Исследование пероксидаз-положительных лейкоцитов в сперме

Резюме

В данной работе представлен экономичный и эффективный протокол исследования пероксидазоположительных лейкоцитов в сперме. С помощью системы автоматизированного анализа спермы (CASA) можно получить концентрацию пероксидазоположительных лейкоцитов в сперме в течение 60 минут, эффективно повышая эффективность работы андрологической лаборатории и андрологов.

Аннотация

Лейкоцитоспермия может привести к снижению подвижности сперматозоидов, увеличению морфологических аномалий сперматозоидов, повышению индекса фрагментации ДНК сперматозоидов, нарушению функции акросом сперматозоидов и даже к нарушению эмбрионального развития. Это распространенное андрологическое заболевание в клинической практике и одна из важных причин мужского бесплодия. При определении наличия воспаления мужского репродуктивного тракта андрологи часто выбирают исследование круглых клеток или семенной плазменной эластазы в сперме в качестве клинико-диагностической основы. Однако на исследование круглых клеток легко влияют отшелушивающиеся сперматогенные клетки и эпителиальные клетки репродуктивного тракта, которые не способствуют уменьшению беспорядочного и ненужного применения антибиотиков. В то же время процесс обнаружения эластазы является относительно сложным, трудоемким и медленным в получении результатов, что не способствует ранней диагностике и лечению таких заболеваний, как инфекции мужских половых путей (МГТИ). Мы инновационно применили исследование пероксидазоположительных лейкоцитов в сперме с помощью системы компьютерного анализа спермы (CASA) в качестве диагностического критерия лейкоцитоспермии, успешно решив эти проблемы. Это исследование требует только добавления рабочей жидкости, состоящей из четырех реагентов, в образец, а общее время реакции при комнатной температуре можно контролировать в течение 20-30 минут. При последующем мазке и микроскопическом исследовании можно получить концентрацию пероксидазоположительных лейкоцитов в сперме в общей сложности в течение 60 мин, что может быть использовано для диагностики наличия воспаления мужских половых путей.

Введение

Бесплодие стало глобальной проблемой общественного здравоохранения, затрагивающей примерно 15% пар в репродуктивном возрасте. Мужские факторы составляют около 50% от общего числа случаев субфертильности, и почти 20-30% могут быть отнесены исключительно к мужским факторам ^1,2,3. Инфекции мужских половых путей (МГТИ) являются одной из значимых причин мужского бесплодия, составляя около 15% случаев ^4,5.

У большинства людей лейкоциты в сперме составляют 13% несперматозоидных клеток, с дифференц....

протокол

Это исследование было рассмотрено и одобрено Комитетом по медицинской этике Третьей филиальной больницы Университета Сунь Ятсена.

1. Приготовление рабочего раствора

1. Подготовьте следующие реагенты, необходимые для приготовления рабочего раствора: раствор ортотолуидинового субстрата, раствор насыщенного хлорида аммония (NH₄Cl), раствор динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (Na₂ЭДТА) 148 ммоль/л и 6% раствор перекиси водорода. Поместите их на лабораторный стол при комнатной температуре вместе с необходимыми инструментами, такими как пипетки для переноса (1000 мкл, 200 мкл, 10 мкл) и....

Результаты

После выполнения вышеупомянутой процедуры реагент в центрифужной пробирке часто проявляет субпрозрачный опалесцирующий вид (Рисунок 1). Обнаружение явно коричневого цвета свидетельствует о потенциальной дегрануляции лейкоцитов, что может привести к окрашиванию жидк.......

Обсуждение

Орто-толуидин и перекись водорода обладают светочувствительными свойствами и могут разлагаться под воздействием света. Для обеспечения эффективности испытуемых реагентов приготовленную рабочую жидкость рекомендуется хранить в темном месте.

Образцы спермы, естестве?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia B
6% (v/v) hydrogen peroxide solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia D
Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE	Microptic S.L.	1222996; Model type: SCA-SCOPE-H	Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment
Disposable centrifugal tube (1.5 mL)	Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD	2210009	Centrifugal tube for Staining process
Disposable transfer pipette (3 mL)	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20221101	Polymer-based pipette
Electronic counter	None	None	A multichannel counter
Electronic scales	Shanghai Liangping Instrument Co., LTD	D9008084	MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g
Makler counting chamber	Makler	MQ30004	0.01 sq.mm, 10 μm deep
Optical microscope	Olympus	3G41067201307	CX31, 10×40
Ortho-toluidine substrate solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia C
Pipet tips(1 mL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	02923205	1000 tips/unit, 5 units/case
Pipet tips(10 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	00323961	1000 tips/unit, 20 units/case
Pipet tips(200 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	32822810	1000 tips/unit, 20 units/case
Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia A
SCA counting chamber	Microptic S.L.	102230608	10 µm, 2 Chambers
The container for semen sample	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20230701	Polymer-based receptacle for semen sample
Thermostatic table	Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD	MQ30004	MQ-300
Transfer pipette (10 µL)	Eppendoff	3121000.015
Transfer pipette (1000 µL)	Eppendoff	3121000.12
Transfer pipette (200 µL)	Eppendoff	3121000.082
Two-dimensional shaker	DragonLab	822000010000	VC5A002205