تحريض السكتة الدماغية الحادة في الفئران باستخدام تقنية انسداد الشريان الأوسط البعيد

Summary

هنا ، نقدم بروتوكولا لإنشاء نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط البعيد (dMCAO) من خلال التخثير الكهربائي عبر الجمجمة في الفئران C57BL / 6J وتقييم السلوك العصبي اللاحق والسمات النسيجية.

Abstract

لا تزال السكتة الدماغية الإقفارية السبب السائد للوفيات والضعف الوظيفي بين السكان البالغين على مستوى العالم. فقط أقلية من مرضى السكتة الدماغية الإقفارية مؤهلون لتلقي انحلال الخثرة داخل الأوعية أو علاج استئصال الخثرة الميكانيكية خلال النافذة الزمنية المثلى. من بين هؤلاء الناجين من السكتة الدماغية ، يعاني حوالي الثلثين من اختلالات عصبية على مدى فترة طويلة. يعد إنشاء نموذج تجريبي مستقر وقابل للتكرار للسكتة الدماغية أمرا في غاية الأهمية لمزيد من التحقيق في الآليات الفيزيولوجية المرضية وتطوير استراتيجيات علاجية فعالة للسكتة الدماغية. يمثل الشريان الدماغي الأوسط (MCA) الموقع السائد للسكتة الدماغية الإقفارية لدى البشر ، حيث يعمل انسداد MCA كنموذج يستخدم بشكل متكرر لنقص التروية الدماغية البؤري. في هذا البروتوكول ، نصف منهجية إنشاء نموذج انسداد MCA البعيد (dMCAO) من خلال التخثير الكهربائي عبر الجمجمة في الفئران C57BL / 6. نظرا لأن موقع الانسداد يقع في الفرع القشري من MCA ، فإن هذا النموذج يولد آفة احتشاء معتدلة تقتصر على القشرة. أظهر التوصيف السلوكي العصبي والنسيجي المرضي خللا وظيفيا حركيا مرئيا ، وتنكس الخلايا العصبية ، وتنشيطا واضحا للخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا النجمية في هذا النموذج. وبالتالي ، يوفر نموذج الماوس dMCAO هذا أداة قيمة للتحقيق في السكتة الدماغية وقيمة التعميم.

Introduction

السكتة الدماغية هي مرض دماغي وعائي حاد شائع يتميز بارتفاع حالات الإعاقة والوفيات¹. من بين جميع حالات السكتة الدماغية ، ينتمي ما يقرب من 80٪ إلى السكتة الدماغية². حتى الآن ، لا يزال انحلال الخثرة في الوريد واحدا من عدد محدود من الأساليب الإنتاجية لعلاج السكتة الدماغية الحادة. ومع ذلك ، فإن فعالية العلاج بالتخثر مقيدة بالنافذة الزمنية الفعالة الضيقة وحدوث التحول النزفي³. في مرحلة إعادة التأهيل على المدى الطويل بعد السكتة الدماغية الإقفارية ، من المحتمل أن يعاني عدد كبير من المرضى من اختلالات عصبية دائمة⁴. هناك حاجة ماسة إلى مزيد من التحقيق لكشف الآليات الفيزيولوجية المرضية ال....

Protocol

تمت الموافقة على البروتوكول التجريبي من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام بجامعة جيانغهان وتم إجراؤه وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية لحيوانات التجارب الصادرة عن مركز السيطرة على الأمراض في الصين. تم استخدام ذكور الفئران البالغة C57BL / 6J ، بعمر 10 أسابيع ، بوزن 24-26 جم ، في هذا البروتوكول. تم إيواء جميع الفئران في بيئة مضبوطة بدورة الضوء / الظلام لمدة 12 ساعة مع الطعام والماء الإعلاني.

1. التحضير قبل الجراحة

ملاحظة: الأدوات والمعدات الرئيسية اللازمة لهذا البروتوكول موضحة في الشكل 1.

1. قبل الإجراء ، تعقيم الأدوات الجراحية عن طريق التعقيم.
<....

النتائج

الأدوات الرئيسية المستخدمة لأداء dMCAO هي مجموعة أدوات الجراحة المجهرية ، ومبخر الأيزوفلوران ، ومولد التخثير الكهربائي المجهري أحادي القطب الموضح في الشكل 1. يوضح الشكل 2 الإجراء التجريبي لهذه الدراسة. باختصار ، تم استخدام حج القحف لنافذة عظمية صغيرة لفضح MCA.......

Discussion

في البروتوكول الحالي لنموذج dMCAO لحج القحف الكهربائي ، يتم إجراء العمليات الجراحية بأقل قدر من الغزو ، حيث يتم فصل جزء فقط من العضلة الصدغية للتخفيف من الآثار الضارة على وظيفة المضغ. تعافت جميع الفئران بشكل جيد بعد العملية ، مع عدم وجود حالات ملحوظة من صعوبات التغذية. يمكن تمييز MCA بسهولة في .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC)	Sigma-Aldrich	108380	Dye for TTC staining
24-well culture plate	Corning (USA)	CLS3527	Vessel for TTC staining
4% paraformaldehyde	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1101	Tissue fixation
5% bovine serum albumin	Wuhan BOSTER Bio Co., Ltd.	AR004	Non-specific antigen blocking
5-0 Polyglycolic acid suture	Jinhuan Medical Co., Ltd	KCR531	Material for surgery
Anesthesia machine	Midmark Corporation	VMR	Anesthetized animal
Antifade mounting medium	Beyotime Biotech	P0131	Seal for IF staining
Automation-tissue-dehydrating  machine	Leica Biosystems (Germany)	TP1020	Dehydrate tissue
Depilatory cream	Veet (France)	20220328	Material for surgery
Diclofenac sodium gel	Wuhan Ma Yinglong Pharmaceutical  Co., Ltd.	H10950214	Analgesia for animal
Drill tip (0.8 mm)	Rwd Life Science Co., Ltd.		Equipment for surgery
Eosin staining solution	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1001	Dye for H&E staining
Eye ointment	Guangzhou Pharmaceutical Co., Ltd	H44023098	Material for surgery
Fluorescence microscope	Olympus (Japan)	BX51	Image acquisition
GFAP Mouse monoclonal antibody	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	3670	Primary antibody for IF staining
Goat anti-mouse Alexa 488-conjugated IgG	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	4408	Second antibody for IF staining
Goat anti-rabbit Alexa 594-conjugated IgG	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	8889	Second antibody for IF staining
Grip strength meter	Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.	XR501	Equipment for behavioral test
Hematoxylin staining solution	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1004	Dye for H&E staining
Iba1 Rabbit monoclonal antibody	Abcam	ab178846	Primary antibody for IF staining
Isoflurane	Rwd Life Science Co., Ltd.	R510-22-10	Anesthetized animal
Laser doppler blood flow meter	Moor Instruments (UK)	moorVMS	Blood flow monitoring
Meloxicam	Boehringer-Ingelheim	J20160020	Analgesia for animal
Microdrill	Rwd Life Science Co., Ltd.	78001	Equipment for surgery
Microsurgical instruments set	Rwd Life Science Co., Ltd.	SP0009-R	Equipment for surgery
Microtome	Thermo Fisher Scientific (USA)	HM325	Tissue section production
Microtome blade	Leica Biosystems (Germany)	819	Tissue section production
Monopolar electrocoagulation generator	Spring Scenery Medical Instrument Co., Ltd.	CZ0001	Equipment for surgery
Mupirocin ointment	Tianjin Smith Kline & French Laboratories Ltd.	H10930064	Anti-infection for animal
NeuN Rabbit monoclonal antibody	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	24307	Primary antibody for IF staining
Neutral balsam	Absin Bioscience	abs9177	Seal for H&E staining
Paraffin embedding center	Thermo Fisher Scientific (USA)	EC 350	Produce paraffin blocks
Pentobarbital sodium	Sigma-Aldrich	P3761	Euthanized animal
Phosphate buffered saline	Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd	C0221A	Rinsing for tissue section
Shaver	Shenzhen Codos Electrical Appliances Co.,Ltd.	CP-9200	Equipment for surgery
Sodium citrate solution	Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd.	P0083	Antigen retrieval for IF staining