تصميم والتحقق من صحة طابعة حيوية بالبثق الحجمي للطباعة الحيوية لمستخلص الغشاء القاعدي القابل للذوبان للبحوث الانتقالية

Paola De Stefano; Elena Bianchi; Alessandro Filippo Pellegata; Gabriele Dubini

doi:10.3791/67788

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Method Article

تصميم والتحقق من صحة طابعة حيوية بالبثق الحجمي للطباعة الحيوية لمستخلص الغشاء القاعدي القابل للذوبان للبحوث الانتقالية

DOI:

10.3791/67788

⸱

March 28th, 2025

Paola De Stefano¹, Elena Bianchi¹, Alessandro Filippo Pellegata¹, Gabriele Dubini¹

¹Laboratory of Biological Structure Mechanics (LaBS), Department of Chemistry, Materials and Chemical Engineering "Giulio Natta", Politecnico di Milano

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Summary

مستخلصات الغشاء القاعدي القابلة للذوبان هي المصفوفات البيولوجية الأكثر استخداما في أبحاث السرطان ، لكن سلوكها الريولوجي المعقد يجعل الطباعة الحيوية صعبة مع أنظمة الطباعة الحيوية المتاحة تجاريا. يقدم هذا العمل استراتيجية طباعة حيوية مخصصة لإنتاج تركيبات مصفوفة نقية بدقة جيدة للشكل في كل من الطبقات المفردة والمتعددة.

Abstract

في البحث الانتقالي ، تعتبر النماذج ثلاثية الأبعاد في المختبر ضرورية لتعزيز الفهم العلمي والتطوير العلاجي. لهذا الهدف ، تلعب مستخلصات الغشاء القاعدي القابلة للذوبان (SBMes) ، المشتقة من خلايا ساركوما الفأر ، الدور الرئيسي في تكرار الميزات الميكانيكية والكيميائية الحيوية للبيئة المكروية في الجسم الحي . إنها ذات قيمة خاصة في مجموعة متنوعة من المجالات البحثية ، من هندسة الأنسجة إلى اختبار الأدوية. على وجه الخصوص ، أصبحت أساسية في أبحاث السرطان حيث يمكن لثقافات الخلايا ثنائية الأبعاد التقليدية ، المستخدمة على نطاق واسع في هذا المجال ، أن توفر معلومات مضللة لأنها لا تلتقط البنية ثلاثية الأبعاد (ثلاثية الأبعاد) والبيئة الدقيقة للورم.

في أبحاث السرطان ، تعد النماذج ثلاثية الأبعاد الفعالة في المختبر ضرورية لفهم تطور السرطان بشكل أفضل وتوقع التحديات ، مثل آليات مقاومة الأدوية. ظهرت العضيات كنماذج واعدة ثلاثية الأبعاد في المختبر ، مما يوفر تمثيلا أكثر دقة لبيولوجيا الورم. أنها تنمو في SBMes لأنها تخلق بيئة حيث الخلايا يمكن أن تنمو وتنظم ذاتيا في هياكل ثلاثية الأبعاد. ومع ذلك ، يمثل SBMe تحديات كبيرة ، بما في ذلك الخصائص الميكانيكية المنخفضة والسلوك الريولوجي المعقد ، مما يمنع استخدامه مع أنظمة الطباعة الحيوية بالبثق الهوائي المتاحة تجاريا.

لمعالجة هذه القيود ، قمنا بتطوير نظام طباعة حيوي منخفض التكلفة يتم التحكم فيه عن طريق الحجم وبروتوكول محدد لهياكل الطباعة باستخدام SBMe. يعتمد هذا النظام على آلة بثق حجمية ويتغلب على قيود الأساليب التقليدية التي تحركها الهواء المضغوط. بمجرد تجميعه وبرمجته باستخدام رمز g محدد ، يمكن للنظام الطباعة الحيوية لكل من SBMe النقي والمخفف للحصول على كل من التركيبات أحادية ومتعددة الطبقات. يوفر هذا النهج طريقة أكثر موثوقية وقابلية للتطوير لإنتاج نماذج زراعة الخلايا ثلاثية الأبعاد ، مما يمهد الطريق لبحث أكثر فعالية في العلاجات الجديدة واختبار الأدوية.

Introduction

في البحث الانتقالي ، يعد إنشاء نماذج ثلاثية الأبعاد في المختبر تكرر عن كثب البيئة في الجسم الحي أمرا ضروريا لتعزيز الفهم العلمي والتطوير العلاجي¹. أحد المكونات الرئيسية في بنائها هو استخدام نظائر المصفوفة خارج الخلية (ECM) ، مثل مستخلصات الغشاء القاعدي القابلة للذوبان (SBMes) ، والتي تعكس بشكل أفضل تعقيدات الأنسجة الطبيعية. تعتبر SBMes ذات قيمة خاصة في مجموعة متنوعة من مجالات البحث ، من هندسة الأنسجة إلى اختبار المخدرات²^،³. على وجه الخصوص ، أصبحت أساسية في أبحاث السرطان ، لأنها تكرر السمات الميكانيكية والكيميائية الحيوية للبيئة المكروية للورم ، مما يتيح تطوير نماذج تعكس بشكل أفضل نمو الورم ، والورم الخبيث ، واستجابات العلاج.

في الواقع ، على الرغم من التقدم الكبير على مدى العقود القليلة الماضية ، لا تزال العديد من العلاجات تفشل ، مما يؤدي إلى فشل العلاج المتكرر في البيئات السريرية. غالبا ما يعزى هذا الفشل إلى آليات مقاومة الأدوية الناجمة عن مستويات عالية من عدم تجانس الخلايا⁴^،⁵. تعد النماذج الفعالة في المختبر ، القادرة على تلخيص تعقيدات الأورام البشرية بدقة ، أمرا بالغ الأهمية لفهم تطور السرطان بشكل أفضل وتوقع هذه الظاهرة.

كانت مزارع الخلايا ثنائية الأبعاد التقليدية أساسية في أبحاث السرطان ولكنها يمكن أن تؤدي إلى معلومات مضللة حول فعالية الدواء وسلوك الورم ، لأنها تفشل في التقاط الهيكل ثلاثي الأبعاد والبيئة الدقيقة للأورام الفعلية⁶^،⁷^،⁸. في المقابل ، ظهرت النماذج ثلاثية الأبعاد في المختبر كبدائل واعدة ، حيث تقدم تمثيلا أكثر دقة للبيئة الدقيقة للورم والسلوك البيولوجي من خلال محاكاة التعقيد ثلاثي الأبعاد⁹^،¹⁰.

في أبحاث السرطان ، تستخدم العضيات على نطاق واسع كنماذج ثلاثية الأبعاد لدراسة المرض وفعالية الأدوية ، لأنها توفر نماذج أكثر دقة وصلة بالأنسجة والأعضاء البشرية. كان استخدام SBMe ، المشتق من خلايا ساركوما الفأر Engelbreth-Holm-Swarm ، محوريا في النهوض بأبحاث^{السرطان 11}^،¹². إنه يوفر ركيزة تشبه الهلام يمكن للخلايا أن تنمو وتتكاثر وتنظم ذاتيا في هياكل عضوية ، مما يضمن التطور والنمو السليمين¹³^،¹⁴.

ومع ذلك, SBMe يطرح عددا من التحديات بسبب خصائصه الفريدة والمعقدة. كسائل غير نيوتوني ، يظهر SBMe خصائص ترقق القص ، مما يعني أن لزوجته تنخفض مع زيادة إجهاد القص ، مما يجعل التعامل معه وتطبيقه غير متسقين تحت القوى المتغيرة. بالإضافة إلى ذلك ، يضيف سلوكه متغير الانسيابية إلى التعقيد ، حيث يمكنه استعادة لزوجته بمرور الوقت عند إزالة إجهاد القص¹⁵^،¹⁶. هذه الخصائص ، جنبا إلى جنب مع القوة الميكانيكية المنخفضة (مع قيم معامل التخزين التي تتراوح من 10 باسكال إلى 5,000 باسكال اعتمادا على تركيز البروتين) والسلوك الحساس للحرارة ، تؤدي إلى تفاقم هذه التحديات ، مما يتطلب تحكما دقيقا أثناء التحضير والاستخدام بالإضافة إلى الطباعة الحيوية نقية.

تفشل أنظمة الطباعة الحيوية القياسية التي تعمل بالهواء المضغوط في التحكم بشكل صحيح في توزيع SBMe لأن تطبيق الضغط يسبب سلوكا لا يمكن السيطرة عليه بعد طرده من المحقنة. يتأثر بظاهرة مشابهة لتأثير "الطفرة" الموصوف للذوبان البوليمري ، حيث يزداد معدل التدفق فجأة فوق قيمة ضغط حرجة^{معينة 17}^،¹⁸^،¹⁹. كما ورد في عملنا السابق¹⁶ ، تسمح استراتيجية الاستغناء عن التحكم الحجمي بفصل بثق SBMe عن الضغط المتولد في الموزع ، والذي يعتمد على الخصائص الانسيابية للمصفوفة وظروف العمل وهندسة الفوهة. في السنوات الأخيرة ، بذلت عدة محاولات في السوق لاستغلال نفس المبدأ ، مع قيادة Matribot من Corning. يسمح بالتعامل مع SBMe والأحبار الحيوية الأخرى الحساسة لدرجة الحرارة وترسبها بفضل ظروف درجة الحرارة التي يتم التحكم فيها. ومع ذلك ، قد يكون مكلفا ، مما يحد من إمكانية الوصول إلى المختبرات الصغيرة.

في ورقتنا السابقة ، قدمنا بديلا مخصصا منخفض التكلفة - نظام طباعة حيوية مدفوع^{بالحجمي 16}. استند هذا الإصدار إلى طابعة ثلاثية الأبعاد معدلة للمبتدئين مع آلة بثق مطبوعة ثلاثية الأبعاد مخصصة. على الرغم من فعاليتها في الطباعة الحيوية ، إلا أنها قدمت بعض القيود في تكرار الطباعة. نظرا لكونه مشتقا من طابعة ثلاثية الأبعاد للمبتدئين ، فقد واجهت بعض المشاكل مع حركات Z والتوجيه التلقائي. لتلبية هذه الاحتياجات ، قمنا بتطوير نسخة متتقدمة من نظام الاستغناء الحجمي المخصص منخفض التكلفة وبروتوكول محدد لهياكل الطباعة الحيوية باستخدام SBMe.

هنا ، نقدم بروتوكولات لبناء واستخدام هذا النظام. وهي تتألف من آلة بثق مخصصة يتم التحكم فيها بالحجم, بناء على دراستنا السابقة¹⁶, علبة طابعة حيوية, ونظام تحكم. يتم الإنتاج والتجميع لكل وحدة. عند تجميعه وبرمجته باستخدام ملف gcode محدد ، باتباع وصف البروتوكول لمعالجة المصفوفة ، يكون النظام قادرا على الطباعة الحيوية للتركيبات النقية أو المخففة باستخدام SBMe بدقة جيدة للشكل في كل من الطبقات المفردة والمتعددة.

Protocol

طباعة 1. 3D وتجميع الطابعة الحيوية الحجمية

إعداد مكونات الطابعة الحيوية وطباعتها ثلاثية الأبعاد.
1. قم بتنزيل *. ملفات تصميم STL من الملف التكميلي 1.
2. حمل*. STL في برنامج التقطيع الخاص لتحديد اتجاه القطع على لوحة الطباعة وجميع الخيارات المطلوبة للطابعة ثلاثية الأبعاد. اطبع القطع باستخدام حمض البولي لاكتيك (PLA) مع خيارات متوسطة الجودة (حجم فوهة 0.4 مم ، قطر خيوط 1.75 مم ، درجة حرارة الطارد 220 درجة مئوية ، درجة حرارة لوحة سرير الطباعة 50 درجة مئوية ، ارتفاع طبقة 0.2 مم ، سرعة طباعة 300 مم / ثانية).
  ملاحظة: قد تختلف خيارات الجودة المتوسطة وفقا للطابعة المستخدمة لطباعة القطع.
3. افصل القطع المطبوعة عن سرير الطابعة ثلاثية الأبعاد. قم بإزالة الهياكل الداعمة المطبوعة ، إن وجدت ، وتلميع الأسطح عند الحاجة.
قم بتجميع الطارد (الشكل 1).
1. أدخل محملين كرويين خطيين (LM4UU) في الفتحات الرأسية لكتلة الدافع. أدخل أيضا صمولة لولبية T8 في الفتحة المركزية الخلفية وثبتها بأربعة براغي (M3x10).
2. قم بتوصيل أداة توصيل عمود صلبة بمحرك السائر ثم اربطه بمبيت محرك الطارد باستخدام أربعة براغي (M3x6).
  ملاحظة: قم بتوجيه محرك السائر وفقا للأخدود الموجود في مبيت محرك الطارد للسماح بالوضع المناسب للمقبس للكابلات.
3. اربط محرك السائر ، الذي تم تجميعه في الخطوة 1.2.2 ، ببرغي T8 (150 مم) باستخدام أداة توصيل العمود الصلب التي تم إدخالها مسبقا. تأكد من تأمين كل كتلة بشكل صحيح باستخدام مسامير الضبط.
4. قم بتوصيل محمل شفة ذاتي المحاذاة (قطر داخلي 8 مم) في الجزء السفلي من قاعدة الطارد ببراغي (M4x8).
5. أدخل محملين كرويين (4 × 9 × 4 مم) في الفتحات المحددة أعلى قاعدة الطارد والفتحتين الأخريان في الفتحات الموجودة في القسم السفلي.
6. أدخل الجزء المجمع (الخطوة 1.2.1) في قاعدة الطارد من خلال التجويف الموجود في الجزء العلوي من الهيكل. قم بتوصيل المحامل الكروية الأربعة (الخطوة 1.2.5) بقضيبين مقاس 4 مم ، واحد لكل جانب. دع القضبان تمر عبر المحامل الكروية الخطية في الجزء المجمع في الخطوة 1.2.1.
  ملاحظة: من الممكن أيضا إدخال القضبان أولا على المحامل الكروية العلوية ثم وضعها في قاعدة الطارد حتى تصل إلى المحمل الكروي السفلي ويتم تأمين كل شيء في الفتحات المحددة.
7. أدخل الجزء المجمع في الخطوة 1.2.3 في الفتحة المركزية لقاعدة الطارد. قم بتدوير المسمار لتمرير الجوز اللولبي والوصول إلى محمل شفة المحاذاة الذاتية. استخدم براغي التثبيت في المكون لقفل المسمار اللولبي واثنين من المسمارين (M3x8) لتأمين مبيت محرك الطارد في الجزء العلوي من قاعدة الطارد.
8. استخدم براغي أخرى (M3x40) وصواميل M3 لتوصيل مثبت شفة برميل المحقنة بالجزء السفلي من قاعدة الطارد ، لقفل شفة برميل المحقنة (أدخل الاتجاه من أعلى إلى أسفل). استخدم براغي أخرى (M3x30) وصواميل M3 لتوصيل مثبت مكبس المحقنة بالفتحات العلوية لكتلة الانتهازي (أدخل الاتجاه من الأسفل إلى الأعلى) لقفل شفة المكبس.
9. أدخل براغي (M4x80) في زنبركين واتركهما يمران عبر الفتحات الموجودة في الجزء السفلي من قاعدة الطارد وكتلة المحقنة. قم بلف الصواميل مع ترك مساحة المحقنة لتجنب انزلاق كتلة المحقنة.
  ملاحظة: يجب أن تنتقل البراغي من الخلف إلى الأمام.
قم بتجميع المحور X (الشكل 2).
1. أدخل أربعة محامل كروية خطية (LM8UU × 24 مم) في X_Left_Block وأجزاء X_Right_Block في الفتحات العلوية والسفلية ، اثنان لكل منهما. قم أيضا بتوصيل كتلتين من الحزام أعلى كتلتين X اليمنى و X اليسرى بمسامير (M2x10) مع ترك مساحة للحزام.
2. أدخل محملين كرويين (5 × 16 × 5 مم) في الفتحات المركزية ل X_Right_Block ، واحد على كل جانب. ضع بكرة (تجويف 5 مم) في التجويف الداخلي X_Right_Block وقم بتوصيل المحامل الكروية بقضيب 5 مم (طول 35 مم) ، واتركها تمر عبر البكرة.
  ملاحظة: استخدم قضيبا أطول للتجميع للحصول على معالجة أفضل. بعد وضع القطع في مكانها ، قم بقص القضيب بالطول المطلوب.
3. قم بتوصيل مفتاح حد ب X_motor_housing ببراغي (M3x8). أدخل محرك NEMA 17 في مبيت المحرك واستخدم أربعة براغي (M3x8) لتثبيت غطاء X_block_1 في مبيت المحرك والمحرك.
4. قم بتوصيل بكرة (تجويف 5 مم) بالمحرك وقفلها بمسامير التثبيت ثم قم بربط الجزء المجمع معا في الخطوة 1.3.3 إلى X_block_1 بأربعة براغي (M5x8). قم أيضا بتوصيل مفتاح حد في الجزء السفلي من X_Left_Block ببراغي (M3x8).
  ملاحظة: يجب أن يكون القطر الخارجي للبكرات في الخطوتين 1.3.2 و 1.3.4 هو نفسه.
5. ضع محملين كرويين خطيين (LM8UU × 45 مم) في الفتحات الموجودة أعلى وأسفل X_slider.
6. قم بتوصيل الأجزاء المجمعة في الخطوتين 1.3.2 و 1.3.4 بقضيبين 8 مم (طول 200 مم) واتركها تمر عبر الجزء المجمع في الخطوة 1.3.5.
  ملاحظة: قطع قضبان الطول المطلوب قبل التجميع.
7. قم بقفل أحد طرفي الحزام على X_slider_belt_connection باستخدام كتلة الحزام واثنين من المسمارين (M2x8). قم بتشغيل الحزام حول البكرة في الجزء المجمع 1.3.4 ، ثم حول البكرة في الجزء المجمع 1.3.2 وقم بتثبيت طرف الحزام الآخر على الوصلة X_slider_belt باستخدام كتلة الحزام الثانية واثنين من البراغي الأخرى (M2x8). تأكد من إحكام الحزام بشكل صحيح للحصول على الحركة الصحيحة.
  ملاحظة: خلال هذه الخطوة ، يجب تحريك X_slider نحو أحد طرفي هيكل المحور X لتجنب التداخل.
8. قم بربط X_slider_belt_connection X_slider بمسمار واحد (M6x20).
9. قم بتوصيل الطارد ب X_slider وقم بإصلاحه بأربعة براغي (M5x10).
قم بتجميع المحور Y (الشكل 3).
1. ضع كتيفة التثبيت في جزء الطابعة الحيوية الخلفية العلوية باستخدام أربعة براغي (M3x10) وأربعة صواميل.
  ملاحظة: يمكن تكييف موضع كتيفة التثبيت للحصول على الشد المناسب للحزام والسماح بإدخال محرك السائر
2. أدخل محرك السائر في كتيفة التثبيت وقم بلفه بأربعة براغي (M3x8). بعد ذلك ، ضع بكرة (تجويف 5 مم) على العمود المرفقي وقم بإصلاحها بمسامير مثبتة.
  ملاحظة: يمكن توصيل البكرة بالعمود المرفقي قبل وضع المحرك في كتيفة التثبيت لتجنب بعض التداخل بين المكونات.
3. حدد موقع بكرتين (القطر الداخلي 8 مم) على قضيب 8 مم الأمامي وقفلهما على القضيبين (2.5 سم بعيدا عن النهاية). كرر هذه العملية للقضيب الخلفي وأضف بكرة أخرى ، على بعد 5 سم من الطرف الأيمن.
4. قم بتوصيل 12 محامل شفة ذاتية المحاذاة (قطر 8 مم) بالأجزاء العلوية الداخلية للطابعة الحيوية.
5. قم بتوصيل جزأين من الطابعة الحيوية الأمامية وجزأين من الطابعة الحيوية في الخلف العلوي (الاتجاه إلى اليسار / اليمين) باستخدام القضبان المجمعة في الخطوة 1.4.3 وقفلهما بمحامل شفة ذاتية المحاذاة (قطر 8 مم). قم بتأمين الجزأين المجمعين في جميع التقاطعات بمسامير (M3x8).
  ملاحظة: عند وضع القضيب الخلفي ، ضع حزاما مغلقا يربط البكرة على محرك السائر بالبكرة الداخلية على القضيب.
  ملاحظة: قم بتأمين محرك السائر الذي يشد الصواميل لضمان عدم وجود حركة للمحرك وشد مناسب للحزام.
6. قم بتوصيل الجزأين المجمعين في الخطوة 1.4.5 باستخدام أربعة قضبان مقاس 8 مم. دع القضبان تمر عبر المحامل الكروية الخطية الموجودة في الجزء المجمع 1.3 وقفلها على محامل شفة ذاتية المحاذاة (قطر 8 مم). قم بتأمين الجزأين المجمعين في جميع التقاطعات بمسامير (M3x8).
7. قم بتثبيت طرف حزام مفتوح في الجزء العلوي من X_block_1 باستخدام كتلة الحزام وكرر هذه العملية X_block_2. قم بتشغيل الحزام حول البكرات الخلفية على اليسار ، ثم حول البكرة الأمامية ، وقم بتثبيت نهاية الحزام الأخرى مرة أخرى على X_block_1 باستخدام كتلة حزام أخرى. كرر هذه العملية للحزام الثاني.
  ملاحظة: يجب شد الأحزمة بشكل صحيح للحصول على الحركة الصحيحة وبنفس الطول لتجنب الانحناء أو التداخل في حركات Y.
قم بتجميع المحور Z (الشكل 4).
1. قم بربط أجزاء علبة الطابعة الحيوية السفلية معا (M4x8).
2. قم بتوصيل محمل شفة ذاتي المحاذاة (قطر 8 مم) بأرضية الجزء السفلي من الجزء المجمع في الخطوة 1.5.2.
3. قم بتثبيت محامل كروية خطية ذات حواف (LMH8UU) في الفتحات الخارجية الموجودة في Z_slider وصمولة لولبية واحدة في الفتحة المركزية بمسامير (M3x8).
4. قم بتثبيت مفتاح حد على الجانب الأيسر Z_plane باستخدام براغي (M3x8).
5. اربط محرك السائر بوصلة عمود صلب. قم بتوصيل محرك متدرج ب Z_block بأربعة براغي (M3x20) وقضيب ملولب بأداة توصيل العمود الصلبة. تأكد من تأمين كل كتلة بشكل صحيح باستخدام مسامير الضبط.
6. قم بتوصيل الجزء المجمع في الخطوة 1.5.5 بقاعدة الطابعة الحيوية باستخدام قضيبين مقاس 8 مم. دعهم يمرون عبر الجزء المجمع في الخطوة 1.5.3.
7. ثبت Z_block على اللوحة الخلفية باستخدام براغي (M5x8).
8. قم بتوصيل Z_plane Z_slider باستخدام أربعة براغي (M3x25). أدخلها في الفتحات Z_plane من أعلى إلى أسفل ، وقم بتمرير الزنبرك بين Z_plane و Z_slider ، وثبتها بالمكسرات. اضبط شد الزنبرك لتسوية المستوى.
9. قم بتوصيل أربعة أقدام قابلة للتعديل تحت هيكل الطابعة الحيوية في التجويف المحدد. قم بتسوية الطابعة الحيوية عن طريق ضبط القدمين.
10. قم بتوصيل الجزء المجمع بالجزء المجمع في الخطوة 1.4.6 بثمانية براغي (M4x12).
11. قم بتوصيل مفصلتين في مقدمة الهيكل في مواقع محددة ومغناطيس واحد في الجزء الأيمن في المكان النسبي بمسامير (M2x8). قم بربط الهيكل العام بألواح زجاج شبكي شفافة 2 مم لإغلاق الفتحات.
  ملاحظة: قم بربط لوحة زجاج شبكي أمامية بالمفصلات وضع برغي آخر بالتوافق مع المغناطيس للحصول على باب أمامي.
اعرض التجميع (الشكل 5 أ).
1. دع الأسلاك المتصلة بالشاشة تمر عبر الفتحة السفلية وقم بتوصيل الشاشة بمبيت الشاشة بأربعة براغي (M3x3).
  ملاحظة: يجب أن يتم هذا المقطع بدون غطاء مقبض LCD. يمكن أن يكون موجودا على المقبض المثبت مسبقا بعد التثبيت على مبيت الشاشة.
2. أغلق الهيكل بالغطاء باستخدام أربعة براغي (M2x6).
3. أدخل بطاقة SD في الفتحة اليسرى.
4. دع الأسلاك تمر عبر الفتحة الموجودة أعلى الهيكل. قم بربط الجزء المجمع في الجزء العلوي من الطابعة الحيوية ببراغي (M3x8).
  ملاحظة: ستعمل جميع الأسلاك (المحركات ومفاتيح الحد والعرض) بالقرب من الحائط وتخرج من الفتحة اليسرى السفلية. يتم تثبيتها بمشابك الكابلات لتجنب التداخل مع الأجزاء الميكانيكية.
تجميع الإلكترونيات (الشكل 5 ب)
1. ثبت المقبس في الجزء الخارجي من العلبة الإلكترونية ببراغي (M3x10).
2. قم بتوصيل اللوحة الأم بالجزء الداخلي من العلبة الإلكترونية بأربعة براغي (M3x10).
3. قم بتوصيل الجزء السفلي من مصدر الطاقة بالجزء الداخلي من العلبة الإلكترونية بأربعة براغي (M3x8).
4. قم بتمرير الأسلاك من خلال الفتحة الدائرية الموجودة على الغطاء وقم بتوصيلها باللوحة الأم. أغلق العلبة الإلكترونية بغطاءها باستخدام أربعة براغي (M3x10).
  ملاحظة: من الممكن توصيل علبة الإلكترونيات بهيكل الطابعة الحيوية أو تركها على المكتب في حالة وجود مساحات عمل صغيرة.
  يوضح الشكل 6 جميع توصيلات الكابلات الإلكترونية. يمكن أن تكون مختلفة قليلا وفقا للوحة الأم للطابعة ثلاثية الأبعاد المستخدمة.

2. إعداد البرنامج وعملية إنشاء gcode

إعداد إعدادات برنامج التقطيع
1. افتح برنامج التقطيع.
  ملاحظة: قد تختلف التعليمات حسب البرنامج المستخدم أو الإصدار.
2. سجل الدخول إلى المنصة.
3. انتقل إلى خيارات الإعدادات . حدد الطابعة ثم إضافة طابعة غير متصلة بالشبكة. حدد طابعة FFF مخصصة وفي المربع اسم الطابعة ، اكتب اسم الطابعة. انقر فوق إضافة.
  ملاحظة: إذا كان هذا هو أول تثبيت للبرنامج، فتح لوحة إضافة طابعة تلقائيا بعد تسجيل الدخول.
4. في نافذة إعدادات الجهاز ، قم بتغيير الإعدادات الافتراضية x وy وz إلى 176 و120 و45 مم.
5. قم بإلغاء تحديد خيار سرير مدفأ إذا لم يتم إلغاء تحديده بالفعل.
6. أدخل في لوحتي بدء g-code و إنهاء g-code الأسطر النصية التي تم الإبلاغ عنها في الملفات المعنونة "JoVE_Starting_G-code.txt" و "JoVE_Ending_G-code.txt" في الملف التكميلي 2.
  1. قم بتعديل القيمة 150 في السطر "M92 E150" في ملف g-code لبدء التشغيل وفقا لمعدل التدفق المراد تطبيقه. قم بتقدير القيمة المناسبة باستخدام الصيغة التالية:
    
    حيث Q هو معدل التدفق المطلوب [μL / min].
    ملاحظة: تم الحصول على هذه الصيغة تجريبيا باستخدام النظام الموصوف. قد يكون الأمر مختلفا إذا كانت هناك تغييرات في المكونات الميكانيكية أو الكهربائية. قد يكون البديل المحتمل هو إصلاح القيمة وفقا للنظام المستخدم وإنشاء كود MATLAB مخصص لإنشاء ملف gcode المطلوب.
7. قم بتغيير قيمة قطر المادة المتوافقة في لوحة الطارد 1 إلى 1,75 ثم أغلقها.
8. انتقل إلى Marketplace ، وحدد المكون الإضافي Z Offset Setting وقم بتثبيته. في نهاية العملية ، أعد تشغيل البرنامج لوضع اللمسات الأخيرة. بمجرد إعادة فتحه، حدد الإعدادات | طابعة | إدارة الطابعات على شريط الأدوات. في نافذة التفضيلات ، انقر فوق الإعدادات وقم بتنشيط جميع الخيارات عن طريق تحديد خيار التحقق من الكل وإغلاقه.
9. قم بتكوين الإعداد بالنقر فوق إعدادات الطباعة (الزر الثالث) في قائمة المرحلة ، والتي تحتوي على لوحة التكوين . أدخل النسبة المئوية للتعبئة في ملف تعريف الطباعة الحالي في لوحة التكوين . حدد الزر مخصص لتعديل إعدادات الطباعة الحالية وملف التعريف جيد في القائمة المنسدلة. اضبط سرعة الطباعة على 10 مم/ثانية.
إعداد gcode
1. قم بتنزيل *. ملف تصميم المحكمة الخاصة بلبنان، بعنوان "JoVE_Square"، من الملف التكميلي 2 من هذه الورقة.
2. حمل. STL في برنامج التقطيع.
3. حدد موقع القطعة على السطح المسطح وانتقل إلى الإحداثيات 65 ، 42.5 ، 0 (X ، Y ، Z) مم. قم بإنشاء نسختين بالنقر فوق ملف . اسم ملف STL في قائمة الكائنات وتحديد الخيار مضاعفة المحدد . انقلها إلى الإحداثيات التالية: 16 ، 42.5 ، 0 مم و -33 ، 42.5 ، 0 مم (X ، Y ، Z).
  ملاحظة: لا يمكن تحديد ترتيب الطباعة تلقائيا ما لم يتم تعديله يدويا مباشرة في ملف gcode النهائي. يتم تحديد الإحداثيات للوحة متعددة الآبار.
4. انتقل إلى إعدادات الطباعة في قائمة المرحلة. في قسم الجدران، ضع 0 كعدد خطوط الجدار. ضع 0 كقيمة سماكة علوية / سفلية في القسم العلوي / السفلي. في لوحة Infill، أدخل القيم التالية: Infill Pattern: Grid، مسافة خط Infill: 5 مم، اتجاهات خط Infill: [0].
  ملاحظة: من الممكن تقليل سرعة السير في قسم سرعة الطباعة لتحسين دقة المحور X.
5. قم بتعطيل التراجع في قسم السفر وطباعة التبريد في قسم التبريد .
6. في قسم التصاق لوحة البناء، حدد لا شيء كنوع التصاق لوحة البناء، بينما في قسم الأوضاع الخاصة، حدد خيار واحد في كل مرة كتسلسل الطباعة.
7. انقر فوق الزر Slice لإنشاء g-code.
8. افتح ملف g-code باستخدام تطبيق Notepad وقم بإزالة الأسطر "M104 S200" و "M105" و "M109 S200" في السطر 12 بعد العبارة "؛ تم إنشاؤه باستخدام Cura_SteamEngine 4.9.0 بوصة.
9. أضف "G1 Z25" قبل السطر التالي "؛ شبكة: JoVE_Square_rev. STL(6)" وقسم التالي إلى قسمين: (1) G0 F3600 X142.46 Y7.499 و (2) G1 Z0.3.
  ملاحظة: إحداثيات X و Y هي مجرد أمثلة.
10. قم بتعديل قيمة Z إلى Z25 في كل سطر موجود بعد "؛ TIME_ELAPSED "التعليق على كل تعليمات الطبقة الأخيرة لكل قطعة.
  ملاحظة: لطباعة قطعة واحدة فقط، لا يلزم اتباع الخطوة 2.3.10.

3. اختبار التورم / التدهور

الخطوات التحضيرية
1. خذ حقنة زجاجية معقمة سعة 1 مل (طرف TL) وفوهة مخروطية معقمة 25 جرام. قم بتجميعها ووضع المحقنة المجمعة في الثلاجة.
2. ضع أطراف الماصة وقارورة مصفوفة SBMe في الثلاجة طوال الليل في اليوم السابق للتجربة.
3. اطبع ثلاث شبكات من جيش التحرير الشعبى الصينى (Φ = 20 مم) بحجم مسام دائري 1 مم × 1 مم وعمود رأسي جانبي للإمساك بها.
بنيات الطباعة
1. خذ المحقنة المجمعة وقارورة مصفوفة SBMe من الثلاجة. استنشق 500 ميكرولتر من مصفوفة SBMe وضعها في الحاضنة لمدة 15 دقيقة للسماح بالتبلور.
2. خذ المحقنة من الحاضنة وضعها في رأس طباعة الطابعة الحيوية. تأكد من أن مكبس الحقنة على اتصال صحيح بكتلة الانتهازي.
3. قم بتأمين مكبس تثبيت الحقنة وشفة برميل الحقنة باستخدام مثبتات مكبس الحقنة ، وبرميل الحقنة بمشبك الحقنة.
4. قم بمعايرة النظام باستخدام إعداد المنزل التلقائي في قائمة الطابعة الحيوية لاكتشاف أصل المحاور تلقائيا.
5. حرك الطارد باستخدام الأمر Move Axes حتى يلامس طرف الإبرة شبكة PLA لتعريف Z0 يدويا.
6. ابدأ الطباعة عن طريق تحديد ملف g-code لطباعته في قائمة الطابعة الحيوية.
7. ضع اللوحة متعددة الآبار في الحاضنة لمدة 2 دقيقة للسماح ل SBMe بالاستقرار بعد البثق.
8. خذ اللوحة متعددة الآبار وضع 2 مل من وسط زراعة الخلايا في الآبار الثلاثة التي تحتوي على الشبكات المطبوعة بيولوجيا. ضع اللوحة متعددة الآبار في الحاضنة.
9. في كل نقطة زمنية (t0 ، 1 ساعة ، 2 ساعة ، 3 ساعات ، 4 ساعات ، 1 ، 3 ، 7 ، 10 ، و 14 يوما) ، خذ كل شبكة من اللوحة وجففها بورق نظيف لإزالة الفائض من الوسط والوزن على الميزان. ضع الشبكة مرة أخرى في اللوحة ثم في الحاضنة لمواصلة التجربة. تقدير نسبة التورم ومعدل التدهور باستخدام الصيغ التالية:
  
  حيث W_t هو وزن التركيبات في كل نقطة زمنية و W_t0 وزن التركيبات المجففة.
  
  حيث W_iهو الوزن في نهاية اختبار التورم.

4. الطباعة الحيوية لتركيبات SBMe

الخطوات التحضيرية
1. خذ حقنة زجاجية معقمة سعة 1 مل (طرف TL) وفوهة مخروطية معقمة 25 جم وقم بتجميعها أسفل خزانة السلامة الحيوية. ضعها في صندوق معقم في الثلاجة.
2. ضع أطراف الماصة وقارورة مصفوفة SBMe في الثلاجة طوال الليل (4 درجات مئوية على الجليد) في اليوم السابق للتجربة.
3. أضف 20 ميكرولتر من التريبان الأزرق إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل.
4. اضبط جهاز الطرد المركزي على 345 × جم ، 4 درجات مئوية واتركه يبرد (~ 3-4 ساعات).
5. خذ 5 مل من الماء في أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل كتوازن لجهاز الطرد المركزي.
6. محلول عازلة الفوسفات الدافئ (PBS) والوسائط في حمام مائي.
  ملاحظة: يتكون وسط زراعة الخلايا من وسط النسر المعدل بالكامل من Dulbecco (DMEM) المكمل بنسبة 10٪ مصل الأبقار الجنيني (FBS) والبنسلين والستربتومايسين و L-glutamine.
7. ضع الطابعة الحيوية تحت خزانة السلامة البيولوجية. تعقيم تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 20 دقيقة.
  ملاحظة: لضمان الأداء السليم للطابعة الحيوية ، قم بتنفيذ وظيفة المنزل التلقائي وتحقق من الحركات المناسبة لكل محور وعمل مفاتيح الحد.
تحضير Bioink
1. خذ القارورة في الحاضنة التي تحتوي على خلايا سرطان البروستاتا التجارية في الفئران وضعها تحت خزانة السلامة الحيوية.
2. قم بإزالة وسط زراعة الخلية من القارورة.
  ملاحظة: تنطبق الأحجام التي تم الإبلاغ عنها في هذا البروتوكول على قوارير T25 Cell Culture.
3. اغسل الخلايا مرة واحدة ب 2 مل من PBS ثم استنشقها.
4. أضف 500 ميكرولتر من التربسين وضع القارورة في الحاضنة لمدة 5 دقائق للسماح بانفصال الخلية عن اللوحة.
5. افحص الخلايا بحثا عن التربسينية وإذا لزم الأمر ، اضغط برفق على قاع القارورة.
6. أضف 4.5 مل من الوسط إلى القارورة. اغسل اللوحة بعناية للتأكد من أن جميع الخلايا المنفصلة تطفو في وسط زراعة الخلية.
7. استنشق الوسط وأضفه إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل.
8. خذ 20 ميكرولتر واخلطها مع التربان الأزرق. ثم ضع 10 ميكرولتر من هذا الخليط في غرفة عد الخلايا لحساب الخلايا الحية باستخدام الصيغة التالية:
  
  حيث f هو عامل التخفيف لتعليق التريبان الأزرق (نسبة 1: 1) ؛ V هو حجم تعليق الخلية [مل].
9. جهاز طرد مركزي التعليق الخلية المتبقية لمدة 5 دقائق (345 × جم ، 4 درجة مئوية).
10. قم بإزالة المادة الطافية وإعادة تعليقها في مصفوفة SBMe الباردة بكثافة الخلية المطلوبة (10⁶ خلايا / مل)
11. استنشق 800 ميكرولتر من معلق المصفوفة الذي يحتوي على خلايا بحقنة باردة.
12. قم بإزالة فقاعات الهواء التي قد تكون محاصرة في المحقنة وضعها في صندوق معقم. ثم ضعه في الحاضنة لمدة 15 دقيقة للسماح بالتبلور.
عملية الطباعة الحيوية
1. خذ المحقنة من الحاضنة وضعها في رأس الطباعة الحيوية. تأكد من أن مكبس الحقنة على اتصال صحيح بكتلة الانتهازي.
  ملاحظة: يجب أن يكون النموذج ووحدة التخزين نفس المحقنة المستخدمة في التجربة.
2. قم بتأمين مكبس تثبيت الحقنة وشفة برميل الحقنة باستخدام مثبتات مكبس الحقنة ، وبرميل الحقنة بمشبك الحقنة.
3. استخدم صواميل M4 في الجزء السفلي من الطارد لضبط ضغط الزنبرك وقفل المحقنة في مكانها.
  ملاحظة: الخطوات من 4.3.1 إلى 4.3.4 موضحة في الشكل 7.
4. قم بمعايرة النظام باستخدام إعداد المنزل التلقائي في قائمة الطابعة الحيوية لاكتشاف أصل المحاور تلقائيا.
  ملاحظة: يضمن هذا المقطع دائما الإعدادات الأولية المناسبة بشكل مستقل عن نوع الدعم الذي نستخدمه للطباعة.
5. ضع لوحة متعددة الآبار 6 على مستوى الطباعة.
6. حرك الطارد باستخدام الأمر Move Axes حتى يلامس طرف الإبرة قاع البئر لتحديد Z0 يدويا.
7. حدد ملف gcode في خيار القائمة في قائمة الطابعة الحيوية وابدأ الطباعة. ستتم طباعة شبكة مربعة من ست طبقات (جانب 2.6 سم) في كل بئر.
8. بعد عملية الطباعة الحيوية ، استخدم مجهرا مقلوبا للتأكد من نجاح عملية الطباعة ووضع اللوحة متعددة الآبار في الحاضنة لمدة دقيقتين للسماح ل SBMe بالاستقرار بعد البثق.
9. ضع 2 مل من وسط زراعة الخلايا في كل بئر.
  ملاحظة: يجب أن يغطي الحجم التركيبات بالكامل.

النتائج

في هذه المقالة ، نقدم بروتوكولا لتركيبات الطباعة الحيوية المصنوعة من SBMe باستخدام طابعة حيوية حجمية منخفضة التكلفة وحسب الطلب. نحن نقدم وصفا مفصلا وطباعة ثلاثية الأبعاد *. ملفات STL لبناء النظام ونثبت استخدامه المحتمل في أبحاث السرطان من خلال طباعة هياكل أحادية ومتعددة ال...

Discussion

في البحوث الانتقالية, SBMes ذات قيمة خاصة في مجموعة متنوعة من مجالات البحث, من هندسة الأنسجة إلى اختبار المخدرات ^2,3. على وجه الخصوص ، أصبحت أساسية في أبحاث السرطان ، لأنها تكرر السمات الميكانيكية والكيميائية الحيوية للبيئة المكروية للورم ، م...

Disclosures

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

Acknowledgements

تم تمويل هذا العمل جزئيا من خلال جائزة المسرع رقم A26815 بعنوان: "تطور سرطان الخلية المفردة في العيادة" بتمويل من شراكة بين Cancer Research UK و Fondazione AIRC (رقم 22790) والاتحاد الأوروبي - الجيل القادم من الاتحاد الأوروبي ، المهمة 4 ، المكون 1 ، CUP D53D23003310006.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
12-multiwell plate	Sigma-Aldrich	CLS351143
3D FDM printer	Flashforge	Adventurer 5M Pro
3D printer Motherboard	GEETECH	GT2560 REV A+
6-multiwell plate	Sigma-Aldrich	M8687
AC socket	HiLetgo	https://www.amazon.it/HiLetgo-Terminal-Socket -Holder-Switch/dp/B0814PT3YG/ref=sr_1_1?__ mk_it_IT=%C3%85M%C3%85%C5%BD%C3% 95%C3%91&crid=2TRIBP34VJ61A &dib=eyJ2IjoiMSJ9.zW6_VmeiudR I4yMpjJqJm7OdeoctTKW2mrEzml BAyJVa1hkM4PiJT3pLY0mXdxm1 AZQxa2_f5J4q4d5v3vUeqLkjJ6BM kWHAoeEfbEQJNuZaQ3NjmUlqWy _1AfQpnRp4VqJ2m3bkWsChztCa Ok-ZdQJlobGxJaMKg7WbV352 Hyo.0tEw2GYoPQJ4SdNYXO1XM Jrl2yXMvRey55Hj7GhISkk&dib_ tag=se&keywords=AC+socket+HiLetgo&nsdOpt OutParam=true&qid=1734702097&sprefix=ac+ socket+hiletgo%2Caps%2C173&sr=8-1	15 A 250 V
Adjustable feet	EXIN DEHCEN	https://www.amazon.it/gp/product/ B0CPLTSNQB/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Height 27-40 mm
Ball bearing 4 mm	QUARKZMAN	684ZZ	Dimensions 4 x 9 x 4 mm
Ball bearing 5 mm	XiKe	625-2RS	Dimensions 5 x 16 x 5 mm
Belt closed	Turmberg3D	https://www.amazon.it/gp/product/ B09B2FJQBV/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Width 6 mm
Belt open	Fajoeda	https://www.amazon.it/gp/product/ B09QCTVPTH/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&th=1	Width 6 mm
Bioprinting nozzle	Fisher Scientific	17780789	Corning Standard Conical Bioprinting Nozzles
Bürker Cell Counting chamber	GLASWARENFABRIK KARL HECHT	40443001
Centrifuge	Eppendorf	5702 R
Centrifuge tube	Sigma-Aldrich	CLS431470	15 mL
Centrifuge tube	Sigma-Aldrich	EP0030120086	1.5 mL
Display	Sigma-Aldrich	BR718905
DMEM	Gibco Thermofisher	11965092
FBS	Sigma-Aldrich	F7524
Flanged linear ball bearing	Sourcing map	https://www.amazon.it/gp/product/ B07S6LZHM7/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	LMF8UU
Glass syringe	Fisher Scientific	11520062	Hamilton GasTight 1 mL (TLL terminal)
Hinges	YASQZ	https://www.amazon.it/gp/product/ B09DNXGDGG/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
Incubator	Fisher Scientific	15481374	Eppendorf Galaxy 48 R CO₂ Incubator, 48 L, Stainless Steel
Inverted microscope	Nikon	Eclipse Ti2-U
Jumper wires	Iverntech	https://www.amazon.it/Iverntech-XH2 -54-Terminale-Stampante-Stepper/dp/ B07Q12B6K5/ref=pd_ci_mcx_mh_ mcx_views_0_image?pd_rd_w=cb2r J&content-id=amzn1.sym.57a351cf- ba07-47e8-b302-aa2aa1a3f209%3 Aamzn1.symc.ca948091-a64d-450e- 86d7-c161ca33337b&pf_rd_p=57a3 51cf-ba07-47e8-b302-aa2aa1a3f209 &pf_rd_r=YHY9RFYZJK7PYAY2RXX D&pd_rd_wg=7WkXB&pd_rd_r=8239 66cb-4977-48ce-b095-0dcedf8c372f& pd_rd_i=B07Q12B6K5&th=1
LCD unit	Paradisetronic.com	https://www.amazon.it/Display-controller -conduttori-adattatore-stampante/dp/B01 DUR4064/ref=sr_1_9?__mk_it_IT=%C3 %85M%C3%85%C5%BD%C3%95%C3 %91&crid=1OAHVIIRA16X3&dib=eyJ2Ij oiMSJ9.07V2Jf7RzJjTUlIuFobUJFjUzG4 8633KkdcMXSEfnWLRX41d5vAF7xPBJ maniVxDoXecfihZzzOXlP3v-e29cUjoGLf GDyv5DoDVwp7ndohNTYvYzoi3gWkF- Hsd2YbT7tjb1Dra1afqSn26CbFdEvJ84y qyX7Gi3-7DHh8yMwdd6_7quiuW_mjsm w1nu0YQG68GZ0XM7unOsvyddQ__R_ 3dndxb3mOjgGjklEgu_KEbZJPOZDIdSo oU3nrrKHj56hCfk9ACwYpB80QGCbTPK 0p-fE0g9h02WPmtHV38UU3m5AdZsTQ HqvnVlJg703qGT-8ze8fQItw2rtbgl_J86H RMReJOhVLQBkqNwxh57CQ.yNbeFmZ ZBEUhadz2dQa8NxpZD9g4P6ighRU_97 yxgnw&dib_tag=se&keywords=display% 2B3D%2Bprinter%2Bprusa%2Bi3&nsdO ptOutParam=true&qid=1734714093&s= industrial&sprefix=display%2B3d%2B printer%2Bprusa%2Bi3%2Cindustrial% 2C143&sr=1-9&th=1	Old Prusa i3 LCD unit. Link to commercially available alternative
Leadscrew M8	RS PRO	280-408
Leadscrew nut M8	Comioke	https://www.amazon.it/dp/B0C7QB13C4? ref=ppx_yo2ov_dt_b_fed_asin_title&th=1	Nut for M8 screws
Leadscrew nut T8	Aipaide	https://www.amazon.it/gp/product/B086QJCX1M/ref =ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Nut for T8 screws
Leadscrew T8	VBESTLIFE	https://www.amazon.it/gp/product/B07CXRB52Y/ref =ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&th=1	Length 15 mm
L-Glutammine	Sigma-Aldrich	G7513
Limit switch	CESFONJER	https://www.amazon.it/gp/product/B07SPX492J/ref =ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
Linear ball bearing (LM4UU)	A ABSOPRO	https://www.amazon.it/gp/product/B0CB3M5GHJ/ref =ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Dimensions 4 x 8 x 12 mm
Linear ball bearing (LM8LUU)	Fdit	https://www.amazon.it/LM8LUU-Linear -Motion-cuscinetti-stampante/dp/B07N 58W3GZ/ref=sr_1_1_sspa?__mk_it_IT =%C3%85M%C3%85%C5%BD%C3% 95%C3%91&crid=33VNCCCSIFJRP& dib=eyJ2IjoiMSJ9._JJ2doXI33C2JagX 8x6E2Bz2ILo10852tBi1erWqGn363ku zbcvknbMtsK6wm5jdR1P5XwC6Ovui at3kGIJPpYFOG_FiIBYT8xLkkbiphhR 4ncR6R9tPPyeN--_3RxFgKMh5tMO_ jesAcu7Anp87Qb91ruM85CKqduV-y6 HQJtAvVSXmfG4yE4N7d4_dDVKsR7 UkEmDIznJE0HIhvvI2R6vX2tMN5yMc _ZrUbUB0gPF6SgXHVJmKRizCRqL7J 64WRD-XnMSpVHY_LUVJ7gn9kJQ35 _zQw8vLD-_kRyvxwvE.4IVMdKzF1Ax mQHQhWEi6LH12UI4CmMgi288_g3zG CPY&dib_tag=se&keywords=LM8LUU+ Fdit&nsdOptOutParam=true&qid=17347 04494&s=industrial&sprefix=lm8luu+fdit+ %2Cindustrial%2C136&sr=1-1-spons&sp _csd=d2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY&psc=1	Dimensions 8 x 15 x 45 mm
Linear ball bearing (LM8UU)	ARCELI	https://www.amazon.it/gp/product/ B07BV3YBP2/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Dimensions 8 x 15 x 24 mm
Magnets	OCEUMAOA	https://www.amazon.it/gp/product/ B0CB6C2RF4/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&th=1	8 x 3 mm
Matrigel	Gibco Thermofisher	LOT 0202003	SBMe
Motor driver	Longruner	https://www.amazon.it/gp/product/ B071P41ZBW/ref=ppx_yo_dt_b_search _asin_title?ie=UTF8&psc=1	Driver A4988
PBS	MicroGem, VWR	TL1006-500ML
Penicillin-Streptomycin	Gibco Thermofisher	15070063
Pipette tips	Sigma-Aldrich	Z740058	BRAND filter tips, racked, TipBox (volume 50-1000 μL)
Plexiglass sheets	MVQPER	https://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti- plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0CF Q4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.bf7 Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_NuF ZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHBtZgdzI 356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-kfklAYrb rXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJPcLF2f2E EcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA0sLPnM0ts wdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh4fpVNMA4Kwh 0UaeQhfexFY0dNWhPYftXvvz9LLj1uMID2E Gi_ScmYqY5LahbYOmKVVPPiPIgCVdLjaM8 yqNp2ZJGV9Fge2xa6OAHxmMeaQUqGkoQ 88x9GkX7EWuOwYO0dEUYSzHCdGONWo eZLfSJOR3C6-knjzKrOQ0ziouJfo-ktbak7v3A H53BtIOiXbT57cKqh-uc9wI_j_lHN-8okAe2yO 6upc61MoydZujuxnfLG7hwytqHQG2.ApKq8 MVs8Xihn_zcA39nML-2lpjnagGhXIx0clcJN_ E&dib_tag=se&keywords=lastra+plexiglass+ 2+mm&nsdOptOutParam=true&qid=1734702823&sr=8-14	2 mm thickness, transparent sheet, 21 x 32.5 cm
Plexiglass sheets	MVQPER	https://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti -plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0C FQ4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.b f7Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_N uFZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHBtZ gdzI356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-kfk lAYrbrXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJPc LF2f2EEcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA0s LPnM0tswdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh4fpV NMA4Kwh0UaeQhfexFY0dNWhPYftXvvz9 LLj1uMID2EGi_ScmYqY5LahbYOmKVVPP iPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fge2xa6OAHx mMeaQUqGkoQ88x9GkX7EWuOwYO0dE UYSzHCdGONWoeZLfSJOR3C6-knjzKrO Q0ziouJfo-ktbak7v3AH53BtIOiXbT57cKqh- uc9wI_j_lHN-8okAe2yO6upc61MoydZujux nfLG7hwytqHQG2.ApKq8MVs8Xihn_zcA3 9nML-2lpjnagGhXIx0clcJN_E&dib_tag=se &keywords=lastra+plexiglass+2+mm&nsd OptOutParam=true&qid=1734702823&sr=8-15	2 transparent sheets, 2 mm thickness, 20 x 20 cm
Plexiglass sheets	MVQPER	https://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti -plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0C FQ4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9. bf7Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_ NuFZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHB tZgdzI356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG- kfklAYrbrXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJ PcLF2f2EEcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA 0sLPnM0tswdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh 4fpVNMA4Kwh0UaeQhfexFY0dNWhPYft Xvvz9LLj1uMID2EGi_ScmYqY5LahbYO mKVVPPiPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fge 2xa6OAHxmMeaQUqGkoQ88x9GkX7E WuOwYO0dEUYSzHCdGONWoeZLfSJO R3C6-knjzKrOQ0ziouJfo-ktbak7v3AH53B tIOiXbT57cKqh-uc9wI_j_lHN-8okAe2yO6 upc61MoydZujuxnfLG7hwytqHQG2.ApKq 8MVs8Xihn_zcA39nML-2lpjnagGhXIx0clcJ N_E&dib_tag=se&keywords=lastra+plexigl ass+2+mm&nsdOptOutParam=true&qid=1 734702823&sr=8-16	2 transparent sheets, 2 mm thickness, 20 x 30 cm
Polylactic acid (PLA) filament	Flashforge	Black 100102
Power supply	SQUADO	https://www.amazon.it/SQUADO-Alimentatore -stabilizzato-dissipatore-efficienza /dp/B0DMTG6SJD/ref=sr_1_6?dib =eyJ2IjoiMSJ9.1vVze6Zt6fhKCvFb eAOSiRe57N6a1mlBnkLdHiEym4 ugHzueF6_FdOodb3sftCXb5raTg eerMMUbL5KcaI_SDa_2j7s2XohI B01QMJDyq0xQ5Gp3KLIZozDHV fGBdSrvwgyOl-BXSDy_ocZlj2TL5 e21p3K6qpvSaT5yo8WA5tngS93 Eqe8s8D6mjpnnPFrb9RpQpj299Y nNRYgr_YF3NCt3mH0r0FocKcCa LNpKtfGLCbnz_yB-360tp5SAi7A7 cgBf5I4NzQ5iQTTXAG727x0Hml mG-eaFBSJv6M1LPooZiT2aT7dx o_7tzyU6MQ9vAEozXkLTaTTMX RA_svPp96sxp93NRLReI64xpFd S3Zh1y_JPQijbMAIuvuYflhh6JlPB W6-fpW6QXl9v5wNEs_YwjzP9Sf RKxRmchzZhgsK-34XJeaEmjbRq H3piM0Zx.MfPYUNvCEhDBqLDh C-iqBEu-vjIVgsrQmOjeLuGo9YQ& dib_tag=se&keywords=power+sup ply+AC+INPUT%3A+110-220V%2 C+DC+OUTPUT%3A+12V+15A&n sdOptOutParam=true&qid=173471 4722&sr=8-6	Old Prusa i3 power supply (AC INPUT: 110-220 V, DC OUTPUT: 12 V 15 A). Link to commercially available alternative
Pulley 5 mm	VooGenzek	https://www.amazon.it/gp/product/ B0B8H16KWX/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Bore 5 mm, Width belt space 6 mm
Pulley 8 mm	Yxtaii	https://www.amazon.it/gp/product/ B07X852RFN/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&th=1	Bore 8 mm, Width belt space 6 mm
Ribbon cables	QUARKZMAN	https://www.amazon.it/sspa/click?ie =UTF8&spc=MTo0NDgyNTkwNzU wNjM5NzM5OjE3MzQ3MTQ1OTE6 c3BfbXRmOjMwMDEyMjk4NTMzN TYzMjo6MDo6&url=%2FQUARKZM AN-connettore-Lunghezza-Comput er-confezione%2Fdp%2FB0CQRM DQNG%2Fref%3Dsr_1_15_sspa% 3F__mk_it_IT%3D%25C3%2585M %25C3%2585%25C5%25BD%25 C3%2595%25C3%2591%26crid%3 D3BZ8Q05YA50TX%26dib%3Dey J2IjoiMSJ9.zoYnL2ViiarlDS_7165D ldxu-TTbVbWUVAP3pCybFB-bjGl wSgrpnkMhhsJj3NRo8Mvht8ev5H vGQ-UUpPom12OcOcwyRVXLAR UvMyTm8mpAdZSaOritwHRgwu2 JuW9UoS4jlCbA-gzP2FEAAH47K fFOWN6FEhc5r0YGBcSIsA6_QV6 _LA1k_ifj3c2BFm2Fj8YjW-auz7Yiy ULfZusvGX28S1K5kJdTa_YOwJY YC0Y__s-CCchHKiZgDhFjtFogUz0 Tonob4HQZiO_hkrnm3ixpNj9rgE- hvVq1FK1uD9M.kkP89x1SJ0SLxZ sv3YomYEfmkhpvP4WQf2TtC76K YAE%26dib_tag%3Dse%26keywords %3DCavo%2Bflessibile%2Ba%2Bna stro%2Bpiatto%2Bper%2Bstampant e%2B3D%2Ba%2B10%2Bpin%26n sdOptOutParam%3Dtrue%26qid% 3D1734714591%26s%3Dindustrial %26sprefix%3Dcavo%2Bflessibile %2Ba%2Bnastro%2Bpiatto%2Bper %2Bstampante%2B3d%2Ba%2B10 %2Bpin%252Cindustrial%252C170 %26sr%3D1-15-spons%26sp_csd% 3Dd2lkZ2V0TmFtZT1zcF9tdGY%26psc%3D1	ribbon cable 2651 28AWG 10 pins
Rigid shaft coupling	Gwolf	https://www.amazon.it/gp/product/ B088R8CW5Z/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Coupling from 5 to 8 mm
Rods 4 mm	RS-components	682-810	Diameter 4 mm
Rods 5 mm	Sourcingmap	a14010200ux0214	Diameter 5 mm
Rods 8 mm	RS-components	682-078	Diameter 8 mm
Screws	Bnnrjia	281-984	M2x6 - Flat head
Screws	INCREWAY	https://www.amazon.it/INCREWAY- assortite-portatili-accessori- riparazione/dp/B07KN37M5J/ ref=sr_1_20?__mk_it_IT=%C 3%85M%C3%85%C5%BD% C3%95%C3%91&crid=12BH MAWD8SK4Z&dib=eyJ2IjoiM SJ9.SjXKoxV0NYqENPoUeS4 2-rj1Af398uiCLXDxFs0C9HfS 8vwEPmsfAMPwIMfllkAfWNY TIEU4KXhJRgRHInNI3U_aow 0EPyfufQKlA4wHz1eOJBvYO ND-5obbXfRPn7VXQ8kzBXM VfUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB-z pRvQ6oE5Fr_1sO7lFnzURtD1 YBf65O58M3hrDXf5r_8MIz1c Asct-2P8AyWWBZAB1buYoyP gnnOiBL5EBS7twJWqcDU86m h1ywyufiUitm6kIwNuMx32D0h 0jkHna481aaYP_Q7kHgDxxrR _fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHfF WVMqvB_YBdEAuTeL08EP_p TY50uT4UeWgdJuT58kB7Gv- Y5fPMPRS_JEQdO-oJ9DlO9n 0OszkmYwrPh-AivwVN6xh4hN 2pseXannS_on9aiNv1lh3x-f2PZ 0R.jCyNdxQiJSAsGVm7ZPhDK eFxQGBAu-M_42ZLTSSBiDg&d ib_tag=se&keywords=viti+M3x3& nsdOptOutParam=true&qid=1734 711519&sprefix=viti+m3x3%2Cap s%2C169&sr=8-20	M2x8 - Flat head
Screws	INCREWAY	https://www.amazon.it/INCREWAY -assortite-portatili-accessori-ripara zione/dp/B07KN37M5J/ref=sr_1_2 0?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85 %C5%BD%C3%95%C3%91&crid= 12BHMAWD8SK4Z&dib=eyJ2IjoiM SJ9.SjXKoxV0NYqENPoUeS42-rj1 Af398uiCLXDxFs0C9HfS8vwEPms fAMPwIMfllkAfWNYTIEU4KXhJRg RHInNI3U_aow0EPyfufQKlA4wHz 1eOJBvYOND-5obbXfRPn7VXQ8 kzBXMVfUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB -zpRvQ6oE5Fr_1sO7lFnzURtD1YB f65O58M3hrDXf5r_8MIz1cAsct-2P8 AyWWBZAB1buYoyPgnnOiBL5EBS 7twJWqcDU86mh1ywyufiUitm6kIwN uMx32D0h0jkHna481aaYP_Q7kHg DxxrR_fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHf FWVMqvB_YBdEAuTeL08EP_pTY50 uT4UeWgdJuT58kB7Gv-Y5fPMPRS _JEQdO-oJ9DlO9n0OszkmYwrPh- AivwVN6xh4hN2pseXannS_on9aiN v1lh3x-f2PZ0R.jCyNdxQiJSAsGVm 7ZPhDKeFxQGBAu-M_42ZLTSSB iDg&dib_tag=se&keywords=viti+M3 x3&nsdOptOutParam=true&qid=17 34711519&sprefix=viti+m3x3%2Ca ps%2C169&sr=8-20	M2x10 - Flat head
Screws	INCREWAY	https://www.amazon.it/INCREWAY- assortite-portatili-accessori-riparazi one/dp/B07KN37M5J/ref=sr_1_20? __mk_it_IT=%C3%85M%C3%85% C5%BD%C3%95%C3%91&crid=12 BHMAWD8SK4Z&dib=eyJ2IjoiMSJ 9.SjXKoxV0NYqENPoUeS42-rj1Af3 98uiCLXDxFs0C9HfS8vwEPmsfAM PwIMfllkAfWNYTIEU4KXhJRgRHIn NI3U_aow0EPyfufQKlA4wHz1eOJB vYOND-5obbXfRPn7VXQ8kzBXMV fUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB-zpRvQ6 oE5Fr_1sO7lFnzURtD1YBf65O58 M3hrDXf5r_8MIz1cAsct-2P8AyWW BZAB1buYoyPgnnOiBL5EBS7twJ WqcDU86mh1ywyufiUitm6kIwNuM x32D0h0jkHna481aaYP_Q7kHgDx xrR_fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHfF WVMqvB_YBdEAuTeL08EP_pTY5 0uT4UeWgdJuT58kB7Gv-Y5fPMPRS _JEQdO-oJ9DlO9n0OszkmYwrPh-Ai vwVN6xh4hN2pseXannS_on9aiNv1l h3x-f2PZ0R.jCyNdxQiJSAsGVm7Z PhDKeFxQGBAu-M_42ZLTSSBiDg &dib_tag=se&keywords=viti+M3x3&n sdOptOutParam=true&qid=1734711 519&sprefix=viti+m3x3%2Caps%2 C169&sr=8-20	M3x3 - Flat head
Screws	RS-components	281-978	M3x6 - Flat head
Screws	RS-components	281-978	M3x10 - Flat head
Screws	RS-components	281-978	M3x20 - Flat head
Screws	Faankiton	https://www.amazon.it/Faankiton-600- M3-Incassato-Cilindrica/dp/B0CFY6V 3HV/ref=sr_1_3_sspa?crid=29NMQZ B1QM7EW&dib=eyJ2IjoiMSJ9.aiGS- zo819G6hZmghT7TFDH1TL5lzRsjT R5PBvqoHbKOBLipyX-kuevmqqPpW m_7Ngng-Wa6aLoDuXMtoqexgeNpr Qn2cISsCatqzhc8fxhJ0yIN4s3YEpD KzIroWWVNzswptkWthnGkLXwHck m4wqLr1sf0qyK9oYYlZdKo_Ypa9RQ s3aYPNd_f-DWpT5rdsG1GL3rd3b9c fLSqXxMd8QnnK3hDcg10Uz9otPwo zJC2QAQFce__CkNwDfBp5Vvgmy1 DLX4a7PolnNePrJiObgjHMJLlfwizGx fie28RAYQ.03Epc_RrVWlBUqUbHU TPDcoDUxaKBHep1CuTOhFj-fI&dib _tag=se&keywords=m3x25%2Bviti&n sdOptOutParam=true&qid=17347118 59&s=industrial&sprefix=M3x25%2Ci ndustrial%2C185&sr=1-3-spons&sp_ csd=d2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY&th=1	M3x25 - Flat head
Screws	Faankiton	https://www.amazon.it/Faankiton-600 -M3-Incassato-Cilindrica/dp/B0CFY6 V3HV/ref=sr_1_3_sspa?crid=29NMQ ZB1QM7EW&dib=eyJ2IjoiMSJ9.aiG S-zo819G6hZmghT7TFDH1TL5lzRsj TR5PBvqoHbKOBLipyX-kuevmqqPp Wm_7Ngng-Wa6aLoDuXMtoqexgeN prQn2cISsCatqzhc8fxhJ0yIN4s3YEp DKzIroWWVNzswptkWthnGkLXwHc km4wqLr1sf0qyK9oYYlZdKo_Ypa9R Qs3aYPNd_f-DWpT5rdsG1GL3rd3b9 cfLSqXxMd8QnnK3hDcg10Uz9otPwo zJC2QAQFce__CkNwDfBp5Vvgmy1D LX4a7PolnNePrJiObgjHMJLlfwizGxfie 28RAYQ.03Epc_RrVWlBUqUbHUTPD coDUxaKBHep1CuTOhFj-fI&dib_tag=s e&keywords=m3x25%2Bviti&nsdOptO utParam=true&qid=1734711859&s=ind ustrial&sprefix=M3x25%2Cindustrial%2 C185&sr=1-3-spons&sp_csd=d2lkZ2V 0TmFtZT1zcF9hdGY&th=1	M3x30 - Flat head
Screws	AERZETIX	https://www.amazon.it/AERZETIX- carbonio-fissaggio-cacciavite-mont aggio/dp/B0BDYZZ8LQ/ref=sr_1_4 ?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85 %C5%BD%C3%95%C3%91&crid= 217010XNB7ZXP&dib=eyJ2IjoiMSJ 9.e5QjA-q9hEvlleIzwY3ssA3x7vIBF Hpcg73tKkBJu9QbDwMwlC5L9-9u 7my7ZG5hZij0WyaijakqAoX4rIZ3rv EgvlPtN6bwKTBgqAK-3uu3GBy6K EPQ2iIEUWx_U73nonJy5IzmTDH Xijn-kRg1iCOM99S5upSWbmmazg 8lctsyXlg_tmXHjHn63WsIo7WcBuL rtVpPW8oMsZCndwh33pNQXBnk1 iStT81spopzrw3gScK1Wdz6RttH6j YL611rNBdkd-PEP2CYhDKeSKHE AqmABjHGLyG6p40k20npHqkg8g- 9Msl3fZZiS4rRxNFOHBjEdVTLBrn PjRjxTspBfZSEKQnqsGm1WPlz8cS khCs.ujWHAL4y-RNahay-1AJl34uN hUj-f6mZ7X1_KZaACvU&dib_tag=s e&keywords=m3x50%2Bviti&nsdOp tOutParam=true&qid=1734711964& s=industrial&sprefix=m3x50%2Bviti %2Cindustrial%2C136&sr=1-4&th=1	M3x50 - Flat head
Screws	JOCAHULFX	https://www.amazon.it/Incassato- Esagonale-Rondelle-Esagonali- Inossidabile/dp/B0DF7P5CC2/ref=sr_ 1_6?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%8 5%C5%BD%C3%95%C3%91&crid=2 7B231M7SRJ3R&dib=eyJ2IjoiMSJ9.3 bij8nHLQAebjY8LHQS6V1GsAE07H cFGUpHAh7jA1oQIxjoTJmxjNuwg0y H14oz-YUvzD0eqVRASqAZTK2spiQ saX0pug7rWgGfENeGhztno5lMcJDT XQfe9H6ocLZANpAFv_p0dRbO6ggA vZN0TfyiuR4focFMAjr6VFGVbprEQO EaS1KRs8loF3FgL0rsmP81K806Gv5 zeSurK_sp8GEelqtm1G3J059zUdPaJ z7zJQEFPSH0TXv3lml5u9lnvnAbM0j ClF03nG5ZjB-6WUPfS41Os5DgzTpS zUTR-YZc1HnRUxy6l5grDPFmDiNZn 0Ie9MrlkcPI2A8dubQZm3d8pYVpg6Y 2OqzifmZzNsQM.Zuh5Ko4bf20Bz46c NFRHJvcyPfJyglpcvN1uM16-yOI&dib _tag=se&keywords=m4+viti+testa+sv asata&nsdOptOutParam=true&qid=17 34712054&s=industrial&sprefix=m4+v iti+testa+svasata%2Cindustrial%2C12 8&sr=1-6	M4x8 - Flat head
Screws	JOCAHULFX	https://www.amazon.it/Incassato-Esagonale -Rondelle-Esagonali-Inossidabile/dp/B0DF 7P5CC2/ref=sr_1_6?__mk_it_IT=%C3%85 M%C3%85%C5%BD%C3%95%C3%91&c rid=27B231M7SRJ3R&dib=eyJ2IjoiMSJ9. 3bij8nHLQAebjY8LHQS6V1GsAE07HcFG UpHAh7jA1oQIxjoTJmxjNuwg0yH14oz-YU vzD0eqVRASqAZTK2spiQsaX0pug7rWgG fENeGhztno5lMcJDTXQfe9H6ocLZANpAF v_p0dRbO6ggAvZN0TfyiuR4focFMAjr6VF GVbprEQOEaS1KRs8loF3FgL0rsmP81K8 06Gv5zeSurK_sp8GEelqtm1G3J059zUdP aJz7zJQEFPSH0TXv3lml5u9lnvnAbM0jCl F03nG5ZjB-6WUPfS41Os5DgzTpSzUTR -YZc1HnRUxy6l5grDPFmDiNZn0Ie9Mrlkc PI2A8dubQZm3d8pYVpg6Y2OqzifmZzNs QM.Zuh5Ko4bf20Bz46cNFRHJvcyPfJyglp cvN1uM16-yOI&dib_tag=se&keywords=m4 +viti+testa+svasata&nsdOptOutParam=tru e&qid=1734712054&s=industrial&sprefix= m4+viti+testa+svasata%2Cindustrial%2C1 28&sr=1-6	M4x12 - Flat head
Screws	Globstar	https://www.amazon.it/testa-svasata- impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH 5JYL/ref=sr_1_9?__mk_it_IT=%C3% 85M%C3%85%C5%BD%C3%95%C 3%91&crid=XEVGIE9R1K2F&dib=ey J2IjoiMSJ9.sYNfljBDPU1N2px8nueT zi6D61Z46HD98MSuIwqXNKrfkSOM GYgywNTC8-dsYqNXiZEMS42kGB4 QdBtz_TVFLvgLCFQVl9W5n7Bo4fQS _VKHh9VLmA_RjdF75wPsSbRPIdSA nidi0pehfkRoBIrEtYVn-cUq4TXH0P1D pGLc_4J88tU02ieLVee-YarMxZLKeLYt kK6B2CmM6d_AE0K7UJofwnOCOLp 3R72KpMTltjkJutf0WxBFsNQhYG8Wz 0q1o_3uRs_aNM0wJtGeSohS3fABN8C z-kYxdfOikF1zi4nE1wn8YUw8lfsCxeUI ioUp4Lz0GaXhHkkXxC5jssOsuOyW_6 CeDYrx0AOAy1URHBY.4xc_PNzUrZe FFz0FV9hV7uu_-Es6f3jhi6koImPVcgw &dib_tag=se&keywords=m4x70%2Bvi ti%2Btesta%2Bsvasata&nsdOptOutPa ram=true&qid=1734712182&s=industri al&sprefix=m4x70%2Bviti%2Btesta%2 Bsvasata%2Cindustrial%2C134&sr=1-9&th=1	M4x70 - Flat head
Screws	Aerzetix	https://www.amazon.it/AERZETIX-cilin drica-impronta-intaglio-montaggio/dp/B 0BLNJ9PTX/ref=sr_1_8?__mk_it_IT=% C3%85M%C3%85%C5%BD%C3%95 %C3%91&crid=3AESCF6VKG6B6&di b=eyJ2IjoiMSJ9.3HlweLtFpKk8huuM4 tfcAbDSl2biH6iWGO7PXpXKxzQnVM cKVrvCI0CkZanzuaduqvaeCs8DLxlFs c_s4-qvSDCE8dvXDhuO4nHPwIhPAl BnL5G6tLMycq0ZS0ZN83GAj_VOUc GVLq4fdcfeurabYdPzrWf3PpwM6_-y OlEOLVvlzzBKgQWO7fiMSCFuGA6 X4j8xVlNzobgrSfsnDNqZpEgH289rp AslvAA9D2YEmvJSm0CRqWecsKPJ iB8yNhelz01McT-qy3s6utg4_Thec18s iTwIY2bFdQ5XYhkTzBxAF86lr6VMXZ 3Ym26ZiedQE1_7ceB7jYcyQ5mOMR fx0d8pYVpg6Y2OqzifmZzNsQM._rEh uS8xCOyhS7xqQQe9H3kwn-ppl22Rf VmzFpFpyW0&dib_tag=se&keyword s=m4x80%2Bviti%2Btesta%2Bsvasat a&nsdOptOutParam=true&qid=17347 12214&s=industrial&sprefix=m4x80% 2Bviti%2Btesta%2Bsvasata%2Cindu strial%2C141&sr=1-8&th=1	M4x80 - Flat head
Screws	Globstar	https://www.amazon.it/testa-svasata- impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RJ S9NT/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3 %85M%C3%85%C5%BD%C3%95% C3%91&crid=15MBBIPYCF06S&dib =eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIko N0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64T nTN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZvO Evle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQFWe SMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQntEIA hyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkmXcWFo zXK-eTFnle6uFI4nXhbCXTWjM5MP_ sNolDP0O4HS7Bnxk_wanuwC9zEuH ZeVNsejl6gwYR0IlJK5iu0V9Y-bgFcr1- iTBhrARDKG7-0Nc5188TSaN9snT7K 6yO2J3ctfC24PTGnaZAFYKMvrNqz OAihVBKIW8xOhIx0ZRipPa9ggsMs _pe1VgY2dCXtUrE_bo1dd4oGlUuw .v5iiMZ2rMQlZlZs2WDyqM_mo1utvu PD71Jyb-O7BY1Y&dib_tag=se&key words=m5x8+viti+testa+svasata&ns dOptOutParam=true&qid=17347123 79&s=industrial&sprefix=m5x8+viti+ testa+svasata%2Cindustrial%2C201 &sr=1-30	M5x8 - Flat head
Screws	Globstar	https://www.amazon.it/testa-svasata- impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH M4BY/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3 %85M%C3%85%C5%BD%C3%95% C3%91&crid=15MBBIPYCF06S&dib= eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIkoN 0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64Tn TN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZvO Evle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQFW eSMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQnt EIAhyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkmX cWFozXK-eTFnle6uFI4nXhbCXTW jM5MP_sNolDP0O4HS7Bnxk_wan uwC9zEuHZeVNsejl6gwYR0IlJK5iu 0V9Y-bgFcr1-iTBhrARDKG7-0Nc5 188TSaN9snT7K6yO2J3ctfC24PTG naZAFYKMvrNqzOAihVBKIW8xOhI x0ZRipPa9ggsMs_pe1VgY2dCXtUr E_bo1dd4oGlUuw.v5iiMZ2rMQlZlZs 2WDyqM_mo1utvuPD71Jyb-O7BY 1Y&dib_tag=se&keywords=m5x8% 2Bviti%2Btesta%2Bsvasata&nsdOpt OutParam=true&qid=1734712379&s =industrial&sprefix=m5x8%2Bviti%2 Btesta%2Bsvasata%2Cindustrial%2 C201&sr=1-30&th=1	M5x10 - Flat head
Screws	Globstar	https://www.amazon.it/testa-svasata- impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH 9SYZ/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3 %85M%C3%85%C5%BD%C3%95% C3%91&crid=15MBBIPYCF06S&dib =eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIko N0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64T nTN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZv OEvle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQF WeSMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQ ntEIAhyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkm XcWFozXK-eTFnle6uFI4nXhbCXT WjM5MP_sNolDP0O4HS7Bnxk_w anuwC9zEuHZeVNsejl6gwYR0IlJK5 iu0V9Y-bgFcr1-iTBhrARDKG7-0Nc5 188TSaN9snT7K6yO2J3ctfC24PTG naZAFYKMvrNqzOAihVBKIW8xOhIx 0ZRipPa9ggsMs_pe1VgY2dCXtUrE _bo1dd4oGlUuw.v5iiMZ2rMQlZlZs2 WDyqM_mo1utvuPD71Jyb-O7BY1Y &dib_tag=se&keywords=m5x8%2Bvi ti%2Btesta%2Bsvasata&nsdOptOutP aram=true&qid=1734712379&s=indus trial&sprefix=m5x8%2Bviti%2Btesta% 2Bsvasata%2Cindustrial%2C201&sr= 1-30&th=1	M6x20 - Flat head
SD card	SanDisk	https://www.amazon.it/SanDisk-Ultra- Scheda-memoria-classe/dp/B08GYG6 T12/ref=sr_1_8?crid=3ETH6HJL8VKD A&dib=eyJ2IjoiMSJ9.5omqicizrizfHo8r pPQ6sWJ_C0sfwUqPQv6VrziwK-SCX 4-aSgFGois1pfvTwB0SuDxdNjByo2zU fBonWwUKAf3clazXEIGNl0GhojQmvj Bt_6RS31QcAM5Y50BpAdndMXIHy9 iGTswgYEwnbt9uj56G_soC6OdPiTvr W3M8jwtTxQDUl8UcHZeRMPq0T8sd v4hskHGmipFItAzE1lyDiy0otrqUhz-ph OggXBAM6gMyGf0qBtU1AFwfj81Shl HS2qojCiRq_JLKyBkc_Y4P_V1YtsGc MxnoG6YzYowwEYbX7uTFWJB-Wvc B_vYw-D5s0B-HDSYRSl-C60yhtqhrUw grg9w6PN5U5s01vos4bauIgIN6lOez1 tz2OHwL5YL3QCHKxNnJV0IM42cH0 du8fIEIbUwYC5jRLqowx1UyaQKQ4W WaGozdZ9l5qUoeQ7KU.iOPo2BYLK STjqjB8BevaVgPa5QD7BuP9CieN6u 4_Qeo&dib_tag=se&keywords=sd% 2Bcard%2Bsandisk&nsdOptOutParam =true&qid=1734704871&sprefix=SD% 2Bcard%2Bsan%2Caps%2C141&sr=8-8&th=1	SanDisk 32 GB Extreme PRO SD card, UHS-I
Self-aligning Flange bearing	Brateuanoii	KFL08	8 mm inner diameter
Slicing software	Ultimaker Cura	https://ultimaker.com/it/software/ ultimaker-cura/?gad_source=1& gclid=CjwKCAiAyJS7BhBiEiwAy S9uNUjnbkNIYNUco6YaZYHcFT 2tqBac23MU4Qx3FaMXjl_UifJ_ k8as3BoCeVkQAvD_BwE	Ultimaker Cura 4.9.0
Springs	YIXISI	https://www.amazon.it/sspa/click?ie =UTF8&spc=MTo4NDAzNDQ1MzM 0OTUyODQzOjE3MzQ3MDQ4MD c6c3BfYXRmOjMwMDM5MDQzMz kzODAzMjo6MDo6&url=%2FYIXIS I-Assortimento-Estensione-Compre ssione-Dispositivi%2Fdp%2FB0DD T3KTBF%2Fref%3Dsr_1_1_sspa% 3F__mk_it_IT%3D%25C3%2585M %25C3%2585%25C5%25BD%25 C3%2595%25C3%2591%26crid% 3D1NT7CA1YJGWK4%26dib%3D eyJ2IjoiMSJ9.IhFmevq0fXTGGwE cGvfUxxLOudQqQcPjSGXlWklXO HY2Ahr2XxWSg6MaNBgZ71N1pQ h9Wkp5c2ary4Hm2xVi4dTH8Ny4 4-OhlcrTn0G8emvX66Zu7U0LGm xGYKyKCGxzlhwYC4EnlmTSH_O JnA5oG-BQzuxFBdCrce0txErCEm S40xONaaYp2R5yMiPDw2PqsPP jLmoSCYs4XctxEvAwn_5rp71t0U QsZNku6-jDiiuh5klpC9DsnjipLFP unRCbITWnw6wslENLdJtPDOGF 8vbO5WFf7PnUy4BZ7tUPt7I.B6j eUKwx1_t0sPaxmSHYVbRd1MG w-kosEYkHuKlPtpQ%26dib_tag% 3Dse%26keywords%3Dmolle%2B YIXISI%26nsdOptOutParam%3Dtr ue%26qid%3D1734704807%26spr efix%3Dmolle%2Byixisi%252Caps %252C137%26sr%3D8-1-spons%2 6sp_csd%3Dd2lkZ2V0TmFtZT1zcF 9hdGY%26psc%3D1
Stepper motor	Twotrees 1234	17HS4401	Stepper motor bipolar NEMA 17 42 Ncm 1.5 A
Stepper motor	STEPPERONLINE	UL1007AWG6	Stepper motor bipolar NEMA 17 42 Ncm 1.5 A
Stepper motor fixing bracket	YOTINO	https://www.amazon.it/gp/product/ B07D7XH97T/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
Threaded nut M2	RS-components	281-984
Threaded nut M3	RS-components	281-984
Threaded nut M4	RS-components	281-984
Threaded nut M5	RS-components	281-984
Threaded nut M6	RS-components	281-984
TRAMP - C1 cell line	ATCC	CRL-2730	Epithelial cell line isolated from the prostate of an adult male transgenic mouse with adenocarcinoma
Trypan blue	Gibco Thermofisher	15250061
Trypsin	Gibco Thermofisher	15400054	Sterile

References

Patel, T., et al. Multicellular tumor spheroids: A convenient in vitro model for translational cancer research. Life Sci. 358, 123184 (2024).
Tanaka, M., et al. Emerging translational research in neurological and psychiatric diseases: From in vitro to in vivo models. Int J Mol Sci. 24 (21), 15739 (2023).
De Maria Marchiano, R., et al. Translational research in the era of precision medicine: Where we are and where we Will Go. J Pers Med. 11 (3), 216 (2021).
Knowlton, S., et al. Bioprinting for cancer research. Trends Biotechnol. 33 (9), 504-513 (2015).
McGranahan, N., et al. Biological and therapeutic impact of intratumor heterogeneity in cancer evolution. Cancer Cell. 27 (1), 15-26 (2015).
Van Zundert, I., et al. From 2D to 3D cancer cell models-The enigmas of drug delivery research. Nanomaterials. 10 (11), 2236 (2020).
Hoarau-Véchot, J., et al. Halfway between 2D and animal models: Are 3D cultures the ideal tool to study cancer-microenvironment interactions. Int J Mol Sci. 19 (1), 181 (2018).
Yamada, K. M., et al. Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D. Cell. 130 (4), 601-610 (2007).
Manduca, N., et al. 3D cancer models: One step closer to in vitro human studies. Front Immunol. 14, 1175503 (2023).
Wang, L., et al. The 3D revolution in cancer discovery. Cancer Discov. 14 (4), 625-629 (2024).
Benton, G., et al. Multiple uses of basement membrane-like matrix (BME/Matrigel) in vitro and in vivo with cancer cells. Int J Cancer. 128 (8), 1751-1757 (2011).
Benton, G., et al. Matrigel: From discovery and ECM mimicry to assays and models for cancer research. Adv Drug Deliv Rev. 79-80, 3-18 (2014).
Rawal, P., et al. Prospects for 3D bioprinting of organoids. Bio-Design Manuf. 4 (3), 627-640 (2021).
Hou, S., et al. Advanced development of primary pancreatic organoid tumor models for high-throughput phenotypic drug screening. SLAS Discov Adv Sci Drug Discov. 23 (6), 574-584 (2018).
Kane, K. I. W., et al. Determination of the rheological properties of Matrigel for optimum seeding conditions in microfluidic cell cultures. AIP Adv. 8 (12), 125332 (2018).
De Stefano, P., et al. Bioprinting of Matrigel scaffolds for cancer research. Polymers. 13 (12), 2026 (2021).
Hatzikiriakos, S. G., et al. Role of slip and fracture in the oscillating flow of HDPE in a capillary. J Rheol. 36 (5), 845-884 (1992).
Kalika, D. S., et al. Wall slip and extrudate distortion in linear low-density polyethylene. J Rheol. 31 (8), 815-834 (1987).
Molenaar, J., et al. Modeling polymer melt-flow instabilities. J Rheol. 38 (1), 99-109 (1994).
Valot, L., et al. Chemical insights into bioinks for 3D printing. Chem Soc Rev. 48 (15), 4049-4086 (2019).
Sundaramurthi, D., et al. 3D bioprinting technology for regenerative medicine applications. Int J Bioprinting. 2 (2), 9-26 (2016).
Maloney, E., et al. Immersion bioprinting of tumor organoids in multi-well plates for increasing chemotherapy screening throughput. Micromachines. 11 (2), 208 (2020).
Snyder, J. E., et al. Bioprinting cell-laden Matrigel for radioprotection study of liver by pro-drug conversion in a dual-tissue microfluidic chip. Biofabrication. 3 (3), 034112 (2011).
Patil, L. S., et al. Toward measuring the mechanical stresses exerted by branching embryonic airway epithelial explants in 3D matrices of Matrigel. Ann Biomed Eng. 50 (9), 1143-1157 (2022).
Lai, V. K., et al. Swelling of collagen-hyaluronic acid co-gels: An in vitro residual stress model. Ann Biomed Eng. 44 (10), 2984-2993 (2016).
Lam, N. T., et al. Fabrication of a Matrigel-collagen semi-interpenetrating scaffold for use in dynamic valve interstitial cell culture. Biomed Mater. 12 (4), 045013 (2017).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE 217 ECM

This article has been published

Video Coming Soon

Keep me updated:

Method Article

تصميم والتحقق من صحة طابعة حيوية بالبثق الحجمي للطباعة الحيوية لمستخلص الغشاء القاعدي القابل للذوبان للبحوث الانتقالية

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

النتائج

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions