JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تستخدم هذه الدراسة تقنية قياس الطيف الكتلي للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ثنائية الأبعاد (2D-HPLC-MS) جنبا إلى جنب مع الشبكات الجزيئية لكشف التركيب الكيميائي المعقد للنبات الطبي التبتي Aconitum pendulum Busch (APB). توفر المقالة بروتوكولا مفصلا للاستكشاف المنهجي وتحديد المكونات الكيميائية المعقدة للأدوية العشبية.

Abstract

في هذه الدراسة ، تم استخدام نهج شامل ، باستخدام تقنية 2D-HPLC-MS جنبا إلى جنب مع الشبكة الجزيئية لكشف التركيب الكيميائي المعقد للنباتات الطبية التبتية APB. من خلال تنفيذ 2D-HPLC ، تم تحقيق فصل معزز للمخاليط المعقدة ، مما مكن من عزل المركبات الفردية لتحليلها لاحقا. ساعد نهج الشبكة الجزيئية أيضا في توضيح العلاقات الهيكلية بين هذه المركبات ، مما ساهم في تحديد الجزيئات النشطة بيولوجيا المحتملة. حددت هذه الاستراتيجية المتكاملة بكفاءة مجموعة واسعة من المكونات الكيميائية الموجودة داخل المصنع. كشفت النتائج عن مجموعة متنوعة من المكونات الكيميائية داخل APB ، بما في ذلك قلويدات ، من بين أمور أخرى. لا يعزز هذا البحث فهم الملف الكيميائي النباتي لهذا الطب التبتي التقليدي فحسب ، بل يوفر أيضا رؤى قيمة حول خصائصه العلاجية المحتملة. يثبت تكامل 2D-HPLC-MS والشبكة الجزيئية أنه أداة قوية لاستكشاف وتحديد التركيبات الكيميائية المعقدة في الأدوية العشبية بشكل منهجي ، مما يمهد الطريق لمزيد من البحث والتطوير في مجال اكتشاف المنتجات الطبيعية.

Introduction

الطب التبتي هو جزء لا يتجزأ من الطب الصيني التقليدي ، والتمسك بمبادئ الممارسات الطبية التبتية ، ويستخدم للوقاية من الأمراض وعلاجها1. ومع ذلك ، يحتوي طب الأعشاب التبتي على مكونات كيميائية نباتية معقدة تتميز بتقلبات كبيرة في المحتوى. أصبح الفهم المحدود للعناصر الأساسية النشطة بيولوجيا عنق الزجاجة في تحديث الطب التبتي2. تم استخدام تطبيق قياس الطيف الكتلي اللوني السائل (LC-MS) ، الذي يجمع بين قوة الفصل القوية للكروماتوغرافيا والحساسية العالية لقياس الطيف الكتلي (MS) ، على نطاق واسع في تحليل الطب الطبيعي3. ومع ذلك ، نظرا لمحدودية آلية فصل واحدة ، تميل المكونات ذات الهياكل المتشابهة للغاية إلى الذوبان في فصل كروماتوغرافيا سائلة أحادية البعد. في التحليل الطيفي الكتلي اللاحق ، يصعب اكتشاف المكونات ذات الوفرة المنخفضة بسبب قمع الأيونات الناجم عن المكونات عالية الوفرة4.

يمثل 2D-HPLC ، الذي يرمز إلى اللوني السائل عالي الأداء ثنائي الأبعاد ، طريقة كروماتوغرافية جديدة تجمع بشكل متناغم بين آليات الفصل المختلفة باستخدام زوج من الأعمدة. وهذا يشمل اندماج أو تناوب كروماتوغرافيا الطور العادي مع كروماتوغرافيا سائلة معكوسة الطور وكروماتوغرافيا سائلة للتفاعل المائي مع كروماتوغرافيا سائلة عكسيةالطور 5. من خلال دمج هذه الخصائص الكروماتوغرافية التكميلية ، يتم تحقيق قدرة الفصل المحسنة ، والتصدي بفعالية للتحديات التي تسببها مصفوفات العينات المعقدة6. علاوة على ذلك ، من خلال اقتران اللوني ثنائي الأبعاد مع مرض التصلب العصبي المتعدد ، يمكن دمج قدرة الفصل القوية ل 2D-HPLC وقدرة الكشف عن الحساسية العالية لمرض التصلب العصبي المتعدد بشكل كامل ، مما يوفر الدعم لدراسة أنظمة الأدوية المعقدة ومكوناتها الأساسية7،8،9.

يتميز الطب التبتي عادة بمجموعة متعددة الأوجه من المكونات والوظائف ، حيث توجد المكونات النشطة عادة في تركيبات معقدة وبتركيزات قليلة. من خلال دمج 2D-LC كنظام فصل قوي و MS ككاشف حساس للغاية ، يمكن معالجة التحديات التي تفرضها العينات المعقدة من حيث الفصل وتحديد الهوية بشكل أكثر فعالية10،11،12. يساهم هذا الاندماج بشكل كبير في تطوير استكشاف التركيب الكيميائي للطب التبتي.

بغض النظر عما إذا كان LC-MS تقليديا أو 2D-LC-MS ، يمكن الحصول على كمية هائلة من المعلومات. ومع ذلك ، فإن استخراج المعلومات الهيكلية لمكونات النظام المعقدة من هذا الكم الهائل من المعلومات كان دائما تحديا كبيرا. لذلك ، طور الباحثون طرقا مختلفة لفحص بيانات مرض التصلب العصبي المتعدد واستخراجها. الشبكات الجزيئية الاجتماعية للمنتجات الطبيعية العالمية (GNPS) هي عبارة عن منصة لتنظيم بيانات MS / MS وتصورها حيث يمكن تحميل بيانات قياس الطيف الكتلي 2D-LC-MS13. يعتبر كل طيف متجه ومقارنته بجميع الأطياف الأخرى باستخدام تشابه جيب التمام. عندما يتجاوز التشابه بين طيفين عتبة ، يتم توصيلهما في شبكة جزيئية (MN). يمكن استخدام هذا للتعرف السريع على المركبات المعروفة وتحديد مختلف المنتجات الطبيعية غير المعروفة14.

عادة ما يكون للطب التبتي وظائف متعددة ، لكن تركيبته المعقدة واختلافات تركيزه الكبيرة تجعل من الصعب توضيح العلاقة بين الوظيفة والأساس المادي بشكل فعال15. تتطلب الدراسة المتعمقة للطب التبتي التوصيف المنهجي لأكبر عدد ممكن من المكونات. في إطار هذه الدراسة ، نعتزم استخدام APB في الطب التبتي كهدف بحثي لتوضيح استراتيجية وعملية الدراسة المنهجية للمكونات الكيميائية المعقدة للطب التبتي باستخدام تقنية 2D-HPLC-MS وتقنية MN. في بناء نظام الكروماتوغرافيا 2D ، قمنا بدمج الكروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي والكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل المائي مع آليات فصل كبيرة لتحقيق فصل أكثر فعالية للمكونات المعقدة ل APB16. بالإضافة إلى ذلك ، للتغلب على عدم توافق المذيبات بين البعدين ، تم اعتماد وضع تعديل التخفيف في العمود. من خلال الجمع بين قدرة الفصل القوية ل 2D-LC مع قدرة الكشف عالية الحساسية ل MS ، يتم الحصول على المعلومات الطيفية للمكونات المعقدة في APB بشكل أكثر فعالية وشمولية. علاوة على ذلك ، من خلال الشبكة وتصور المعلومات الطيفية الضخمة بواسطة تقنية MN ، يتم تحليل مكونات APB بشكل منهجي. من المتوقع أن يتم تطبيق الاستراتيجية والعملية الموضحة في هذه الدراسة على دراسة الأدوية التبتية الأخرى ، وتعزيز البحث على الأساس المادي للطب التبتي ، وهو أمر ذو أهمية كبيرة للنهوض بموارد الطب التبتي وتحسين معايير مراقبة الجودة للأعشاب التبتية17. يوضح الشكل 1 العملية التجريبية الإجمالية.

في التجربة المقدمة هنا ، تم إدخال معدل تخفيف جديد في العمود في نظام الكروماتوغرافيا السائلة ثنائية الأبعاد Agilent (2D-LC)18. عن طريق إضافة مضخة توصيل مستقلة ، تم تغيير مسار تدفق التحليل ، مما أدى إلى تعامد عال لتحليل 2D-LC. يتم إنجاز الاقتران والتبديل بين البعدين بواسطة صمامين من ستة منافذ ، كما هو موضح في الشكل 2. عندما يتم ملء حلقة عينة واحدة في البعد الأول ، يتم تحليل حلقة عينة أخرى في البعد الثاني. هذا يعني أن وقت ملء حلقة 1D ووقت تشغيل 2D متساويان. وهذا يتطلب التدرج السريع الناتج عن المضخة الثنائية في البعد الثاني. لا تضيع أي قمم عند تحليل النفايات السائلة بأكملها. هذا مفيد بشكل خاص لتحليل العينات غير المعروفة. ينتج عنه عدد كبير من كروماتوجرام 2D التي تحتاج إلى دمجها لتحليل البيانات.

Protocol

1. التحضير

  1. إعداد العينة
    1. استخدم ميزان حساسية 1/10000 لوزن 0.25 جم (الوزن الجاف) من APB في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 3 مل ، وأضف 2.5 مل من الميثانول ، ثم صوتنة لمدة 30 دقيقة (قوة 240 واط ، تردد 40 كيلو هرتز).
    2. قم بإجراء الطرد المركزي عند 1.2 × جم لمدة 5 دقائق ، واجمع المادة الطافية ، وقم بالتصفية من خلال مرشح غشاء بحجم مسام 0.22 ميكرومتر.
  2. تحضير المواد التجريبية
    1. قم بإعداد المرحلة المتنقلة ثنائية الأبعاد ، واستخدم الأسيتونيتريل كمرحلة عضوية B ، وقم بتكوين 0.1٪ من حمض الفورميك عالي النقاء كمرحلة مائية A.
    2. قم بإجراء الترشيح على مرحلتين (0.22 ميكرومتر) وصوتنة باستخدام جهاز الموجات فوق الصوتية (40 كيلو هرتز) لمدة 15 دقيقة. قم بتطهير المرحلة المتنقلة المستبدلة لإزالة الفقاعات. في هذه التجربة ، تم استخدام العمود C18 كعمود 1D ، والعمود المحب للماء كعمود 2D ، وتم تركيب العمود على الجهاز.
  3. تعديل نسبة التحويلة المناسبة
    1. قم بتوصيل خط إخراج أداة 2D-LC من خلال نقطة الإنطلاق بمدخل الكتلة والطرف الآخر من نقطة الإنطلاق بخط محول. اضبط معدل التدفق على قيمة مناسبة للتأكد من أن معدل التدفق إلى الطيف الكتلي هو 0.3-0.5 مل / دقيقة.
      ملاحظة: نظرا لأن البعد الثاني من 2D-LC عادة ما يتم ضبطه فوق 2 مل / دقيقة ، فإن معدل التدفق هذا كبير جدا بالنسبة لمرض التصلب العصبي المتعدد ، لذلك من الضروري إجراء انقسام.

2. عملية 2D-LC

  1. انقر نقرا مزدوجا فوق رمز Instrument 1 Online ، وستتواصل محطة العمل الكيميائية تلقائيا مع 1260 LC وتدخل محطة العمل.
  2. لإعداد معلمة طريقة 2D-LC ، حدد شاشة التحكم في الطريقة والتشغيل من القائمة عرض لاستدعاء الواجهة المطلوبة ، والتي سيتم إدخالها عادة افتراضيا. انقر فوق وحدة الحاقن ، وانقر بزر الماوس الأيمن فوق الطريقة ، واضبط حجم الحقن ومعدل التدفق وتدرج وقت الطور المتحرك لمضخة 1D.
  3. أدخل وقت التشغيل النموذجي ضمن وقت الإيقاف. انقر فوق القائمة الرئيسية أداة وانقر فوق طريقة 2D-LC في القائمة المنسدلة. حدد شامل في وضع 2D-LC. أدخل دقيقتين في وقت التعديل ، 1.9 دقيقة في وقت توقف التدرج ثنائي الأبعاد . اضبط إعدادات التدفق على 2 مل. قم بتحرير 2D-Gradient واضبطه على الأطوال الموجية. بعد تحرير الطريقة ، حدد حفظ الطريقة باسم في قائمة الطريقة لتسمية الطريقة الجديدة ، ثم انقر فوق موافق.
    ملاحظة: تتطلب مضخة النقل الخارجية الإعداد اليدوي لمعدل التدفق.

3. عملية مرض التصلب العصبي المتعدد

  1. قم بتشغيل مفتاح مضخة التفريغ. افتح الصمام الرئيسي لأسطوانة الأرجون وصمام مقسم الضغط واضبط الضغط على حوالي 0.3 ميجا باسكال. افتح صمام النيتروجين.
  2. انتظر 8 ساعات على الأقل لضمان فراغ مناسب للظروف التجريبية. تأكد من أن ضغط الهواء للأرجون والنيتروجين مرتفع بدرجة كافية قبل التحليل.
  3. لتشغيل برنامج التحكم MS ، انقر فوق مصدر التسخين SEI في لوحة البرنامج وأدخل معلمات MS ، بما في ذلك درجة حرارة السخان (350 درجة مئوية) ، ومعدل تدفق الغمد (35 أرب) ، ومعدل تدفق الهواء الإضافي (15 أرب) ، وجهد الرش (3.8 كيلو فولت في الوضع الإيجابي ، -2.5 كيلو فولت في الوضع السلبي) ، ودرجة حرارة الشعيرات الدموية (275 درجة مئوية). انقر فوق الزر "تطبيق " لتنشيط مصدر الأيون.
  4. لإعداد طريقة MS ، أدخل قيما لتكوين وقت الاستحواذ والقطبية ونطاق الكتلة ورقم قيمة النقل ومدة قيمة النقل والمزيد. ضبط وقت تشغيل MS (دقيقة): 93.00. إعداد تفاصيل ScanEvent: ITMS + c norm o (100.0-1200.0) ، CV = 0.0v. ITMS + c norm Dep MS / MS ، الأيونات الأكثر كثافة من (1): نوع التنشيط: CID ، الحد الأدنى للإشارة المطلوبة: 500 ، عرض العزل: 2.00 ، Coll. الطاقة الطبيعية: 35.0 ، حالة الشحن الافتراضية: 3 ، التنشيط Q: 0.250 ، وقت التنشيط: 93.000. لتعيين الإعدادات المعتمدة على البيانات ، استخدم إعدادات قطبية منفصلة على أنها معطلة ، خسارة محايدة في الأعلى: 3 ، المنتج في الأعلى: 3. انقر فوق حفظ لتكوين الإعدادات كطريقة الأداة.
    ملاحظة: نهاية وقت التشغيل متوافق مع 2D-LC.
  5. انقر فوق الزر إعداد التسلسل لفتح جدول التسلسل. أدخل نوع العينة واسم الملف والمسار ومعرف العينة وطريقة الأداة والموقع وكمية الحقن والمعلومات الأخرى في النموذج.
  6. انقر فوق الزر حفظ لتسجيل قائمة التسلسل ، ثم انقر فوق الزر بدء التحليل لإعداد وبدء اكتساب MS. انقر فوق تشغيل التحكم على أداة 2D-LC وحدد طريقة التشغيل. في الوقت نفسه ، تنقر أداة MS أيضا على زر التشغيل .
    ملاحظة: نظرا لعدم التحكم في 2D-LC وMS بواسطة نفس البرنامج في هذه التجربة ، يجب إعدادهما على كلا الجهازين بشكل منفصل.

4. تشغيل الشبكة الجزيئية

  1. إعداد البيانات: تصدير البيانات الطيفية للكتلة الخام 2D-HPLC-MS وتحويل البيانات الطيفية للكتلة الثانوية إلى بيانات mzXML أو mzML عبر برنامج تحويل Msconvert الخاص ب ProteoWizard. (http://proteowizard.sourceforge.net/).
  2. لتحميل البيانات ، قم بتنزيل برنامج WinSCP على الموقع الرسمي وتحميل بيانات mzML إلى الحساب الذي تم إنشاؤه بواسطة GNPS عبر بروتوكول FTP. بمجرد اكتمال التثبيت ، قم بتشغيل WinSCP.
  3. الاتصال بخادم GNPS FTP: في واجهة WinSCP ، في صفحة تكوين جلسة العمل ، املأ معلومات الاتصال التالية: بروتوكول الملف: حدد FTP. بالنسبة إلى اسم المضيف: أدخل massive.ucsd.edu.، لرقم المنفذ: احتفظ بالرقم الافتراضي 22.
  4. أدخل رقم الحساب وكلمة المرور. بعد ملء المعلومات المذكورة أعلاه ، انقر فوق زر تسجيل الدخول لإنشاء اتصال بخادم GNPS FTP.
  5. قم بإنشاء شبكات جزيئية عن طريق فتح متصفح ويب وزيارة موقع GNPS على الويب (https://gnps.ucsd.edu/). يحتاج المستخدمون الجدد إلى التسجيل للحصول على حساب ثم تسجيل الدخول.
  6. على الواجهة الرئيسية لموقع GNPS على الويب ، انقر فوق علامة التبويب المهام في شريط التنقل العلوي وحدد إنشاء مهمة جديدة من القائمة المنسدلة. في صفحة إنشاء المهمة، انقر فوق الزر إضافة ملفات، ثم حدد ملف البيانات وقم بتحميله. (على سبيل المثال ، تنسيق mzML).
  7. في علامة التبويب معلمات المهمة ، قم بتعيين المعلمات المختلفة التي تنشئ MN. تتضمن هذه المعلمات خوارزمية استخراج الذروة ، وقيمة ذروة السفر ، وطريقة حساب التشابه ، وما إلى ذلك. قم بإجراء إعدادات المعلمة المناسبة حسب الحاجة. انقر فوق الزر تشغيل التحليل في أسفل الصفحة لتشغيل المهمة.
  8. بعد تشغيل المهمة، ابحث عن المهمة التي تم إنشاؤها في قائمة المهام وانقر فوق اسم الخدمة لعرض نتائج التحليل. يوفر موقع الويب مخططات MN والبدائل والشبكات التكافلية والمعلومات الأخرى ذات الصلة.

النتائج

تم استخدام APB ككائن نموذجي للتحقق من جدوى تقنية 2D-HPLC-MS بالاقتران مع طريقة MN. من خلال استيراد بيانات MS الأولية إلى MN مع تعيين المعلمات إلى الافتراضي ، تم إنشاء MN. MN هي استراتيجية حسابية بصرية تصور جميع الأيونات الجزيئية المكتشفة في تجربة LC-MS-MS كاملة والعلاقات الكيميائية بين هذه الأيونات الجز?...

Discussion

كان التركيز الأساسي لهذه التجربة هو تحسين طريقة جزئية في إطار فصل الطور السائل ثنائي الأبعاد. لتحقيق ذلك ، تم دمج معدل تخفيف جديد في العمود بسلاسة في نظام كروماتوغرافيا السائل ثنائي الأبعاد (2D-LC). كان هذا التعديل الفني ذا أهمية قصوى لأنه رفع بشكل كبير من الكفاءة في تحديد المكونات الكيميائي?...

Disclosures

يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود مصالح مالية متنافسة.

Acknowledgements

تم تمويل هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82130113) ، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82204765) ، ومؤسسة علوم الطبيعة في سيتشوان (2022NSFSC1470) ، ومشروع التمويل الخاص لما بعد الدكتوراه في مقاطعة سيتشوان (TB2023020) وبرنامج تعزيز أبحاث علماء Xinglin بجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (BSH2021030). توفر هذه الأموال الدعم من حيث المعدات التجريبية والمواد التجريبية ورسوم النشر.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrileFisher chemicalF22M81203Mobile phase
Aconitum pendulum//Herb medicine
Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC Agilent TechnologiesG2198-90001Liquid chromatography
Disposable syringesChengdu Keen experimental equipment/1ml
EP tubeChengdu Keen experimental equipment/3ml
Liquid phase injection bottleChengdu Keen experimental equipment/1.5ml
LTQ XL Mass SpectrometerThermo FisherLTQ21991Mass Spectrometer
Microporous membranes Chengdu Keen experimental equipment/0.22μm
Ultimate XB-C18,5 μm,2.1 x 200 mmWelch00201-31015Reversed-phase column
Ultrasonic CleanerGT SonicUGT20DEC048YUltrasonic Cleaner 240W 40KHz
XAmide,3 μm,100ADalian Mondi TechnologyD2019110601Hydrophilic column

References

  1. Luo, H., et al. Correlation between Tibetan and traditional Chinese medicine body constitutions: A cross-sectional study of Tibetan college students in the Tibet Autonomous Region. J Tradl Chinese Med Sci. 5 (3), 215-221 (2018).
  2. Fu, X., et al. Standardized identification of compound structure in Tibetan medicine using ion trap mass spectrometry and multiple-stage fragmentation analysis. J Vis Exp. (193), 65054 (2023).
  3. Kumar, P. R., Dinesh, S. R., Rini, R. LCMS-a review and a recent update. J Pharm Pharm Sci. 5, 377-391 (2016).
  4. Yan, P., et al. Strategy for the identification and quantitative analysis of the phytochemicals of traditional Chinese medicine by LC-MS/MS. Acta Pharm Sinica. 55 (7), 1494-1503 (2020).
  5. Iguiniz, M., Heinisch, S. Two-dimensional liquid chromatography in pharmaceutical analysis. Instrumental aspects, trends and applications. J Pharma Biomed Anal. 145, 482-503 (2017).
  6. Ye, C. X., et al. Application progress of 2D-LC in analysis and quality control of traditional Chinese medicine. Chem Reag. 44 (8), 1103-1110 (2022).
  7. Cao, J. L., et al. Online comprehensive two-dimensional hydrophilic interaction chromatography x reversed-phase liquid chromatography coupled with hybrid linear ion trap Orbitrap mass spectrometry for the analysis of phenolic acids in Salvia miltiorrhiza. J Chromatogr A. 1536, 216-227 (2018).
  8. Cao, J. L., et al. Qualitative and quantitative characterization of phenolic and diterpenoid constituents in Danshen (Salvia miltiorrhiza) by comprehensive two-dimensional liquid chromatography coupled with hybrid linear ion trap Orbitrap mass. J Chromatogr. 1427, 79-89 (2016).
  9. Wang, J., Ren, X., Wen, C., Xu, Y., Chen, Y. Separation and characterization of unknown impurities in rutin tablets using trap-free two-dimensional liquid chromatography coupled with ion trap/time-of-flight mass spectrometry. Rapid Commun Mass Spectrom. 34 (10), e8739 (2020).
  10. Ma, L. J., Ma, N., Cao, J. L., Wan, J. B. Characterizing the influence of different drying methods on chemical components of Panax notoginseng leaves by heart-cutting two-dimensional liquid chromatography coupled to orbitrap high-resolution mass spectrometry. Food Chem. 369, 130965 (2022).
  11. Wong, Y. F., et al. Untargeted profiling of Glycyrrhiza glabra extract with comprehensive two-dimensional liquid chromatography-mass spectrometry using multi-segmented shift gradients in the second dimension: Expanding the metabolic coverage. Electrophoresis. 39 (15), 1993-2000 (2018).
  12. Cao, J. L., et al. Comprehensively qualitative and quantitative analysis of ginsenosides in Panax notoginseng leaves by online two-dimensional liquid chromatography coupled to hybrid linear ion trap Orbitrap mass spectrometry with deeply optimized dilution and modulation system. Anal Chim Acta. 1079, 237-251 (2019).
  13. Nothias, L. F., et al. Feature-based molecular networking in the GNPS analysis environment. Nat methods. 17 (9), 905-908 (2020).
  14. Qin, G. F., et al. MS/MS-based molecular networking: an efficient approach for natural products Dereplication. Molecules. 28 (1), 157 (2023).
  15. Qu, B., et al. Combining multidimensional chromatography-mass spectrometry and feature-based molecular networking methods for the systematic characterization of compounds in the supercritical fluid extract of Tripterygium wilfordii Hook F. Analyst. 148 (1), 61-73 (2023).
  16. Li, W., et al. An enhanced analytical strategy integrating offline two-dimensional liquid chromatography with high-resolution accurate mass spectrometry and molecular networking: Comprehensive characterization of HuangLian JieDu Decoction as a case study. J Sep Sci. 45 (14), 2734-2745 (2022).
  17. Dai, Y., et al. Comprehensive profiling of Sanguisorba officinalis using offline two-dimensional mixed-mode liquid chromatography × reversed-phase liquid chromatography, tandem high-resolution mass spectrometry, and molecular network. J Sep Sci. 45 (10), 1727-1736 (2022).
  18. Chen, Y., Montero, L., Luo, J., Li, J., Schmitz, O. J. Application of the new at-column dilution (ACD) modulator for the two-dimensional RP× HILIC analysis of Buddleja davidii. Anal Bioanal Chem. 412 (7), 1483-1495 (2020).
  19. Zhou, Y. P. Pharmacological action and toxicity of Aconite and its main components. Acta Pharm Sinica. (05), 394-400 (1983).
  20. Shao, X., Liu, F. Progress in the role of 14-Benzoylaconine in rheumatoid arthritis. Chinese J Pharmacol Toxicol. 33 (10), 917 (2019).
  21. Hao, W. J. . Study on the chemical constituents of the alkaloids from the root of Aconitum flavum HandMazz and its anti-tumor activities. , (2015).
  22. Han, X., Hou, Y. J. Research progress on the pharmacological effects and toxicity of Aconitine. J China Prescrip Drug. 12 (12), 149-150 (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

2D HPLC MS

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved