Inducción de ictus isquémico agudo en ratones mediante la técnica de oclusión de la arteria media distal

Resumen

En este trabajo, presentamos un protocolo para establecer un modelo de oclusión distal de la arteria cerebral media (dMCAO) mediante electrocoagulación transcraneal en ratones C57BL/6J y evaluamos el comportamiento neurológico y las características histopatológicas posteriores.

Resumen

El accidente cerebrovascular isquémico sigue siendo la causa predominante de mortalidad y deterioro funcional entre las poblaciones adultas de todo el mundo. Solo una minoría de los pacientes con accidente cerebrovascular isquémico son elegibles para recibir tratamiento de trombólisis intravascular o trombectomía mecánica dentro del período de tiempo óptimo. Entre los supervivientes de accidentes cerebrovasculares, alrededor de dos tercios sufren disfunciones neurológicas durante un periodo prolongado. El establecimiento de un modelo experimental de accidente cerebrovascular isquémico estable y repetible es extremadamente importante para investigar más a fondo los mecanismos fisiopatológicos y desarrollar estrategias terapéuticas efectivas para el accidente cerebrovascular isquémico. La arteria cerebral media (ACM) representa la localización predominante del accidente cerebrovascular isquémico en los seres humanos, y la oclusión del ACM es el modelo más utilizado de la isquemia cerebral focal. En este protocolo, describimos la metodología para establecer el modelo de oclusión distal de MCA (dMCAO) mediante electrocoagulación transcraneal en ratones C57BL/6. Dado que el sitio de oclusión se localiza en la rama cortical de la ACM, este modelo genera una lesión infartada moderada restringida a la corteza. La caracterización neurológica, conductual e histopatológica ha demostrado disfunción motora visible, degeneración neuronal y activación pronunciada de la microglía y los astrocitos en este modelo. Por lo tanto, este modelo de ratón dMCAO proporciona una herramienta valiosa para investigar el ictus isquémico y el valor de la popularización.

Introducción

El accidente cerebrovascular es una enfermedad cerebrovascular aguda frecuente caracterizada por una alta incidencia de discapacidad y mortalidad¹. De todos los casos de ictus, casi el 80% pertenecen a ictus isquémico². Hasta ahora, la trombólisis intravenosa sigue siendo uno de los pocos enfoques productivos para el tratamiento del accidente cerebrovascular isquémico agudo. Sin embargo, la efectividad del tratamiento trombolítico está limitada por la estrechez del tiempo efectivo y la ocurrencia de transformación hemorrágica³. En la fase de rehabilitación a largo plazo después de un accidente cer....

Protocolo

El protocolo experimental fue aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Jianghan y se llevó a cabo de acuerdo con las Directrices Éticas en Animales de Experimentación emitidas por el Centro para el Control de Enfermedades de China. En este protocolo se utilizaron ratones machos adultos C57BL/6J, de 10 semanas de edad, con un peso de 24-26 g. Todos los ratones fueron alojados bajo un ambiente controlado de ciclo de luz/oscuridad de 12 horas con comida y agua ad libitum.

1. Preparación preoperatoria

NOTA: Los instrumentos y equipos clave necesari....

Discusión

En el protocolo actual del modelo de electrocoagulación craneotomía dMCAO, los procedimientos quirúrgicos se realizan con una invasividad mínima, en la que solo se separa una porción del músculo temporal para mitigar los efectos adversos sobre la función masticatoria. Todos los ratones se recuperaron bien después del procedimiento, sin que se observaran casos de dificultades para alimentarse. El ACM se puede discernir fácilmente en el hueso temporal del ratón, lo que facilita la identificación precisa de las u.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC)	Sigma-Aldrich	108380	Dye for TTC staining
24-well culture plate	Corning (USA)	CLS3527	Vessel for TTC staining
4% paraformaldehyde	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1101	Tissue fixation
5% bovine serum albumin	Wuhan BOSTER Bio Co., Ltd.	AR004	Non-specific antigen blocking
5-0 Polyglycolic acid suture	Jinhuan Medical Co., Ltd	KCR531	Material for surgery
Anesthesia machine	Midmark Corporation	VMR	Anesthetized animal
Antifade mounting medium	Beyotime Biotech	P0131	Seal for IF staining
Automation-tissue-dehydrating  machine	Leica Biosystems (Germany)	TP1020	Dehydrate tissue
Depilatory cream	Veet (France)	20220328	Material for surgery
Diclofenac sodium gel	Wuhan Ma Yinglong Pharmaceutical  Co., Ltd.	H10950214	Analgesia for animal
Drill tip (0.8 mm)	Rwd Life Science Co., Ltd.		Equipment for surgery
Eosin staining solution	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1001	Dye for H&E staining
Eye ointment	Guangzhou Pharmaceutical Co., Ltd	H44023098	Material for surgery
Fluorescence microscope	Olympus (Japan)	BX51	Image acquisition
GFAP Mouse monoclonal antibody	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	3670	Primary antibody for IF staining
Goat anti-mouse Alexa 488-conjugated IgG	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	4408	Second antibody for IF staining
Goat anti-rabbit Alexa 594-conjugated IgG	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	8889	Second antibody for IF staining
Grip strength meter	Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.	XR501	Equipment for behavioral test
Hematoxylin staining solution	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1004	Dye for H&E staining
Iba1 Rabbit monoclonal antibody	Abcam	ab178846	Primary antibody for IF staining
Isoflurane	Rwd Life Science Co., Ltd.	R510-22-10	Anesthetized animal
Laser doppler blood flow meter	Moor Instruments (UK)	moorVMS	Blood flow monitoring
Meloxicam	Boehringer-Ingelheim	J20160020	Analgesia for animal
Microdrill	Rwd Life Science Co., Ltd.	78001	Equipment for surgery
Microsurgical instruments set	Rwd Life Science Co., Ltd.	SP0009-R	Equipment for surgery
Microtome	Thermo Fisher Scientific (USA)	HM325	Tissue section production
Microtome blade	Leica Biosystems (Germany)	819	Tissue section production
Monopolar electrocoagulation generator	Spring Scenery Medical Instrument Co., Ltd.	CZ0001	Equipment for surgery
Mupirocin ointment	Tianjin Smith Kline & French Laboratories Ltd.	H10930064	Anti-infection for animal
NeuN Rabbit monoclonal antibody	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	24307	Primary antibody for IF staining
Neutral balsam	Absin Bioscience	abs9177	Seal for H&E staining
Paraffin embedding center	Thermo Fisher Scientific (USA)	EC 350	Produce paraffin blocks
Pentobarbital sodium	Sigma-Aldrich	P3761	Euthanized animal
Phosphate buffered saline	Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd	C0221A	Rinsing for tissue section
Shaver	Shenzhen Codos Electrical Appliances Co.,Ltd.	CP-9200	Equipment for surgery
Sodium citrate solution	Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd.	P0083	Antigen retrieval for IF staining