Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Vasküler demans ve Alzheimer hastalığı modellemesi için kullanılabilecek serebrovasküler disfonksiyonu araştırmak için bir model olarak farelerde kimyasal olarak indüklenen büyük kan damarı dilatasyonunu gösteriyoruz. Ayrıca, silikon kauçuk bileşiği enjekte ederek ve kan damarı boyutundaki değişiklikleri ölçmek için net bir görsel rehberlik sağlayarak damar sistemini görselleştirmeyi de gösteriyoruz.
Kan-beyin (BBB), örneğin çevre ile seçici beyin dolaşımını düzenleyen, gerekli besinlerin beyinden aşırı amino asitlere veya toksinlere girmesine ve dışarı atılmasına izin veren çok önemli bir sistemdir. Vasküler demans (VaD) veya Alzheimer hastalığı (AD) gibi hastalıklarda BBB'nin nasıl tehlikeye atılabileceğini modellemek için araştırmacılar, damar dilatasyonunu modellemek için yeni yöntemler geliştirdiler. Bu hastalık durumlarında tehlikeye atılmış bir BBB zararlı olabilir ve BBB'nin düzensizliğine neden olabilir ve bu da beyin fonksiyonunu etkileyen istenmeyen ve patolojik sonuçlara yol açabilir. Elastaz kullanarak kan damarlarının dilatasyonunu indüklemek ve BBB'nin sıkı bağlantılarını (TJ) bozmak için doğrudan Cisterna magna'ya (CM) enjekte etmemizi sağlayan mevcut bir tekniği değiştirebildik. Bu yöntemle, tutarlı kan damarı dilatasyonu, azaltılmış mortalite veya daha iyi iyileşme ve bir silikon kauçuk bileşiği olan dolgu / opaklaştırıcı ajanın iyileştirilmesi, dilatasyon analizi için kan damarlarını etiketlemek için teslimat dahil olmak üzere önceki tekniklere göre çeşitli başarı ölçütleri görebildik. Bu modifiye minimal invaziv yöntem, farelerde enjeksiyondan 2 hafta ila 3 ay sonra büyük kan damarlarının sürekli genişlemesinde %19-32'lik bir artışla umut verici sonuçlar vermiştir. Bu iyileşme, yalnızca 2 haftalık işarette artan dilatasyon gösteren önceki çalışmalarla çelişmektedir. Ek veriler, 9,5 ay sonra bile genişlemenin devam ettiğini gösteriyor. Bu artış, elastaz ve araç enjekte edilen grubun kan damarlarının çapı karşılaştırılarak doğrulandı. Genel olarak, bu teknik, hayvan modelleri kullanarak merkezi sinir sistemini (CNS) etkileyen patolojik bozuklukları incelemek için değerlidir.
Serebral kılcal damarları kaplayan mikrovasküler endotel hücreleri, beyin dolaşımına çevre ile neyin girdiğini veya neyin çıktığını düzenlemede çok önemli bir rol oynayan kan-beyin bariyerini (BBB)1 oluşturmak için ana bileşenlerdir. Sinir dokusu için gerekli olan temel besin maddelerinin BBB'ye girmesine izin verilirken, glutamat gibi bazı esansiyel amino asitler beyinden atılır, çünkü yüksek konsantrasyonlar beyin dokusunda kalıcı nörouyarıcı hasara neden olabilir2. Normal fizyolojik koşullar altında, BBB, albümin 3,4 ve protrombin gibi plazma proteinlerinin be....
Bu çalışma için insan amiloid plağını fizyolojik düzeyde eksprese eden AppNL-Ffareleri (3 aylık) kullanıldı, ancak bu sistem herhangi bir kemirgen modelinde kullanılabilir. Tüm hayvan prosedürleri, CAMH Hayvan Bakım Komitesi (Protokol # 843) tarafından onaylandı ve Kanada Hayvan Bakımı Konseyi yönergelerinin etik standartlarına uygun oldu. Fareler şirket içinde yetiştirildi ve yem ve suya ad libitum erişimi ile 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngüsünde tutuldu.
1. Cisterna magna (CM) enjeksiyonu prosedürü
Fareyi stereotaksik çerçeveye dikkatlice yerleştirdikten ve kasları diseksiyon ettikten sonra Cisterna magna'yı kafatasının oksipital bölgesinin altına yerleştirmede başarılı olduk. Ters üçgeni andıran ve sarı renkle vurgulanan bu anatomik yapı, kafatasının tabanının altında yer almaktadır (Şekil 1). Hassasiyeti sağlamak ve beyin dokusuna herhangi bir zarar gelmesini önlemek için, Hamilton şırınga eğiminin 1-2 mm'si Cisterna magna'ya nazikçe yerleştirildi.
Bu makale, farelerin Cisterna magna'sına elastaz enjeksiyonu için kesin ve basit bir yaklaşım sağlayan serebrovasküler dilatasyon için geliştirilmiş bir protokolü göstermektedir. Bu anatomik nokta, beyin omurilik sıvısına doğrudan bir geçit görevi görür ve farklı nörolojik hastalıkların araştırılması için değerli bir yol sunar. Bu modifiye tekniğin ana avantajlarından biri, farelerin Cisterna magna'sına tek bir doz elastaz enjekte edilmesinin, tekrarlanabilir enjeksiyona veya bir kanül im.......
Çıkar çatışması yoktur.
Bu çalışma, ameliyatlara yardımcı olma konusunda destek sağlayan Stephanie Tam'ın paha biçilmez katkılarıyla mümkün olmuştur. Kendisine yardımları için en içten şükranlarımızı sunarız. Bu araştırmayı desteklemek için Ulusal Sağlık Enstitüleri (AG066162).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
23 G catheter | University Medstore | 2546-CABD305145 | Needed for perfusion (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Absolute ethanol | University Medstore | https://www.uoftmedstore.com/index.sz | For removing the microfil |
Betadine scrub | # | https://www.pittsborofeed.com/products/betadine-surgical-scrub | Sterilization |
Betadine solution | Amazon | https://www.amazon.ca/Povidone-Iodine-10-Topical-Solution-100ml/dp/B09DTKJGHW | Sterilization |
Bupivacaine | Provided by animal facility | N/A | Analgesic |
Clippers | BrainTree Scientific Inc | CLP-41590 | Shave fur |
Cotton Q-tip | University Medstore | 1962 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Elastase | Sigma-aldrich | E7885 | Used for the dilatation of blood vessel |
Ethanol | University Medstore | 39752-P016-EAAN | Sterilization (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Goat anti-mouse 568 | Invitrogen | A11004 | For staining mature neurons |
Graphpad prism 10 | Graphpad prism 10 | https://www.graphpad.com/ | Statistical analysis software |
Hamilton syringe | Sigma-aldrich | 28614-U | Injection elastase |
Heat pad | Amazon | https://www.amazon.ca/iPower-Temperature-Controller-Terrarium-Amphibians/dp/B08L4DBFFZ | Maintain body temperature |
ImageJ software | Fiji Imagej software | imagej.net (USA) | Image analysis software |
Induction chamber | Provided by animal facility | N/A | Anesthesia induction |
Metacam | Provided by animal facility | N/A | Analgesic |
Methyl salicylate | Sigma-aldrich | M6752 | For removing the microfil |
Microfil | Flow Tech, Carver, Massachusetts | https://www.flowtech-inc.com/order/ | Dye (yellow) |
Mouse monoclonal anti-NeuN | Millipore Sigma | MAB377 | For staining mature neurons |
Olympus VS200 slide scanner and VSI software. | Olympus Life Science | https://www.olympus-lifescience.com/en/downloads/detail-iframe/?0[downloads][id]=847254104 | Imaging software |
Paraformaldehyde | University Medstore | PAR070.1 | For protein fixation (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Perfusion pump | VWR International | https://pr.vwr.com/store/product/4787969/vwr-variable-speed-peristaltic-pumps | Needed for perfusion |
Scalpel | University Medstore | 2580-M90-10 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Stereotaxic | Provided by animal facility | N/A | So secure the animal for surgery |
Surgical scissor | University Medstore | 22751-A9-240 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Surgical tape | University Medstore | https://www.amazon.ca/3M-Micropore-Tape-1530-2-Rolls/dp/B0082A9GS2 | Secure the animal on the diaper |
Sutures | University Medstore | 2297-VS881 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
X2 tweezers | University Medstore | 7731-A10-612 | For surgery (https://www.uoftmedstore.com/index.sz) |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır