Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Özet

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Özet

İskemik inme, tüm dünyada erişkin popülasyonlar arasında mortalite ve fonksiyonel bozukluğun baskın nedeni olmaya devam etmektedir. İskemik inme hastalarının sadece küçük bir kısmı en uygun zaman aralığında intravasküler tromboliz veya mekanik trombektomi tedavisi almaya uygundur. İnme geçirenler arasında, yaklaşık üçte ikisi uzun bir süre boyunca nörolojik işlev bozukluklarından muzdariptir. İskemik inme için patofizyolojik mekanizmaların daha fazla araştırılması ve etkili terapötik stratejilerin geliştirilmesi için stabil ve tekrarlanabilir bir deneysel iskemik inme modelinin oluşturulması son derece önemlidir. Orta serebral arter (MCA), insanlarda iskemik inmenin baskın lokalizasyonunu temsil eder ve MCA oklüzyonu, fokal serebral iskeminin sık kullanılan modeli olarak hizmet eder. Bu protokolde, C57BL/6 farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal MCA oklüzyonu (dMCAO) modelinin kurulması metodolojisini açıklıyoruz. Oklüzyon bölgesi MCA'nın kortikal dalında yer aldığından, bu model korteksle sınırlı orta derecede enfarktüslü bir lezyon oluşturur. Nörolojik davranışsal ve histopatolojik karakterizasyon, bu modelde görünür motor disfonksiyon, nöron dejenerasyonu ve mikroglia ve astrositlerin belirgin aktivasyonunu göstermiştir. Bu nedenle, bu dMCAO fare modeli, iskemi inmeyi ve popülerleşmenin değerini araştırmak için değerli bir araç sağlar.

Giriş

İnme, yüksek sakatlık ve mortalite insidansı ile karakterize yaygın bir akut serebrovasküler hastalıktır¹. Tüm inme vakalarının yaklaşık %80'i iskemik inme^2'ye aittir. Şimdiye kadar, intravenöz tromboliz, akut iskemik inme tedavisinde sınırlı sayıda üretken yaklaşımdan biri olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte, trombolitik tedavinin etkinliği, dar etkili zaman penceresi ve hemorajik dönüşümün ortaya çıkması ile sınırlıdır³. İskemik inmeyi takiben uzun süreli rehabilitasyon aşamasında, önemli sayıda hastanın kalıcı nörolojik işlev bozuklukları yaşaması muhtemeldir⁴. İsk....

Protokol

Deney protokolü, Jianghan Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı ve Çin Hastalık Kontrol Merkezi tarafından yayınlanan Deney Hayvanları Etik Yönergelerine uygun olarak yürütüldü. Bu protokolde 10 haftalık, 24-26 g ağırlığında yetişkin erkek C57BL / 6J fareleri kullanıldı. Tüm fareler, yiyecek ve su ad libitum ile 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsü kontrollü bir ortam altında barındırıldı.

1. Ameliyat öncesi hazırlık

NOT: Bu protokol için gerekli olan temel aletler ve ekipmanlar Şekil 1'de gösterilmiştir.

1. ....

Tartışmalar

Kraniyotomi elektrokoagülasyon dMCAO modelinin mevcut protokolünde, cerrahi prosedürler minimal invazivlik ile gerçekleştirilir, burada çiğneme fonksiyonu üzerindeki olumsuz etkileri azaltmak için temporalis kasının sadece bir kısmı ayrılır. Farelerin tümü işlemden sonra iyi bir şekilde iyileşti ve gözlemlenen herhangi bir beslenme güçlüğü vakası olmadı. MCA, farenin temporal kemiğinde kolayca ayırt edilebilir, böylece uygun kraniyotomi konumlarının hassas bir şekilde tanımlanmasını k.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC)	Sigma-Aldrich	108380	Dye for TTC staining
24-well culture plate	Corning (USA)	CLS3527	Vessel for TTC staining
4% paraformaldehyde	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1101	Tissue fixation
5% bovine serum albumin	Wuhan BOSTER Bio Co., Ltd.	AR004	Non-specific antigen blocking
5-0 Polyglycolic acid suture	Jinhuan Medical Co., Ltd	KCR531	Material for surgery
Anesthesia machine	Midmark Corporation	VMR	Anesthetized animal
Antifade mounting medium	Beyotime Biotech	P0131	Seal for IF staining
Automation-tissue-dehydrating  machine	Leica Biosystems (Germany)	TP1020	Dehydrate tissue
Depilatory cream	Veet (France)	20220328	Material for surgery
Diclofenac sodium gel	Wuhan Ma Yinglong Pharmaceutical  Co., Ltd.	H10950214	Analgesia for animal
Drill tip (0.8 mm)	Rwd Life Science Co., Ltd.		Equipment for surgery
Eosin staining solution	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1001	Dye for H&E staining
Eye ointment	Guangzhou Pharmaceutical Co., Ltd	H44023098	Material for surgery
Fluorescence microscope	Olympus (Japan)	BX51	Image acquisition
GFAP Mouse monoclonal antibody	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	3670	Primary antibody for IF staining
Goat anti-mouse Alexa 488-conjugated IgG	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	4408	Second antibody for IF staining
Goat anti-rabbit Alexa 594-conjugated IgG	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	8889	Second antibody for IF staining
Grip strength meter	Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.	XR501	Equipment for behavioral test
Hematoxylin staining solution	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1004	Dye for H&E staining
Iba1 Rabbit monoclonal antibody	Abcam	ab178846	Primary antibody for IF staining
Isoflurane	Rwd Life Science Co., Ltd.	R510-22-10	Anesthetized animal
Laser doppler blood flow meter	Moor Instruments (UK)	moorVMS	Blood flow monitoring
Meloxicam	Boehringer-Ingelheim	J20160020	Analgesia for animal
Microdrill	Rwd Life Science Co., Ltd.	78001	Equipment for surgery
Microsurgical instruments set	Rwd Life Science Co., Ltd.	SP0009-R	Equipment for surgery
Microtome	Thermo Fisher Scientific (USA)	HM325	Tissue section production
Microtome blade	Leica Biosystems (Germany)	819	Tissue section production
Monopolar electrocoagulation generator	Spring Scenery Medical Instrument Co., Ltd.	CZ0001	Equipment for surgery
Mupirocin ointment	Tianjin Smith Kline & French Laboratories Ltd.	H10930064	Anti-infection for animal
NeuN Rabbit monoclonal antibody	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	24307	Primary antibody for IF staining
Neutral balsam	Absin Bioscience	abs9177	Seal for H&E staining
Paraffin embedding center	Thermo Fisher Scientific (USA)	EC 350	Produce paraffin blocks
Pentobarbital sodium	Sigma-Aldrich	P3761	Euthanized animal
Phosphate buffered saline	Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd	C0221A	Rinsing for tissue section
Shaver	Shenzhen Codos Electrical Appliances Co.,Ltd.	CP-9200	Equipment for surgery
Sodium citrate solution	Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd.	P0083	Antigen retrieval for IF staining