L’examen des leucocytes peroxydases positifs dans le sperme

Résumé

Cet article présente un protocole économique et efficace pour l’examen des leucocytes peroxydases positifs dans le sperme. À l’aide d’un système d’analyse de sperme assisté par ordinateur (CASA), la concentration de leucocytes positifs à la peroxydase dans le sperme peut être obtenue en 60 minutes au total, ce qui améliore efficacement l’efficacité du laboratoire d’andrologie et des andrologues.

Résumé

La leucocytospermie peut entraîner une diminution de la motilité des spermatozoïdes, une augmentation des anomalies morphologiques des spermatozoïdes, une augmentation de l’indice de fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes, une altération de la fonction acrosomique des spermatozoïdes et même une altération du développement embryonnaire. Il s’agit d’une maladie andrologique courante dans la pratique clinique et l’une des causes importantes de l’infertilité masculine. Pour déterminer s’il existe une inflammation de l’appareil reproducteur masculin, les andrologues choisissent souvent d’examiner des cellules rondes ou de l’élastase plasmatique séminale dans le sperme comme base de diagnostic clinique. Cependant, l’examen des cellules rondes est facilement influencé par les cellules spermatogènes desquamées et les cellules épithéliales de l’appareil reproducteur, qui ne contribuent pas à réduire l’utilisation aveugle et inutile d’antibiotiques. Dans le même temps, le processus de détection de l’élastase est relativement compliqué, prend du temps et lent, ce qui n’est pas bénéfique pour le diagnostic précoce et le traitement de maladies telles que les infections de l’appareil génital masculin (MGTI). Nous avons appliqué de manière innovante l’examen des leucocytes peroxydases positifs dans le sperme assisté par un système d’analyse de sperme assisté par ordinateur (CASA) comme critère de diagnostic de la leucocytospermie, résolvant avec succès ces problèmes. Cet examen ne nécessite que l’ajout du fluide de fonctionnement composé de quatre réactifs dans l’échantillon, et le temps de réaction total à température ambiante peut être contrôlé en 20 à 30 minutes. Avec le frottis et l’examen microscopique qui s’ensuivent, la concentration de leucocytes positifs à la peroxydase dans le sperme peut être obtenue en 60 minutes au total, ce qui peut être utilisé pour diagnostiquer si l’inflammation de l’appareil reproducteur masculin existait.

Introduction

L’infertilité est devenue un problème de santé publique mondial qui touche environ 15 % des couples en âge de procréer. Les facteurs masculins sont dus à environ 50 % des cas totaux d’hypofertilité, et près de 20 % à 30 % peuvent être attribués uniquement aux facteurs masculins ^1,2,3. Les infections de l’appareil génital masculin constituent l’une des causes importantes d’infertilité masculine, représentant environ 15 % des cas ^4,5.

La plupart des individus ont des leucocytes dans leur sper....

Protocole

Cette étude a été examinée et approuvée par le Comité d’éthique médicale du troisième hôpital affilié de l’Université Sun Yat-sen.

1. Préparation de la solution de travail

1. Rassemblez les réactifs suivants essentiels à la préparation de la solution de travail : solution de substrat d’ortho-toluidine, solution saturée de chlorure d’ammonium (NH₄Cl), solution de sel disodique d’acide éthylènediaminetétraacétique à 148 mmol/L (Na₂EDTA) et solution de peroxyde d’hydrogène à 6 % (v/v). Placez-les sur une paillasse de laboratoire à température ambiante (RT) avec les outils nécessaires, tels que des ....

Discussion

L’ortho-toluidine et le peroxyde d’hydrogène ont des propriétés photosensibles et peuvent se décomposer lorsqu’ils sont exposés à la lumière. Pour garantir l’efficacité des réactifs de test, il est recommandé de stocker le fluide de travail préparé dans un endroit sombre.

Les échantillons de sperme présentent naturellement des caractéristiques hétérogènes. Dans le processus de préparation des échantillons de sperme, il est crucial d’évaluer correctement l’éta.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
148 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid disodium (Na2EDTA) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia B
6% (v/v) hydrogen peroxide solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia D
Automatic Sperm Class Analyzer – SCA SCOPE	Microptic S.L.	1222996; Model type: SCA-SCOPE-H	Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) equipment
Disposable centrifugal tube (1.5 mL)	Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD	2210009	Centrifugal tube for Staining process
Disposable transfer pipette (3 mL)	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20221101	Polymer-based pipette
Electronic counter	None	None	A multichannel counter
Electronic scales	Shanghai Liangping Instrument Co., LTD	D9008084	MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0.01 g
Makler counting chamber	Makler	MQ30004	0.01 sq.mm, 10 μm deep
Optical microscope	Olympus	3G41067201307	CX31, 10×40
Ortho-toluidine substrate solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia C
Pipet tips(1 mL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	02923205	1000 tips/unit, 5 units/case
Pipet tips(10 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	00323961	1000 tips/unit, 20 units/case
Pipet tips(200 µL)	Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd	32822810	1000 tips/unit, 20 units/case
Saturated ammonium chloride (NH4Cl) solution	ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD	20230301	Agentia A
SCA counting chamber	Microptic S.L.	102230608	10 µm, 2 Chambers
The container for semen sample	Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD	20230701	Polymer-based receptacle for semen sample
Thermostatic table	Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD	MQ30004	MQ-300
Transfer pipette (10 µL)	Eppendoff	3121000.015
Transfer pipette (1000 µL)	Eppendoff	3121000.12
Transfer pipette (200 µL)	Eppendoff	3121000.082
Two-dimensional shaker	DragonLab	822000010000	VC5A002205