Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В данной работе представлен экономичный и эффективный протокол исследования пероксидазоположительных лейкоцитов в сперме. С помощью системы автоматизированного анализа спермы (CASA) можно получить концентрацию пероксидазоположительных лейкоцитов в сперме в течение 60 минут, эффективно повышая эффективность работы андрологической лаборатории и андрологов.

Аннотация

Лейкоцитоспермия может привести к снижению подвижности сперматозоидов, увеличению морфологических аномалий сперматозоидов, повышению индекса фрагментации ДНК сперматозоидов, нарушению функции акросом сперматозоидов и даже к нарушению эмбрионального развития. Это распространенное андрологическое заболевание в клинической практике и одна из важных причин мужского бесплодия. При определении наличия воспаления мужского репродуктивного тракта андрологи часто выбирают исследование круглых клеток или семенной плазменной эластазы в сперме в качестве клинико-диагностической основы. Однако на исследование круглых клеток легко влияют отшелушивающиеся сперматогенные клетки и эпителиальные клетки репродуктивного тракта, которые не способствуют уменьшению беспорядочного и ненужного применения антибиотиков. В то же время процесс обнаружения эластазы является относительно сложным, трудоемким и медленным в получении результатов, что не способствует ранней диагностике и лечению таких заболеваний, как инфекции мужских половых путей (МГТИ). Мы инновационно применили исследование пероксидазоположительных лейкоцитов в сперме с помощью системы компьютерного анализа спермы (CASA) в качестве диагностического критерия лейкоцитоспермии, успешно решив эти проблемы. Это исследование требует только добавления рабочей жидкости, состоящей из четырех реагентов, в образец, а общее время реакции при комнатной температуре можно контролировать в течение 20-30 минут. При последующем мазке и микроскопическом исследовании можно получить концентрацию пероксидазоположительных лейкоцитов в сперме в общей сложности в течение 60 мин, что может быть использовано для диагностики наличия воспаления мужских половых путей.

Введение

Бесплодие стало глобальной проблемой общественного здравоохранения, затрагивающей примерно 15% пар в репродуктивном возрасте. Мужские факторы составляют около 50% от общего числа случаев субфертильности, и почти 20-30% могут быть отнесены исключительно к мужским факторам 1,2,3. Инфекции мужских половых путей (МГТИ) являются одной из значимых причин мужского бесплодия, составляя около 15% случаев 4,5.

У большинства людей лейкоциты в сперме составляют 13% несперматозоидных клеток, с дифференц....

протокол

Это исследование было рассмотрено и одобрено Комитетом по медицинской этике Третьей филиальной больницы Университета Сунь Ятсена.

1. Приготовление рабочего раствора

  1. Подготовьте следующие реагенты, необходимые для приготовления рабочего раствора: раствор ортотолуидинового субстрата, раствор насыщенного хлорида аммония (NH4Cl), раствор динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (Na2ЭДТА) 148 ммоль/л и 6% раствор перекиси водорода. Поместите их на лабораторный стол при комнатной температуре вместе с необходимыми инструментами, такими как пипетки для переноса (1000 мкл, 200 мкл, 10 мкл) и....

Результаты

После выполнения вышеупомянутой процедуры реагент в центрифужной пробирке часто проявляет субпрозрачный опалесцирующий вид (Рисунок 1). Обнаружение явно коричневого цвета свидетельствует о потенциальной дегрануляции лейкоцитов, что может привести к окрашиванию жидк.......

Обсуждение

Орто-толуидин и перекись водорода обладают светочувствительными свойствами и могут разлагаться под воздействием света. Для обеспечения эффективности испытуемых реагентов приготовленную рабочую жидкость рекомендуется хранить в темном месте.

Образцы спермы, естестве?.......

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы выражают благодарность Андрологической лаборатории Центра репродуктивной медицины, Третьей филиальной больницы Университета Сунь Ятсена, за предоставление возможностей для проведения данного исследования. Никакого финансирования на подготовку этой статьи не было.

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia B
6% (v/v) hydrogen peroxide solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia D
Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE Microptic S.L.1222996; Model type: SCA-SCOPE-HComputer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment
Disposable centrifugal tube (1.5 mL)Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD2210009Centrifugal tube for Staining process
Disposable transfer pipette (3 mL)Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD20221101Polymer-based pipette
Electronic counterNoneNoneA multichannel counter
Electronic scalesShanghai Liangping Instrument Co., LTDD9008084MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g
Makler counting chamberMaklerMQ300040.01 sq.mm, 10 μm deep
Optical microscopeOlympus3G41067201307CX31, 10×40
Ortho-toluidine substrate solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia C
Pipet tips(1 mL)Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd029232051000 tips/unit, 5 units/case
Pipet tips(10 µL)Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd003239611000 tips/unit, 20 units/case
Pipet tips(200 µL)Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd328228101000 tips/unit, 20 units/case
Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia A
SCA counting chamberMicroptic S.L.10223060810 µm, 2 Chambers
The container for semen sampleJiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD20230701Polymer-based receptacle for semen sample
Thermostatic tableShenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTDMQ30004MQ-300
Transfer pipette (10 µL)Eppendoff3121000.015
Transfer pipette (1000 µL)Eppendoff3121000.12
Transfer pipette (200 µL)Eppendoff3121000.082
Two-dimensional shakerDragonLab822000010000VC5A002205

Ссылки

  1. Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. A unique view on male infertility around the globe. Reprod Biol Endocrinol. 13, 37 (2015).
  2. Sharlip, I. D., et al. Best practice policies for male infertility. Fertil Ster....

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

JoVE203

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены