A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تقدم هذه الورقة بروتوكولا اقتصاديا وفعالا لفحص الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي. بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي في غضون 60 دقيقة ، مما يحسن بشكل فعال كفاءة مختبر أمراض الذكورة وأخصائيي أمراض الذكورة.

Abstract

يمكن أن تؤدي زيادة عدد الكريات البيض إلى انخفاض حركة المنوية ، وزيادة التشوهات المورفولوجية للحيوانات المنوية ، وارتفاع مؤشر تجزئة الحمض النووي للحيوانات المنوية ، وضعف وظيفة الجسم القمي للحيوانات المنوية ، وحتى التأثير على التطور الجنيني. وهو مرض ذكوري شائع في الممارسة السريرية وأحد الأسباب المهمة للعقم عند الذكور. عند تحديد ما إذا كان التهاب الجهاز التناسلي الذكري موجودا ، غالبا ما يختار أخصائيو الذكورة فحص الخلايا المستديرة أو إيلاستاز البلازما المنوية في السائل المنوي كأساس تشخيصي سريري. ومع ذلك ، فإن فحص الخلايا المستديرة يتأثر بسهولة بالخلايا المنوية المولدة للحيوانات المنوية والخلايا الظهارية في الجهاز التناسلي ، والتي لا تساهم في الحد من الاستخدام العشوائي وغير الضروري للمضادات الحيوية. في الوقت نفسه ، فإن عملية الكشف عن الإيلاستاز معقدة نسبيا ، وتستغرق وقتا طويلا ، وبطيئة في الإبلاغ عن النتائج ، وهو أمر غير مفيد للتشخيص المبكر وعلاج أمراض مثل التهابات الجهاز التناسلي الذكري (MGTIs). لقد طبقنا بشكل مبتكر فحص الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) كمعيار تشخيصي ل leukocytospermia ، وحل هذه المشاكل بنجاح. يتطلب هذا الفحص فقط إضافة سائل التشغيل المكون من أربعة كواشف إلى العينة ، ويمكن التحكم في إجمالي وقت التفاعل في درجة حرارة الغرفة في غضون 20-30 دقيقة. مع اللطاخة اللاحقة والفحص المجهري ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي في غضون 60 دقيقة ، والتي يمكن استخدامها لتشخيص ما إذا كان التهاب الجهاز التناسلي الذكري موجودا.

Introduction

برز العقم كقضية صحية عامة عالمية تؤثر على حوالي 15٪ من الأزواج في سن الإنجاب. تساهم العوامل الذكورية بحوالي 50٪ من إجمالي حالات ضعف الخصوبة ، ويمكن أن يعزى ما يقرب من 20٪ إلى 30٪ فقط إلى العوامل الذكورية1،2،3. تشكل التهابات الجهاز التناسلي الذكري (MGTIs) أحد الأسباب المهمة للعقم عند الذكور ، حيث تمثل حوالي 15٪ من الحالات 4,5.

معظم الأفراد لديهم كريات الدم البيضاء في السائل المنوي ، والتي تشكل 13 ٪ من الخلايا غير المنوية ، مع نسب تفاضلية هي العدلات 12 ٪ ، الضامة 0.9 ٪ ، والخلايا الليمفاوية 0....

Protocol

تمت مراجعة هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات الطبية التابعة للمستشفى الثالث التابع لجامعة صن يات صن.

1. إعداد حل العمل

  1. اجمع الكواشف التالية الضرورية لإعداد محلول العمل - محلول ركيزة أورثو تولويدين ، محلول كلوريد الأمونيوم المشبع (NH4Cl) ، محلول 148 مليمول / لتر ملح ثنائي الصوديوم لحمض الإيثيلين ديامينيترايتيك (Na2EDTA) ، ومحلول بيروكسيد الهيدروجين 6٪ (v / v). ضعها على مقعد مختبر بدرجة حرارة الغرفة (RT) مع الأدوات اللازمة ، مثل ماصات النقل (1000 ميكرولتر ، 200 ميكرولتر ، 10 ميكرولتر) ورفوف أنابيب الاختبار.
    تنبيه: اقرأ ورقة بيانات السلامة (SDS) قبل التعامل مع الكواشف المذكور....

النتائج

عند تنفيذ الإجراء المذكور أعلاه ، يظهر المتفاعل في أنبوب الطرد المركزي في كثير من الأحيان مظهرا شبه شفاف وبراق (الشكل 1). الكشف عن اللون البني الواضح يكشف عن احتمال تحلل كريات الدم البيضاء ، مما قد يؤدي إلى تلطيخ السائل. وبالتالي ، يمكن أن تفشل عملية التلوين ، مما يجعل من الض?.......

Discussion

أورثو تولويدين وبيروكسيد الهيدروجين لهما خصائص حساسة للضوء ويمكن أن تتحلل عند تعرضها للضوء. لضمان فعالية كواشف الاختبار ، يوصى بتخزين سائل العمل المحضر في مكان مظلم.

تظهر عينات السائل المنوي بشكل طبيعي خصائص غير متجانسة. في عملية تحضير عينات السائل المنوي ، يعد الحكم بشكل .......

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

المؤلفون ممتنون لمختبر أمراض الذكورة التابع لمركز الطب التناسلي ، المستشفى الثالث التابع لجامعة صن يات صن ، لتوفير التسهيلات لهذه الدراسة. لم يشارك أي تمويل في إعداد هذه المقالة.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia B
6% (v/v) hydrogen peroxide solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia D
Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE Microptic S.L.1222996; Model type: SCA-SCOPE-HComputer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment
Disposable centrifugal tube (1.5 mL)Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD2210009Centrifugal tube for Staining process
Disposable transfer pipette (3 mL)Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD20221101Polymer-based pipette
Electronic counterNoneNoneA multichannel counter
Electronic scalesShanghai Liangping Instrument Co., LTDD9008084MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g
Makler counting chamberMaklerMQ300040.01 sq.mm, 10 μm deep
Optical microscopeOlympus3G41067201307CX31, 10×40
Ortho-toluidine substrate solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia C
Pipet tips(1 mL)Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd029232051000 tips/unit, 5 units/case
Pipet tips(10 µL)Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd003239611000 tips/unit, 20 units/case
Pipet tips(200 µL)Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd328228101000 tips/unit, 20 units/case
Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia A
SCA counting chamberMicroptic S.L.10223060810 µm, 2 Chambers
The container for semen sampleJiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD20230701Polymer-based receptacle for semen sample
Thermostatic tableShenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTDMQ30004MQ-300
Transfer pipette (10 µL)Eppendoff3121000.015
Transfer pipette (1000 µL)Eppendoff3121000.12
Transfer pipette (200 µL)Eppendoff3121000.082
Two-dimensional shakerDragonLab822000010000VC5A002205

References

  1. Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. A unique view on male infertility around the globe. Reprod Biol Endocrinol. 13, 37 (2015).
  2. Sharlip, I. D., et al. Best practice policies for male infertility. Fertil Ster....

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 203

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved