Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

תמציות ממברנות בסיס מסיסות הן המטריצות הביולוגיות הנפוצות ביותר בחקר הסרטן, אך ההתנהגות הריאולוגית המורכבת שלהן מקשה על ההדפסה הביולוגית שלהן עם מערכות הדפסה ביולוגית זמינות מסחרית. עבודה זו מציגה אסטרטגיית הדפסה ביולוגית מותאמת אישית לייצור מבני מטריצה טהורים עם נאמנות צורה טובה הן בשכבה אחת והן בשכבות מרובות.

Abstract

במחקר תרגומי, מודלים תלת מימדיים במבחנה חיוניים לקידום ההבנה המדעית והפיתוח הטיפולי. למטרה זו, תמציות ממברנת מרתף מסיסות (SBMes), שמקורן בתאי סרקומה של עכברים, ממלאות את תפקיד המפתח בשכפול תכונות מכניות וביוכימיות של מיקרו-סביבה in vivo . הם בעלי ערך מיוחד במגוון תחומי מחקר, מהנדסת רקמות ועד בדיקות תרופות. בפרט, הם הפכו לבסיסיים בחקר הסרטן שכן תרביות תאים דו-ממדיות מסורתיות, הנמצאות בשימוש נרחב בתחום, יכולות לספק מידע מטעה מכיוון שהן אינן לוכדות את המבנה התלת מימדי (3D) ואת המיקרו-סביבה של הגידול.

בחקר הסרטן, מודלים תלת מימדיים יעילים במבחנה חיוניים להבנה טובה יותר של התפתחות הסרטן ולחיזוי אתגרים, כגון מנגנוני עמידות לתרופות. אורגנואידים התגלו כמודלים תלת מימדיים מבטיחים במבחנה , המציעים ייצוג מדויק יותר של הביולוגיה של הגידול. הם גדלים ב-SBMes מכיוון שהם יוצרים סביבה שבה תאים יכולים לגדול ולהתארגן בעצמם למבנים תלת מימדיים. עם זאת, SBMe מציב אתגרים משמעותיים, כולל תכונות מכניות נמוכות והתנהגות ריאולוגית מורכבת, ומונעים את השימוש בו עם מערכות הדפסה ביולוגית פנאומטיות-אקסטרוזיה זמינות מסחרית.

כדי להתמודד עם מגבלות אלה, פיתחנו מערכת הדפסה ביולוגית בעלות נמוכה ומבוקרת נפח ופרוטוקול ספציפי להדפסת מבנים עם SBMe. מערכת זו מבוססת על מכבש נפחי ומתגברת על המגבלות של גישות פנאומטיות מסורתיות. לאחר ההרכבה והתכנות עם קוד g ספציפי, המערכת יכולה להדפיס ביולוגית SBMe טהור ומדולל כדי להשיג מבנים חד-שכבתיים ורב-שכבתיים. גישה זו מציעה שיטה אמינה וניתנת להרחבה יותר לייצור מודלים תלת-ממדיים של תרביות תאים, וסוללת את הדרך למחקר יעיל יותר בטיפולים חדשים ובדיקות תרופות.

Introduction

במחקר תרגומי, יצירת מודלים תלת מימדיים במבחנה המשכפלים באופן הדוק את הסביבה in vivo חיונית לקידום ההבנה המדעית והפיתוח הטיפולי1. מרכיב מרכזי בבנייתן הוא השימוש באנלוגים של מטריצה חוץ-תאית (ECM), כגון תמציות ממברנת מרתף מסיסות (SBMes), המשקפות טוב יותר את המורכבות של רקמות טבעיות. SBMes הם בעלי ערך מיוחד במגוון תחומי מחקר, מהנדסת רקמות ועד בדיקות תרופות 2,3. בפרט, הם הפכו לבסיסיים בחקר הסרטן, מכיוון שהם משכפלים תכונות מכניות וביוכימיות של מיקרו-סביבת הגידול, ומאפשרים פיתוח מודלים המשקפים טוב יותר את צמיחת הגידול, גרורות ותגובות טיפול.

ואכן, למרות התקדמות ניכרת בעשורים האחרונים, טיפולים רבים ממשיכים להיכשל, מה שמוביל לכישלון טיפולי תכוף במסגרות קליניות. כישלון זה מיוחס לעתים קרובות למנגנוני עמידות לתרופות הנגרמים על ידי רמות גבוהות של הטרוגניות תאים 4,5. מודלים יעילים במבחנה, המסוגלים לסכם במדויק את המורכבות של גידולים אנושיים, חיוניים להבנה טובה יותר של התפתחות הסרטן ולחיזוי תופעה זו.

תרביות תאים דו-ממדיות מסורתיות היו בסיסיות בחקר הסרטן, אך עלולות להוביל למידע מטעה לגבי יעילות התרופות והתנהגות הגידול, מכיוון שהן אינן מצליחות ללכוד את המבנה התלת-ממדי והמיקרו-סביבה של גידולים אמיתיים 6,7,8. לעומת זאת, מודלים תלת מימדיים במבחנה התגלו כחלופות מבטיחות, המציעות ייצוג מדויק יותר של מיקרו-סביבה של הגידול והתנהגות ביולוגית על ידי חיקוי מורכבות תלת מימדית 9,10.

בחקר הסרטן, אורגנואידים נמצאים בשימוש נרחב כמודלים תלת מימדיים לחקר מחלות ויעילות תרופות, מכיוון שהם מספקים מודלים מדויקים ורלוונטיים יותר של רקמות ואיברים אנושיים. השימוש ב-SBMe, שמקורו בתאי סרקומה של עכברי אנגלברת-הולם-נחיל, היה מרכזי בקידום חקר הסרטן11,12. הוא מספק מצע דמוי ג'ל שבו תאים יכולים לגדול, להתרבות ולהתארגן בעצמם למבנים אורגנואידים, מה שמבטיח התפתחות וצמיחה תקינים13,14.

עם זאת, SBMe מציב מספר אתגרים בשל המאפיינים הייחודיים והמורכבים שלו. כנוזל שאינו ניוטוני, SBMe מציג תכונות דילול גזירה, כלומר הצמיגות שלו פוחתת עם הגדלת מתח הגזירה, מה שהופך את הטיפול והיישום שלו לבלתי עקביים תחת כוחות משתנים. בנוסף, ההתנהגות התיקסוטרופית שלו מוסיפה למורכבות, מכיוון שהוא יכול לשחזר את הצמיגות שלו לאורך זמן כאשר מתח הגזירה מוסר15,16. תכונות אלה, יחד עם חוזק מכני נמוך (עם ערכי מודול אחסון הנעים בין 10 Pa ל-5,000 Pa בהתאם לריכוז החלבון) והתנהגות רגישה לחום, מחמירים את האתגרים הללו, ודורשים בקרה קפדנית במהלך ההכנה והשימוש כמו גם הדפסה ביולוגית טהורה.

מערכות הדפסה ביולוגית סטנדרטיות מונעות פנאומטיות אינן מצליחות לשלוט כראוי בחלוקת SBMe מכיוון שהפעלת לחץ גורמת להתנהגות בלתי נשלטת לאחר פליטתו מהמזרק. הוא מושפע מתופעה הדומה לאפקט "הזינוק" המתואר עבור נמסים פולימריים, שבו קצב הזרימה עולה בפתאומיות מעל ערך לחץ קריטי מסוים 17,18,19. כפי שדווח בעבודה הקודמת שלנו16, אסטרטגיית חלוקת בקרת הנפח מאפשרת ניתוק שחול SBMe מהלחץ שנוצר במתקן, התלוי בתכונות הריאולוגיות של המטריצה, תנאי העבודה וגיאומטריית הזרבובית. בשנים האחרונות נעשו מספר ניסיונות בשוק לנצל את אותו עיקרון, כאשר ה-Matribot של קורנינג מוביל את הדרך. הוא מאפשר טיפול ושקיעה של SBMe ודיו ביולוגי רגיש לטמפרטורה הודות לתנאי טמפרטורה מבוקרים. עם זאת, זה עשוי להיות יקר, ולהגביל את הנגישות למעבדות קטנות יותר.

במאמר הקודם שלנו, הצגנו חלופה מותאמת אישית בעלות נמוכה - מערכת הדפסה ביולוגית מונעת נפח16. גרסה זו התבססה על מדפסת תלת מימד ברמת כניסה שונה עם מכבש מודפס בתלת מימד מותאם אישית. למרות יעילותו בהדפסה ביולוגית, הוא הציג כמה מגבלות בחזרתיות ההדפסה. בהיותו נגזר ממדפסת תלת מימד ברמת הכניסה, היו לו כמה בעיות עם תנועות ה-Z והביות האוטומטי. כדי לענות על צרכים אלה, פיתחנו גרסה מתקדמת של מערכת החלוקה הנפחית המותאמת אישית שלנו בעלות נמוכה ופרוטוקול ספציפי למבני הדפסה ביולוגית באמצעות SBMe.

כאן, אנו מספקים פרוטוקולים לבנייה ושימוש במערכת זו. הוא מורכב ממכבש מבוקר נפח מותאם אישית, המבוסס על המחקר הקודם שלנו16, מארז מדפסת ביולוגית ומערכת בקרה. ייצור והרכבה נעשים עבור כל מודול. כאשר היא מורכבת ומתוכנתת עם קובץ gcode ספציפי, בהתאם לתיאור הפרוטוקול לטיפול במטריצה, המערכת מסוגלת להדפיס ביולוגית מבנים טהורים או מדוללים באמצעות SBMe עם נאמנות צורה טובה בשכבה אחת ובשכבות מרובות כאחד.

Protocol

1. 3D הדפסה והרכבה של מדפסת ביולוגית נפחית

  1. הכן והדפס בתלת מימד את רכיבי המדפסת הביולוגית.
    1. הורד את *. קבצי עיצוב STL מקובץ משלים 1.
    2. טען*. STL בתוכנת החיתוך הקניינית כדי להגדיר את כיוון החלקים על לוחית ההדפסה ואת כל האפשרויות הנדרשות למדפסת התלת מימד. הדפס את החלקים באמצעות חומצה פולילקטית (PLA) עם אפשרויות באיכות בינונית (גודל זרבובית 0.4 מ"מ, קוטר נימה 1.75 מ"מ, טמפרטורת מכבש 220 מעלות צלזיוס, טמפרטורת צלחת הדפסה 50 מעלות צלזיוס, גובה שכבה 0.2 מ"מ, מהירות הדפסה 300 מ"מ לשנייה).
      הערה: האפשרויות באיכות בינונית עשויות להשתנות בהתאם למדפסת המשמשת להדפסת החלקים.
    3. נתק את החלקים המודפסים ממיטת מדפסת התלת מימד. הסר את המבנים התומכים המודפסים, אם קיימים, ולטש משטחים במידת הצורך.
  2. הרכיבו את המכבש (איור 1).
    1. הכנס שני מיסבים כדוריים ליניאריים (LM4UU) לחורים האנכיים של בלוק הדוחף. הכנס גם אום בורג T8 לחור המרכזי האחורי ואבטח אותו עם ארבעה ברגים (M3x10).
    2. חבר צימוד פיר קשיח למנוע הצעד ולאחר מכן הדק אותו לבית מנוע המכבש באמצעות ארבעה ברגים (M3x6).
      הערה: כוון את מנוע הצעד בהתאם לחריץ בבית מנוע המכבש כדי לאפשר מיקום נכון של השקע לכבלים.
    3. הדק את מנוע הצעד, שהורכב בשלב 1.2.2, לבורג עופרת T8 (150 מ"מ) באמצעות צימוד הציר הקשיח שהוכנס קודם לכן. ודא שכל בלוק מאובטח כהלכה עם ברגי הסט.
    4. חבר מיסב אוגן אחד ליישור עצמי (קוטר פנימי של 8 מ"מ) בתחתית בסיס המכבש עם שני ברגים (M4x8).
    5. הכנס שני מיסבים כדוריים (4 x 9 x 4 מ"מ) בחורים הספציפיים על גבי בסיס המכבש ואת השניים האחרים בחורים בחלק התחתון.
    6. הכנס את החלק המורכב (שלב 1.2.1) לבסיס המכבש דרך החלל בחלקו העליון של המבנה. חבר את ארבעת מיסבי הכדור (שלב 1.2.5) עם שני מוטות 4 מ"מ, אחד לכל צד. תן למוטות לעבור דרך שני מיסבי הכדור הליניאריים בחלק המורכב בשלב 1.2.1.
      הערה: אפשר גם להכניס תחילה את הסורגים בשני המסבים הכדוריים העליונים ולאחר מכן להכניס אותם לבסיס המכבש עד שהם מגיעים למיסב הכדורי התחתון והכל מאובטח בחריצים המוגדרים.
    7. הכנס את החלק המורכב בשלב 1.2.3 לחור המרכזי של בסיס המכבש. סובב את בורג ההובלה כדי לעבור את אום הבורג ולהגיע למיסב האוגן המיישר את עצמו. השתמש בברגי הסט ברכיב כדי לנעול את בורג ההובלה ושני ברגים (M3x8) כדי לאבטח את בית מנוע המכבש בחלק העליון של בסיס המכבש.
    8. השתמש בשני ברגים אחרים (M3x40) ואומים M3 כדי לחבר את מחזיק אוגן קנה המזרק לחלק התחתון של בסיס המכבש, כדי לנעול את אוגן קנה המזרק (הכנס כיוון מלמעלה למטה). השתמש בשני ברגים אחרים (M3x30) ואומים M3 כדי לחבר את מחזיק בוכנת המזרק לחורים העליונים של בלוק הדוחף (הכנס כיוון מלמטה למעלה) כדי לנעול את אוגן הבוכנה.
    9. הכנס שני ברגים (M4x80) לשני קפיצים ותן להם לעבור דרך החורים הקיימים בחלק התחתון של בסיס המכבש ובלוק המזרק. הברג את האומים והשאיר את המקום למזרק כדי למנוע החלקה של גוש המזרק.
      הערה: הברגים חייבים לעבור מאחור לחזית.
  3. הרכיבו את ציר ה-X (איור 2).
    1. הכנס ארבעה מיסבים כדוריים ליניאריים (LM8UU x 24 מ"מ) לתוך X_Left_Block וחלקים X_Right_Block בחורים העליונים והתחתונים, שניים לכל אחד. חבר גם שני בלוקים של חגורה על גבי בלוקים X ימני ו-X שמאלי עם ברגים (M2x10) והשאיר מקום לחגורה.
    2. הכנס שני מיסבים כדוריים (5 x 16 x 5 מ"מ) בחורים המרכזיים של X_Right_Block, אחד מכל צד. הניחו גלגלת (קדח 5 מ"מ) בחלל הפנימי של X_Right_Block וחברו את שני מיסבי הכדור עם מוט 5 מ"מ (אורך 35 מ"מ), ותנו לו לעבור דרך הגלגלת.
      הערה: השתמש במוט ארוך יותר כדי שההרכבה תהיה בעלת טיפול טוב יותר. לאחר מיקום החלקים במקומם, חותכים את המוט באורך הרצוי.
    3. חבר מתג גבול X_motor_housing עם שני ברגים (M3x8). הכנס מנוע NEMA 17 לתוך בית המנוע והשתמש בארבעה ברגים (M3x8) כדי לקבע את מכסה X_block_1 לבית המנוע ולמנוע.
    4. חבר גלגלת (קדח 5 מ"מ) למנוע ונעל אותו עם ברגים מוגדרים ולאחר מכן הברג יחד את החלק המורכב בשלב 1.3.3 כדי X_block_1 עם ארבעה ברגים (M5x8). חבר גם מתג גבול בתחתית X_Left_Block עם שני ברגים (M3x8).
      הערה: הקוטר החיצוני של הגלגלות בשלבים 1.3.2 ו-1.3.4 חייב להיות זהה.
    5. הנח שני מיסבים כדוריים ליניאריים (LM8UU x 45 מ"מ) לתוך החורים בחלק העליון והתחתון של X_slider.
    6. חבר את החלקים המורכבים בשלבים 1.3.2 ו-1.3.4 עם שני מוטות 8 מ"מ (אורך 200 מ"מ) ותן להם לעבור דרך החלק המורכב בשלב 1.3.5.
      הערה: חותכים את המוטות באורך הרצוי לפני ההרכבה.
    7. נעל קצה חגורה אחד X_slider_belt_connection באמצעות בלוק החגורה ושני ברגים (M2x8). הפעל את החגורה סביב הגלגלת בחלק המורכב 1.3.4, ולאחר מכן סביב הגלגלת בחלק המורכב 1.3.2 וקבע את קצה החגורה השני לחיבור X_slider_belt באמצעות בלוק החגורה השני ושני ברגים נוספים (M2x8). ודא שהחגורה הדוקה כראוי כדי להשיג את התנועה הנכונה.
      הערה: במהלך שלב זה, יש להזיז את X_slider לכיוון קצה אחד של מבנה ציר ה-X כדי למנוע הפרעות.
    8. הברג את X_slider_belt_connection X_slider עם בורג אחד (M6x20).
    9. חבר את המכבש X_slider וקבע אותו עם ארבעה ברגים (M5x10).
  4. הרכיבו את ציר ה-Y (איור 3).
    1. הנח את תושבת הקיבוע לחלק האחורי למעלה של המדפסת הביולוגית באמצעות ארבעה ברגים (M3x10) וארבעה אומים.
      הערה: ניתן להתאים את מיקום תושבת הקיבוע כדי להשיג את המתח הנכון של החגורה ולאפשר הכנסת מנוע הצעד.
    2. הכנס את מנוע הצעד לתושבת הקיבוע והברג אותו עם ארבעה ברגים (M3x8). לאחר מכן, הניחו גלגלת (נשא 5 מ"מ) על גל הארכובה וקבעו אותה בעזרת ברגים מוגדרים.
      הערה: ניתן לחבר את הגלגלת לגל הארכובה לפני הכנסת המנוע לתושבת הקיבוע כדי למנוע הפרעה מסוימת בין רכיבים.
    3. אתר שתי גלגלות (קוטר פנימי של 8 מ"מ) על המוט הקדמי בקוטר 8 מ"מ ונעל אותן על שני המוטות (במרחק של 2.5 ס"מ מהקצה). חזור על פעולה זו עבור המוט האחורי והוסף גלגלת נוספת, במרחק של 5 ס"מ מהקצה הימני.
    4. חבר 12 מיסבי אוגן ליישור עצמי (קוטר 8 מ"מ) לחלקים העליונים הפנימיים של המדפסת הביולוגית.
    5. חבר את שני חלקי המדפסת הביולוגית הקדמית ואת שני חלקי המדפסת הביולוגית האחורית (כיוון שמאלה/ימינה) באמצעות המוטות המורכבים בשלב 1.4.3 ונעל אותם למיסבי האוגן המיישרים את עצמם (קוטר 8 מ"מ). אבטח את שני החלקים המורכבים בכל הצמתים באמצעות ברגים (M3x8).
      הערה: בעת מיקום המוט האחורי, הנח חגורה סגורה המחברת את הגלגלת על מנוע הצעד עם הגלגלת הפנימית על המוט.
      הערה: אבטח את מנוע הצעד מהדק את האומים כדי להבטיח ללא תנועה של המנוע ומתח תקין של החגורה.
    6. חבר את שני החלקים המורכבים בשלב 1.4.5 באמצעות ארבעה מוטות 8 מ"מ. תן למוטות לעבור דרך מיסבי הכדור הליניאריים הקיימים בחלק המורכב 1.3 ונעל אותם למיסבי האוגן המיישרים את עצמם (קוטר 8 מ"מ). אבטח את שני החלקים המורכבים בכל הצמתים באמצעות ברגים (M3x8).
    7. תקן קצה חגורה פתוח בחלקו העליון של X_block_1 באמצעות בלוק החגורה וחזור על פעולה זו למשך X_block_2. העבירו את החגורה סביב הגלגלות האחוריות משמאל, ואז סביב הגלגלת הקדמית, וקבעו שוב את קצה החגורה השני X_block_1 עם בלוק חגורה נוסף. חזור על פעולה זו עבור החגורה השנייה.
      הערה: יש להדק את החגורות כראוי כדי להשיג את התנועה הנכונה ובאותו אורך כדי למנוע כיפוף או הפרעה בתנועות Y.
  5. הרכיבו את ציר ה-Z (איור 4).
    1. הברג יחד את חלקי מארז המדפסת הביולוגית התחתונה (M4x8).
    2. חבר מיסב אוגן אחד ליישור עצמי (קוטר 8 מ"מ) לרצפת החלק התחתון של החלק המורכב בשלב 1.5.2.
    3. תקן שני מיסבים כדוריים ליניאריים אוגנים (LMH8UU) לחורים החיצוניים הקיימים Z_slider ואום בורג אחד בחור המרכזי עם ברגים (M3x8).
    4. תקן מתג גבול לצד שמאל Z_plane עם שני ברגים (M3x8).
    5. הדק את מנוע הצעד לצימוד פיר קשיח. חבר מנוע צעד Z_block עם ארבעה ברגים (M3x20) ומוט הברגה לצימוד הפיר הקשיח. ודא שכל בלוק מאובטח כהלכה עם ברגי הסט.
    6. חבר את החלק המורכב בשלב 1.5.5 לבסיס המדפסת הביולוגית באמצעות שני מוטות 8 מ"מ. תן להם לעבור דרך החלק המורכב בשלב 1.5.3.
    7. קבע את Z_block לפאנל האחורי באמצעות שני ברגים (M5x8).
    8. חבר Z_plane Z_slider באמצעות ארבעה ברגים (M3x25). הכנס אותם לחורי Z_plane מלמעלה למטה, העביר את הקפיץ בין Z_plane Z_slider ואבטח אותם בעזרת אגוזים. כוונן את מתח הקפיץ כדי ליישר את המטוס.
    9. חבר ארבע רגליים מתכווננות מתחת למבנה המדפסת הביולוגית בחלל הספציפי. יישר את המדפסת הביולוגית על ידי כוונון כפות הרגליים.
    10. חבר את החלק המורכב לחלק המורכב בשלב 1.4.6 עם שמונה ברגים (M4x12).
    11. חבר שני צירים בחזית המבנה במיקומים הספציפיים ומגנט אחד בחלק הימני במקום היחסי עם ברגים (M2x8). הברג את המבנה הכללי ליריעות פרספקס שקופות 2 מ"מ כדי לסגור את הפתחים.
      הערה: הברג את לוח הפרספקס הקדמי לצירים והנח בורג נוסף בהתכתבות עם המגנט כדי לקבל דלת כניסה.
  6. הצג את המכלול (איור 5A).
    1. הניחו לחוטים, המחוברים לתצוגה, לעבור דרך החור התחתון והצמידו את הצג לבית התצוגה באמצעות ארבעה ברגים (M3x3).
      הערה: מעבר זה צריך להיעשות ללא מכסה כפתור ה-LCD. זה יכול להיות ממוקם על הכפתור המותקן מראש לאחר החיבור לבית התצוגה.
    2. סגור את המארז עם המכסה באמצעות ארבעה ברגים (M2x6).
    3. הכנס את כרטיס ה-SD לחריץ השמאלי.
    4. תן לחוטים לעבור דרך החור בחלקו העליון של המבנה. הברג את החלק המורכב בחלק העליון של המדפסת הביולוגית עם שני ברגים (M3x8).
      הערה: כל החוטים (מנועים, מתגי גבול ותצוגה) יפעלו קרוב לקיר ויצאו מהחור השמאלי התחתון. הם מקובעים עם תפסי כבלים כדי למנוע הפרעה לחלקים המכניים.
  7. מכלול אלקטרוניקה (איור 5B)
    1. תקן את השקע לחלק החיצוני של המארז האלקטרוני בעזרת שני ברגים (M3x10).
    2. חבר את לוח האם לחלק הפנימי של המארז האלקטרוני עם ארבעה ברגים (M3x10).
    3. חבר את החלק התחתון של ספק הכוח לחלק הפנימי של המארז האלקטרוני עם ארבעה ברגים (M3x8).
    4. העבירו את החוטים דרך החור העגול שעל הכיסוי וחברו אותם ללוח האם. סגור את המארז האלקטרוני עם המכסה שלו באמצעות ארבעה ברגים (M3x10).
      הערה: ניתן לחבר את מארז האלקטרוניקה למבנה המדפסת הביולוגית או להשאיר אותו על השולחן במקרה של חללי עבודה קטנים.
      איור 6 מציג את כל חיבורי הכבלים האלקטרוניים. הם יכולים להיות שונים במקצת בהתאם ללוח האם של מדפסת התלת מימד בשימוש.

2. הגדרת תוכנה ותהליך יצירת gcode

  1. הכנת הגדרות תוכנת חיתוך
    1. פתח את תוכנת החיתוך.
      הערה: ההוראות עשויות להשתנות בהתאם לתוכנה שבה נעשה שימוש או לגרסה.
    2. היכנס לפלטפורמה.
    3. עבור אל אפשרויות ההגדרות . בחר את המדפסת ולאחר מכן הוסף מדפסת שאינה מחוברת לרשת. בחר מדפסת FFF מותאמת אישית ובתיבה שם מדפסת, הקלד את שם המדפסת. לחץ על הוסף.
      הערה: אם זוהי התקנת התוכנה הראשונה, החלונית הוסף מדפסת תיפתח אוטומטית לאחר הכניסה.
    4. בחלון הגדרות מכשיר , שנה את הגדרות ברירת המחדל x, y, z ל-176, 120, 45 מ"מ.
    5. בטלו את הבחירה באפשרות 'מיטה מחוממת ' אם היא עדיין לא בוטלה.
    6. הכנס לחלוניות התחלת g-code וסיום g-code את שורות הטקסט המדווחות בקבצים שכותרתם 'JoVE_Starting_G-code.txt' ו-'JoVE_Ending_G-code.txt' בקובץ משלים 2.
      1. שנה את הערך 150 בשורה 'M92 E150' בקובץ קוד ה-g ההתחלתי בהתאם לקצב הזרימה שיש להחיל. הערך המתאים באמצעות הנוסחה הבאה:
        figure-protocol-10858
        כאשר Q הוא קצב הזרימה הרצוי [μL/min].
        הערה: נוסחה זו הושגה בניסוי עם המערכת המתוארת. זה עשוי להיות שונה אם יהיו שינויים ברכיבים המכניים או החשמליים. חלופה אפשרית יכולה להיות לתקן את הערך בהתאם למערכת בשימוש וליצור קוד MATLAB מותאם אישית כדי ליצור את קובץ ה-gcode הרצוי.
    7. שנה את ערך קוטר החומר התואם בלוח המכבש 1 ל-1,75 ולאחר מכן, סגור.
    8. עבור אל Marketplace, בחר את התוסף Z Offset Setting והתקן אותו. בסוף התהליך, הפעל מחדש את התוכנה כדי לסיים. לאחר פתיחתו מחדש, בחר הגדרות | מדפסת | נהל מדפסות בסרגל הכלים. בחלון העדפות , לחץ על הגדרות והפעל את כל האפשרויות על ידי בחירה באפשרות בדוק הכל וסגור אותה.
    9. הגדר את ההגדרה על ידי לחיצה על הגדרות הדפסה (כפתור שלישי) בתפריט הבמה, המכיל את לוח התצורה. הזן את אחוזי המילוי בפרופיל ההדפסה הנוכחי בחלונית התצורה. בחר בלחצן Custom כדי לשנות את הגדרות ההדפסה הנוכחיות ואת הפרופיל Fine בתפריט הנפתח. הגדר את מהירות ההדפסה ל-10 מ"מ לשנייה.
  2. הכנת GCud
    1. הורד את *. קובץ עיצוב STL, שכותרתו 'JoVE_Square', מתוך קובץ משלים 2 של מאמר זה.
    2. טען. STL לתוכנת החיתוך.
    3. אתר את היצירה על המשטח השטוח ועבור לקואורדינטות 65, 42.5, 0 (X, Y, Z) מ"מ. צור שני עותקים על ידי לחיצה על . שם קובץ STL ברשימת האובייקטים ובחירה באפשרות הכפל שנבחרה. העבר אותם לקואורדינטות הבאות: 16, 42.5, 0 מ"מ ו- -33, 42.5, 0 מ"מ (X, Y, Z).
      הערה: לא ניתן להגדיר באופן אוטומטי את סדר ההדפסה אלא אם כן שונה באופן ידני ישירות בקובץ ה-gcode הסופי. קואורדינטות מוגדרות עבור לוח של 6 רב-בארות.
    4. עבור אל הגדרות הדפסה בתפריט הבמה. בקטע קירות, שים 0 כספירת קווי קיר. מקם 0 כערך עובי עליון/תחתון במקטע עליון/תחתון. בחלונית Infill, הוסף את הערכים הבאים: Infill Pattern: Grid, מרחק קו מילוי: 5 מ"מ, כיווני קו מילוי: [0].
      הערה: ניתן להפחית את מהירות הנסיעה במקטע מהירות הדפסה כדי לשפר את דיוק ציר ה-X.
    5. השבת את הנסיגה במקטע נסיעות וקירור הדפסה במקטע קירור .
    6. במקטע Build Plate Adhesion, בחר None כסוג הדבקה של לוחית בנייה, ואילו במקטע Special Modes, בחר באפשרות One at a Time בתור Print Sequence.
    7. לחץ על כפתור הפרוסה כדי ליצור את קוד ה-g.
    8. פתח את קובץ ה- g עם יישום פנקס הרשימות והסר את השורות "M104 S200", "M105" ו- "M109 S200" בשורה 12 אחרי הביטוי "; נוצר עם Cura_SteamEngine 4.9.0 אינץ'.
    9. הוסף "G1 Z25" לפני השורה הבאה "; מש: JoVE_Square_rev. STL(6)" ולפצל את הבא לשניים: (1) G0 F3600 X142.46 Y7.499 ו-(2) G1 Z0.3.
      הערה: קואורדינטות X ו-Y הן רק דוגמאות.
    10. שנה את ערך Z ל-Z25 בכל שורה הקיימת אחרי "; TIME_ELAPSED" הגיבו על כל הוראת שכבה אחרונה של כל יצירה.
      הערה: להדפסת חתיכה אחת בלבד, שלב 2.3.10 אינו נדרש.

3. מבחן נפיחות/השפלה

  1. שלבי הכנה
    1. קח מזרק זכוכית סטרילי של 1 מ"ל (מסוף TLL) וזרבובית חרוטית סטרילית של 25 גרם. הרכיבו אותם והכניסו את המזרק המורכב למקרר.
    2. הכניסו את קצות הפיפטה ואת בקבוקון מטריצת SBMe למקרר למשך הלילה יום לפני הניסוי.
    3. הדפס שלוש רשתות PLA (Φ = 20 מ"מ) עם גודל נקבוביות עגול של 1 מ"מ x 1 מ"מ ועמוד אנכי צדדי כדי לתפוס אותן.
  2. מבני הדפסה
    1. קח את המזרק המורכב ואת בקבוקון מטריצת SBMe מהמקרר. שאפו 500 מיקרוליטר ממטריצת SBMe והכניסו אותה לחממה למשך 15 דקות כדי לאפשר ג'לציה.
    2. קח את המזרק מהחממה והנח אותו בראש ההדפסה של המדפסת הביולוגית. ודא שבוכנת המזרק נמצאת במגע תקין עם בלוק הדוחף.
    3. אבטח את הבוכנה לקיבוע המזרק ואת אוגן חבית המזרק עם מחזיקי בוכנת המזרק, וחבית המזרק עם מהדק מזרק.
    4. כייל את המערכת באמצעות ההגדרה Auto-home בתפריט המדפסת הביולוגית כדי לזהות באופן אוטומטי את מקור הצירים.
    5. הזז את המכבש באמצעות הפקודה הזז צירים עד שקצה המחט נוגע ברשת ה-PLA כדי להגדיר ידנית את Z0.
    6. התחל להדפיס על ידי בחירת קוד ה-g file להדפסה בתפריט המדפסת הביולוגית.
    7. הכניסו את צלחת הרב-באר לחממה למשך 2 דקות כדי לאפשר ל-SBMe להתיישב לאחר האקסטרוזיה.
    8. קח את צלחת הרב-באר והכניס 2 מ"ל של מדיום תרבית תאים לשלוש הבארות המכילות את הרשתות המודפסות ביולוגית. הכניסו את צלחת הרב-באר לחממה.
    9. בכל נקודת זמן (t0, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 1, 3, 7, 10 ו-14 ימים), קח כל רשת מהצלחת וייבש אותה בנייר נקי כדי להסיר את עודפי המדיום והמשקל על איזון. החזירו את הרשת לצלחת ולאחר מכן לאינקובטור כדי להמשיך בניסוי. הערך את יחס הנפיחות וקצב ההשפלה באמצעות הנוסחאות הבאות:
      figure-protocol-16022
      כאשר Wt הוא משקל המבנים בכל נקודת זמן ו- Wt0 משקל המבנים המיובשים.
      figure-protocol-16209
      כאשר Wi הוא המשקל בסוף בדיקת הנפיחות.

4. הדפסה ביולוגית של מבני SBMe

  1. שלבי הכנה
    1. קח מזרק זכוכית סטרילי של 1 מ"ל (מסוף TLL) וזרבובית חרוטית סטרילית של 25 גרם והרכיב אותם מתחת לארון הבטיחות הביולוגית. הכניסו אותם לקופסה סטרילית במקרר.
    2. הכניסו את קצות הפיפטה ואת בקבוקון מטריצת SBMe למקרר למשך הלילה (4 מעלות צלזיוס על קרח) יום לפני הניסוי.
    3. הוסף 20 מיקרוליטר של טריפאן כחול לצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל.
    4. הגדר את הצנטריפוגה על 345 × גרם, 4 מעלות צלזיוס ותן לה להתקרר (~3-4 שעות).
    5. קח 5 מ"ל מים לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל כאיזון לצנטריפוגה.
    6. תמיסת חיץ פוספט חמה (PBS) ומדיה באמבט מים.
      הערה: מדיום תרבית תאים עשוי ממדיום נשר מעובד (DMEM) שלם של Dulbecco בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS), פניצילין-סטרפטומיצין ו-L-גלוטמין.
    7. הנח את המדפסת הביולוגית מתחת לארון הבטיחות הביולוגי. יש לעקר באור UV למשך 20 דקות.
      הערה: כדי להבטיח את תפקודה התקין של המדפסת הביולוגית, בצע את פונקציית הבית האוטומטי וודא את התנועות הנכונות של כל ציר ועבודה של מתגי גבול.
  2. הכנת דיו ביולוגי
    1. קח את הבקבוק באינקובטור המכיל תאי סרטן ערמונית מסחריים של עכברים והנח אותו מתחת לארון הבטיחות הביולוגית.
    2. הסר את מדיום תרבית התאים מהבקבוק.
      הערה: הנפחים המדווחים בפרוטוקול זה חלים על צלוחיות תרבית תאים T25.
    3. שטפו תאים פעם אחת עם 2 מ"ל PBS ואז שאפו אותו.
    4. מוסיפים 500 מיקרוליטר טריפסין ומכניסים את הבקבוק לחממה למשך 5 דקות כדי לאפשר ניתוק תאים מהצלחת.
    5. בדוק אם יש תאים לטריפסיניזציה ובמידת הצורך, הקש בעדינות על תחתית הבקבוק.
    6. הוסף 4.5 מ"ל בינוני לבקבוק. שטפו בזהירות את הצלחת כדי להבטיח שכל התאים המנותקים צפים במדיום תרבית התאים.
    7. שואבים את המדיום ומוסיפים אותו לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל.
    8. קח אליקוט של 20 מיקרוליטר וערבב אותו עם הטריפן הכחול. לאחר מכן, הכניסו 10 מיקרוליטר מתערובת זו לתא ספירת התאים כדי לספור את התאים החיים באמצעות הנוסחה הבאה:
      figure-protocol-18291
      כאשר f הוא גורם הדילול עבור מתלה כחול טריפאן (יחס של 1:1); V הוא נפח מתלה תאים [מ"ל].
    9. צנטריפוגה את תרחיף התאים הנותר למשך 5 דקות (345 × גרם, 4 מעלות צלזיוס).
    10. הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש לתוך מטריצת SBMe הקרה בצפיפות התא הרצויה (106 תאים/מ"ל)
    11. שאפו 800 מיקרוליטר מתרחיף המטריצה המכיל תאים עם המזרק הקר.
    12. הסר את בועות האוויר שעלולות להילכד במזרק והכניס אותו לקופסה סטרילית. לאחר מכן, הניחו אותו בחממה למשך 15 דקות כדי לאפשר ג'לציה.
  3. תהליך הדפסה ביולוגית
    1. קח את המזרק מהחממה והכניס אותו לראש ההדפסה של המדפסת הביולוגית. ודא שבוכנת המזרק נמצאת במגע תקין עם בלוק הדוחף.
      הערה: הדגם והנפח חייבים להיות זהים למזרק המשמש לניסוי.
    2. אבטח את הבוכנה לקיבוע המזרק ואת אוגן חבית המזרק עם מחזיקי בוכנת המזרק, וחבית המזרק עם מהדק מזרק.
    3. השתמש באומים M4 בחלק התחתון של המכבש כדי לכוונן את לחץ הקפיץ ולנעול את המזרק במקומו.
      הערה: שלבים 4.3.1 עד 4.3.4 מוצגים באיור 7.
    4. כייל את המערכת באמצעות ההגדרה Auto-home בתפריט המדפסת הביולוגית כדי לזהות באופן אוטומטי את מקור הצירים.
      הערה: קטע זה מבטיח תמיד את ההגדרות ההתחלתיות המתאימות ללא תלות בסוג התמיכה שבה אנו משתמשים להדפסה.
    5. הנח צלחת מרובת 6 בארות על מישור ההדפסה.
    6. הזז את המכבש באמצעות הפקודה הזז צירים עד שקצה המחט נוגע בתחתית הבאר כדי להגדיר ידנית את Z0.
    7. בחר את קובץ ה- gcode באפשרות התפריט של תפריט המדפסת הביולוגית והתחל להדפיס. בכל באר תודפס רשת מרובעת בת שש שכבות (צד 2.6 ס"מ).
    8. לאחר תהליך ההדפסה הביולוגית, השתמש במיקרוסקופ הפוך כדי להבטיח שתהליך ההדפסה הצליח והכנס את צלחת הרב-באר לחממה למשך 2 דקות כדי לאפשר ל-SBMe להתיישב לאחר האקסטרוזיה.
    9. הכניסו 2 מ"ל של מדיום תרבית תאים לכל באר.
      הערה: אמצעי האחסון חייב לכסות את המבנים במלואם.

תוצאות

במאמר זה, אנו מציגים פרוטוקול עבור מבני הדפסה ביולוגית העשויים מ-SBMe באמצעות מדפסת ביולוגית נפחית בעלות נמוכה ובהתאמה אישית. אנו מספקים תיאור מפורט והדפסת תלת מימד *. STL לבניית המערכת ואנו מדגימים את השימוש הפוטנציאלי שלה בחקר הסרטן על ידי הדפסת מבנים חד-שכבתיים ורב-שכבתי?...

Discussion

במחקר תרגומי, SBMes הם בעלי ערך מיוחד במגוון תחומי מחקר, מהנדסת רקמות ועד לבדיקת תרופות 2,3. בפרט, הם הפכו לבסיסיים בחקר הסרטן, מכיוון שהם משכפלים תכונות מכניות וביוכימיות של מיקרו-סביבת הגידול, ומאפשרים פיתוח מודלים המשקפים טוב יותר את צמיחת ?...

Disclosures

למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.

Acknowledgements

עבודה זו מומנה בחלקה על ידי פרס המאיץ מס' A26815 שכותרתו: "אבולוציה של סרטן תא בודד במרפאה" שמומן באמצעות שותפות בין Cancer Research UK ו-Fondazione AIRC (מס' 22790) ועל ידי האיחוד האירופי - הדור הבא של האיחוד האירופי, משימה 4, רכיב 1, CUP D53D23003310006.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
12-multiwell plateSigma-AldrichCLS351143
3D FDM printerFlashforgeAdventurer 5M Pro
3D printer MotherboardGEETECHGT2560 REV A+
6-multiwell plateSigma-AldrichM8687
AC socketHiLetgohttps://www.amazon.it/HiLetgo-Terminal-Socket
-Holder-Switch/dp/B0814PT3YG/ref=sr_1_1?__
mk_it_IT=%C3%85M%C3%85%C5%BD%C3%
95%C3%91&crid=2TRIBP34VJ61A
&dib=eyJ2IjoiMSJ9.zW6_VmeiudR
I4yMpjJqJm7OdeoctTKW2mrEzml
BAyJVa1hkM4PiJT3pLY0mXdxm1
AZQxa2_f5J4q4d5v3vUeqLkjJ6BM
kWHAoeEfbEQJNuZaQ3NjmUlqWy
_1AfQpnRp4VqJ2m3bkWsChztCa
Ok-ZdQJlobGxJaMKg7WbV352
Hyo.0tEw2GYoPQJ4SdNYXO1XM
Jrl2yXMvRey55Hj7GhISkk&dib_
tag=se&keywords=AC+socket+HiLetgo&nsdOpt
OutParam=true&qid=1734702097&sprefix=ac+
socket+hiletgo%2Caps%2C173&sr=8-1		15 A 250 V
Adjustable feetEXIN DEHCENhttps://www.amazon.it/gp/product/
B0CPLTSNQB/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&psc=1		Height 27-40 mm
Ball bearing 4 mmQUARKZMAN684ZZDimensions 4 x 9 x 4 mm
Ball bearing 5 mmXiKe625-2RSDimensions 5 x 16 x 5 mm
Belt closedTurmberg3Dhttps://www.amazon.it/gp/product/
B09B2FJQBV/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&psc=1		Width 6 mm
Belt openFajoedahttps://www.amazon.it/gp/product/
B09QCTVPTH/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&th=1		Width 6 mm
Bioprinting nozzleFisher Scientific17780789Corning Standard Conical Bioprinting Nozzles
Bürker Cell Counting chamberGLASWARENFABRIK KARL HECHT40443001
CentrifugeEppendorf5702 R
Centrifuge tubeSigma-AldrichCLS43147015 mL
Centrifuge tubeSigma-AldrichEP00301200861.5 mL
DisplaySigma-AldrichBR718905
DMEM Gibco Thermofisher11965092
FBSSigma-AldrichF7524
Flanged linear ball bearingSourcing maphttps://www.amazon.it/gp/product/
B07S6LZHM7/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&psc=1		LMF8UU
Glass syringeFisher Scientific11520062Hamilton GasTight 1 mL (TLL terminal)
HingesYASQZhttps://www.amazon.it/gp/product/
B09DNXGDGG/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
IncubatorFisher Scientific15481374Eppendorf Galaxy 48 R CO2 Incubator, 48 L, Stainless Steel
Inverted microscopeNikonEclipse Ti2-U
Jumper wiresIverntechhttps://www.amazon.it/Iverntech-XH2
-54-Terminale-Stampante-Stepper/dp/
B07Q12B6K5/ref=pd_ci_mcx_mh_
mcx_views_0_image?pd_rd_w=cb2r
J&content-id=amzn1.sym.57a351cf-
ba07-47e8-b302-aa2aa1a3f209%3
Aamzn1.symc.ca948091-a64d-450e-
86d7-c161ca33337b&pf_rd_p=57a3
51cf-ba07-47e8-b302-aa2aa1a3f209
&pf_rd_r=YHY9RFYZJK7PYAY2RXX
D&pd_rd_wg=7WkXB&pd_rd_r=8239
66cb-4977-48ce-b095-0dcedf8c372f&
pd_rd_i=B07Q12B6K5&th=1
LCD unitParadisetronic.comhttps://www.amazon.it/Display-controller
-conduttori-adattatore-stampante/dp/B01
DUR4064/ref=sr_1_9?__mk_it_IT=%C3
%85M%C3%85%C5%BD%C3%95%C3
%91&crid=1OAHVIIRA16X3&dib=eyJ2Ij
oiMSJ9.07V2Jf7RzJjTUlIuFobUJFjUzG4
8633KkdcMXSEfnWLRX41d5vAF7xPBJ
maniVxDoXecfihZzzOXlP3v-e29cUjoGLf
GDyv5DoDVwp7ndohNTYvYzoi3gWkF-
Hsd2YbT7tjb1Dra1afqSn26CbFdEvJ84y
qyX7Gi3-7DHh8yMwdd6_7quiuW_mjsm
w1nu0YQG68GZ0XM7unOsvyddQ__R_
3dndxb3mOjgGjklEgu_KEbZJPOZDIdSo
oU3nrrKHj56hCfk9ACwYpB80QGCbTPK
0p-fE0g9h02WPmtHV38UU3m5AdZsTQ
HqvnVlJg703qGT-8ze8fQItw2rtbgl_J86H
RMReJOhVLQBkqNwxh57CQ.yNbeFmZ
ZBEUhadz2dQa8NxpZD9g4P6ighRU_97
yxgnw&dib_tag=se&keywords=display%
2B3D%2Bprinter%2Bprusa%2Bi3&nsdO
ptOutParam=true&qid=1734714093&s=
industrial&sprefix=display%2B3d%2B
printer%2Bprusa%2Bi3%2Cindustrial%
2C143&sr=1-9&th=1		Old Prusa i3 LCD unit. Link to commercially available alternative
Leadscrew M8RS PRO280-408
Leadscrew nut M8Comiokehttps://www.amazon.it/dp/B0C7QB13C4?
ref=ppx_yo2ov_dt_b_fed_asin_title&th=1		Nut for M8 screws
Leadscrew nut T8Aipaidehttps://www.amazon.it/gp/product/B086QJCX1M/ref
=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1		Nut for T8 screws
Leadscrew T8VBESTLIFEhttps://www.amazon.it/gp/product/B07CXRB52Y/ref
=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&th=1		Length 15 mm
L-GlutammineSigma-AldrichG7513
Limit switchCESFONJERhttps://www.amazon.it/gp/product/B07SPX492J/ref
=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
Linear ball bearing (LM4UU)A ABSOPROhttps://www.amazon.it/gp/product/B0CB3M5GHJ/ref
=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1		Dimensions 4 x 8 x 12 mm
Linear ball bearing (LM8LUU)Fdithttps://www.amazon.it/LM8LUU-Linear
-Motion-cuscinetti-stampante/dp/B07N
58W3GZ/ref=sr_1_1_sspa?__mk_it_IT
=%C3%85M%C3%85%C5%BD%C3%
95%C3%91&crid=33VNCCCSIFJRP&
dib=eyJ2IjoiMSJ9._JJ2doXI33C2JagX
8x6E2Bz2ILo10852tBi1erWqGn363ku
zbcvknbMtsK6wm5jdR1P5XwC6Ovui
at3kGIJPpYFOG_FiIBYT8xLkkbiphhR
4ncR6R9tPPyeN--_3RxFgKMh5tMO_
jesAcu7Anp87Qb91ruM85CKqduV-y6
HQJtAvVSXmfG4yE4N7d4_dDVKsR7
UkEmDIznJE0HIhvvI2R6vX2tMN5yMc
_ZrUbUB0gPF6SgXHVJmKRizCRqL7J
64WRD-XnMSpVHY_LUVJ7gn9kJQ35
_zQw8vLD-_kRyvxwvE.4IVMdKzF1Ax
mQHQhWEi6LH12UI4CmMgi288_g3zG
CPY&dib_tag=se&keywords=LM8LUU+
Fdit&nsdOptOutParam=true&qid=17347
04494&s=industrial&sprefix=lm8luu+fdit+
%2Cindustrial%2C136&sr=1-1-spons&sp
_csd=d2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY&psc=1		Dimensions 8 x 15 x 45 mm
Linear ball bearing (LM8UU)ARCELIhttps://www.amazon.it/gp/product/
B07BV3YBP2/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&psc=1		Dimensions 8 x 15 x 24 mm
MagnetsOCEUMAOAhttps://www.amazon.it/gp/product/
B0CB6C2RF4/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&th=1		8 x 3 mm
MatrigelGibco ThermofisherLOT 0202003SBMe
Motor driver Longrunerhttps://www.amazon.it/gp/product/
B071P41ZBW/ref=ppx_yo_dt_b_search
_asin_title?ie=UTF8&psc=1		Driver A4988
PBSMicroGem, VWRTL1006-500ML
Penicillin-StreptomycinGibco Thermofisher15070063
Pipette tipsSigma-AldrichZ740058BRAND filter tips, racked, TipBox (volume 50-1000 μL)
Plexiglass sheetsMVQPERhttps://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti-
plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0CF
Q4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.bf7
Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_NuF
ZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHBtZgdzI
356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-kfklAYrb
rXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJPcLF2f2E
EcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA0sLPnM0ts
wdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh4fpVNMA4Kwh
0UaeQhfexFY0dNWhPYftXvvz9LLj1uMID2E
Gi_ScmYqY5LahbYOmKVVPPiPIgCVdLjaM8
yqNp2ZJGV9Fge2xa6OAHxmMeaQUqGkoQ
88x9GkX7EWuOwYO0dEUYSzHCdGONWo
eZLfSJOR3C6-knjzKrOQ0ziouJfo-ktbak7v3A
H53BtIOiXbT57cKqh-uc9wI_j_lHN-8okAe2yO
6upc61MoydZujuxnfLG7hwytqHQG2.ApKq8
MVs8Xihn_zcA39nML-2lpjnagGhXIx0clcJN_
E&dib_tag=se&keywords=lastra+plexiglass+
2+mm&nsdOptOutParam=true&qid=1734702823&sr=8-14		2 mm thickness, transparent sheet, 21 x 32.5 cm
Plexiglass sheetsMVQPERhttps://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti
-plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0C
FQ4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.b
f7Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_N
uFZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHBtZ
gdzI356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-kfk
lAYrbrXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJPc
LF2f2EEcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA0s
LPnM0tswdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh4fpV
NMA4Kwh0UaeQhfexFY0dNWhPYftXvvz9
LLj1uMID2EGi_ScmYqY5LahbYOmKVVPP
iPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fge2xa6OAHx
mMeaQUqGkoQ88x9GkX7EWuOwYO0dE
UYSzHCdGONWoeZLfSJOR3C6-knjzKrO
Q0ziouJfo-ktbak7v3AH53BtIOiXbT57cKqh-
uc9wI_j_lHN-8okAe2yO6upc61MoydZujux
nfLG7hwytqHQG2.ApKq8MVs8Xihn_zcA3
9nML-2lpjnagGhXIx0clcJN_E&dib_tag=se
&keywords=lastra+plexiglass+2+mm&nsd
OptOutParam=true&qid=1734702823&sr=8-15		2 transparent sheets, 2 mm thickness, 20 x 20 cm
Plexiglass sheetsMVQPERhttps://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti
-plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0C
FQ4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.
bf7Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_
NuFZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHB
tZgdzI356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-
kfklAYrbrXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJ
PcLF2f2EEcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA
0sLPnM0tswdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh
4fpVNMA4Kwh0UaeQhfexFY0dNWhPYft
Xvvz9LLj1uMID2EGi_ScmYqY5LahbYO
mKVVPPiPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fge
2xa6OAHxmMeaQUqGkoQ88x9GkX7E
WuOwYO0dEUYSzHCdGONWoeZLfSJO
R3C6-knjzKrOQ0ziouJfo-ktbak7v3AH53B
tIOiXbT57cKqh-uc9wI_j_lHN-8okAe2yO6
upc61MoydZujuxnfLG7hwytqHQG2.ApKq
8MVs8Xihn_zcA39nML-2lpjnagGhXIx0clcJ
N_E&dib_tag=se&keywords=lastra+plexigl
ass+2+mm&nsdOptOutParam=true&qid=1
734702823&sr=8-16		2 transparent sheets, 2 mm thickness, 20 x 30 cm
Polylactic acid (PLA) filamentFlashforgeBlack 100102
Power supplySQUADOhttps://www.amazon.it/SQUADO-Alimentatore
-stabilizzato-dissipatore-efficienza
/dp/B0DMTG6SJD/ref=sr_1_6?dib
=eyJ2IjoiMSJ9.1vVze6Zt6fhKCvFb
eAOSiRe57N6a1mlBnkLdHiEym4
ugHzueF6_FdOodb3sftCXb5raTg
eerMMUbL5KcaI_SDa_2j7s2XohI
B01QMJDyq0xQ5Gp3KLIZozDHV
fGBdSrvwgyOl-BXSDy_ocZlj2TL5
e21p3K6qpvSaT5yo8WA5tngS93
Eqe8s8D6mjpnnPFrb9RpQpj299Y
nNRYgr_YF3NCt3mH0r0FocKcCa
LNpKtfGLCbnz_yB-360tp5SAi7A7
cgBf5I4NzQ5iQTTXAG727x0Hml
mG-eaFBSJv6M1LPooZiT2aT7dx
o_7tzyU6MQ9vAEozXkLTaTTMX
RA_svPp96sxp93NRLReI64xpFd
S3Zh1y_JPQijbMAIuvuYflhh6JlPB
W6-fpW6QXl9v5wNEs_YwjzP9Sf
RKxRmchzZhgsK-34XJeaEmjbRq
H3piM0Zx.MfPYUNvCEhDBqLDh
C-iqBEu-vjIVgsrQmOjeLuGo9YQ&
dib_tag=se&keywords=power+sup
ply+AC+INPUT%3A+110-220V%2
C+DC+OUTPUT%3A+12V+15A&n
sdOptOutParam=true&qid=173471
4722&sr=8-6		Old Prusa i3 power supply (AC INPUT: 110-220 V, DC OUTPUT: 12 V 15 A). Link to commercially available alternative
Pulley 5 mmVooGenzekhttps://www.amazon.it/gp/product/
B0B8H16KWX/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&psc=1		Bore 5 mm, Width belt space 6 mm
Pulley 8 mmYxtaiihttps://www.amazon.it/gp/product/
B07X852RFN/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&th=1		Bore 8 mm, Width belt space 6 mm
Ribbon cablesQUARKZMANhttps://www.amazon.it/sspa/click?ie
=UTF8&spc=MTo0NDgyNTkwNzU
wNjM5NzM5OjE3MzQ3MTQ1OTE6
c3BfbXRmOjMwMDEyMjk4NTMzN
TYzMjo6MDo6&url=%2FQUARKZM
AN-connettore-Lunghezza-Comput
er-confezione%2Fdp%2FB0CQRM
DQNG%2Fref%3Dsr_1_15_sspa%
3F__mk_it_IT%3D%25C3%2585M
%25C3%2585%25C5%25BD%25
C3%2595%25C3%2591%26crid%3
D3BZ8Q05YA50TX%26dib%3Dey
J2IjoiMSJ9.zoYnL2ViiarlDS_7165D
ldxu-TTbVbWUVAP3pCybFB-bjGl
wSgrpnkMhhsJj3NRo8Mvht8ev5H
vGQ-UUpPom12OcOcwyRVXLAR
UvMyTm8mpAdZSaOritwHRgwu2
JuW9UoS4jlCbA-gzP2FEAAH47K
fFOWN6FEhc5r0YGBcSIsA6_QV6
_LA1k_ifj3c2BFm2Fj8YjW-auz7Yiy
ULfZusvGX28S1K5kJdTa_YOwJY
YC0Y__s-CCchHKiZgDhFjtFogUz0
Tonob4HQZiO_hkrnm3ixpNj9rgE-
hvVq1FK1uD9M.kkP89x1SJ0SLxZ
sv3YomYEfmkhpvP4WQf2TtC76K
YAE%26dib_tag%3Dse%26keywords
%3DCavo%2Bflessibile%2Ba%2Bna
stro%2Bpiatto%2Bper%2Bstampant
e%2B3D%2Ba%2B10%2Bpin%26n
sdOptOutParam%3Dtrue%26qid%
3D1734714591%26s%3Dindustrial
%26sprefix%3Dcavo%2Bflessibile
%2Ba%2Bnastro%2Bpiatto%2Bper
%2Bstampante%2B3d%2Ba%2B10
%2Bpin%252Cindustrial%252C170
%26sr%3D1-15-spons%26sp_csd%
3Dd2lkZ2V0TmFtZT1zcF9tdGY%26psc%3D1		ribbon cable 2651 28AWG 10 pins
Rigid shaft couplingGwolfhttps://www.amazon.it/gp/product/
B088R8CW5Z/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&psc=1		Coupling from 5 to 8 mm 
Rods 4 mmRS-components682-810Diameter 4 mm
Rods 5 mmSourcingmapa14010200ux0214Diameter 5 mm
Rods 8 mmRS-components682-078Diameter 8 mm
ScrewsBnnrjia281-984M2x6 - Flat head
ScrewsINCREWAYhttps://www.amazon.it/INCREWAY-
assortite-portatili-accessori-
riparazione/dp/B07KN37M5J/
ref=sr_1_20?__mk_it_IT=%C
3%85M%C3%85%C5%BD%
C3%95%C3%91&crid=12BH
MAWD8SK4Z&dib=eyJ2IjoiM
SJ9.SjXKoxV0NYqENPoUeS4
2-rj1Af398uiCLXDxFs0C9HfS
8vwEPmsfAMPwIMfllkAfWNY
TIEU4KXhJRgRHInNI3U_aow
0EPyfufQKlA4wHz1eOJBvYO
ND-5obbXfRPn7VXQ8kzBXM
VfUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB-z
pRvQ6oE5Fr_1sO7lFnzURtD1
YBf65O58M3hrDXf5r_8MIz1c
Asct-2P8AyWWBZAB1buYoyP
gnnOiBL5EBS7twJWqcDU86m
h1ywyufiUitm6kIwNuMx32D0h
0jkHna481aaYP_Q7kHgDxxrR
_fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHfF
WVMqvB_YBdEAuTeL08EP_p
TY50uT4UeWgdJuT58kB7Gv-
Y5fPMPRS_JEQdO-oJ9DlO9n
0OszkmYwrPh-AivwVN6xh4hN
2pseXannS_on9aiNv1lh3x-f2PZ
0R.jCyNdxQiJSAsGVm7ZPhDK
eFxQGBAu-M_42ZLTSSBiDg&d
ib_tag=se&keywords=viti+M3x3&
nsdOptOutParam=true&qid=1734
711519&sprefix=viti+m3x3%2Cap
s%2C169&sr=8-20		M2x8 - Flat head
ScrewsINCREWAYhttps://www.amazon.it/INCREWAY
-assortite-portatili-accessori-ripara
zione/dp/B07KN37M5J/ref=sr_1_2
0?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85
%C5%BD%C3%95%C3%91&crid=
12BHMAWD8SK4Z&dib=eyJ2IjoiM
SJ9.SjXKoxV0NYqENPoUeS42-rj1
Af398uiCLXDxFs0C9HfS8vwEPms
fAMPwIMfllkAfWNYTIEU4KXhJRg
RHInNI3U_aow0EPyfufQKlA4wHz
1eOJBvYOND-5obbXfRPn7VXQ8
kzBXMVfUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB
-zpRvQ6oE5Fr_1sO7lFnzURtD1YB
f65O58M3hrDXf5r_8MIz1cAsct-2P8
AyWWBZAB1buYoyPgnnOiBL5EBS
7twJWqcDU86mh1ywyufiUitm6kIwN
uMx32D0h0jkHna481aaYP_Q7kHg
DxxrR_fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHf
FWVMqvB_YBdEAuTeL08EP_pTY50
uT4UeWgdJuT58kB7Gv-Y5fPMPRS
_JEQdO-oJ9DlO9n0OszkmYwrPh-
AivwVN6xh4hN2pseXannS_on9aiN
v1lh3x-f2PZ0R.jCyNdxQiJSAsGVm
7ZPhDKeFxQGBAu-M_42ZLTSSB
iDg&dib_tag=se&keywords=viti+M3
x3&nsdOptOutParam=true&qid=17
34711519&sprefix=viti+m3x3%2Ca
ps%2C169&sr=8-20		M2x10 - Flat head
ScrewsINCREWAYhttps://www.amazon.it/INCREWAY-
assortite-portatili-accessori-riparazi
one/dp/B07KN37M5J/ref=sr_1_20?
__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85%
C5%BD%C3%95%C3%91&crid=12
BHMAWD8SK4Z&dib=eyJ2IjoiMSJ
9.SjXKoxV0NYqENPoUeS42-rj1Af3
98uiCLXDxFs0C9HfS8vwEPmsfAM
PwIMfllkAfWNYTIEU4KXhJRgRHIn
NI3U_aow0EPyfufQKlA4wHz1eOJB
vYOND-5obbXfRPn7VXQ8kzBXMV
fUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB-zpRvQ6
oE5Fr_1sO7lFnzURtD1YBf65O58
M3hrDXf5r_8MIz1cAsct-2P8AyWW
BZAB1buYoyPgnnOiBL5EBS7twJ
WqcDU86mh1ywyufiUitm6kIwNuM
x32D0h0jkHna481aaYP_Q7kHgDx
xrR_fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHfF
WVMqvB_YBdEAuTeL08EP_pTY5
0uT4UeWgdJuT58kB7Gv-Y5fPMPRS
_JEQdO-oJ9DlO9n0OszkmYwrPh-Ai
vwVN6xh4hN2pseXannS_on9aiNv1l
h3x-f2PZ0R.jCyNdxQiJSAsGVm7Z
PhDKeFxQGBAu-M_42ZLTSSBiDg
&dib_tag=se&keywords=viti+M3x3&n
sdOptOutParam=true&qid=1734711
519&sprefix=viti+m3x3%2Caps%2
C169&sr=8-20		M3x3 - Flat head
ScrewsRS-components281-978M3x6 - Flat head
ScrewsRS-components281-978M3x10 - Flat head
ScrewsRS-components281-978M3x20 - Flat head
ScrewsFaankitonhttps://www.amazon.it/Faankiton-600-
M3-Incassato-Cilindrica/dp/B0CFY6V
3HV/ref=sr_1_3_sspa?crid=29NMQZ
B1QM7EW&dib=eyJ2IjoiMSJ9.aiGS-
zo819G6hZmghT7TFDH1TL5lzRsjT
R5PBvqoHbKOBLipyX-kuevmqqPpW
m_7Ngng-Wa6aLoDuXMtoqexgeNpr
Qn2cISsCatqzhc8fxhJ0yIN4s3YEpD
KzIroWWVNzswptkWthnGkLXwHck
m4wqLr1sf0qyK9oYYlZdKo_Ypa9RQ
s3aYPNd_f-DWpT5rdsG1GL3rd3b9c
fLSqXxMd8QnnK3hDcg10Uz9otPwo
zJC2QAQFce__CkNwDfBp5Vvgmy1
DLX4a7PolnNePrJiObgjHMJLlfwizGx
fie28RAYQ.03Epc_RrVWlBUqUbHU
TPDcoDUxaKBHep1CuTOhFj-fI&dib
_tag=se&keywords=m3x25%2Bviti&n
sdOptOutParam=true&qid=17347118
59&s=industrial&sprefix=M3x25%2Ci
ndustrial%2C185&sr=1-3-spons&sp_
csd=d2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY&th=1		M3x25 - Flat head
ScrewsFaankitonhttps://www.amazon.it/Faankiton-600
-M3-Incassato-Cilindrica/dp/B0CFY6
V3HV/ref=sr_1_3_sspa?crid=29NMQ
ZB1QM7EW&dib=eyJ2IjoiMSJ9.aiG
S-zo819G6hZmghT7TFDH1TL5lzRsj
TR5PBvqoHbKOBLipyX-kuevmqqPp
Wm_7Ngng-Wa6aLoDuXMtoqexgeN
prQn2cISsCatqzhc8fxhJ0yIN4s3YEp
DKzIroWWVNzswptkWthnGkLXwHc
km4wqLr1sf0qyK9oYYlZdKo_Ypa9R
Qs3aYPNd_f-DWpT5rdsG1GL3rd3b9
cfLSqXxMd8QnnK3hDcg10Uz9otPwo
zJC2QAQFce__CkNwDfBp5Vvgmy1D
LX4a7PolnNePrJiObgjHMJLlfwizGxfie
28RAYQ.03Epc_RrVWlBUqUbHUTPD
coDUxaKBHep1CuTOhFj-fI&dib_tag=s
e&keywords=m3x25%2Bviti&nsdOptO
utParam=true&qid=1734711859&s=ind
ustrial&sprefix=M3x25%2Cindustrial%2
C185&sr=1-3-spons&sp_csd=d2lkZ2V
0TmFtZT1zcF9hdGY&th=1		M3x30 - Flat head
ScrewsAERZETIXhttps://www.amazon.it/AERZETIX-
carbonio-fissaggio-cacciavite-mont
aggio/dp/B0BDYZZ8LQ/ref=sr_1_4
?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85
%C5%BD%C3%95%C3%91&crid=
217010XNB7ZXP&dib=eyJ2IjoiMSJ
9.e5QjA-q9hEvlleIzwY3ssA3x7vIBF
Hpcg73tKkBJu9QbDwMwlC5L9-9u
7my7ZG5hZij0WyaijakqAoX4rIZ3rv
EgvlPtN6bwKTBgqAK-3uu3GBy6K
EPQ2iIEUWx_U73nonJy5IzmTDH
Xijn-kRg1iCOM99S5upSWbmmazg
8lctsyXlg_tmXHjHn63WsIo7WcBuL
rtVpPW8oMsZCndwh33pNQXBnk1
iStT81spopzrw3gScK1Wdz6RttH6j
YL611rNBdkd-PEP2CYhDKeSKHE
AqmABjHGLyG6p40k20npHqkg8g-
9Msl3fZZiS4rRxNFOHBjEdVTLBrn
PjRjxTspBfZSEKQnqsGm1WPlz8cS
khCs.ujWHAL4y-RNahay-1AJl34uN
hUj-f6mZ7X1_KZaACvU&dib_tag=s
e&keywords=m3x50%2Bviti&nsdOp
tOutParam=true&qid=1734711964&
s=industrial&sprefix=m3x50%2Bviti
%2Cindustrial%2C136&sr=1-4&th=1		M3x50 - Flat head
ScrewsJOCAHULFXhttps://www.amazon.it/Incassato-
Esagonale-Rondelle-Esagonali-
Inossidabile/dp/B0DF7P5CC2/ref=sr_
1_6?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%8
5%C5%BD%C3%95%C3%91&crid=2
7B231M7SRJ3R&dib=eyJ2IjoiMSJ9.3
bij8nHLQAebjY8LHQS6V1GsAE07H
cFGUpHAh7jA1oQIxjoTJmxjNuwg0y
H14oz-YUvzD0eqVRASqAZTK2spiQ
saX0pug7rWgGfENeGhztno5lMcJDT
XQfe9H6ocLZANpAFv_p0dRbO6ggA
vZN0TfyiuR4focFMAjr6VFGVbprEQO
EaS1KRs8loF3FgL0rsmP81K806Gv5
zeSurK_sp8GEelqtm1G3J059zUdPaJ
z7zJQEFPSH0TXv3lml5u9lnvnAbM0j
ClF03nG5ZjB-6WUPfS41Os5DgzTpS
zUTR-YZc1HnRUxy6l5grDPFmDiNZn
0Ie9MrlkcPI2A8dubQZm3d8pYVpg6Y
2OqzifmZzNsQM.Zuh5Ko4bf20Bz46c
NFRHJvcyPfJyglpcvN1uM16-yOI&dib
_tag=se&keywords=m4+viti+testa+sv
asata&nsdOptOutParam=true&qid=17
34712054&s=industrial&sprefix=m4+v
iti+testa+svasata%2Cindustrial%2C12
8&sr=1-6		M4x8 - Flat head
ScrewsJOCAHULFXhttps://www.amazon.it/Incassato-Esagonale
-Rondelle-Esagonali-Inossidabile/dp/B0DF
7P5CC2/ref=sr_1_6?__mk_it_IT=%C3%85
M%C3%85%C5%BD%C3%95%C3%91&c
rid=27B231M7SRJ3R&dib=eyJ2IjoiMSJ9.
3bij8nHLQAebjY8LHQS6V1GsAE07HcFG
UpHAh7jA1oQIxjoTJmxjNuwg0yH14oz-YU
vzD0eqVRASqAZTK2spiQsaX0pug7rWgG
fENeGhztno5lMcJDTXQfe9H6ocLZANpAF
v_p0dRbO6ggAvZN0TfyiuR4focFMAjr6VF
GVbprEQOEaS1KRs8loF3FgL0rsmP81K8
06Gv5zeSurK_sp8GEelqtm1G3J059zUdP
aJz7zJQEFPSH0TXv3lml5u9lnvnAbM0jCl
F03nG5ZjB-6WUPfS41Os5DgzTpSzUTR
-YZc1HnRUxy6l5grDPFmDiNZn0Ie9Mrlkc
PI2A8dubQZm3d8pYVpg6Y2OqzifmZzNs
QM.Zuh5Ko4bf20Bz46cNFRHJvcyPfJyglp
cvN1uM16-yOI&dib_tag=se&keywords=m4
+viti+testa+svasata&nsdOptOutParam=tru
e&qid=1734712054&s=industrial&sprefix=
m4+viti+testa+svasata%2Cindustrial%2C1
28&sr=1-6		M4x12 - Flat head
ScrewsGlobstarhttps://www.amazon.it/testa-svasata-
impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH
5JYL/ref=sr_1_9?__mk_it_IT=%C3%
85M%C3%85%C5%BD%C3%95%C
3%91&crid=XEVGIE9R1K2F&dib=ey
J2IjoiMSJ9.sYNfljBDPU1N2px8nueT
zi6D61Z46HD98MSuIwqXNKrfkSOM
GYgywNTC8-dsYqNXiZEMS42kGB4
QdBtz_TVFLvgLCFQVl9W5n7Bo4fQS
_VKHh9VLmA_RjdF75wPsSbRPIdSA
nidi0pehfkRoBIrEtYVn-cUq4TXH0P1D
pGLc_4J88tU02ieLVee-YarMxZLKeLYt
kK6B2CmM6d_AE0K7UJofwnOCOLp
3R72KpMTltjkJutf0WxBFsNQhYG8Wz
0q1o_3uRs_aNM0wJtGeSohS3fABN8C
z-kYxdfOikF1zi4nE1wn8YUw8lfsCxeUI
ioUp4Lz0GaXhHkkXxC5jssOsuOyW_6
CeDYrx0AOAy1URHBY.4xc_PNzUrZe
FFz0FV9hV7uu_-Es6f3jhi6koImPVcgw
&dib_tag=se&keywords=m4x70%2Bvi
ti%2Btesta%2Bsvasata&nsdOptOutPa
ram=true&qid=1734712182&s=industri
al&sprefix=m4x70%2Bviti%2Btesta%2
Bsvasata%2Cindustrial%2C134&sr=1-9&th=1		M4x70 - Flat head
ScrewsAerzetixhttps://www.amazon.it/AERZETIX-cilin
drica-impronta-intaglio-montaggio/dp/B
0BLNJ9PTX/ref=sr_1_8?__mk_it_IT=%
C3%85M%C3%85%C5%BD%C3%95
%C3%91&crid=3AESCF6VKG6B6&di
b=eyJ2IjoiMSJ9.3HlweLtFpKk8huuM4
tfcAbDSl2biH6iWGO7PXpXKxzQnVM
cKVrvCI0CkZanzuaduqvaeCs8DLxlFs
c_s4-qvSDCE8dvXDhuO4nHPwIhPAl
BnL5G6tLMycq0ZS0ZN83GAj_VOUc
GVLq4fdcfeurabYdPzrWf3PpwM6_-y
OlEOLVvlzzBKgQWO7fiMSCFuGA6
X4j8xVlNzobgrSfsnDNqZpEgH289rp
AslvAA9D2YEmvJSm0CRqWecsKPJ
iB8yNhelz01McT-qy3s6utg4_Thec18s
iTwIY2bFdQ5XYhkTzBxAF86lr6VMXZ
3Ym26ZiedQE1_7ceB7jYcyQ5mOMR
fx0d8pYVpg6Y2OqzifmZzNsQM._rEh
uS8xCOyhS7xqQQe9H3kwn-ppl22Rf
VmzFpFpyW0&dib_tag=se&keyword
s=m4x80%2Bviti%2Btesta%2Bsvasat
a&nsdOptOutParam=true&qid=17347
12214&s=industrial&sprefix=m4x80%
2Bviti%2Btesta%2Bsvasata%2Cindu
strial%2C141&sr=1-8&th=1		M4x80 - Flat head
ScrewsGlobstarhttps://www.amazon.it/testa-svasata-
impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RJ
S9NT/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3
%85M%C3%85%C5%BD%C3%95%
C3%91&crid=15MBBIPYCF06S&dib
=eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIko
N0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64T
nTN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZvO
Evle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQFWe
SMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQntEIA
hyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkmXcWFo
zXK-eTFnle6uFI4nXhbCXTWjM5MP_
sNolDP0O4HS7Bnxk_wanuwC9zEuH
ZeVNsejl6gwYR0IlJK5iu0V9Y-bgFcr1-
iTBhrARDKG7-0Nc5188TSaN9snT7K
6yO2J3ctfC24PTGnaZAFYKMvrNqz
OAihVBKIW8xOhIx0ZRipPa9ggsMs
_pe1VgY2dCXtUrE_bo1dd4oGlUuw
.v5iiMZ2rMQlZlZs2WDyqM_mo1utvu
PD71Jyb-O7BY1Y&dib_tag=se&key
words=m5x8+viti+testa+svasata&ns
dOptOutParam=true&qid=17347123
79&s=industrial&sprefix=m5x8+viti+
testa+svasata%2Cindustrial%2C201
&sr=1-30		M5x8 - Flat head
ScrewsGlobstarhttps://www.amazon.it/testa-svasata-
impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH
M4BY/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3
%85M%C3%85%C5%BD%C3%95%
C3%91&crid=15MBBIPYCF06S&dib=
eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIkoN
0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64Tn
TN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZvO
Evle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQFW
eSMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQnt
EIAhyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkmX
cWFozXK-eTFnle6uFI4nXhbCXTW
jM5MP_sNolDP0O4HS7Bnxk_wan
uwC9zEuHZeVNsejl6gwYR0IlJK5iu
0V9Y-bgFcr1-iTBhrARDKG7-0Nc5
188TSaN9snT7K6yO2J3ctfC24PTG
naZAFYKMvrNqzOAihVBKIW8xOhI
x0ZRipPa9ggsMs_pe1VgY2dCXtUr
E_bo1dd4oGlUuw.v5iiMZ2rMQlZlZs
2WDyqM_mo1utvuPD71Jyb-O7BY
1Y&dib_tag=se&keywords=m5x8%
2Bviti%2Btesta%2Bsvasata&nsdOpt
OutParam=true&qid=1734712379&s
=industrial&sprefix=m5x8%2Bviti%2
Btesta%2Bsvasata%2Cindustrial%2
C201&sr=1-30&th=1		M5x10 - Flat head
ScrewsGlobstarhttps://www.amazon.it/testa-svasata-
impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH
9SYZ/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3
%85M%C3%85%C5%BD%C3%95%
C3%91&crid=15MBBIPYCF06S&dib
=eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIko
N0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64T
nTN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZv
OEvle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQF
WeSMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQ
ntEIAhyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkm
XcWFozXK-eTFnle6uFI4nXhbCXT
WjM5MP_sNolDP0O4HS7Bnxk_w
anuwC9zEuHZeVNsejl6gwYR0IlJK5
iu0V9Y-bgFcr1-iTBhrARDKG7-0Nc5
188TSaN9snT7K6yO2J3ctfC24PTG
naZAFYKMvrNqzOAihVBKIW8xOhIx
0ZRipPa9ggsMs_pe1VgY2dCXtUrE
_bo1dd4oGlUuw.v5iiMZ2rMQlZlZs2
WDyqM_mo1utvuPD71Jyb-O7BY1Y
&dib_tag=se&keywords=m5x8%2Bvi
ti%2Btesta%2Bsvasata&nsdOptOutP
aram=true&qid=1734712379&s=indus
trial&sprefix=m5x8%2Bviti%2Btesta%
2Bsvasata%2Cindustrial%2C201&sr=
1-30&th=1		M6x20 - Flat head
SD cardSanDiskhttps://www.amazon.it/SanDisk-Ultra-
Scheda-memoria-classe/dp/B08GYG6
T12/ref=sr_1_8?crid=3ETH6HJL8VKD
A&dib=eyJ2IjoiMSJ9.5omqicizrizfHo8r
pPQ6sWJ_C0sfwUqPQv6VrziwK-SCX
4-aSgFGois1pfvTwB0SuDxdNjByo2zU
fBonWwUKAf3clazXEIGNl0GhojQmvj
Bt_6RS31QcAM5Y50BpAdndMXIHy9
iGTswgYEwnbt9uj56G_soC6OdPiTvr
W3M8jwtTxQDUl8UcHZeRMPq0T8sd
v4hskHGmipFItAzE1lyDiy0otrqUhz-ph
OggXBAM6gMyGf0qBtU1AFwfj81Shl
HS2qojCiRq_JLKyBkc_Y4P_V1YtsGc
MxnoG6YzYowwEYbX7uTFWJB-Wvc
B_vYw-D5s0B-HDSYRSl-C60yhtqhrUw
grg9w6PN5U5s01vos4bauIgIN6lOez1
tz2OHwL5YL3QCHKxNnJV0IM42cH0
du8fIEIbUwYC5jRLqowx1UyaQKQ4W
WaGozdZ9l5qUoeQ7KU.iOPo2BYLK
STjqjB8BevaVgPa5QD7BuP9CieN6u
4_Qeo&dib_tag=se&keywords=sd%
2Bcard%2Bsandisk&nsdOptOutParam
=true&qid=1734704871&sprefix=SD%
2Bcard%2Bsan%2Caps%2C141&sr=8-8&th=1		SanDisk 32 GB Extreme PRO SD card, UHS-I
Self-aligning Flange bearingBrateuanoiiKFL088 mm inner diameter
Slicing softwareUltimaker Curahttps://ultimaker.com/it/software/
ultimaker-cura/?gad_source=1&
gclid=CjwKCAiAyJS7BhBiEiwAy
S9uNUjnbkNIYNUco6YaZYHcFT
2tqBac23MU4Qx3FaMXjl_UifJ_
k8as3BoCeVkQAvD_BwE		Ultimaker Cura 4.9.0
SpringsYIXISIhttps://www.amazon.it/sspa/click?ie
=UTF8&spc=MTo4NDAzNDQ1MzM
0OTUyODQzOjE3MzQ3MDQ4MD
c6c3BfYXRmOjMwMDM5MDQzMz
kzODAzMjo6MDo6&url=%2FYIXIS
I-Assortimento-Estensione-Compre
ssione-Dispositivi%2Fdp%2FB0DD
T3KTBF%2Fref%3Dsr_1_1_sspa%
3F__mk_it_IT%3D%25C3%2585M
%25C3%2585%25C5%25BD%25
C3%2595%25C3%2591%26crid%
3D1NT7CA1YJGWK4%26dib%3D
eyJ2IjoiMSJ9.IhFmevq0fXTGGwE
cGvfUxxLOudQqQcPjSGXlWklXO
HY2Ahr2XxWSg6MaNBgZ71N1pQ
h9Wkp5c2ary4Hm2xVi4dTH8Ny4
4-OhlcrTn0G8emvX66Zu7U0LGm
xGYKyKCGxzlhwYC4EnlmTSH_O
JnA5oG-BQzuxFBdCrce0txErCEm
S40xONaaYp2R5yMiPDw2PqsPP
jLmoSCYs4XctxEvAwn_5rp71t0U
QsZNku6-jDiiuh5klpC9DsnjipLFP
unRCbITWnw6wslENLdJtPDOGF
8vbO5WFf7PnUy4BZ7tUPt7I.B6j
eUKwx1_t0sPaxmSHYVbRd1MG
w-kosEYkHuKlPtpQ%26dib_tag%
3Dse%26keywords%3Dmolle%2B
YIXISI%26nsdOptOutParam%3Dtr
ue%26qid%3D1734704807%26spr
efix%3Dmolle%2Byixisi%252Caps
%252C137%26sr%3D8-1-spons%2
6sp_csd%3Dd2lkZ2V0TmFtZT1zcF
9hdGY%26psc%3D1
Stepper motorTwotrees 123417HS4401Stepper motor bipolar NEMA 17 42 Ncm 1.5 A
Stepper motorSTEPPERONLINEUL1007AWG6Stepper motor bipolar NEMA 17 42 Ncm 1.5 A
Stepper motor fixing bracketYOTINOhttps://www.amazon.it/gp/product/
B07D7XH97T/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
Threaded nut M2RS-components281-984
Threaded nut M3RS-components281-984
Threaded nut M4RS-components281-984
Threaded nut M5RS-components281-984
Threaded nut M6RS-components281-984
TRAMP - C1 cell lineATCCCRL-2730Epithelial cell line isolated from the prostate of an adult male transgenic mouse with adenocarcinoma
Trypan blueGibco Thermofisher15250061
TrypsinGibco Thermofisher15400054Sterile

References

  1. Patel, T., et al. Multicellular tumor spheroids: A convenient in vitro model for translational cancer research. Life Sci. 358, 123184 (2024).
  2. Tanaka, M., et al. Emerging translational research in neurological and psychiatric diseases: From in vitro to in vivo models. Int J Mol Sci. 24 (21), 15739 (2023).
  3. De Maria Marchiano, R., et al. Translational research in the era of precision medicine: Where we are and where we Will Go. J Pers Med. 11 (3), 216 (2021).
  4. Knowlton, S., et al. Bioprinting for cancer research. Trends Biotechnol. 33 (9), 504-513 (2015).
  5. McGranahan, N., et al. Biological and therapeutic impact of intratumor heterogeneity in cancer evolution. Cancer Cell. 27 (1), 15-26 (2015).
  6. Van Zundert, I., et al. From 2D to 3D cancer cell models-The enigmas of drug delivery research. Nanomaterials. 10 (11), 2236 (2020).
  7. Hoarau-Véchot, J., et al. Halfway between 2D and animal models: Are 3D cultures the ideal tool to study cancer-microenvironment interactions. Int J Mol Sci. 19 (1), 181 (2018).
  8. Yamada, K. M., et al. Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D. Cell. 130 (4), 601-610 (2007).
  9. Manduca, N., et al. 3D cancer models: One step closer to in vitro human studies. Front Immunol. 14, 1175503 (2023).
  10. Wang, L., et al. The 3D revolution in cancer discovery. Cancer Discov. 14 (4), 625-629 (2024).
  11. Benton, G., et al. Multiple uses of basement membrane-like matrix (BME/Matrigel) in vitro and in vivo with cancer cells. Int J Cancer. 128 (8), 1751-1757 (2011).
  12. Benton, G., et al. Matrigel: From discovery and ECM mimicry to assays and models for cancer research. Adv Drug Deliv Rev. 79-80, 3-18 (2014).
  13. Rawal, P., et al. Prospects for 3D bioprinting of organoids. Bio-Design Manuf. 4 (3), 627-640 (2021).
  14. Hou, S., et al. Advanced development of primary pancreatic organoid tumor models for high-throughput phenotypic drug screening. SLAS Discov Adv Sci Drug Discov. 23 (6), 574-584 (2018).
  15. Kane, K. I. W., et al. Determination of the rheological properties of Matrigel for optimum seeding conditions in microfluidic cell cultures. AIP Adv. 8 (12), 125332 (2018).
  16. De Stefano, P., et al. Bioprinting of Matrigel scaffolds for cancer research. Polymers. 13 (12), 2026 (2021).
  17. Hatzikiriakos, S. G., et al. Role of slip and fracture in the oscillating flow of HDPE in a capillary. J Rheol. 36 (5), 845-884 (1992).
  18. Kalika, D. S., et al. Wall slip and extrudate distortion in linear low-density polyethylene. J Rheol. 31 (8), 815-834 (1987).
  19. Molenaar, J., et al. Modeling polymer melt-flow instabilities. J Rheol. 38 (1), 99-109 (1994).
  20. Valot, L., et al. Chemical insights into bioinks for 3D printing. Chem Soc Rev. 48 (15), 4049-4086 (2019).
  21. Sundaramurthi, D., et al. 3D bioprinting technology for regenerative medicine applications. Int J Bioprinting. 2 (2), 9-26 (2016).
  22. Maloney, E., et al. Immersion bioprinting of tumor organoids in multi-well plates for increasing chemotherapy screening throughput. Micromachines. 11 (2), 208 (2020).
  23. Snyder, J. E., et al. Bioprinting cell-laden Matrigel for radioprotection study of liver by pro-drug conversion in a dual-tissue microfluidic chip. Biofabrication. 3 (3), 034112 (2011).
  24. Patil, L. S., et al. Toward measuring the mechanical stresses exerted by branching embryonic airway epithelial explants in 3D matrices of Matrigel. Ann Biomed Eng. 50 (9), 1143-1157 (2022).
  25. Lai, V. K., et al. Swelling of collagen-hyaluronic acid co-gels: An in vitro residual stress model. Ann Biomed Eng. 44 (10), 2984-2993 (2016).
  26. Lam, N. T., et al. Fabrication of a Matrigel-collagen semi-interpenetrating scaffold for use in dynamic valve interstitial cell culture. Biomed Mater. 12 (4), 045013 (2017).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE217ECM

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved