Examen de leucocitos positivos para peroxidasa en el semen

Resumen

En este trabajo se presenta un protocolo económico y eficaz para examinar los leucocitos positivos para peroxidasa en el semen. Con la ayuda de un sistema de análisis de semen asistido por computadora (CASA), la concentración de leucocitos positivos para peroxidasa en el semen se puede obtener en un total de 60 minutos, mejorando efectivamente la eficiencia del laboratorio de andrología y los andrólogos.

Resumen

La leucocitospermia puede conducir a una disminución de la motilidad de los espermatozoides, un aumento de las anomalías morfológicas de los espermatozoides, un índice elevado de fragmentación del ADN de los espermatozoides, un deterioro de la función del acrosomia de los espermatozoides e incluso afectar el desarrollo embrionario. Es una enfermedad andrológica común en la práctica clínica y una de las causas importantes de infertilidad masculina. Al determinar si existe inflamación del tracto reproductor masculino, los andrólogos a menudo optan por examinar las células redondas o la elastasa plasmática seminal en el semen como base diagnóstica clínica. Sin embargo, el examen de las células redondas es fácilmente influenciado por las células espermatogénicas desprendidas y las células epiteliales del tracto reproductivo, que no contribuyen a reducir el uso indiscriminado e innecesario de antibióticos. Al mismo tiempo, el proceso de detección de la elastasa es relativamente complicado, requiere mucho tiempo y tarda en informar los resultados, lo que no es beneficioso para el diagnóstico y tratamiento tempranos de enfermedades como las infecciones del tracto genital masculino (MGTI). Hemos aplicado de forma innovadora el examen de leucocitos positivos a peroxidasa en semen asistido por un sistema de análisis de semen asistido por ordenador (CASA) como criterio diagnóstico de leucocitospermia, resolviendo con éxito estos problemas. Este examen solo requiere la adición del fluido operativo que consta de cuatro reactivos en la muestra, y el tiempo total de reacción a temperatura ambiente se puede controlar en 20-30 minutos. Con el frotis posterior y el examen microscópico, se puede obtener la concentración de leucocitos positivos para peroxidasa en el semen en un total de 60 min, lo que puede utilizarse para diagnosticar si existía la inflamación del tracto reproductor masculino.

Introducción

La infertilidad se ha convertido en un problema de salud pública mundial que afecta aproximadamente al 15% de las parejas en edad reproductiva. Los factores masculinos son aportados por alrededor del 50% del total de los casos de subfertilidad, y entre el 20% y el 30% pueden atribuirse únicamente a factores masculinos ^1,2,3. Las infecciones del tracto genital masculino (ITMG) constituyen una de las causas significativas de infertilidad masculina, representando alrededor del 15% de los casos ^4,5.

Protocolo

Este estudio ha sido revisado y aprobado por el Comité de Ética Médica del Tercer Hospital Afiliado de la Universidad Sun Yat-sen.

1. Preparación de la solución de trabajo

1. Reúna los siguientes reactivos esenciales para preparar la solución de trabajo: solución de sustrato de orto-toluidina, solución saturada de cloruro de amonio (NH₄Cl), solución de sal disódica de ácido etilendiaminotetraacético (Na₂EDTA) de 148 mmol/L y solución de peróxido de hidrógeno al 6% (v/v). Colóquelos en una mesa de laboratorio a temperatura ambiente (RT) junto con las herramientas necesarias, como pipetas de trans....

Discusión

La ortotoluidina y el peróxido de hidrógeno tienen propiedades fotosensibles y pueden descomponerse cuando se exponen a la luz. Para garantizar la eficacia de los reactivos de prueba, se recomienda que el fluido de trabajo preparado se almacene en un lugar oscuro.

Las muestras de semen presentan naturalmente características heterogéneas. En el proceso de preparación de muestras de semen, juzgar correctamente el estado de licuefacción del semen y homogeneizar a fondo las muestras de seme.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia B
6% (v/v) hydrogen peroxide solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia D
Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE	Microptic S.L.	1222996; Model type: SCA-SCOPE-H	Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment
Disposable centrifugal tube (1.5 mL)	Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD	2210009	Centrifugal tube for Staining process
Disposable transfer pipette (3 mL)	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20221101	Polymer-based pipette
Electronic counter	None	None	A multichannel counter
Electronic scales	Shanghai Liangping Instrument Co., LTD	D9008084	MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g
Makler counting chamber	Makler	MQ30004	0.01 sq.mm, 10 μm deep
Optical microscope	Olympus	3G41067201307	CX31, 10×40
Ortho-toluidine substrate solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia C
Pipet tips(1 mL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	02923205	1000 tips/unit, 5 units/case
Pipet tips(10 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	00323961	1000 tips/unit, 20 units/case
Pipet tips(200 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	32822810	1000 tips/unit, 20 units/case
Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia A
SCA counting chamber	Microptic S.L.	102230608	10 µm, 2 Chambers
The container for semen sample	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20230701	Polymer-based receptacle for semen sample
Thermostatic table	Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD	MQ30004	MQ-300
Transfer pipette (10 µL)	Eppendoff	3121000.015
Transfer pipette (1000 µL)	Eppendoff	3121000.12
Transfer pipette (200 µL)	Eppendoff	3121000.082
Two-dimensional shaker	DragonLab	822000010000	VC5A002205