L'esame dei leucociti positivi alla perossidasi nel liquido seminale

Riepilogo

Questo documento presenta un protocollo economico ed efficiente per l'esame dei leucociti positivi alla perossidasi nello sperma. Con l'assistenza di un sistema di analisi dello sperma computerizzato (CASA), la concentrazione di leucociti positivi alla perossidasi nello sperma può essere ottenuta entro un totale di 60 minuti, migliorando efficacemente l'efficienza del laboratorio di andrologia e degli andrologi.

Abstract

La leucocitospermia può portare a una diminuzione della motilità degli spermatozoi, a un aumento delle anomalie morfologiche degli spermatozoi, a un aumento dell'indice di frammentazione del DNA degli spermatozoi, a una compromissione della funzione dell'acrosoma degli spermatozoi e persino a un aumento dello sviluppo embrionale. È una malattia andrologica comune nella pratica clinica e una delle principali cause di infertilità maschile. Nel determinare se esiste un'infiammazione del tratto riproduttivo maschile, gli andrologi spesso scelgono di esaminare le cellule rotonde o l'elastasi plasmatica seminale nello sperma come base diagnostica clinica. Tuttavia, l'esame delle cellule rotonde è facilmente influenzato dalle cellule spermatogene e dalle cellule epiteliali del tratto riproduttivo, che non contribuiscono a ridurre l'uso indiscriminato e non necessario di antibiotici. Allo stesso tempo, il processo di rilevamento dell'elastasi è relativamente complicato, richiede tempo e è lento nel riportare i risultati, il che non è vantaggioso per la diagnosi precoce e il trattamento di malattie come le infezioni del tratto genitale maschile (MGTI). Abbiamo applicato in modo innovativo l'esame dei leucociti perossidasi-positivi nel liquido seminale assistito da un sistema di analisi del seme computer-assistito (CASA) come criterio diagnostico per la leucocitospermia, risolvendo con successo questi problemi. Questo esame richiede solo l'aggiunta del fluido operativo costituito da quattro reagenti nel campione e il tempo di reazione totale a temperatura ambiente può essere controllato entro 20-30 minuti. Con il successivo striscio e l'esame microscopico, è possibile ottenere la concentrazione di leucociti positivi alla perossidasi nel liquido seminale entro un totale di 60 minuti, che può essere utilizzata per diagnosticare se l'infiammazione del tratto riproduttivo maschile esisteva.

Introduzione

L'infertilità è emersa come un problema di salute pubblica globale che colpisce circa il 15% delle coppie in età riproduttiva. I fattori maschili sono rappresentati da circa il 50% dei casi totali di subfertilità e quasi il 20-30% può essere attribuito esclusivamente ai fattori maschili ^1,2,3. Le infezioni del tratto genitale maschile (MGTI) costituiscono una delle principali cause di infertilità maschile, rappresentando circa il 15% dei casi ^4,5.

La maggior parte degli individui ha leucoci....

Protocollo

Questo studio è stato esaminato e approvato dal Comitato Etico Medico del Terzo Ospedale Affiliato dell'Università Sun Yat-sen.

1. Preparazione della soluzione di lavoro

1. Raccogliere i seguenti reagenti essenziali per la preparazione della soluzione di lavoro: soluzione di substrato orto-toluidina, soluzione satura di cloruro di ammonio (NH₄Cl), soluzione di sale disodico di acido etilendiamminotetraacetico (Na₂EDTA) 148 mmol/L e soluzione di perossido di idrogeno al 6% (v/v). Posizionarli su un banco da laboratorio a temperatura ambiente (RT) insieme agli strumenti necessari, come pipette di ....

Discussione

L'orto-toluidina e il perossido di idrogeno hanno proprietà fotosensibili e possono decomporsi se esposti alla luce. Per garantire l'efficacia dei reagenti in esame, si consiglia di conservare il fluido di lavoro preparato in un luogo buio.

I campioni di sperma presentano naturalmente caratteristiche eterogenee. Nel processo di preparazione dei campioni di sperma, giudicare correttamente lo stato di liquefazione dello sperma e omogeneizzare accuratamente i campioni di sperma prima di ogni ca.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia B
6% (v/v) hydrogen peroxide solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia D
Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE	Microptic S.L.	1222996; Model type: SCA-SCOPE-H	Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment
Disposable centrifugal tube (1.5 mL)	Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD	2210009	Centrifugal tube for Staining process
Disposable transfer pipette (3 mL)	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20221101	Polymer-based pipette
Electronic counter	None	None	A multichannel counter
Electronic scales	Shanghai Liangping Instrument Co., LTD	D9008084	MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g
Makler counting chamber	Makler	MQ30004	0.01 sq.mm, 10 μm deep
Optical microscope	Olympus	3G41067201307	CX31, 10×40
Ortho-toluidine substrate solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia C
Pipet tips(1 mL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	02923205	1000 tips/unit, 5 units/case
Pipet tips(10 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	00323961	1000 tips/unit, 20 units/case
Pipet tips(200 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	32822810	1000 tips/unit, 20 units/case
Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia A
SCA counting chamber	Microptic S.L.	102230608	10 µm, 2 Chambers
The container for semen sample	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20230701	Polymer-based receptacle for semen sample
Thermostatic table	Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD	MQ30004	MQ-300
Transfer pipette (10 µL)	Eppendoff	3121000.015
Transfer pipette (1000 µL)	Eppendoff	3121000.12
Transfer pipette (200 µL)	Eppendoff	3121000.082
Two-dimensional shaker	DragonLab	822000010000	VC5A002205