A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
لقد أثبتنا توسع الأوعية الدموية الكبيرة الذي يحفز كيميائيا في الفئران كنموذج للتحقيق في الخلل الوظيفي الوعائي الدماغي ، والذي يمكن استخدامه في الخرف الوعائي ونمذجة مرض الزهايمر. نوضح أيضا تصور الأوعية الدموية عن طريق حقن مركب مطاط السيليكون وتوفير إرشادات بصرية واضحة لقياس التغيرات في حجم الأوعية الدموية.
الدم في الدماغ (BBB) هو نظام حاسم ينظم الدورة الدموية الانتقائية للدماغ مع المحيط ، على سبيل المثال ، مما يسمح للمغذيات الضرورية بدخول وطرد الأحماض الأمينية الزائدة أو السموم من الدماغ. لنمذجة كيف يمكن اختراق BBB في أمراض مثل الخرف الوعائي (VaD) أو مرض الزهايمر (AD) ، طور الباحثون طرقا جديدة لنمذجة توسع الأوعية. يمكن أن يكون BBB المخترق في هذه الحالات المرضية ضارا ويؤدي إلى عدم تنظيم BBB مما يؤدي إلى عواقب غير مرغوب فيها ومرضية تؤثر على وظائف المخ. تمكنا من تعديل تقنية موجودة مكنتنا من الحقن مباشرة في Cisterna magna (CM) للحث على توسع الأوعية الدموية باستخدام الإيلاستاز ، وتعطيل الوصلات الضيقة (TJ) ل BBB. باستخدام هذه الطريقة ، تمكنا من رؤية مقاييس مختلفة للنجاح مقارنة بالتقنيات السابقة ، بما في ذلك التوسع المتسق للأوعية الدموية ، وانخفاض معدل الوفيات أو تحسين التعافي ، وتحسين عامل التعبئة / التعتيم ، وهو مركب مطاط السيليكون ، والتسليم لوضع العلامات على الأوعية الدموية لتحليل التوسع. حققت هذه الطريقة المعدلة طفيفة التوغل نتائج واعدة ، مع زيادة بنسبة 19٪ -32٪ في التوسع المستمر للأوعية الدموية الكبيرة في الفئران من أسبوعين إلى 3 أشهر بعد الحقن. يتناقض هذا التحسن مع الدراسات السابقة ، والتي أظهرت زيادة التوسع فقط عند علامة أسبوع 2. تشير البيانات الإضافية إلى التوسع المستدام حتى بعد 9.5 أشهر. تم تأكيد هذه الزيادة من خلال مقارنة قطر الأوعية الدموية للإلاستاز والمجموعة المحقونة بالمركبة. بشكل عام ، هذه التقنية ذات قيمة لدراسة الاضطرابات المرضية التي تؤثر على الجهاز العصبي المركزي (CNS) باستخدام النماذج الحيوانية.
الخلايا البطانية الوعائية الدقيقة التي تبطن الشعيرات الدموية الدماغية هي المكونات الرئيسية لتشكيل الحاجز الدموي الدماغي (BBB)1 الذي يلعب دورا حاسما في تنظيم ما يدخل أو يخرج من الدورة الدموية للدماغ مع المحيط. يسمح للعناصر الغذائية الأساسية اللازمة للأنسجة العصبية بدخول BBB ، بينما يتم طرد بعض الأحماض الأمينية الأساسية مثل الغلوتامات من الدماغ ، حيث يمكن أن تسبب التركيزات العالية ضررا عصبيا دائما لأنسجة المخ2. في ظل الظروف الفسيولوجية العادية ، يحد BBB من كمية بروتينات البلازما مثل الألبومين 3,4 والبروثرومبين من دخول الدماغ لأن هذه يمكن أن يكون لها آثار ضارة ....
تم استخدام فئرانالتطبيق NL-F(3 أشهر) التي تعبر عن لوحة الأميلويد البشرية على المستوى الفسيولوجي لهذه الدراسة على الرغم من أنه يمكن استخدام هذا النظام مع أي نموذج للقوارض. تمت الموافقة على جميع إجراءات من قبل لجنة رعاية في CAMH (البروتوكول # 843) وكانت متوافقة مع المعايير الأخلاقية لإرشادات المجلس الكندي لرعاية. تم تربية الفئران في المنزل والاحتفاظ بها في دورة 12 ساعة من الضوء والظلام مع وصول ad libitum إلى الطعام والماء.
1. إجراء حقن سيستيرنا ماجنا (CM)
لقد نجحنا في تحديد موقع Cisterna magna تحت المنطقة القذالية من الجمجمة بعد وضع الماوس بعناية على الإطار التجسيمي وتشريح العضلات. يقع هذا الهيكل التشريحي ، الذي يشبه المثلث المقلوب والمظلل باللون الأصفر ، أسفل قاعدة الجمجمة (الشكل 1). لضمان الدقة ومنع أي ضرر لأنسجة المخ ، تم إدخال 1.......
توضح هذه المقالة بروتوكولا محسنا للتوسع الوعائي الدماغي ، مما يوفر نهجا دقيقا ومباشرا لحقن الإيلاستاز في Cisterna magna للفئران. تعمل هذه النقطة التشريحية كبوابة مباشرة للسائل النخاعي ، مما يوفر وسيلة قيمة للتحقيق في الأمراض العصبية المختلفة. واحدة من المزايا الرئيسية لهذه التقنية المعدلة هي ?.......
لا يوجد تضارب في المصالح.
أصبحت هذه الدراسة ممكنة بفضل المساهمات القيمة لستيفاني تام التي قدمت الدعم في المساعدة في العمليات الجراحية. نعرب عن خالص امتناننا لمساعدتها. المعاهد الوطنية للصحة (AG066162) لدعم هذا البحث.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
23 G catheter | University Medstore | 2546-CABD305145 | Needed for perfusion (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Absolute ethanol | University Medstore | https://www.uoftmedstore.com/index.sz | For removing the microfil |
Betadine scrub | # | https://www.pittsborofeed.com/products/betadine-surgical-scrub | Sterilization |
Betadine solution | Amazon | https://www.amazon.ca/Povidone-Iodine-10-Topical-Solution-100ml/dp/B09DTKJGHW | Sterilization |
Bupivacaine | Provided by animal facility | N/A | Analgesic |
Clippers | BrainTree Scientific Inc | CLP-41590 | Shave fur |
Cotton Q-tip | University Medstore | 1962 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Elastase | Sigma-aldrich | E7885 | Used for the dilatation of blood vessel |
Ethanol | University Medstore | 39752-P016-EAAN | Sterilization (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Goat anti-mouse 568 | Invitrogen | A11004 | For staining mature neurons |
Graphpad prism 10 | Graphpad prism 10 | https://www.graphpad.com/ | Statistical analysis software |
Hamilton syringe | Sigma-aldrich | 28614-U | Injection elastase |
Heat pad | Amazon | https://www.amazon.ca/iPower-Temperature-Controller-Terrarium-Amphibians/dp/B08L4DBFFZ | Maintain body temperature |
ImageJ software | Fiji Imagej software | imagej.net (USA) | Image analysis software |
Induction chamber | Provided by animal facility | N/A | Anesthesia induction |
Metacam | Provided by animal facility | N/A | Analgesic |
Methyl salicylate | Sigma-aldrich | M6752 | For removing the microfil |
Microfil | Flow Tech, Carver, Massachusetts | https://www.flowtech-inc.com/order/ | Dye (yellow) |
Mouse monoclonal anti-NeuN | Millipore Sigma | MAB377 | For staining mature neurons |
Olympus VS200 slide scanner and VSI software. | Olympus Life Science | https://www.olympus-lifescience.com/en/downloads/detail-iframe/?0[downloads][id]=847254104 | Imaging software |
Paraformaldehyde | University Medstore | PAR070.1 | For protein fixation (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Perfusion pump | VWR International | https://pr.vwr.com/store/product/4787969/vwr-variable-speed-peristaltic-pumps | Needed for perfusion |
Scalpel | University Medstore | 2580-M90-10 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Stereotaxic | Provided by animal facility | N/A | So secure the animal for surgery |
Surgical scissor | University Medstore | 22751-A9-240 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Surgical tape | University Medstore | https://www.amazon.ca/3M-Micropore-Tape-1530-2-Rolls/dp/B0082A9GS2 | Secure the animal on the diaper |
Sutures | University Medstore | 2297-VS881 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
X2 tweezers | University Medstore | 7731-A10-612 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved