A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
מחקר זה משתמש בטכנולוגיה דו-ממדית בעלת ביצועים גבוהים של ספקטרומטריית מסה של כרומטוגרפיה נוזלית (2D-HPLC-MS) בשילוב עם רשתות מולקולריות כדי לפענח את ההרכב הכימי המורכב של צמח המרפא הטיבטי Aconitum pendulum Busch (APB). המאמר מספק פרוטוקול מפורט לחקירה שיטתית וזיהוי של רכיבים כימיים מורכבים של תרופות צמחיות.
במחקר זה נעשה שימוש בגישה מקיפה, תוך שימוש בטכנולוגיית 2D-HPLC-MS בשילוב עם הרשת המולקולרית כדי לפענח את ההרכב הכימי המורכב של צמח המרפא הטיבטי APB. באמצעות יישום של 2D-HPLC, הושגה הפרדה משופרת של תערובות מורכבות, המאפשרת בידוד של תרכובות בודדות לניתוח הבא. גישת הרשת המולקולרית סייעה עוד יותר בהבהרת היחסים המבניים בין תרכובות אלה, ותרמה לקביעת מולקולות ביו-אקטיביות פוטנציאליות. אסטרטגיה משולבת זו זיהתה ביעילות מגוון רחב של רכיבים כימיים הקיימים במפעל. הממצאים חשפו ספקטרום מגוון של מרכיבים כימיים בתוך APB, כולל אלקלואידים, בין היתר. מחקר זה לא רק מקדם את הבנת הפרופיל הפיטוכימי של רפואה טיבטית מסורתית זו, אלא גם מספק תובנות חשובות לגבי תכונותיה הטיפוליות הפוטנציאליות. השילוב של 2D-HPLC-MS ורשת מולקולרית מוכיח את עצמו ככלי רב עוצמה לחקירה שיטתית וזיהוי הרכבים כימיים מורכבים בתרופות צמחיות, וסולל את הדרך למחקר ופיתוח נוספים בתחום גילוי מוצרים טבעיים.
הרפואה הטיבטית היא חלק בלתי נפרד מהרפואה הסינית המסורתית, תוך דבקות בעקרונות הרפואה הטיבטית, ומשמשת למניעת מחלות ולטיפולבהן 1. עם זאת, צמחי מרפא טיבטיים מכילים מרכיבים כימיים צמחיים מורכבים המאופיינים בתנודות משמעותיות בתוכן. הבנה מוגבלת של היסודות הביו-אקטיביים הבסיסיים הפכה לצוואר בקבוק במודרניזציה של הרפואה הטיבטית2. היישום של ספקטרומטריית מסה כרומטוגרפית נוזלית (LC-MS), המשלבת את כוח ההפרדה החזק של הכרומטוגרפיה עם הרגישות הגבוהה של ספקטרומטריית מסות (MS), נמצא בשימוש נרחב בניתוח רפואה טבעית3. עם זאת, בשל מגבלתו של מנגנון הפרדה יחיד, רכיבים בעלי מבנים דומים מאוד נוטים להתלכד בהפרדת כרומטוגרפיה ....
1. הכנה
APB שימש כאורגניזם מודל כדי לאמת את ההיתכנות של טכנולוגיית 2D-HPLC-MS בשילוב עם שיטת MN. על ידי ייבוא הנתונים הגולמיים של MS לתוך MN עם הפרמטרים מוגדרים כברירת מחדל, MN נוצר. MN היא אסטרטגיה חישובית חזותית הממחישה את כל היונים המולקולריים שזוהו בניסוי LC-MS-MS-MS מלא ואת היחסים הכימיים בין יונים מולקולריי?.......
המוקד העיקרי של ניסוי זה היה אופטימיזציה של שיטה חלקית במסגרת הפרדת פאזות נוזליות דו-ממדיות. כדי להשיג זאת, אפנן דילול חדשני בעמודה שולב בצורה חלקה במערכת הכרומטוגרפיה הנוזלית הדו-ממדית (2D-LC). התאמה טכנית זו הייתה בעלת חשיבות עליונה מכיוון שהיא העלתה באופן משמעותי את המיומנות בפרופיל המרכ?.......
המחברים מצהירים כי אין אינטרסים כלכליים מתחרים.
עבודה זו מומנה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82130113), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82204765), קרן מדעי הטבע של סצ'ואן (2022NSFSC1470), פרויקט מימון מיוחד לפוסט-דוקטורט במחוז סצ'ואן (TB2023020) והתוכנית לקידום מחקר מלגות Xinglin של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (BSH2021030). קרנות אלה מספקות תמיכה במונחים של ציוד ניסיוני, חומרים ניסיוניים ודמי פרסום.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Acetonitrile | Fisher chemical | F22M81203 | Mobile phase |
Aconitum pendulum | / | / | Herb medicine |
Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC | Agilent Technologies | G2198-90001 | Liquid chromatography |
Disposable syringes | Chengdu Keen experimental equipment | / | 1ml |
EP tube | Chengdu Keen experimental equipment | / | 3ml |
Liquid phase injection bottle | Chengdu Keen experimental equipment | / | 1.5ml |
LTQ XL Mass Spectrometer | Thermo Fisher | LTQ21991 | Mass Spectrometer |
Microporous membranes | Chengdu Keen experimental equipment | / | 0.22μm |
Ultimate XB-C18,5 μm,2.1 x 200 mm | Welch | 00201-31015 | Reversed-phase column |
Ultrasonic Cleaner | GT Sonic | UGT20DEC048Y | Ultrasonic Cleaner 240W 40KHz |
XAmide,3 μm,100A | Dalian Mondi Technology | D2019110601 | Hydrophilic column |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved