인간 Omentum을 사용한 난소암 복막 전이의 생체 외 모델

요약

이 프로토콜은 암세포-omentum 상호 작용의 3차원(3D) 생체 외 모델의 확립을 설명합니다. 이 모델은 지방 틈새 시장 내에서 종양 유발 기전을 규명하고 새로운 치료법을 테스트하기 위한 플랫폼을 제공합니다.

초록

난소암은 가장 치명적인 부인과 악성 종양입니다. 오멘텀은 전이성 난소암 세포에 지지적인 미세환경을 제공할 뿐만 아니라 종양 내성을 허용하는 면역 조절 신호를 제공하는 데 중요한 역할을 합니다. 그러나 난소암 세포와 지방이 풍부한 조직 간의 상호 작용을 밀접하게 모방하는 모델은 제한적입니다. 오멘텀이 전종양 미세환경을 제공하는 세포 및 분자 메커니즘을 더 깊이 이해하기 위해, 우리는 암세포-오멘텀 상호작용에 대한 독특한 3D 생체 외 모델을 개발했습니다. 인간 오멘텀을 사용하여 지방이 풍부한 미세환경 내에서 난소암 세포를 성장시키고 종양 성장과 면역 조절을 담당하는 요인을 모니터링할 수 있습니다. 이 모델은 지방이 풍부한 종양 미세환경 연구를 위한 플랫폼을 제공할 뿐만 아니라 이 틈새 시장에서 전이성 암세포를 표적으로 하는 새로운 치료 접근법의 개발 및 평가를 위한 훌륭한 플랫폼을 제공합니다. 제안된 모델은 생성하기 쉽고, 저렴하며, 중개 조사에 적용할 수 있습니다.

서문

난소암은 전 세계적으로 가장 치명적인 부인과 악성 종양입니다¹. 이 암에 걸릴 위험은 평생 70명 중 1명이며, 평균 진단 연령은 63세입니다². 원발성 난소 악성 종양은 조직학적으로 상피성 또는 비상피성으로 분류됩니다. 상피난소암(EOC)은 종양의 90% 이상을 차지하며, 가장 흔한 아형은 EOC의 약 70%-80%를 차지하는 고등급 장액암(HGSC)입니다. 현재로서는 질병을 조기에 발견할 수 있는 효과적인 선별 방법이 없습니다. 따라서 대부분의 환자는 암이 복막강 전체로 퍼진 후 진행된 단계(즉, Fédération Internationale de Gynécologie et d'Obstétrique [FIGO] stage III 또는 IV)에서 진단된다².

표준 일선 치료는 눈에 보이는 모든 거시적 질병을 제거하는 세포 축소 수술과 잔여 현미경 질환을 파괴하기 위한 보조 백금 기반 화학 요법입니다. 지난 20년 동안 난소암 치료에는 많은 발전이 있었지만, 진행성 난소암 환자의 약 70%는 치료 후 3년 이내에 재발한다³. 이러한 환자들의 전반적인 예후가 좋지 않다는 점을....

프로토콜

다음 연구 프로토콜은 Wayne State University Institutional Review Board(IRB)에서 검토 및 승인되었습니다. 수술 전에 모든 환자로부터 정보에 입각한 동의를 받았습니다. 그림 1 은 이 프로토콜의 세 가지 일반적인 단계를 보여줍니다.

1. 인간 omentum 조직의 준비

1. 오멘텀 배양 배지(DMEM/F12 + 소 태아 혈청 10% + 페니실린-스트렙토마이신 1%)를 준비하고 4°C에서 보관합니다. 이 배지 30-40mL를 멸균 50mL 코니컬 튜브 또는 수술용 표본 용기에 분취합니다.
2. omental 생검 또는 omentectomy 수술에서 수술 표본을 얻습니다. 멸균 검체를 수술실에서 제거한 직후 omentum 배양 배지에 담그십시오. 워크플로우에서 이를 허용하지 않는 경우 가능한 한 빨리 검체를 omentum 배양 배지에 넣으십시오. 샘플을 얼음 위에 올려 옮기고 처리할 때까지 4°C에서 보관합니다.
   알림: 제거된 오멘텀 표본의 크기에 따라 작업 가능한 조직의 양이 결정됩니다.
3. 층류 후드를 사용하여 채취 후 1-2시간 이내에 omentum 표본을 처리합니다. 모....

토론

이 프로토콜을 사용하여 난소암에 대한 복막암의 전임상 모델은 기본적인 in vitro 및 ex vivo 기술의 조합을 사용하여 개발되었습니다. mCherry+ OCSC1-F2 인간 난소암 세포로 오멘텀 검체를 파종한 후 50일간의 공동 배양에서 점진적인 종양 성장이 관찰되었습니다. 이 방법은 다양한 오멘텀 표본을 사용한 여러 실험 시험에서 개발 및 최적화되었습니다. 성공적인 종양 성장은 오멘텀의 질, ?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05% Trypsin-EDTA (1x)	Gibco	25300054
1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needle	BD	329652
10 mL Serological Pipets	CELLTREAT	229010B
100 mm Tissue Culture Dish	Fisherbrand	FB012924
15 mL Centrifuge Tube	CELLTREAT	229411
24 Well Cell Culture Plate	Costar	3524
50 mL Centrifuge Tube	CELLTREAT	229421
75 cm2 Tissue Culture Flask	CELLTREAT	229341
Corning Cell Counter	Corning	9819000
Cytation 5 imager	Biotek
DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium Bicarbonate	Gibco	11320033
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	1043028
Matrigel	Corning	356230	Basement membrane matrix
No. 10 Stainless Steel Disposable Scalpel	Integra-Miltex	4410
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x)	Gibco	10010023
Revolve microscope	Echo