チベット医学トリカブト振り子中の成分同定のための分子ネットワークと組み合わせた2D-HPLC-MS技術

要約

この研究では、2次元高速液体クロマトグラフィー-質量分析(2D-HPLC-MS)技術と分子ネットワークを組み合わせて、チベットの薬用植物 であるトリカブ ト振り子ブッシュ(APB)の複雑な化学組成を解明します。この記事では、漢方薬の複雑な化学成分を体系的に調査し、同定するための詳細なプロトコルを提供します。

要約

本研究では、2D-HPLC-MS技術と分子ネットワークを併用し、チベットの薬用植物APBの複雑な化学組成を解明する包括的なアプローチを採用しました。2D-HPLCの導入により、複雑な混合物の分離が向上し、その後の分析のために個々の化合物を単離することが可能になりました。分子ネットワークアプローチは、これらの化合物間の構造的関係の解明にさらに役立ち、潜在的な生理活性分子の決定に貢献しました。この統合戦略により、プラント内に存在するさまざまな化学成分を効率的に特定することができました。その結果、APBにはアルカロイドなど、さまざまな化学成分が含まれていることが明らかになりました。この研究は、この伝統的なチベット医学の植物化学的プロファイルの理解を進めるだけでなく、その潜在的な治療特性に関する貴重な洞察も提供します。2D-HPLC-MSと分子ネットワークの統合は、漢方薬の複雑な化学組成を体系的に探索および同定するための強力なツールであることが証明されており、天然物発見の分野におけるさらなる研究開発への道を開きます。

概要

チベット医学は、チベットの医療行為の原則を遵守し、伝統的な中国医学の不可欠な部分であり、病気の予防と治療に使用されます¹。しかし、チベットの漢方薬には、含有量の大幅な変動を特徴とする複雑な植物化学成分が含まれています。基本的な生理活性元素の理解が限られていることが、チベット医学の近代化のボトルネックとなっています²。クロマトグラフィーの強力な分離力と質量分析(MS)の高感度を組み合わせた液体クロマトグラフィー-質量分析(LC-MS)の応用は、自然医学分析で広く使用されています³。しかし、単一の分離メカニズムには制限があるため、構造が類似性の高い成分は、1次元液体クロマトグラフィー分離で共溶出する傾向があります。その後の質量分析では、高存在量成分⁴によるイオン抑制により、低存在量の共溶出成分を検出することが困難でした。

2D-HPLCは、Two-Dimensional High-Performance Liquid Chromatographyの略で、一対のカラムを使用して異なる分離メカニズムを調和的に組み合わせた新しいクロマトグラフィー法です。これには、順相クロマトグラフィーと逆相液体クロマトグラフィー、および親水性相互作用液体クロマトグラフィーと逆相液体クロマトグラフィーとの融合または....

プロトコル

1. 事前準備

1. サンプル調製
   1. 1/10,000の感度天秤を使用して、3 mLの微量遠心チューブに0.25 g(乾燥重量)のAPBを秤量し、2.5 mLのメタノールを加えた後、30分間超音波処理します(出力240 W、周波数40 kHz)。
   2. 1.2 x g で5分間遠心分離を行い、上清を回収し、孔径0.22 μmのメンブレンフィルターでろ過します。
2. 実験材料の準備
   1. 二次元移動相を調製し、有機相B相としてアセトニトリルを使用し、水相Aとして0.1%ギ酸超純水を構成します。
   2. 二相ろ過(0.22μm)を行い、超音波装置(40kHz)を用いて15分間超音波処理します。交換した移動相をパージして、気泡を除去します。この実験では、C18カラムを1Dカラム、親水性カラムを2Dカラムとして、カラムを装置に取り付けました。
3. 適切なシャント比の調整
   1. 2D-LC装置のアウトラインをティーを介してマスインレットに接続し、ティーのもう一方の端をシャントラインに接続します。質量スペクトルへの流量が0.3〜0.5mL / minになるように、流量を適切な値に調整します。
      注:2D-LC の 2 次元は通常 2 mL/分以上に設定されているため、この流速は MS には大きすぎるため、スプリットを実行する必要があります....

ディスカッション

この実験の主な焦点は、2次元液相分離の枠組み内での部分法の最適化でした。これを達成するために、新しいアットカラム希釈モジュレーターを 2 次元液体クロマトグラフィー(2D-LC)システムにシームレスに統合しました。この技術的な調整は、APBとして知られるチベット医学に存在する化学成分のプロファイリングの習熟度を大幅に向上させたため、最も重要でした。2D-HPLC-MS技術を組み込?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetonitrile	Fisher chemical	F22M81203	Mobile phase
Aconitum pendulum	/	/	Herb medicine
Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC	Agilent Technologies	G2198-90001	Liquid chromatography
Disposable syringes	Chengdu Keen experimental equipment	/	1ml
EP tube	Chengdu Keen experimental equipment	/	3ml
Liquid phase injection bottle	Chengdu Keen experimental equipment	/	1.5ml
LTQ XL Mass Spectrometer	Thermo Fisher	LTQ21991	Mass Spectrometer
Microporous membranes	Chengdu Keen experimental equipment	/	0.22μm
Ultimate XB-C18,5 μm,2.1 x 200 mm	Welch	00201-31015	Reversed-phase column
Ultrasonic Cleaner	GT Sonic	UGT20DEC048Y	Ultrasonic Cleaner 240W 40KHz
XAmide,3 μm,100A	Dalian Mondi Technology	D2019110601	Hydrophilic column