فحص الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي

Summary

تقدم هذه الورقة بروتوكولا اقتصاديا وفعالا لفحص الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي. بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض الإيجابية للبيروكسيديز في السائل المنوي في غضون 60 دقيقة ، مما يحسن بشكل فعال كفاءة مختبر أمراض الذكورة وأخصائيي أمراض الذكورة.

Abstract

يمكن أن تؤدي زيادة عدد الكريات البيض إلى انخفاض حركة المنوية ، وزيادة التشوهات المورفولوجية للحيوانات المنوية ، وارتفاع مؤشر تجزئة الحمض النووي للحيوانات المنوية ، وضعف وظيفة الجسم القمي للحيوانات المنوية ، وحتى التأثير على التطور الجنيني. وهو مرض ذكوري شائع في الممارسة السريرية وأحد الأسباب المهمة للعقم عند الذكور. عند تحديد ما إذا كان التهاب الجهاز التناسلي الذكري موجودا ، غالبا ما يختار أخصائيو الذكورة فحص الخلايا المستديرة أو إيلاستاز البلازما المنوية في السائل المنوي كأساس تشخيصي سريري. ومع ذلك ، فإن فحص الخلايا المستديرة يتأثر بسهولة بالخلايا المنوية المولدة للحيوانات المنوية والخلايا الظهارية في الجهاز التناسلي ، والتي لا تساهم في الحد من الاستخدام العشوائي وغير الضروري للمضادات الحيوية. في الوقت نفسه ، فإن عملية الكشف عن الإيلاستاز معقدة نسبيا ، وتستغرق وقتا طويلا ، وبطيئة في الإبلاغ عن النتائج ، وهو أمر غير مفيد للتشخيص المبكر وعلاج أمراض مثل التهابات الجهاز التناسلي الذكري (MGTIs). لقد طبقنا بشكل مبتكر فحص الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي بمساعدة نظام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر (CASA) كمعيار تشخيصي ل leukocytospermia ، وحل هذه المشاكل بنجاح. يتطلب هذا الفحص فقط إضافة سائل التشغيل المكون من أربعة كواشف إلى العينة ، ويمكن التحكم في إجمالي وقت التفاعل في درجة حرارة الغرفة في غضون 20-30 دقيقة. مع اللطاخة اللاحقة والفحص المجهري ، يمكن الحصول على تركيز الكريات البيض إيجابية البيروكسيديز في السائل المنوي في غضون 60 دقيقة ، والتي يمكن استخدامها لتشخيص ما إذا كان التهاب الجهاز التناسلي الذكري موجودا.

Introduction

برز العقم كقضية صحية عامة عالمية تؤثر على حوالي 15٪ من الأزواج في سن الإنجاب. تساهم العوامل الذكورية بحوالي 50٪ من إجمالي حالات ضعف الخصوبة ، ويمكن أن يعزى ما يقرب من 20٪ إلى 30٪ فقط إلى العوامل الذكورية^1،2،3. تشكل التهابات الجهاز التناسلي الذكري (MGTIs) أحد الأسباب المهمة للعقم عند الذكور ، حيث تمثل حوالي 15٪ من الحالات ^4,5.

معظم الأفراد لديهم كريات الدم البيضاء في السائل المنوي ، والتي تشكل 13 ٪ من الخلايا غير المنوية ، مع نسب تفاضلية هي العدلات 12 ٪ ، الضامة 0.9 ٪ ، والخلايا الليمفاوية 0....

Protocol

تمت مراجعة هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات الطبية التابعة للمستشفى الثالث التابع لجامعة صن يات صن.

1. إعداد حل العمل

1. اجمع الكواشف التالية الضرورية لإعداد محلول العمل - محلول ركيزة أورثو تولويدين ، محلول كلوريد الأمونيوم المشبع (NH₄Cl) ، محلول 148 مليمول / لتر ملح ثنائي الصوديوم لحمض الإيثيلين ديامينيترايتيك (Na₂EDTA) ، ومحلول بيروكسيد الهيدروجين 6٪ (v / v). ضعها على مقعد مختبر بدرجة حرارة الغرفة (RT) مع الأدوات اللازمة ، مثل ماصات النقل (1000 ميكرولتر ، 200 ميكرولتر ، 10 ميكرولتر) ورفوف أنابيب الاختبار.
   تنبيه: اقرأ ورقة بيانات السلامة (SDS) قبل التعامل مع الكواشف المذكور....

النتائج

عند تنفيذ الإجراء المذكور أعلاه ، يظهر المتفاعل في أنبوب الطرد المركزي في كثير من الأحيان مظهرا شبه شفاف وبراق (الشكل 1). الكشف عن اللون البني الواضح يكشف عن احتمال تحلل كريات الدم البيضاء ، مما قد يؤدي إلى تلطيخ السائل. وبالتالي ، يمكن أن تفشل عملية التلوين ، مما يجعل من الض?.......

Discussion

أورثو تولويدين وبيروكسيد الهيدروجين لهما خصائص حساسة للضوء ويمكن أن تتحلل عند تعرضها للضوء. لضمان فعالية كواشف الاختبار ، يوصى بتخزين سائل العمل المحضر في مكان مظلم.

تظهر عينات السائل المنوي بشكل طبيعي خصائص غير متجانسة. في عملية تحضير عينات السائل المنوي ، يعد الحكم بشكل .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia B
6% (v/v) hydrogen peroxide solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia D
Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE	Microptic S.L.	1222996; Model type: SCA-SCOPE-H	Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment
Disposable centrifugal tube (1.5 mL)	Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD	2210009	Centrifugal tube for Staining process
Disposable transfer pipette (3 mL)	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20221101	Polymer-based pipette
Electronic counter	None	None	A multichannel counter
Electronic scales	Shanghai Liangping Instrument Co., LTD	D9008084	MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g
Makler counting chamber	Makler	MQ30004	0.01 sq.mm, 10 μm deep
Optical microscope	Olympus	3G41067201307	CX31, 10×40
Ortho-toluidine substrate solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia C
Pipet tips(1 mL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	02923205	1000 tips/unit, 5 units/case
Pipet tips(10 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	00323961	1000 tips/unit, 20 units/case
Pipet tips(200 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	32822810	1000 tips/unit, 20 units/case
Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia A
SCA counting chamber	Microptic S.L.	102230608	10 µm, 2 Chambers
The container for semen sample	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20230701	Polymer-based receptacle for semen sample
Thermostatic table	Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD	MQ30004	MQ-300
Transfer pipette (10 µL)	Eppendoff	3121000.015
Transfer pipette (1000 µL)	Eppendoff	3121000.12
Transfer pipette (200 µL)	Eppendoff	3121000.082
Two-dimensional shaker	DragonLab	822000010000	VC5A002205