A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מאמר זה מציג פרוטוקול חסכוני ויעיל לבדיקת לויקוציטים חיוביים לפרוקסידז בזרע. בעזרת מערכת ניתוח זרע בסיוע מחשב (CASA), ניתן להשיג את ריכוז הלויקוציטים החיוביים לפרוקסידז בזרע תוך 60 דקות בסך הכל, ובכך לשפר ביעילות את היעילות של מעבדה אנדרולוגית ואנדרולוגים.

Abstract

לוקוציטוספרמיה יכולה להוביל לירידה בתנועתיות הזרעונים, הפרעות מורפולוגיות מוגברות בזרעונים, עלייה במדד פיצול ה- DNA של הזרעונים, פגיעה בתפקוד אקרוזום הזרעונים, ואפילו התפתחות עוברית מושפעת. זוהי מחלה אנדרולוגית נפוצה בפרקטיקה הקלינית ואחד הגורמים החשובים לאי פוריות הגבר. כאשר קובעים אם קיימת דלקת בדרכי הרבייה הגברית, אנדרולוגים בוחרים לעתים קרובות לבחון תאים עגולים או אלסטאז פלזמה זרע בזרע כבסיס אבחוני קליני. עם זאת, בדיקת תאים עגולים מושפעת בקלות מתאי זרע מושחתים ותאי אפיתל בדרכי הרבייה, שאינם תורמים להפחתת השימוש חסר ההבחנה והמיותר באנטיביוטיקה. יחד עם זאת, תהליך הגילוי של אלסטאז הוא מסובך יחסית, גוזל זמן ואיטי בדיווח על תוצאות, מה שאינו מועיל לאבחון מוקדם וטיפול במחלות כגון דלקות בדרכי המין הגבריות (MGTI). יישמנו באופן חדשני את הבדיקה של לויקוציטים חיוביים לפרוקסידז בזרע בסיוע מערכת ניתוח זרע בסיוע מחשב (CASA) כקריטריון אבחון עבור לויקוציטוספרמיה, ופתרנו בהצלחה בעיות אלה. בדיקה זו דורשת רק תוספת של נוזל הפעולה המורכב מארבעה ריאגנטים לתוך הדגימה, ואת זמן התגובה הכולל בטמפרטורת החדר ניתן לשלוט בתוך 20-30 דקות. עם כתם הבא בדיקה מיקרוסקופית, ריכוז של לויקוציטים חיוביים peroxidase בזרע ניתן להשיג בתוך סך של 60 דקות, אשר ניתן להשתמש בו כדי לאבחן אם דלקת של מערכת הרבייה הגברית קיים.

Introduction

אי פוריות התפתחה כבעיה עולמית של בריאות הציבור המשפיעה על כ -15% מהזוגות בגיל הפוריות שלהם. גורמים גבריים נתרמים על ידי כ -50% מכלל מקרי תת-פוריות, וכמעט 20% עד 30% ניתן לייחס אך ורק לגורמים גבריים 1,2,3. זיהומים בדרכי המין הגבריים (MGTIs) מהווים את אחד הגורמים המשמעותיים לאי פוריות הגבר, ומהווים כ -15% מהמקרים 4,5.

לרוב האנשים יש לויקוציטים בזרע שלהם, המהווים 13% מהתאים שאינם זרעונים, כאשר הפרופורציות השונות הן נויטרופילים 12%, מקרופאגים 0.9% ולימפוציטים 0.1%6,....

Protocol

מחקר זה נבדק ואושר על ידי ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים המסונף השלישי של אוניברסיטת סון יאט-סן.

1. הכנת פתרון העבודה

  1. אסוף את הריאגנטים הבאים החיוניים להכנת תמיסת העבודה - תמיסת מצע אורתו-טולוידין, תמיסת אמוניום כלורי רווי (NH4Cl), תמיסת מלח דיסודיום 148 mmol / L ethylenediaminetetraacetic acid (Na2EDTA) ותמיסת מי חמצן 6% (v/v). הניחו אותם על ספסל מעבדה בטמפרטורת החדר (RT) יחד עם הכלים הדרושים, כגון פיפטות העברה (1000 μL, 200 μL, 10 μL) ומדפי מבחנה.
    התראה: קרא את גיליון נתוני הבטיחות (SDS) לפני הטיפול בריאגנטים שהוזכרו לעיל.
  2. הכינו בקבוק מגיב חום אטום לאחסון והגנה על פתרון העבו....

תוצאות

בעת יישום ההליך שהוזכר לעיל, המגיב בצינור הצנטריפוגה מפגין לעתים קרובות מראה תת-שקוף ואטום, (איור 1). זיהוי צבע חום ברור חושף degranulation פוטנציאלי של לויקוציטים, אשר עלול לגרום כתמים נוזליים. כתוצאה מכך, תהליך הצביעה עלול להיכשל, ולכן יש צורך להכתים מחדש או לאסוף דגימת זרע חדשה ל.......

Discussion

אורתו-טולוידין ומי חמצן הם בעלי תכונות רגישות לאור ויכולים להתפרק כאשר הם נחשפים לאור. כדי להבטיח את האפקטיביות של ריאגנטים הבדיקה, מומלץ לאחסן את נוזל העבודה מוכן במקום חשוך.

דגימות זרע מציגות באופן טבעי מאפיינים הטרוגניים. בתהליך ההכנה של דגימות זרע, שיפוט נכון של מצב ההנ.......

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

המחברים אסירי תודה למעבדה האנדרולוגית של המרכז לרפואת רבייה, בית החולים המסונף השלישי של אוניברסיטת סון יאט-סן, על אספקת המתקנים למחקר זה. לא היה מעורב מימון בהכנת מאמר זה.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia B
6% (v/v) hydrogen peroxide solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia D
Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE Microptic S.L.1222996; Model type: SCA-SCOPE-HComputer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment
Disposable centrifugal tube (1.5 mL)Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD2210009Centrifugal tube for Staining process
Disposable transfer pipette (3 mL)Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD20221101Polymer-based pipette
Electronic counterNoneNoneA multichannel counter
Electronic scalesShanghai Liangping Instrument Co., LTDD9008084MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g
Makler counting chamberMaklerMQ300040.01 sq.mm, 10 μm deep
Optical microscopeOlympus3G41067201307CX31, 10×40
Ortho-toluidine substrate solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia C
Pipet tips(1 mL)Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd029232051000 tips/unit, 5 units/case
Pipet tips(10 µL)Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd003239611000 tips/unit, 20 units/case
Pipet tips(200 µL)Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd328228101000 tips/unit, 20 units/case
Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solutionShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD20230301Agentia A
SCA counting chamberMicroptic S.L.10223060810 µm, 2 Chambers
The container for semen sampleJiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD20230701Polymer-based receptacle for semen sample
Thermostatic tableShenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTDMQ30004MQ-300
Transfer pipette (10 µL)Eppendoff3121000.015
Transfer pipette (1000 µL)Eppendoff3121000.12
Transfer pipette (200 µL)Eppendoff3121000.082
Two-dimensional shakerDragonLab822000010000VC5A002205

References

  1. Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. A unique view on male infertility around the globe. Reprod Biol Endocrinol. 13, 37 (2015).
  2. Sharlip, I. D., et al. Best practice policies for male infertility. Fertil Ster....

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE203

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved