Die Untersuchung von Peroxidase-positiven Leukozyten im Sperma

Zusammenfassung

In dieser Arbeit wird ein wirtschaftliches und effizientes Protokoll zur Untersuchung von Peroxidase-positiven Leukozyten im Sperma vorgestellt. Mit Hilfe eines computergestützten Samenanalysesystems (CASA) kann die Konzentration von Peroxidase-positiven Leukozyten im Sperma innerhalb von insgesamt 60 Minuten ermittelt werden, wodurch die Effizienz des andrologischen Labors und der Andrologen effektiv verbessert wird.

Zusammenfassung

Leukozytospermie kann zu einer verminderten Beweglichkeit der Spermien, zu vermehrten morphologischen Anomalien der Spermien, zu einem erhöhten DNA-Fragmentierungsindex der Spermien, zu einer Beeinträchtigung der Funktion des Spermienakrosoms und sogar zu einer Beeinträchtigung der Embryonalentwicklung führen. Es ist eine häufige andrologische Erkrankung in der klinischen Praxis und eine der Hauptursachen für männliche Unfruchtbarkeit. Bei der Feststellung, ob eine Entzündung des männlichen Fortpflanzungstrakts vorliegt, entscheiden sich Andrologen häufig für die Untersuchung runder Zellen oder der Samenplasma-Elastase im Sperma als klinisch-diagnostische Grundlage. Die Untersuchung von runden Zellen wird jedoch leicht durch abgestreifte spermatogene Zellen und Epithelzellen des Fortpflanzungstrakts beeinflusst, die nicht dazu beitragen, den wahllosen und unnötigen Einsatz von Antibiotika zu reduzieren. Gleichzeitig ist der Nachweisprozess der Elastase relativ kompliziert, zeitaufwändig und langsam in der Berichterstattung über die Ergebnisse, was für die Frühdiagnose und Behandlung von Krankheiten wie Infektionen des männlichen Genitaltrakts (MGTIs) nicht von Vorteil ist. Wir haben die Untersuchung von Peroxidase-positiven Leukozyten im Sperma mit Hilfe eines computergestützten Samenanalysesystems (CASA) als diagnostisches Kriterium für Leukozytospermie innovativ angewendet und diese Probleme erfolgreich gelöst. Für diese Untersuchung muss nur die aus vier Reagenzien bestehende Betriebsflüssigkeit in die Probe gegeben werden, und die Gesamtreaktionszeit bei Raumtemperatur kann innerhalb von 20-30 min gesteuert werden. Mit dem anschließenden Abstrich und der mikroskopischen Untersuchung kann innerhalb von insgesamt 60 min die Konzentration von Peroxidase-positiven Leukozyten im Sperma ermittelt werden, anhand derer diagnostiziert werden kann, ob die Entzündung des männlichen Fortpflanzungstraktes vorlag.

Einleitung

Unfruchtbarkeit hat sich zu einem globalen Problem der öffentlichen Gesundheit entwickelt, von dem etwa 15 % der Paare im gebärfähigen Alter betroffen sind. Etwa 50 % der Fälle von Subfertilität sind auf männliche Faktoren zurückzuführen, und fast 20 % bis 30 % können ausschließlich auf männliche Faktoren zurückgeführt werden ^1,2,3. Infektionen des männlichen Genitaltrakts (MGTIs) stellen eine der Hauptursachen für männliche Unfruchtbarkeit dar und machen etwa 15 % der Fälle aus ^4,5.

Die me....

Protokoll

Diese Studie wurde von der medizinischen Ethikkommission des dritten angeschlossenen Krankenhauses der Sun Yat-sen Universität geprüft und genehmigt.

1. Vorbereitung der Arbeitslösung

1. Sammeln Sie die folgenden Reagenzien, die für die Herstellung der Arbeitslösung unerlässlich sind: ortho-Toluidin-Substratlösung, gesättigte Ammoniumchloridlösung (NH₄Cl), 148 mmol/L Ethylendiamintetraessigsäure-Dinatriumsalzlösung (Na₂EDTA) und 6% (v/v) Wasserstoffperoxidlösung. Legen Sie sie zusammen mit den erforderlichen Werkzeugen wie Transferpipetten (1000 μl, 200 μl, 10 μl) und Reagenzglasgestellen auf ei....

Diskussion

Ortho-Toluidin und Wasserstoffperoxid haben lichtempfindliche Eigenschaften und können sich unter Lichteinwirkung zersetzen. Um die Wirksamkeit der Testreagenzien zu gewährleisten, wird empfohlen, die vorbereitete Arbeitsflüssigkeit an einem dunklen Ort zu lagern.

Samenproben weisen naturgemäß heterogene Merkmale auf. Bei der Vorbereitung von Samenproben sind die korrekte Beurteilung des Verflüssigungszustands des Samens und die gründliche Homogenisierung der Samenproben vor jeder Prob.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia B
6% (v/v) hydrogen peroxide solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia D
Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE	Microptic S.L.	1222996; Model type: SCA-SCOPE-H	Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment
Disposable centrifugal tube (1.5 mL)	Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD	2210009	Centrifugal tube for Staining process
Disposable transfer pipette (3 mL)	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20221101	Polymer-based pipette
Electronic counter	None	None	A multichannel counter
Electronic scales	Shanghai Liangping Instrument Co., LTD	D9008084	MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g
Makler counting chamber	Makler	MQ30004	0.01 sq.mm, 10 μm deep
Optical microscope	Olympus	3G41067201307	CX31, 10×40
Ortho-toluidine substrate solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia C
Pipet tips(1 mL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	02923205	1000 tips/unit, 5 units/case
Pipet tips(10 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	00323961	1000 tips/unit, 20 units/case
Pipet tips(200 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	32822810	1000 tips/unit, 20 units/case
Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia A
SCA counting chamber	Microptic S.L.	102230608	10 µm, 2 Chambers
The container for semen sample	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20230701	Polymer-based receptacle for semen sample
Thermostatic table	Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD	MQ30004	MQ-300
Transfer pipette (10 µL)	Eppendoff	3121000.015
Transfer pipette (1000 µL)	Eppendoff	3121000.12
Transfer pipette (200 µL)	Eppendoff	3121000.082
Two-dimensional shaker	DragonLab	822000010000	VC5A002205