تقنية 2D-HPLC-MS جنبا إلى جنب مع الشبكة الجزيئية لتحديد المكونات في بندول Aconitum الطب التبتي

Summary

تستخدم هذه الدراسة تقنية قياس الطيف الكتلي للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ثنائية الأبعاد (2D-HPLC-MS) جنبا إلى جنب مع الشبكات الجزيئية لكشف التركيب الكيميائي المعقد للنبات الطبي التبتي Aconitum pendulum Busch (APB). توفر المقالة بروتوكولا مفصلا للاستكشاف المنهجي وتحديد المكونات الكيميائية المعقدة للأدوية العشبية.

Abstract

في هذه الدراسة ، تم استخدام نهج شامل ، باستخدام تقنية 2D-HPLC-MS جنبا إلى جنب مع الشبكة الجزيئية لكشف التركيب الكيميائي المعقد للنباتات الطبية التبتية APB. من خلال تنفيذ 2D-HPLC ، تم تحقيق فصل معزز للمخاليط المعقدة ، مما مكن من عزل المركبات الفردية لتحليلها لاحقا. ساعد نهج الشبكة الجزيئية أيضا في توضيح العلاقات الهيكلية بين هذه المركبات ، مما ساهم في تحديد الجزيئات النشطة بيولوجيا المحتملة. حددت هذه الاستراتيجية المتكاملة بكفاءة مجموعة واسعة من المكونات الكيميائية الموجودة داخل المصنع. كشفت النتائج عن مجموعة متنوعة من المكونات الكيميائية داخل APB ، بما في ذلك قلويدات ، من بين أمور أخرى. لا يعزز هذا البحث فهم الملف الكيميائي النباتي لهذا الطب التبتي التقليدي فحسب ، بل يوفر أيضا رؤى قيمة حول خصائصه العلاجية المحتملة. يثبت تكامل 2D-HPLC-MS والشبكة الجزيئية أنه أداة قوية لاستكشاف وتحديد التركيبات الكيميائية المعقدة في الأدوية العشبية بشكل منهجي ، مما يمهد الطريق لمزيد من البحث والتطوير في مجال اكتشاف المنتجات الطبيعية.

Introduction

الطب التبتي هو جزء لا يتجزأ من الطب الصيني التقليدي ، والتمسك بمبادئ الممارسات الطبية التبتية ، ويستخدم للوقاية من الأمراض وعلاجها¹. ومع ذلك ، يحتوي طب الأعشاب التبتي على مكونات كيميائية نباتية معقدة تتميز بتقلبات كبيرة في المحتوى. أصبح الفهم المحدود للعناصر الأساسية النشطة بيولوجيا عنق الزجاجة في تحديث الطب التبتي². تم استخدام تطبيق قياس الطيف الكتلي اللوني السائل (LC-MS) ، الذي يجمع بين قوة الفصل القوية للكروماتوغرافيا والحساسية العالية لقياس الطيف الكتلي (MS) ، على نطاق واسع في تحليل الطب الطبيعي³. ومع ذلك ، نظرا لمحدودية آلية فصل واحدة ، تميل المكونات ذات الهياكل المتشابهة للغاية إلى الذوبان ف....

Protocol

1. التحضير

1. إعداد العينة
   1. استخدم ميزان حساسية 1/10000 لوزن 0.25 جم (الوزن الجاف) من APB في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 3 مل ، وأضف 2.5 مل من الميثانول ، ثم صوتنة لمدة 30 دقيقة (قوة 240 واط ، تردد 40 كيلو هرتز).
   2. قم بإجراء الطرد المركزي عند 1.2 × جم لمدة 5 دقائق ، واجمع المادة الطافية ، وقم بالتصفية من خلال مرشح غشاء بحجم مسام 0.22 ميكرومتر.
2. تحضير المواد التجريبية
   1. قم بإعداد المرحلة المتنقلة ثنائية الأبعاد ، واستخدم الأسيتونيتريل كمرحلة عضوية B ، وقم بتكوين 0.1٪ من حمض الفورميك عالي النقاء كمرحلة مائية A.
   2. قم بإجراء الترشيح على مرحلتين (0.22 ميكرومتر) وصوتنة باستخدام جهاز الموجات فوق ....

النتائج

تم استخدام APB ككائن نموذجي للتحقق من جدوى تقنية 2D-HPLC-MS بالاقتران مع طريقة MN. من خلال استيراد بيانات MS الأولية إلى MN مع تعيين المعلمات إلى الافتراضي ، تم إنشاء MN. MN هي استراتيجية حسابية بصرية تصور جميع الأيونات الجزيئية المكتشفة في تجربة LC-MS-MS كاملة والعلاقات الكيميائية بين هذه الأيونات الجز?.......

Discussion

كان التركيز الأساسي لهذه التجربة هو تحسين طريقة جزئية في إطار فصل الطور السائل ثنائي الأبعاد. لتحقيق ذلك ، تم دمج معدل تخفيف جديد في العمود بسلاسة في نظام كروماتوغرافيا السائل ثنائي الأبعاد (2D-LC). كان هذا التعديل الفني ذا أهمية قصوى لأنه رفع بشكل كبير من الكفاءة في تحديد المكونات الكيميائي?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetonitrile	Fisher chemical	F22M81203	Mobile phase
Aconitum pendulum	/	/	Herb medicine
Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC	Agilent Technologies	G2198-90001	Liquid chromatography
Disposable syringes	Chengdu Keen experimental equipment	/	1ml
EP tube	Chengdu Keen experimental equipment	/	3ml
Liquid phase injection bottle	Chengdu Keen experimental equipment	/	1.5ml
LTQ XL Mass Spectrometer	Thermo Fisher	LTQ21991	Mass Spectrometer
Microporous membranes	Chengdu Keen experimental equipment	/	0.22μm
Ultimate XB-C18,5 μm,2.1 x 200 mm	Welch	00201-31015	Reversed-phase column
Ultrasonic Cleaner	GT Sonic	UGT20DEC048Y	Ultrasonic Cleaner 240W 40KHz
XAmide,3 μm,100A	Dalian Mondi Technology	D2019110601	Hydrophilic column