん治療法の開発を目的....

プロトコル

以下の研究プロトコルは、ウェイン州立大学治験審査委員会(IRB)によってレビューされ、承認されました。手術前にすべての患者からインフォームドコンセントが得られました。 図 1 は、このプロトコルの 3 つの一般的な手順を示しています。

1. ヒト大網組織の調製

1. 大網培養培地(DMEM/F12 + 10%ウシ胎児血清 + 1%ペニシリン-ストレプトマイシン)を調製し、4°Cで保存します。 この培地30〜40 mLを滅菌50 mLのコニカルチューブまたは手術標本容器に分注します。
2. 大網生検または大網切除術から手術標本を取得します。手術室で取り出した直後に、滅菌標本を大網培養液に浸します。ワークフローでこれができない場合は、できるだけ早く検体を大網培養培地に入れてください。サンプルを氷上に置いて移し、処理するまで4°Cで保存します。
   注:除去された大網標本のサイズによって、実行可能な組織の量が決まります。
3. 層流フードを使用して、収集から1〜2時間以内に大網標本を処理します。すべての材料とツールが滅菌または滅菌されていることを確認してください。
4. 大網を採取容器から取り出し、100mmの培養皿に移します。検体を1xリン酸緩衝生理食塩水(1x PBS)に浸し、検体を静かに洗浄して血栓や破片を取り除きます。

ディスカッション

このプロトコルを使用して、卵巣癌の腹膜癌腫症の前臨床モデルが、基本的な in vitro 技術と ex vivo 技術の組み合わせを使用して開発されました。大網標本にmCherry+ OCSC1-F2ヒト卵巣がん細胞を播種した後、50日間の共培養で進行性の腫瘍増殖が観察されました。この方法は、さまざまな大網標本を使用したいくつかの実験的試験で開発され、最適化されました。腫瘍増殖が成功す?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05% Trypsin-EDTA (1x)	Gibco	25300054
1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needle	BD	329652
10 mL Serological Pipets	CELLTREAT	229010B
100 mm Tissue Culture Dish	Fisherbrand	FB012924
15 mL Centrifuge Tube	CELLTREAT	229411
24 Well Cell Culture Plate	Costar	3524
50 mL Centrifuge Tube	CELLTREAT	229421
75 cm2 Tissue Culture Flask	CELLTREAT	229341
Corning Cell Counter	Corning	9819000
Cytation 5 imager	Biotek
DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium Bicarbonate	Gibco	11320033
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	1043028
Matrigel	Corning	356230	Basement membrane matrix
No. 10 Stainless Steel Disposable Scalpel	Integra-Miltex	4410
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x)	Gibco	10010023
Revolve microscope	Echo