A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מחקר זה משתמש בטכנולוגיה דו-ממדית בעלת ביצועים גבוהים של ספקטרומטריית מסה של כרומטוגרפיה נוזלית (2D-HPLC-MS) בשילוב עם רשתות מולקולריות כדי לפענח את ההרכב הכימי המורכב של צמח המרפא הטיבטי Aconitum pendulum Busch (APB). המאמר מספק פרוטוקול מפורט לחקירה שיטתית וזיהוי של רכיבים כימיים מורכבים של תרופות צמחיות.

Abstract

במחקר זה נעשה שימוש בגישה מקיפה, תוך שימוש בטכנולוגיית 2D-HPLC-MS בשילוב עם הרשת המולקולרית כדי לפענח את ההרכב הכימי המורכב של צמח המרפא הטיבטי APB. באמצעות יישום של 2D-HPLC, הושגה הפרדה משופרת של תערובות מורכבות, המאפשרת בידוד של תרכובות בודדות לניתוח הבא. גישת הרשת המולקולרית סייעה עוד יותר בהבהרת היחסים המבניים בין תרכובות אלה, ותרמה לקביעת מולקולות ביו-אקטיביות פוטנציאליות. אסטרטגיה משולבת זו זיהתה ביעילות מגוון רחב של רכיבים כימיים הקיימים במפעל. הממצאים חשפו ספקטרום מגוון של מרכיבים כימיים בתוך APB, כולל אלקלואידים, בין היתר. מחקר זה לא רק מקדם את הבנת הפרופיל הפיטוכימי של רפואה טיבטית מסורתית זו, אלא גם מספק תובנות חשובות לגבי תכונותיה הטיפוליות הפוטנציאליות. השילוב של 2D-HPLC-MS ורשת מולקולרית מוכיח את עצמו ככלי רב עוצמה לחקירה שיטתית וזיהוי הרכבים כימיים מורכבים בתרופות צמחיות, וסולל את הדרך למחקר ופיתוח נוספים בתחום גילוי מוצרים טבעיים.

Introduction

הרפואה הטיבטית היא חלק בלתי נפרד מהרפואה הסינית המסורתית, תוך דבקות בעקרונות הרפואה הטיבטית, ומשמשת למניעת מחלות ולטיפולבהן 1. עם זאת, צמחי מרפא טיבטיים מכילים מרכיבים כימיים צמחיים מורכבים המאופיינים בתנודות משמעותיות בתוכן. הבנה מוגבלת של היסודות הביו-אקטיביים הבסיסיים הפכה לצוואר בקבוק במודרניזציה של הרפואה הטיבטית2. היישום של ספקטרומטריית מסה כרומטוגרפית נוזלית (LC-MS), המשלבת את כוח ההפרדה החזק של הכרומטוגרפיה עם הרגישות הגבוהה של ספקטרומטריית מסות (MS), נמצא בשימוש נרחב בניתוח רפואה טבעית3. עם זאת, בשל מגבלתו של מנגנון הפרדה יחיד, רכיבים בעלי מבנים דומים מאוד נוטים להתלכד בהפרדת כרומטוגרפיה ....

Protocol

1. הכנה

  1. הכנת דוגמאות
    1. השתמש במאזן רגישות של 1/10,000 כדי לשקול 0.25 גרם (משקל יבש) של APB בצינור מיקרוצנטריפוגה של 3 מ"ל, הוסף 2.5 מ"ל מתנול ולאחר מכן בצע סוניקציה למשך 30 דקות (הספק 240 W, תדר 40 kHz).
    2. בצע צנטריפוגה ב 1.2 x גרם במשך 5 דקות, לאסוף את supernatant, ולסנן דרך מסנן ממברנה עם גודל נקבוביות 0.22 מיקרומטר.
  2. הכנת חומרים ניסיוניים
    1. הכינו את הפאזה הניידת הדו-ממדית, השתמשו באצטוניטריל כשלב B האורגני, והגדירו מים אולטרה-טהורים עם חומצה פורמית 0.1% כשלב A המימי.
    2. בצע סינון דו-פאזי (0.22 מיקרומטר) ובצע סוניזציה באמצעות מכשיר אולטרסאונד (40 קילוהרץ) למשך 15 דקות. נקה את השלב הנ....

תוצאות

APB שימש כאורגניזם מודל כדי לאמת את ההיתכנות של טכנולוגיית 2D-HPLC-MS בשילוב עם שיטת MN. על ידי ייבוא הנתונים הגולמיים של MS לתוך MN עם הפרמטרים מוגדרים כברירת מחדל, MN נוצר. MN היא אסטרטגיה חישובית חזותית הממחישה את כל היונים המולקולריים שזוהו בניסוי LC-MS-MS-MS מלא ואת היחסים הכימיים בין יונים מולקולריי?.......

Discussion

המוקד העיקרי של ניסוי זה היה אופטימיזציה של שיטה חלקית במסגרת הפרדת פאזות נוזליות דו-ממדיות. כדי להשיג זאת, אפנן דילול חדשני בעמודה שולב בצורה חלקה במערכת הכרומטוגרפיה הנוזלית הדו-ממדית (2D-LC). התאמה טכנית זו הייתה בעלת חשיבות עליונה מכיוון שהיא העלתה באופן משמעותי את המיומנות בפרופיל המרכ?.......

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

Acknowledgements

עבודה זו מומנה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82130113), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82204765), קרן מדעי הטבע של סצ'ואן (2022NSFSC1470), פרויקט מימון מיוחד לפוסט-דוקטורט במחוז סצ'ואן (TB2023020) והתוכנית לקידום מחקר מלגות Xinglin של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (BSH2021030). קרנות אלה מספקות תמיכה במונחים של ציוד ניסיוני, חומרים ניסיוניים ודמי פרסום.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrileFisher chemicalF22M81203Mobile phase
Aconitum pendulum//Herb medicine
Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC Agilent TechnologiesG2198-90001Liquid chromatography
Disposable syringesChengdu Keen experimental equipment/1ml
EP tubeChengdu Keen experimental equipment/3ml
Liquid phase injection bottleChengdu Keen experimental equipment/1.5ml
LTQ XL Mass SpectrometerThermo FisherLTQ21991Mass Spectrometer
Microporous membranes Chengdu Keen experimental equipment/0.22μm
Ultimate XB-C18,5 μm,2.1 x 200 mmWelch00201-31015Reversed-phase column
Ultrasonic CleanerGT SonicUGT20DEC048YUltrasonic Cleaner 240W 40KHz
XAmide,3 μm,100ADalian Mondi TechnologyD2019110601Hydrophilic column

References

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

2D HPLC MS

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved