Проектирование и валидация объемно-экструзионного биопринтера для биопечати растворимого экстракта базальной мембраны для трансляционных исследований

Резюме

Растворимые экстракты базальной мембраны являются наиболее широко используемыми биологическими матрицами в исследованиях рака, но их сложное реологическое поведение затрудняет их биопечать с коммерчески доступными системами биопечати. В этой работе представлена индивидуальная стратегия биопечати для создания чистых матричных конструкций с хорошей точностью формы как в однослойном, так и в нескольких слоях.

Аннотация

В трансляционных исследованиях 3D-модели in vitro имеют важное значение для продвижения научного понимания и терапевтических разработок. С этой целью растворимые экстракты базальной мембраны (SBM), полученные из клеток саркомы мыши, играют ключевую роль в воспроизведении механических и биохимических особенностей микроокружения in vivo . Они особенно ценны в различных областях исследований, от тканевой инженерии до тестирования лекарств. В частности, они стали основополагающими в исследованиях рака, поскольку традиционные двухмерные клеточные культуры, широко используемые в этой области, могут предоставлять вводящую в заблуждение информацию, поскольку они не захватывают трехмерную (3D) структуру и микроокружение опухоли.

В исследованиях рака эффективные 3D-модели in vitro имеют решающее значение для лучшего понимания эволюции рака и прогнозирования проблем, таких как механизмы лекарственной устойчивости. Органоиды стали многообещающими 3D-моделями in vitro , предлагающими более точное представление биологии опухоли. Они растут в SBM, поскольку создают среду, в которой клетки могут расти и самоорганизовываться в 3D-структуры. Тем не менее, SBMe сопряжен со значительными проблемами, включая низкие механические свойства и сложные реологические свойства, что не позволяет использовать его с коммерчески доступными системами пневматической экструзионной биопечати.

Чтобы устранить эти ограничения, мы разработали недорогую систему биопечати с контролем объема и специальный протокол для печати структур с помощью SBMe. Эта система основана на объемном экструдере и преодолевает ограничения традиционных подходов с пневматическим приводом. После сборки и программирования с помощью определенного g-кода система может биопечатать как чистый, так и разбавленный SBMe для получения как однослойных, так и многослойных конструкций. Этот подход предлагает более надежный и масштабируемый метод создания 3D-моделей клеточных культур, прокладывая путь к более эффективным исследованиям новых методов лечения и тестированию лекарств.

Введение

В трансляционных исследованиях создание 3D-моделей in vitro, которые точно воспроизводят окружающую среду in vivo, имеет важное значение для продвижения научного понимания и терапевтических разработок¹. Ключевым компонентом в их создании является использование аналогов внеклеточного матрикса (ECM), таких как растворимые экстракты базальной мембраны (SBM), которые лучше отражают сложность естественных тканей. SBM особенно ценны в различных областях исследований, от тканевой инженерии до тестирования лекарств ^2,3. В частности, они стали фундаментальными в исследованиях рака, поскольку они воспроизводят механические и биохимические особенности микроокружения опухоли, что позволяет разрабатывать модели, которые лучше отражают рост опухоли, метастазирование и реакцию на лечение.

Действительно, несмотря на значительные достижения за последние несколько десятилетий, многие методы лечения по-прежнему терпят неудачу, что приводит к частым неудачам лечения в клинических условиях. Этот сбой часто связывают с механизмами лекарственной устойчивости, вызванными высокими уровнями клеточной гетерогенности4,5. Эффективные модели in vitro, способные точно повторять сложность опухолей человека, имеют решающее значение для лучшего понимания эволюции рака и прогнозирования этого явления.

Традиционные двумерные клеточные культуры играют основополагающую роль в исследованиях рака, но могут привести к вводящей в заблуждение информации об эффективности лекарств и поведении опухоли, поскольку они не в состоянии охватить трехмерную структуру и микроокружение реальных^{опухолей.} В отличие от этого, 3D-модели in vitro стали многообещающими альтернативами, предлагающими более точное представление микроокружения опухоли и биологического поведения, имитируя 3D-сложность ^9,10.

В исследованиях рака органоиды широко используются в качестве 3D-моделей для изучения болезней и эффективности лекарств, поскольку они обеспечивают более точные и актуальные модели тканей и органов человека. Использование SBMe, полученного из клеток саркомы мышей Энгельбрета-Холма-Роя, сыграло ключевую роль в^{продвижении исследований рака.} Он обеспечивает гелеобразный субстрат, в котором клетки могут расти, размножаться и самоорганизовываться в органоидные структуры, обеспечивая надлежащее развитие и рост^13,14.

Тем не менее, SBMe создает ряд проблем из-за своих уникальных и сложных характеристик. Будучи неньютоновской жидкостью, SBMe обладает свойствами разжижения при сдвиге, что означает, что ее вязкость уменьшается с увеличением напряжения сдвига, что делает ее обращение и применение нестабильными при переменных силах. Кроме того, его тиксотропное поведение добавляет сложности, так как он может восстанавливать свою вязкость с течением времени при устранении напряжения сдвига^15,16. Эти свойства, наряду с низкой механической прочностью (со значениями модуля накопления от 10 Па до 5000 Па в зависимости от концентрации белка) и термочувствительными свойствами, усугубляют эти проблемы, требуя тщательного контроля во время приготовления и использования, а также биопечати в чистом виде.

Стандартные пневматические системы биопечати не могут должным образом контролировать дозирование SBMe, поскольку приложение давления вызывает неконтролируемое поведение после его выброса из шприца. На него воздействует явление, аналогичное описанному для полимерных расплавов «рывку», при котором скорость потока резко возрастает выше определенного критического значения давления 17,18,19. Как сообщалось в нашей предыдущей работе¹⁶, стратегия дозирования с объемным управлением позволяет отделить экструзию SBMe от давления, создаваемого в дозаторе, которое зависит от реологических свойств матрицы, условий работы и геометрии сопла. В последние годы на рынке было предпринято несколько попыток использовать тот же принцип, и Matribot от Corning лидирует. Он позволяет обрабатывать и осаждать SBMe и другие термочувствительные биочернила благодаря контролируемым температурным условиям. Однако это может быть дорого, что ограничивает доступность для небольших лабораторий.

В нашей предыдущей статье мы представили недорогую альтернативу на заказ — систему объемной биопечати¹⁶. Эта версия была основана на модифицированном 3D-принтере начального уровня с пользовательским экструдером, напечатанным на 3D-принтере. Несмотря на свою эффективность в биопечати, она имела некоторые ограничения в повторяемости печати. Будучи созданным на основе 3D-принтера начального уровня, он имел некоторые проблемы с Z-движениями и автоматическим самонаведением. Чтобы удовлетворить эти потребности, мы разработали усовершенствованную версию нашей специализированной недорогой системы объемного дозирования и специальный протокол для биопечати структур с использованием SBMe.

Здесь мы предоставляем протоколы для создания и использования этой системы. Он состоит из специального экструдера с объемным управлением, основанного на нашем предыдущем исследовании¹⁶, корпуса биопринтера и системы управления. Производство и сборка производятся для каждого модуля. При сборке и программировании с помощью определенного файла gcode, в соответствии с описанием протокола для работы с матрицей, система способна биопечатать чистые или разбавленные конструкции с использованием SBMe с хорошей точностью формы как в одном, так и в нескольких слоях.

протокол

1. 3D печать и сборка объемного биопринтера

1. Подготовьте и напечатайте на 3D-принтере компоненты биопринтера.
   1. Загрузите файл *. Файлы проекта STL из Дополнительного файла 1.
   2. Груз*. STL в запатентованном программном обеспечении для нарезки для определения ориентации деталей на печатной форме и всех параметров, необходимых для 3D-принтера. Печатайте детали с использованием полимолочной кислоты (PLA) со средним качеством (размер сопла 0,4 мм, диаметр филамента 1,75 мм, температура экструдера 220 °C, температура печатной платформы 50 °C, высота слоя 0,2 мм, скорость печати 300 мм/с).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Варианты среднего качества могут отличаться в зависимости от принтера, используемого для печати деталей.
   3. Отсоедините напечатанные детали от станины 3D-принтера. Удалите напечатанные несущие конструкции, если таковые имеются, и при необходимости отполируйте поверхности.
2. Соберите экструдер (Рисунок 1).
   1. Вставьте два линейных шарикоподшипника (LM4UU) в вертикальные отверстия толкающего блока. Вставьте также гайку ходового винта T8 в заднее центральное отверстие и закрепите ее четырьмя винтами (M3x10).
   2. Прикрепите к шаговому двигателю муфту с жестким валом, а затем закрепите ее на корпусе двигателя экструдера с помощью четырех винтов (M3x6).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Сориентируйте шаговый двигатель в соответствии с канавкой в корпусе двигателя экструдера, чтобы обеспечить правильное расположение гнезда для кабелей.
   3. Закрепите шаговый двигатель, собранный на шаге 1.2.2, на ходовом винте T8 (150 мм) с помощью ранее вставленной муфты жесткого вала. Убедитесь, что каждый блок правильно закреплен установочными винтами.
   4. Прикрепите один самоустанавливающийся фланцевый подшипник (внутренний диаметр 8 мм) в нижней части основания экструдера с помощью двух винтов (M4x8).
   5. Вставьте два шарикоподшипника (4 x 9 x 4 мм) в определенные отверстия в верхней части основания экструдера, а два других - в отверстия в нижней части.
   6. Вставьте собранную деталь (шаг 1.2.1) в основание экструдера через полость в верхней части конструкции. Соедините четыре шарикоподшипника (шаг 1.2.5) двумя штоками диаметром 4 мм, по одному с каждой стороны. Пропустите стержни через два линейных шарикоподшипника в собранной части на шаге 1.2.1.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Также можно сначала вставить стержни на двух верхних шарикоподшипниках, а затем поместить их в основание экструдера, пока они не достигнут нижнего шарикоподшипника и все не будет закреплено в определенных пазах.
   7. Вставьте собранную деталь на шаге 1.2.3 в центральное отверстие основания экструдера. Поверните ходовой винт, чтобы пройти через гайку ходового винта и дойти до самоустанавливающегося фланцевого подшипника. С помощью установочных винтов в компоненте зафиксируйте ходовой винт и два винта (M3x8) для крепления корпуса двигателя экструдера в верхней части основания экструдера.
   8. С помощью двух других винтов (M3x40) и гаек M3 прикрепите фиксатор фланца цилиндра шприца к нижней части основания экструдера, чтобы зафиксировать фланец цилиндра шприца (направление вставки сверху вниз). С помощью двух других винтов (M3x30) и гаек M3 прикрепите фиксатор поршня шприца к верхним отверстиям блока толкателя (направление вставки снизу вверх) для фиксации фланца плунжера.
   9. Вставьте два винта (M4x80) в две пружины и пропустите их через отверстия в нижней части основания экструдера и шприцевого блока. Закрутите гайки, оставив место для шприца, чтобы избежать соскальзывания шприцевого блока.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Винты должны идти сзади вперед.
3. Соберите ось X (рис. 2).
   1. Вставьте четыре линейных шарикоподшипника (LM8UU x 24 мм) в X_Left_Block и X_Right_Block детали в верхнем и нижнем отверстиях, по два на каждое. Прикрепите также два блока ремня поверх X правого и X левого блоков с помощью винтов (M2x10), оставив место для ремня.
   2. Вставьте два шарикоподшипника (5 x 16 x 5 мм) в центральные отверстия X_Right_Block, по одному с каждой стороны. Поместите шкив (отверстие 5 мм) во внутреннюю полость X_Right_Block и соедините два шарикоподшипника стержнем диаметром 5 мм (длина 35 мм), пропустив его через шкив.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте более длинный стержень для сборки, чтобы обеспечить лучшую управляемость. Расположив детали на месте, отрежьте стержень нужной длины.
   3. Прикрепите к X_motor_housing концевой выключатель двумя винтами (M3x8). Вставьте двигатель NEMA 17 в корпус двигателя и с помощью четырех винтов (M3x8) закрепите крышку X_block_1 к корпусу двигателя и двигателю.
   4. Прикрепите шкив (отверстие 5 мм) к двигателю и зафиксируйте его установочными винтами, а затем прикрутите собранную деталь в соответствии с пунктом 1.3.3 до X_block_1 четырьмя винтами (M5x8). Прикрепите также концевой выключатель в нижней части X_Left_Block двумя винтами (M3x8).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Наружный диаметр шкивов в пунктах 1.3.2 и 1.3.4 должен быть одинаковым.
   5. Поместите два линейных шарикоподшипника (LM8UU x 45 мм) в отверстия в верхней и нижней части X_slider.
   6. Соедините собранные детали на шагах 1.3.2 и 1.3.4 двумя стержнями по 8 мм (длиной 200 мм) и пропустите их через собранную деталь на шаге 1.3.5.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Перед сборкой обрежьте стержни нужной длины.
   7. Зафиксируйте один конец ремня на X_slider_belt_connection с помощью ременной колодки и двух винтов (M2x8). Проведите ремень вокруг шкива в собранной детали 1.3.4, затем вокруг шкива в собранной детали 1.3.2 и зафиксируйте другой конец ремня к X_slider_belt соединению с помощью второго ременного блока и двух других винтов (M2x8). Убедитесь, что ремень правильно затянут для правильного движения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Во время этого шага X_slider необходимо переместить к одному концу конструкции оси X, чтобы избежать помех.
   8. Прикрутите X_slider_belt_connection к X_slider одним винтом (М6х20).
   9. Подключите экструдер к X_slider и зафиксируйте его четырьмя винтами (М5х10).
4. Соберите ось Y (Рисунок 3).
   1. Установите крепежный кронштейн на верхнюю заднюю часть биопринтера с помощью четырех винтов (M3x10) и четырех гаек.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Положение крепежного кронштейна может быть адаптировано для обеспечения надлежащего натяжения ремня и возможности вставки шагового двигателя.
   2. Вставьте шаговый двигатель в фиксирующий кронштейн и прикрутите его четырьмя винтами (M3x8). Далее установите шкив (отверстие 5 мм) на коленчатый вал и зафиксируйте его установочными винтами.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Шкив можно прикрепить к коленчатому валу перед установкой двигателя в крепежный кронштейн, чтобы избежать некоторого вмешательства между компонентами.
   3. Найдите два шкива (внутренний диаметр 8 мм) на переднем штоке диаметром 8 мм и зафиксируйте их на двух стержнях (на расстоянии 2,5 см от конца). Повторите эту операцию для заднего стержня и добавьте еще один шкив, удаленный на 5 см от правого конца.
   4. Прикрепите 12 самоустанавливающихся фланцевых подшипников (диаметр 8 мм) к внутренним верхним частям биопринтера.
   5. Соедините две передние части биопринтера и две верхние задние части биопринтера (направление влево/вправо) с помощью собранных стержней в шаге 1.4.3 и зафиксируйте их на самоустанавливающихся фланцевых подшипниках (диаметр 8 мм). Закрепите две собранные детали во всех местах соединения винтами (M3x8).
      ПРИМЕЧАНИЕ: При установке заднего штока установите замкнутый ремень, который соединяет шкив на шаговом двигателе с внутренним шкивом на штоке.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Закрепите шаговый двигатель, затянув гайки, чтобы обеспечить отсутствие движения двигателя и надлежащее натяжение ремня.
   6. Соедините две собранные детали на шаге 1.4.5 с помощью четырех стержней по 8 мм. Пропустите стержни через линейные шарикоподшипники, присутствующие в собранной детали 1.3, и зафиксируйте их на самоустанавливающихся фланцевых подшипниках (диаметр 8 мм). Закрепите две собранные детали во всех местах соединения винтами (M3x8).
   7. Зафиксируйте открытый конец ремня на верхней части X_block_1 с помощью блока ремня и повторите эту операцию для X_block_2. Протяните ремень вокруг задних шкивов слева, затем вокруг переднего шкива и снова закрепите другой конец ремня на X_block_1 с помощью другого ременного блока. Повторите эту операцию для второго ремня.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Ремни должны быть правильно затянуты для обеспечения правильного движения и одинаковой длины, чтобы избежать изгиба или помех при движениях по букве Y.
5. Соберите ось Z (рис. 4).
   1. Закрутите между собой нижние детали корпуса биопринтера (M4x8).
   2. Прикрепите один самоустанавливающийся фланцевый подшипник (диаметром 8 мм) к полу нижней части собранной детали в шаге 1.5.2.
   3. Винтами (M3x8) закрепите два фланцевых линейных шариковых подшипника (LMH8UU) на внешних отверстиях в Z_slider и одну гайку ходового винта в центральном отверстии (M3x8).
   4. Зафиксируйте концевой выключатель с Z_plane левой стороны двумя винтами (M3x8).
   5. Закрепите шаговый двигатель на жесткой муфте вала. Прикрепите к Z_block шаговый двигатель четырьмя винтами (M3x20) и резьбовым стержнем к муфте жесткого вала. Убедитесь, что каждый блок правильно закреплен установочными винтами.
   6. Соедините собранную деталь на шаге 1.5.5 с основанием биопринтера с помощью двух стержней по 8 мм. Пропустите их через собранную деталь на шаге 1.5.3.
   7. Закрепите Z_block на задней панели с помощью двух винтов (M5x8).
   8. Подсоедините Z_plane к Z_slider с помощью четырех винтов (M3x25). Вставьте их в Z_plane отверстия сверху вниз, проденьте пружину между Z_plane и Z_slider, и закрепите гайками. Отрегулируйте натяжение пружины, чтобы выровнять плоскость.
   9. Прикрепите четыре регулируемые ножки под конструкцию биопринтера в конкретной полости. Выровняйте биопринтер, отрегулировав ножки.
   10. Соедините собранную деталь с собранной деталью на шаге 1.4.6 восемью винтами (M4x12).
   11. Прикрепите винтами два шарнира на передней части конструкции в определенных местах и один магнит в правой части в соответствующем месте (M2x8). Прикрутите общую конструкцию к прозрачным листам оргстекла толщиной 2 мм, чтобы закрыть проемы.
       ПРИМЕЧАНИЕ: Прикрутите переднюю панель из плексигласа к петлям и вставьте еще один винт в соответствии с магнитом, чтобы получить переднюю дверь.
6. Отобразите сборку (рисунок 5A).
   1. Пропустите провода, подключенные к дисплею, через нижнее отверстие и прикрепите дисплей к корпусу дисплея четырьмя винтами (M3x3).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Этот проход должен быть выполнен без крышки ручки ЖК-дисплея. Он может быть расположен на предустановленной ручке после крепления к корпусу дисплея.
   2. Закройте корпус крышкой с помощью четырех винтов (M2x6).
   3. Вставьте SD-карту в левый слот.
   4. Пропустите провода через отверстие в верхней части конструкции. Прикрутите собранную деталь в верхней части биопринтера двумя винтами (M3x8).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Все провода (двигатели, концевые выключатели и дисплей) будут проходить близко к стене и выходить из нижнего левого отверстия. Они фиксируются кабельными зажимами, чтобы избежать помех механическим частям.
7. Сборка электроники (Рисунок 5B)
   1. Закрепите гнездо на внешней части электронного корпуса двумя винтами (M3x10).
   2. Закрепите материнскую плату во внутренней части электронного корпуса четырьмя винтами (M3x10).
   3. Прикрепите нижнюю часть блока питания к внутренней части электронного корпуса четырьмя винтами (M3x8).
   4. Пропустите провода через круглое отверстие на крышке и подключите их к материнской плате. Закройте электронный корпус крышкой с помощью четырех винтов (M3x10).
      ПРИМЕЧАНИЕ: В случае небольших рабочих мест корпус электроники можно подключить к конструкции биопринтера или оставить его на столе.
      На рисунке 6 показаны все электронные кабельные соединения. Они могут немного отличаться в зависимости от используемой материнской платы 3D-принтера.

2. Настройка программного обеспечения и процесс генерации gcode

1. Подготовка настроек программного обеспечения для нарезки
   1. Откройте программу для нарезки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Инструкции могут отличаться в зависимости от используемого программного обеспечения или версии.
   2. Авторизуйтесь на платформе.
   3. Перейдите в раздел «Настройки ». Выберите принтер, а затем добавьте принтер, не подключенный к сети. Выберите пользовательский принтер FFF и в поле Имя принтера введите имя принтера. Нажмите « Добавить».
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если это первая установка программного обеспечения, панель «Добавить принтер » автоматически откроется после входа в систему.
   4. В окне Настройки машины измените настройки по умолчанию x, y, z на 176, 120, 45 мм.
   5. Снимите флажок Кровать с подогревом , если его выбор еще не снят.
   6. Вставьте в панели «Начальный g-код » и «Конечный g-код » текстовые строки, указанные в файлах под названием «JoVE_Starting_G-code.txt» и «JoVE_Ending_G-code.txt» в дополнительном файле 2.
      1. Измените значение 150 в строке «M92 E150» в начальном файле g-кода в соответствии с применяемой скоростью потока. Оцените правильное значение по следующей формуле:
         
         где Q — требуемый расход [μл/мин].
         ПРИМЕЧАНИЕ: Эта формула была получена экспериментально с помощью описанной системы. Ситуация может измениться, если произойдут изменения в механических или электрических компонентах. Возможной альтернативой может быть фиксация значения в соответствии с используемой системой и создание пользовательского кода MATLAB для генерации желаемого файла gcode.
   7. Измените значение Совместимый диаметр материала на панели Экструдер 1 на 1,75 и закройте.
   8. Перейдите в Marketplace, выберите плагин Z Offset Setting и установите его. В конце процесса перезапустите программное обеспечение для завершения. Когда он снова откроется, выберите Настройки | Принтер | Управление принтерами на панели инструментов. В окне «Настройки » нажмите « Настройки » и активируйте все параметры, выбрав « Отметить все », и закройте его.
   9. Настройте настройку, нажав на кнопку «Параметры печати » (третья кнопка) в меню этапа , которое содержит панель конфигурации . Введите процент заполнения в текущем профиле печати на панели конфигурации . Нажмите кнопку Пользовательский , чтобы изменить текущие настройки печати и профиль Тонкая в выпадающем меню. Установите скорость печати на 10 мм/с.
2. Подготовка gcode
   1. Загрузите файл *. Файл проекта STL, озаглавленный «JoVE_Square», из Дополнительного файла 2 этой статьи.
   2. Груз. STL в программное обеспечение для нарезки.
   3. Расположите деталь на плоской поверхности и переместите ее в координаты 65, 42,5, 0 (X, Y, Z) мм. Создайте две копии, нажав на кнопку . STL-файла в списке объектов и выбрав опцию умножения выбранного . Переместите их в следующие координаты: 16, 42,5, 0 мм и -33, 42,5, 0 мм (X, Y, Z).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Невозможно автоматически определить порядок печати, если он не был изменен вручную непосредственно в окончательном файле gcode. Координаты определены для 6-луночной пластины.
   4. Перейдите в Настройки печати в меню этапа . В разделе Стены укажите 0 как Количество линий стены. Укажите 0 в качестве значения толщины сверху/снизу в разделе Верх/Низ . На панели «Заполнение » вставьте следующие значения: Образец заполнения: Сетка, Расстояние между линиями заполнения: 5 мм, Направления линий заполнения: [0].
      ПРИМЕЧАНИЕ: В разделе «Скорость печати» можно уменьшить скорость перемещения, чтобы повысить точность по оси X.
   5. Отключите отзыв в разделе Путешествия и напечатайте охлаждение в разделе Охлаждение .
   6. В разделе Адгезия монтажной пластины выберите Нет в качестве типа адгезии рабочей пластины, а в разделе Специальные режимы выберите параметр Один за раз в качестве последовательности печати.
   7. Нажмите на кнопку «Нарезать », чтобы сгенерировать g-код.
   8. Откройте файл g-code с помощью приложения «Блокнот» и удалите строки «M104 S200», «M105» и «M109 S200» в строке 12 после фразы «; Сгенерировано с помощью Cura_SteamEngine 4.9.0".
   9. Добавить "G1 Z25" перед следующей строкой: "; СЕТКА: JoVE_Square_rev. STL(6)" и разделите следующий на два: (1) G0 F3600 X142.46 Y7.499 и (2) G1 Z0.3.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Координаты X и Y приведены только в примере.
   10. Измените значение Z на Z25 в каждой строке, присутствующей после "; TIME_ELAPSED" комментируйте все до последнего слоя инструкции по каждой части.
       ПРИМЕЧАНИЕ: Для печати только одной детали шаг 2.3.10 не требуется.

3. Испытание на набухание/деградацию

1. Подготовительные этапы
   1. Возьмите стерильный стеклянный шприц объемом 1 мл (терминал TLL) и стерильную коническую насадку 25 G. Соберите их и положите собранный шприц в холодильник.
   2. Поместите наконечники для пипеток и матричный флакон SBMe в холодильник на ночь за день до эксперимента.
   3. Напечатайте три сетки PLA (Φ = 20 мм) с круглыми порами размером 1 мм x 1 мм и боковой вертикальной стойкой, чтобы захватить их.
2. Печать конструкций
   1. Возьмите собранный шприц и матричный флакон SBMe из холодильника. Аспирируйте 500 мкл матрицы SBMe и поместите ее в инкубатор на 15 минут, чтобы дать возможность гелеобразованию.
   2. Достаньте шприц из инкубатора и поместите его в печатающую головку биопринтера. Убедитесь, что поршень шприца правильно соприкасается с толкающим блоком.
   3. Закрепите поршень крепления шприца и фланец цилиндра шприца с помощью фиксаторов поршня шприца, а цилиндр шприца - с зажимом шприца.
   4. Откалибруйте систему с помощью параметра «Авто домой » в меню биопринтера для автоматического определения начала координат осей.
   5. Перемещайте экструдер с помощью команды «Переместить оси» до тех пор, пока кончик иглы не коснется сетки PLA, чтобы вручную определить Z0.
   6. Начните печать, выбрав файл g-code для печати в меню биопринтера.
   7. Поместите многолуночную пластину в инкубатор на 2 минуты, чтобы SBMe остыл после экструзии.
   8. Возьмите многолуночный планшет и налейте 2 мл среды для клеточных культур в три лунки, содержащие биопечатные сетки. Поместите многолуночную пластину в инкубатор.
   9. В каждый момент времени (t0, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 1, 3, 7, 10 и 14 дней) возьмите каждую сетку с тарелки и высушите ее чистой бумагой, чтобы удалить избыток среды и веса на весах. Поставьте сетку обратно в тарелку, а затем в инкубатор для продолжения эксперимента. Оцените коэффициент набухания и скорость деградации по следующим формулам:
      
      Где W_t — вес конструкций в каждый момент времени, а W_t0 — вес высушенных конструкций.
      
      Где W_i — вес в конце испытания на набухание.

4. Биопечать конструкций SBMe

1. Подготовительные этапы
   1. Возьмите стерильный стеклянный шприц объемом 1 мл (терминал TLL) и стерильную коническую насадку 25 G и соберите их под шкафом биобезопасности. Положите их в стерильную коробку в холодильник.
   2. Поместите наконечники для пипеток и матричный флакон SBMe в холодильник на ночь (4 °C на льду) за день до эксперимента.
   3. Добавьте 20 μл трипанового синего в центрифужную пробирку объемом 1,5 мл.
   4. Установите центрифугу на 345 × г, 4 °C и дайте ей остыть (~3-4 часа).
   5. Наберите 5 мл воды в центрифужную пробирку объемом 15 мл в качестве весов для центрифуги.
   6. Подогрейте фосфатный буферный раствор (PBS) и среду на водяной бане.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Среда для культивирования клеток изготовлена из полностью модифицированной Dulbecco Eagle's среды (DMEM) с добавлением 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота (FBS), пенициллин-стрептомицина и L-глутамина.
   7. Поместите биопринтер под шкаф биологической безопасности. Стерилизовать под ультрафиолетовым светом в течение 20 минут.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы обеспечить правильную работу биопринтера, выполните функцию «Автоматическое возвращение» и проверьте правильность движений каждой оси и работу концевых выключателей.
2. Подготовка биочернил
   1. Возьмите колбу в инкубатор, содержащий коммерческие клетки рака предстательной железы мышей, и поставьте ее под шкаф биобезопасности.
   2. Извлеките питательную среду из колбы.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Объемы, указанные в данном протоколе, относятся к колбам T25 для клеточных культур.
   3. Промойте клетки один раз 2 мл PBS, а затем аспирируйте их.
   4. Добавьте 500 мкл трипсина и поместите колбу в инкубатор на 5 минут, чтобы дать возможность ячейке отделиться от тарелки.
   5. Проверьте ячейки на трипсинизацию и при необходимости аккуратно постучите по дну колбы.
   6. Добавьте в колбу 4,5 мл среды. Тщательно промойте планшет, чтобы убедиться, что все отделенные клетки плавают в среде для клеточных культур.
   7. Отсадите среду и добавьте ее в центрифужную пробирку объемом 15 мл.
   8. Возьмите аликвоту объемом 20 μл и смешайте ее с трипановой синей аликвотой. Затем налейте 10 μL этой смеси в камеру для подсчета клеток для подсчета живых клеток по следующей формуле:
      
      где f - коэффициент разбавления трипановой синей суспензии (соотношение 1:1); V – объем клеточной суспензии [мл].
   9. Центрифугируйте оставшуюся клеточную суспензию в течение 5 мин (345 × г, 4 °C).
   10. Удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте в холодную матрицу SBMe при желаемой плотности клеток (10⁶ клеток/мл)
   11. Аспират 800 мкл матричной суспензии, содержащей клетки, с помощью холодного шприца.
   12. Удалите пузырьки воздуха, которые могут застрять в шприце, и поместите его в стерильную коробку. Затем поместите его в инкубатор на 15 минут, чтобы дать возможность образоваться.
3. Процесс биопечати
   1. Возьмите шприц из инкубатора и вставьте его в печатающую головку биопринтера. Убедитесь, что поршень шприца правильно соприкасается с толкающим блоком.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Модель и объем должны совпадать со шприцем, используемым для эксперимента.
   2. Закрепите поршень крепления шприца и фланец цилиндра шприца с помощью фиксаторов поршня шприца, а цилиндр шприца - с зажимом шприца.
   3. Используйте гайки M4 в нижней части экструдера, чтобы отрегулировать давление пружины и зафиксировать шприц на месте.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Шаги с 4.3.1 по 4.3.4 показаны на рисунке 7.
   4. Откалибруйте систему с помощью параметра «Авто домой » в меню биопринтера для автоматического определения начала координат осей.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Этот отрывок всегда обеспечивает правильные первоначальные настройки, независимо от типа поддержки, которую мы используем для печати.
   5. Поместите пластину 6-multiwell на печатную плоскость.
   6. Перемещайте экструдер с помощью команды «Перемещать оси» до тех пор, пока кончик иглы не коснется дна лунки, чтобы вручную определить Z0.
   7. Выберите файл gcode в пункте меню биопринтера и начните печать. В каждой лунке будет напечатана квадратная шестислойная сетка (сторона 2,6 см).
   8. После процесса биопечати используйте перевернутый микроскоп, чтобы убедиться, что процесс печати прошел успешно, и поместите многолуночную пластину в инкубатор на 2 минуты, чтобы SBMe остыл после экструзии.
   9. В каждую лунку налейте по 2 мл среды для клеточных культур.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Объем должен полностью покрывать конструкции.

Результаты

В этой статье мы представляем протокол биопечати конструкций из SBMe с использованием недорогого, изготовленного на заказ, объемного биопринтера. Предоставляем подробное описание и 3D-печать*. STL для создания системы, и мы демонстрируем ее потенциальное использование в ...

Обсуждение

В трансляционных исследованиях SBM особенно ценны в различных областях исследований, от тканевой инженерии до тестирования лекарств ^2,3. В частности, они стали фундаментальными в исследованиях рака, поскольку они воспроизводят механиче?...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
12-multiwell plate	Sigma-Aldrich	CLS351143
3D FDM printer	Flashforge	Adventurer 5M Pro
3D printer Motherboard	GEETECH	GT2560 REV A+
6-multiwell plate	Sigma-Aldrich	M8687
AC socket	HiLetgo	https://www.amazon.it/HiLetgo-Terminal-Socket -Holder-Switch/dp/B0814PT3YG/ref=sr_1_1?__ mk_it_IT=%C3%85M%C3%85%C5%BD%C3% 95%C3%91&crid=2TRIBP34VJ61A &dib=eyJ2IjoiMSJ9.zW6_VmeiudR I4yMpjJqJm7OdeoctTKW2mrEzml BAyJVa1hkM4PiJT3pLY0mXdxm1 AZQxa2_f5J4q4d5v3vUeqLkjJ6BM kWHAoeEfbEQJNuZaQ3NjmUlqWy _1AfQpnRp4VqJ2m3bkWsChztCa Ok-ZdQJlobGxJaMKg7WbV352 Hyo.0tEw2GYoPQJ4SdNYXO1XM Jrl2yXMvRey55Hj7GhISkk&dib_ tag=se&keywords=AC+socket+HiLetgo&nsdOpt OutParam=true&qid=1734702097&sprefix=ac+ socket+hiletgo%2Caps%2C173&sr=8-1	15 A 250 V
Adjustable feet	EXIN DEHCEN	https://www.amazon.it/gp/product/ B0CPLTSNQB/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Height 27-40 mm
Ball bearing 4 mm	QUARKZMAN	684ZZ	Dimensions 4 x 9 x 4 mm
Ball bearing 5 mm	XiKe	625-2RS	Dimensions 5 x 16 x 5 mm
Belt closed	Turmberg3D	https://www.amazon.it/gp/product/ B09B2FJQBV/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Width 6 mm
Belt open	Fajoeda	https://www.amazon.it/gp/product/ B09QCTVPTH/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&th=1	Width 6 mm
Bioprinting nozzle	Fisher Scientific	17780789	Corning Standard Conical Bioprinting Nozzles
Bürker Cell Counting chamber	GLASWARENFABRIK KARL HECHT	40443001
Centrifuge	Eppendorf	5702 R
Centrifuge tube	Sigma-Aldrich	CLS431470	15 mL
Centrifuge tube	Sigma-Aldrich	EP0030120086	1.5 mL
Display	Sigma-Aldrich	BR718905
DMEM	Gibco Thermofisher	11965092
FBS	Sigma-Aldrich	F7524
Flanged linear ball bearing	Sourcing map	https://www.amazon.it/gp/product/ B07S6LZHM7/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	LMF8UU
Glass syringe	Fisher Scientific	11520062	Hamilton GasTight 1 mL (TLL terminal)
Hinges	YASQZ	https://www.amazon.it/gp/product/ B09DNXGDGG/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
Incubator	Fisher Scientific	15481374	Eppendorf Galaxy 48 R CO2 Incubator, 48 L, Stainless Steel
Inverted microscope	Nikon	Eclipse Ti2-U
Jumper wires	Iverntech	https://www.amazon.it/Iverntech-XH2 -54-Terminale-Stampante-Stepper/dp/ B07Q12B6K5/ref=pd_ci_mcx_mh_ mcx_views_0_image?pd_rd_w=cb2r J&content-id=amzn1.sym.57a351cf- ba07-47e8-b302-aa2aa1a3f209%3 Aamzn1.symc.ca948091-a64d-450e- 86d7-c161ca33337b&pf_rd_p=57a3 51cf-ba07-47e8-b302-aa2aa1a3f209 &pf_rd_r=YHY9RFYZJK7PYAY2RXX D&pd_rd_wg=7WkXB&pd_rd_r=8239 66cb-4977-48ce-b095-0dcedf8c372f& pd_rd_i=B07Q12B6K5&th=1
LCD unit	Paradisetronic.com	https://www.amazon.it/Display-controller -conduttori-adattatore-stampante/dp/B01 DUR4064/ref=sr_1_9?__mk_it_IT=%C3 %85M%C3%85%C5%BD%C3%95%C3 %91&crid=1OAHVIIRA16X3&dib=eyJ2Ij oiMSJ9.07V2Jf7RzJjTUlIuFobUJFjUzG4 8633KkdcMXSEfnWLRX41d5vAF7xPBJ maniVxDoXecfihZzzOXlP3v-e29cUjoGLf GDyv5DoDVwp7ndohNTYvYzoi3gWkF- Hsd2YbT7tjb1Dra1afqSn26CbFdEvJ84y qyX7Gi3-7DHh8yMwdd6_7quiuW_mjsm w1nu0YQG68GZ0XM7unOsvyddQ__R_ 3dndxb3mOjgGjklEgu_KEbZJPOZDIdSo oU3nrrKHj56hCfk9ACwYpB80QGCbTPK 0p-fE0g9h02WPmtHV38UU3m5AdZsTQ HqvnVlJg703qGT-8ze8fQItw2rtbgl_J86H RMReJOhVLQBkqNwxh57CQ.yNbeFmZ ZBEUhadz2dQa8NxpZD9g4P6ighRU_97 yxgnw&dib_tag=se&keywords=display% 2B3D%2Bprinter%2Bprusa%2Bi3&nsdO ptOutParam=true&qid=1734714093&s= industrial&sprefix=display%2B3d%2B printer%2Bprusa%2Bi3%2Cindustrial% 2C143&sr=1-9&th=1	Old Prusa i3 LCD unit. Link to commercially available alternative
Leadscrew M8	RS PRO	280-408
Leadscrew nut M8	Comioke	https://www.amazon.it/dp/B0C7QB13C4? ref=ppx_yo2ov_dt_b_fed_asin_title&th=1	Nut for M8 screws
Leadscrew nut T8	Aipaide	https://www.amazon.it/gp/product/B086QJCX1M/ref =ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Nut for T8 screws
Leadscrew T8	VBESTLIFE	https://www.amazon.it/gp/product/B07CXRB52Y/ref =ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&th=1	Length 15 mm
L-Glutammine	Sigma-Aldrich	G7513
Limit switch	CESFONJER	https://www.amazon.it/gp/product/B07SPX492J/ref =ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
Linear ball bearing (LM4UU)	A ABSOPRO	https://www.amazon.it/gp/product/B0CB3M5GHJ/ref =ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Dimensions 4 x 8 x 12 mm
Linear ball bearing (LM8LUU)	Fdit	https://www.amazon.it/LM8LUU-Linear -Motion-cuscinetti-stampante/dp/B07N 58W3GZ/ref=sr_1_1_sspa?__mk_it_IT =%C3%85M%C3%85%C5%BD%C3% 95%C3%91&crid=33VNCCCSIFJRP& dib=eyJ2IjoiMSJ9._JJ2doXI33C2JagX 8x6E2Bz2ILo10852tBi1erWqGn363ku zbcvknbMtsK6wm5jdR1P5XwC6Ovui at3kGIJPpYFOG_FiIBYT8xLkkbiphhR 4ncR6R9tPPyeN--_3RxFgKMh5tMO_ jesAcu7Anp87Qb91ruM85CKqduV-y6 HQJtAvVSXmfG4yE4N7d4_dDVKsR7 UkEmDIznJE0HIhvvI2R6vX2tMN5yMc _ZrUbUB0gPF6SgXHVJmKRizCRqL7J 64WRD-XnMSpVHY_LUVJ7gn9kJQ35 _zQw8vLD-_kRyvxwvE.4IVMdKzF1Ax mQHQhWEi6LH12UI4CmMgi288_g3zG CPY&dib_tag=se&keywords=LM8LUU+ Fdit&nsdOptOutParam=true&qid=17347 04494&s=industrial&sprefix=lm8luu+fdit+ %2Cindustrial%2C136&sr=1-1-spons&sp _csd=d2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY&psc=1	Dimensions 8 x 15 x 45 mm
Linear ball bearing (LM8UU)	ARCELI	https://www.amazon.it/gp/product/ B07BV3YBP2/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Dimensions 8 x 15 x 24 mm
Magnets	OCEUMAOA	https://www.amazon.it/gp/product/ B0CB6C2RF4/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&th=1	8 x 3 mm
Matrigel	Gibco Thermofisher	LOT 0202003	SBMe
Motor driver	Longruner	https://www.amazon.it/gp/product/ B071P41ZBW/ref=ppx_yo_dt_b_search _asin_title?ie=UTF8&psc=1	Driver A4988
PBS	MicroGem, VWR	TL1006-500ML
Penicillin-Streptomycin	Gibco Thermofisher	15070063
Pipette tips	Sigma-Aldrich	Z740058	BRAND filter tips, racked, TipBox (volume 50-1000 μL)
Plexiglass sheets	MVQPER	https://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti- plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0CF Q4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.bf7 Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_NuF ZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHBtZgdzI 356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-kfklAYrb rXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJPcLF2f2E EcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA0sLPnM0ts wdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh4fpVNMA4Kwh 0UaeQhfexFY0dNWhPYftXvvz9LLj1uMID2E Gi_ScmYqY5LahbYOmKVVPPiPIgCVdLjaM8 yqNp2ZJGV9Fge2xa6OAHxmMeaQUqGkoQ 88x9GkX7EWuOwYO0dEUYSzHCdGONWo eZLfSJOR3C6-knjzKrOQ0ziouJfo-ktbak7v3A H53BtIOiXbT57cKqh-uc9wI_j_lHN-8okAe2yO 6upc61MoydZujuxnfLG7hwytqHQG2.ApKq8 MVs8Xihn_zcA39nML-2lpjnagGhXIx0clcJN_ E&dib_tag=se&keywords=lastra+plexiglass+ 2+mm&nsdOptOutParam=true&qid=1734702823&sr=8-14	2 mm thickness, transparent sheet, 21 x 32.5 cm
Plexiglass sheets	MVQPER	https://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti -plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0C FQ4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.b f7Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_N uFZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHBtZ gdzI356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-kfk lAYrbrXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJPc LF2f2EEcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA0s LPnM0tswdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh4fpV NMA4Kwh0UaeQhfexFY0dNWhPYftXvvz9 LLj1uMID2EGi_ScmYqY5LahbYOmKVVPP iPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fge2xa6OAHx mMeaQUqGkoQ88x9GkX7EWuOwYO0dE UYSzHCdGONWoeZLfSJOR3C6-knjzKrO Q0ziouJfo-ktbak7v3AH53BtIOiXbT57cKqh- uc9wI_j_lHN-8okAe2yO6upc61MoydZujux nfLG7hwytqHQG2.ApKq8MVs8Xihn_zcA3 9nML-2lpjnagGhXIx0clcJN_E&dib_tag=se &keywords=lastra+plexiglass+2+mm&nsd OptOutParam=true&qid=1734702823&sr=8-15	2 transparent sheets, 2 mm thickness, 20 x 20 cm
Plexiglass sheets	MVQPER	https://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti -plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0C FQ4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9. bf7Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_ NuFZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHB tZgdzI356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG- kfklAYrbrXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJ PcLF2f2EEcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA 0sLPnM0tswdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh 4fpVNMA4Kwh0UaeQhfexFY0dNWhPYft Xvvz9LLj1uMID2EGi_ScmYqY5LahbYO mKVVPPiPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fge 2xa6OAHxmMeaQUqGkoQ88x9GkX7E WuOwYO0dEUYSzHCdGONWoeZLfSJO R3C6-knjzKrOQ0ziouJfo-ktbak7v3AH53B tIOiXbT57cKqh-uc9wI_j_lHN-8okAe2yO6 upc61MoydZujuxnfLG7hwytqHQG2.ApKq 8MVs8Xihn_zcA39nML-2lpjnagGhXIx0clcJ N_E&dib_tag=se&keywords=lastra+plexigl ass+2+mm&nsdOptOutParam=true&qid=1 734702823&sr=8-16	2 transparent sheets, 2 mm thickness, 20 x 30 cm
Polylactic acid (PLA) filament	Flashforge	Black 100102
Power supply	SQUADO	https://www.amazon.it/SQUADO-Alimentatore -stabilizzato-dissipatore-efficienza /dp/B0DMTG6SJD/ref=sr_1_6?dib =eyJ2IjoiMSJ9.1vVze6Zt6fhKCvFb eAOSiRe57N6a1mlBnkLdHiEym4 ugHzueF6_FdOodb3sftCXb5raTg eerMMUbL5KcaI_SDa_2j7s2XohI B01QMJDyq0xQ5Gp3KLIZozDHV fGBdSrvwgyOl-BXSDy_ocZlj2TL5 e21p3K6qpvSaT5yo8WA5tngS93 Eqe8s8D6mjpnnPFrb9RpQpj299Y nNRYgr_YF3NCt3mH0r0FocKcCa LNpKtfGLCbnz_yB-360tp5SAi7A7 cgBf5I4NzQ5iQTTXAG727x0Hml mG-eaFBSJv6M1LPooZiT2aT7dx o_7tzyU6MQ9vAEozXkLTaTTMX RA_svPp96sxp93NRLReI64xpFd S3Zh1y_JPQijbMAIuvuYflhh6JlPB W6-fpW6QXl9v5wNEs_YwjzP9Sf RKxRmchzZhgsK-34XJeaEmjbRq H3piM0Zx.MfPYUNvCEhDBqLDh C-iqBEu-vjIVgsrQmOjeLuGo9YQ& dib_tag=se&keywords=power+sup ply+AC+INPUT%3A+110-220V%2 C+DC+OUTPUT%3A+12V+15A&n sdOptOutParam=true&qid=173471 4722&sr=8-6	Old Prusa i3 power supply (AC INPUT: 110-220 V, DC OUTPUT: 12 V 15 A). Link to commercially available alternative
Pulley 5 mm	VooGenzek	https://www.amazon.it/gp/product/ B0B8H16KWX/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Bore 5 mm, Width belt space 6 mm
Pulley 8 mm	Yxtaii	https://www.amazon.it/gp/product/ B07X852RFN/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&th=1	Bore 8 mm, Width belt space 6 mm
Ribbon cables	QUARKZMAN	https://www.amazon.it/sspa/click?ie =UTF8&spc=MTo0NDgyNTkwNzU wNjM5NzM5OjE3MzQ3MTQ1OTE6 c3BfbXRmOjMwMDEyMjk4NTMzN TYzMjo6MDo6&url=%2FQUARKZM AN-connettore-Lunghezza-Comput er-confezione%2Fdp%2FB0CQRM DQNG%2Fref%3Dsr_1_15_sspa% 3F__mk_it_IT%3D%25C3%2585M %25C3%2585%25C5%25BD%25 C3%2595%25C3%2591%26crid%3 D3BZ8Q05YA50TX%26dib%3Dey J2IjoiMSJ9.zoYnL2ViiarlDS_7165D ldxu-TTbVbWUVAP3pCybFB-bjGl wSgrpnkMhhsJj3NRo8Mvht8ev5H vGQ-UUpPom12OcOcwyRVXLAR UvMyTm8mpAdZSaOritwHRgwu2 JuW9UoS4jlCbA-gzP2FEAAH47K fFOWN6FEhc5r0YGBcSIsA6_QV6 _LA1k_ifj3c2BFm2Fj8YjW-auz7Yiy ULfZusvGX28S1K5kJdTa_YOwJY YC0Y__s-CCchHKiZgDhFjtFogUz0 Tonob4HQZiO_hkrnm3ixpNj9rgE- hvVq1FK1uD9M.kkP89x1SJ0SLxZ sv3YomYEfmkhpvP4WQf2TtC76K YAE%26dib_tag%3Dse%26keywords %3DCavo%2Bflessibile%2Ba%2Bna stro%2Bpiatto%2Bper%2Bstampant e%2B3D%2Ba%2B10%2Bpin%26n sdOptOutParam%3Dtrue%26qid% 3D1734714591%26s%3Dindustrial %26sprefix%3Dcavo%2Bflessibile %2Ba%2Bnastro%2Bpiatto%2Bper %2Bstampante%2B3d%2Ba%2B10 %2Bpin%252Cindustrial%252C170 %26sr%3D1-15-spons%26sp_csd% 3Dd2lkZ2V0TmFtZT1zcF9tdGY%26psc%3D1	ribbon cable 2651 28AWG 10 pins
Rigid shaft coupling	Gwolf	https://www.amazon.it/gp/product/ B088R8CW5Z/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1	Coupling from 5 to 8 mm
Rods 4 mm	RS-components	682-810	Diameter 4 mm
Rods 5 mm	Sourcingmap	a14010200ux0214	Diameter 5 mm
Rods 8 mm	RS-components	682-078	Diameter 8 mm
Screws	Bnnrjia	281-984	M2x6 - Flat head
Screws	INCREWAY	https://www.amazon.it/INCREWAY- assortite-portatili-accessori- riparazione/dp/B07KN37M5J/ ref=sr_1_20?__mk_it_IT=%C 3%85M%C3%85%C5%BD% C3%95%C3%91&crid=12BH MAWD8SK4Z&dib=eyJ2IjoiM SJ9.SjXKoxV0NYqENPoUeS4 2-rj1Af398uiCLXDxFs0C9HfS 8vwEPmsfAMPwIMfllkAfWNY TIEU4KXhJRgRHInNI3U_aow 0EPyfufQKlA4wHz1eOJBvYO ND-5obbXfRPn7VXQ8kzBXM VfUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB-z pRvQ6oE5Fr_1sO7lFnzURtD1 YBf65O58M3hrDXf5r_8MIz1c Asct-2P8AyWWBZAB1buYoyP gnnOiBL5EBS7twJWqcDU86m h1ywyufiUitm6kIwNuMx32D0h 0jkHna481aaYP_Q7kHgDxxrR _fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHfF WVMqvB_YBdEAuTeL08EP_p TY50uT4UeWgdJuT58kB7Gv- Y5fPMPRS_JEQdO-oJ9DlO9n 0OszkmYwrPh-AivwVN6xh4hN 2pseXannS_on9aiNv1lh3x-f2PZ 0R.jCyNdxQiJSAsGVm7ZPhDK eFxQGBAu-M_42ZLTSSBiDg&d ib_tag=se&keywords=viti+M3x3& nsdOptOutParam=true&qid=1734 711519&sprefix=viti+m3x3%2Cap s%2C169&sr=8-20	M2x8 - Flat head
Screws	INCREWAY	https://www.amazon.it/INCREWAY -assortite-portatili-accessori-ripara zione/dp/B07KN37M5J/ref=sr_1_2 0?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85 %C5%BD%C3%95%C3%91&crid= 12BHMAWD8SK4Z&dib=eyJ2IjoiM SJ9.SjXKoxV0NYqENPoUeS42-rj1 Af398uiCLXDxFs0C9HfS8vwEPms fAMPwIMfllkAfWNYTIEU4KXhJRg RHInNI3U_aow0EPyfufQKlA4wHz 1eOJBvYOND-5obbXfRPn7VXQ8 kzBXMVfUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB -zpRvQ6oE5Fr_1sO7lFnzURtD1YB f65O58M3hrDXf5r_8MIz1cAsct-2P8 AyWWBZAB1buYoyPgnnOiBL5EBS 7twJWqcDU86mh1ywyufiUitm6kIwN uMx32D0h0jkHna481aaYP_Q7kHg DxxrR_fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHf FWVMqvB_YBdEAuTeL08EP_pTY50 uT4UeWgdJuT58kB7Gv-Y5fPMPRS _JEQdO-oJ9DlO9n0OszkmYwrPh- AivwVN6xh4hN2pseXannS_on9aiN v1lh3x-f2PZ0R.jCyNdxQiJSAsGVm 7ZPhDKeFxQGBAu-M_42ZLTSSB iDg&dib_tag=se&keywords=viti+M3 x3&nsdOptOutParam=true&qid=17 34711519&sprefix=viti+m3x3%2Ca ps%2C169&sr=8-20	M2x10 - Flat head
Screws	INCREWAY	https://www.amazon.it/INCREWAY- assortite-portatili-accessori-riparazi one/dp/B07KN37M5J/ref=sr_1_20? __mk_it_IT=%C3%85M%C3%85% C5%BD%C3%95%C3%91&crid=12 BHMAWD8SK4Z&dib=eyJ2IjoiMSJ 9.SjXKoxV0NYqENPoUeS42-rj1Af3 98uiCLXDxFs0C9HfS8vwEPmsfAM PwIMfllkAfWNYTIEU4KXhJRgRHIn NI3U_aow0EPyfufQKlA4wHz1eOJB vYOND-5obbXfRPn7VXQ8kzBXMV fUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB-zpRvQ6 oE5Fr_1sO7lFnzURtD1YBf65O58 M3hrDXf5r_8MIz1cAsct-2P8AyWW BZAB1buYoyPgnnOiBL5EBS7twJ WqcDU86mh1ywyufiUitm6kIwNuM x32D0h0jkHna481aaYP_Q7kHgDx xrR_fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHfF WVMqvB_YBdEAuTeL08EP_pTY5 0uT4UeWgdJuT58kB7Gv-Y5fPMPRS _JEQdO-oJ9DlO9n0OszkmYwrPh-Ai vwVN6xh4hN2pseXannS_on9aiNv1l h3x-f2PZ0R.jCyNdxQiJSAsGVm7Z PhDKeFxQGBAu-M_42ZLTSSBiDg &dib_tag=se&keywords=viti+M3x3&n sdOptOutParam=true&qid=1734711 519&sprefix=viti+m3x3%2Caps%2 C169&sr=8-20	M3x3 - Flat head
Screws	RS-components	281-978	M3x6 - Flat head
Screws	RS-components	281-978	M3x10 - Flat head
Screws	RS-components	281-978	M3x20 - Flat head
Screws	Faankiton	https://www.amazon.it/Faankiton-600- M3-Incassato-Cilindrica/dp/B0CFY6V 3HV/ref=sr_1_3_sspa?crid=29NMQZ B1QM7EW&dib=eyJ2IjoiMSJ9.aiGS- zo819G6hZmghT7TFDH1TL5lzRsjT R5PBvqoHbKOBLipyX-kuevmqqPpW m_7Ngng-Wa6aLoDuXMtoqexgeNpr Qn2cISsCatqzhc8fxhJ0yIN4s3YEpD KzIroWWVNzswptkWthnGkLXwHck m4wqLr1sf0qyK9oYYlZdKo_Ypa9RQ s3aYPNd_f-DWpT5rdsG1GL3rd3b9c fLSqXxMd8QnnK3hDcg10Uz9otPwo zJC2QAQFce__CkNwDfBp5Vvgmy1 DLX4a7PolnNePrJiObgjHMJLlfwizGx fie28RAYQ.03Epc_RrVWlBUqUbHU TPDcoDUxaKBHep1CuTOhFj-fI&dib _tag=se&keywords=m3x25%2Bviti&n sdOptOutParam=true&qid=17347118 59&s=industrial&sprefix=M3x25%2Ci ndustrial%2C185&sr=1-3-spons&sp_ csd=d2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY&th=1	M3x25 - Flat head
Screws	Faankiton	https://www.amazon.it/Faankiton-600 -M3-Incassato-Cilindrica/dp/B0CFY6 V3HV/ref=sr_1_3_sspa?crid=29NMQ ZB1QM7EW&dib=eyJ2IjoiMSJ9.aiG S-zo819G6hZmghT7TFDH1TL5lzRsj TR5PBvqoHbKOBLipyX-kuevmqqPp Wm_7Ngng-Wa6aLoDuXMtoqexgeN prQn2cISsCatqzhc8fxhJ0yIN4s3YEp DKzIroWWVNzswptkWthnGkLXwHc km4wqLr1sf0qyK9oYYlZdKo_Ypa9R Qs3aYPNd_f-DWpT5rdsG1GL3rd3b9 cfLSqXxMd8QnnK3hDcg10Uz9otPwo zJC2QAQFce__CkNwDfBp5Vvgmy1D LX4a7PolnNePrJiObgjHMJLlfwizGxfie 28RAYQ.03Epc_RrVWlBUqUbHUTPD coDUxaKBHep1CuTOhFj-fI&dib_tag=s e&keywords=m3x25%2Bviti&nsdOptO utParam=true&qid=1734711859&s=ind ustrial&sprefix=M3x25%2Cindustrial%2 C185&sr=1-3-spons&sp_csd=d2lkZ2V 0TmFtZT1zcF9hdGY&th=1	M3x30 - Flat head
Screws	AERZETIX	https://www.amazon.it/AERZETIX- carbonio-fissaggio-cacciavite-mont aggio/dp/B0BDYZZ8LQ/ref=sr_1_4 ?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85 %C5%BD%C3%95%C3%91&crid= 217010XNB7ZXP&dib=eyJ2IjoiMSJ 9.e5QjA-q9hEvlleIzwY3ssA3x7vIBF Hpcg73tKkBJu9QbDwMwlC5L9-9u 7my7ZG5hZij0WyaijakqAoX4rIZ3rv EgvlPtN6bwKTBgqAK-3uu3GBy6K EPQ2iIEUWx_U73nonJy5IzmTDH Xijn-kRg1iCOM99S5upSWbmmazg 8lctsyXlg_tmXHjHn63WsIo7WcBuL rtVpPW8oMsZCndwh33pNQXBnk1 iStT81spopzrw3gScK1Wdz6RttH6j YL611rNBdkd-PEP2CYhDKeSKHE AqmABjHGLyG6p40k20npHqkg8g- 9Msl3fZZiS4rRxNFOHBjEdVTLBrn PjRjxTspBfZSEKQnqsGm1WPlz8cS khCs.ujWHAL4y-RNahay-1AJl34uN hUj-f6mZ7X1_KZaACvU&dib_tag=s e&keywords=m3x50%2Bviti&nsdOp tOutParam=true&qid=1734711964& s=industrial&sprefix=m3x50%2Bviti %2Cindustrial%2C136&sr=1-4&th=1	M3x50 - Flat head
Screws	JOCAHULFX	https://www.amazon.it/Incassato- Esagonale-Rondelle-Esagonali- Inossidabile/dp/B0DF7P5CC2/ref=sr_ 1_6?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%8 5%C5%BD%C3%95%C3%91&crid=2 7B231M7SRJ3R&dib=eyJ2IjoiMSJ9.3 bij8nHLQAebjY8LHQS6V1GsAE07H cFGUpHAh7jA1oQIxjoTJmxjNuwg0y H14oz-YUvzD0eqVRASqAZTK2spiQ saX0pug7rWgGfENeGhztno5lMcJDT XQfe9H6ocLZANpAFv_p0dRbO6ggA vZN0TfyiuR4focFMAjr6VFGVbprEQO EaS1KRs8loF3FgL0rsmP81K806Gv5 zeSurK_sp8GEelqtm1G3J059zUdPaJ z7zJQEFPSH0TXv3lml5u9lnvnAbM0j ClF03nG5ZjB-6WUPfS41Os5DgzTpS zUTR-YZc1HnRUxy6l5grDPFmDiNZn 0Ie9MrlkcPI2A8dubQZm3d8pYVpg6Y 2OqzifmZzNsQM.Zuh5Ko4bf20Bz46c NFRHJvcyPfJyglpcvN1uM16-yOI&dib _tag=se&keywords=m4+viti+testa+sv asata&nsdOptOutParam=true&qid=17 34712054&s=industrial&sprefix=m4+v iti+testa+svasata%2Cindustrial%2C12 8&sr=1-6	M4x8 - Flat head
Screws	JOCAHULFX	https://www.amazon.it/Incassato-Esagonale -Rondelle-Esagonali-Inossidabile/dp/B0DF 7P5CC2/ref=sr_1_6?__mk_it_IT=%C3%85 M%C3%85%C5%BD%C3%95%C3%91&c rid=27B231M7SRJ3R&dib=eyJ2IjoiMSJ9. 3bij8nHLQAebjY8LHQS6V1GsAE07HcFG UpHAh7jA1oQIxjoTJmxjNuwg0yH14oz-YU vzD0eqVRASqAZTK2spiQsaX0pug7rWgG fENeGhztno5lMcJDTXQfe9H6ocLZANpAF v_p0dRbO6ggAvZN0TfyiuR4focFMAjr6VF GVbprEQOEaS1KRs8loF3FgL0rsmP81K8 06Gv5zeSurK_sp8GEelqtm1G3J059zUdP aJz7zJQEFPSH0TXv3lml5u9lnvnAbM0jCl F03nG5ZjB-6WUPfS41Os5DgzTpSzUTR -YZc1HnRUxy6l5grDPFmDiNZn0Ie9Mrlkc PI2A8dubQZm3d8pYVpg6Y2OqzifmZzNs QM.Zuh5Ko4bf20Bz46cNFRHJvcyPfJyglp cvN1uM16-yOI&dib_tag=se&keywords=m4 +viti+testa+svasata&nsdOptOutParam=tru e&qid=1734712054&s=industrial&sprefix= m4+viti+testa+svasata%2Cindustrial%2C1 28&sr=1-6	M4x12 - Flat head
Screws	Globstar	https://www.amazon.it/testa-svasata- impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH 5JYL/ref=sr_1_9?__mk_it_IT=%C3% 85M%C3%85%C5%BD%C3%95%C 3%91&crid=XEVGIE9R1K2F&dib=ey J2IjoiMSJ9.sYNfljBDPU1N2px8nueT zi6D61Z46HD98MSuIwqXNKrfkSOM GYgywNTC8-dsYqNXiZEMS42kGB4 QdBtz_TVFLvgLCFQVl9W5n7Bo4fQS _VKHh9VLmA_RjdF75wPsSbRPIdSA nidi0pehfkRoBIrEtYVn-cUq4TXH0P1D pGLc_4J88tU02ieLVee-YarMxZLKeLYt kK6B2CmM6d_AE0K7UJofwnOCOLp 3R72KpMTltjkJutf0WxBFsNQhYG8Wz 0q1o_3uRs_aNM0wJtGeSohS3fABN8C z-kYxdfOikF1zi4nE1wn8YUw8lfsCxeUI ioUp4Lz0GaXhHkkXxC5jssOsuOyW_6 CeDYrx0AOAy1URHBY.4xc_PNzUrZe FFz0FV9hV7uu_-Es6f3jhi6koImPVcgw &dib_tag=se&keywords=m4x70%2Bvi ti%2Btesta%2Bsvasata&nsdOptOutPa ram=true&qid=1734712182&s=industri al&sprefix=m4x70%2Bviti%2Btesta%2 Bsvasata%2Cindustrial%2C134&sr=1-9&th=1	M4x70 - Flat head
Screws	Aerzetix	https://www.amazon.it/AERZETIX-cilin drica-impronta-intaglio-montaggio/dp/B 0BLNJ9PTX/ref=sr_1_8?__mk_it_IT=% C3%85M%C3%85%C5%BD%C3%95 %C3%91&crid=3AESCF6VKG6B6&di b=eyJ2IjoiMSJ9.3HlweLtFpKk8huuM4 tfcAbDSl2biH6iWGO7PXpXKxzQnVM cKVrvCI0CkZanzuaduqvaeCs8DLxlFs c_s4-qvSDCE8dvXDhuO4nHPwIhPAl BnL5G6tLMycq0ZS0ZN83GAj_VOUc GVLq4fdcfeurabYdPzrWf3PpwM6_-y OlEOLVvlzzBKgQWO7fiMSCFuGA6 X4j8xVlNzobgrSfsnDNqZpEgH289rp AslvAA9D2YEmvJSm0CRqWecsKPJ iB8yNhelz01McT-qy3s6utg4_Thec18s iTwIY2bFdQ5XYhkTzBxAF86lr6VMXZ 3Ym26ZiedQE1_7ceB7jYcyQ5mOMR fx0d8pYVpg6Y2OqzifmZzNsQM._rEh uS8xCOyhS7xqQQe9H3kwn-ppl22Rf VmzFpFpyW0&dib_tag=se&keyword s=m4x80%2Bviti%2Btesta%2Bsvasat a&nsdOptOutParam=true&qid=17347 12214&s=industrial&sprefix=m4x80% 2Bviti%2Btesta%2Bsvasata%2Cindu strial%2C141&sr=1-8&th=1	M4x80 - Flat head
Screws	Globstar	https://www.amazon.it/testa-svasata- impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RJ S9NT/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3 %85M%C3%85%C5%BD%C3%95% C3%91&crid=15MBBIPYCF06S&dib =eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIko N0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64T nTN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZvO Evle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQFWe SMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQntEIA hyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkmXcWFo zXK-eTFnle6uFI4nXhbCXTWjM5MP_ sNolDP0O4HS7Bnxk_wanuwC9zEuH ZeVNsejl6gwYR0IlJK5iu0V9Y-bgFcr1- iTBhrARDKG7-0Nc5188TSaN9snT7K 6yO2J3ctfC24PTGnaZAFYKMvrNqz OAihVBKIW8xOhIx0ZRipPa9ggsMs _pe1VgY2dCXtUrE_bo1dd4oGlUuw .v5iiMZ2rMQlZlZs2WDyqM_mo1utvu PD71Jyb-O7BY1Y&dib_tag=se&key words=m5x8+viti+testa+svasata&ns dOptOutParam=true&qid=17347123 79&s=industrial&sprefix=m5x8+viti+ testa+svasata%2Cindustrial%2C201 &sr=1-30	M5x8 - Flat head
Screws	Globstar	https://www.amazon.it/testa-svasata- impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH M4BY/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3 %85M%C3%85%C5%BD%C3%95% C3%91&crid=15MBBIPYCF06S&dib= eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIkoN 0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64Tn TN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZvO Evle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQFW eSMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQnt EIAhyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkmX cWFozXK-eTFnle6uFI4nXhbCXTW jM5MP_sNolDP0O4HS7Bnxk_wan uwC9zEuHZeVNsejl6gwYR0IlJK5iu 0V9Y-bgFcr1-iTBhrARDKG7-0Nc5 188TSaN9snT7K6yO2J3ctfC24PTG naZAFYKMvrNqzOAihVBKIW8xOhI x0ZRipPa9ggsMs_pe1VgY2dCXtUr E_bo1dd4oGlUuw.v5iiMZ2rMQlZlZs 2WDyqM_mo1utvuPD71Jyb-O7BY 1Y&dib_tag=se&keywords=m5x8% 2Bviti%2Btesta%2Bsvasata&nsdOpt OutParam=true&qid=1734712379&s =industrial&sprefix=m5x8%2Bviti%2 Btesta%2Bsvasata%2Cindustrial%2 C201&sr=1-30&th=1	M5x10 - Flat head
Screws	Globstar	https://www.amazon.it/testa-svasata- impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH 9SYZ/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3 %85M%C3%85%C5%BD%C3%95% C3%91&crid=15MBBIPYCF06S&dib =eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIko N0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64T nTN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZv OEvle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQF WeSMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQ ntEIAhyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkm XcWFozXK-eTFnle6uFI4nXhbCXT WjM5MP_sNolDP0O4HS7Bnxk_w anuwC9zEuHZeVNsejl6gwYR0IlJK5 iu0V9Y-bgFcr1-iTBhrARDKG7-0Nc5 188TSaN9snT7K6yO2J3ctfC24PTG naZAFYKMvrNqzOAihVBKIW8xOhIx 0ZRipPa9ggsMs_pe1VgY2dCXtUrE _bo1dd4oGlUuw.v5iiMZ2rMQlZlZs2 WDyqM_mo1utvuPD71Jyb-O7BY1Y &dib_tag=se&keywords=m5x8%2Bvi ti%2Btesta%2Bsvasata&nsdOptOutP aram=true&qid=1734712379&s=indus trial&sprefix=m5x8%2Bviti%2Btesta% 2Bsvasata%2Cindustrial%2C201&sr= 1-30&th=1	M6x20 - Flat head
SD card	SanDisk	https://www.amazon.it/SanDisk-Ultra- Scheda-memoria-classe/dp/B08GYG6 T12/ref=sr_1_8?crid=3ETH6HJL8VKD A&dib=eyJ2IjoiMSJ9.5omqicizrizfHo8r pPQ6sWJ_C0sfwUqPQv6VrziwK-SCX 4-aSgFGois1pfvTwB0SuDxdNjByo2zU fBonWwUKAf3clazXEIGNl0GhojQmvj Bt_6RS31QcAM5Y50BpAdndMXIHy9 iGTswgYEwnbt9uj56G_soC6OdPiTvr W3M8jwtTxQDUl8UcHZeRMPq0T8sd v4hskHGmipFItAzE1lyDiy0otrqUhz-ph OggXBAM6gMyGf0qBtU1AFwfj81Shl HS2qojCiRq_JLKyBkc_Y4P_V1YtsGc MxnoG6YzYowwEYbX7uTFWJB-Wvc B_vYw-D5s0B-HDSYRSl-C60yhtqhrUw grg9w6PN5U5s01vos4bauIgIN6lOez1 tz2OHwL5YL3QCHKxNnJV0IM42cH0 du8fIEIbUwYC5jRLqowx1UyaQKQ4W WaGozdZ9l5qUoeQ7KU.iOPo2BYLK STjqjB8BevaVgPa5QD7BuP9CieN6u 4_Qeo&dib_tag=se&keywords=sd% 2Bcard%2Bsandisk&nsdOptOutParam =true&qid=1734704871&sprefix=SD% 2Bcard%2Bsan%2Caps%2C141&sr=8-8&th=1	SanDisk 32 GB Extreme PRO SD card, UHS-I
Self-aligning Flange bearing	Brateuanoii	KFL08	8 mm inner diameter
Slicing software	Ultimaker Cura	https://ultimaker.com/it/software/ ultimaker-cura/?gad_source=1& gclid=CjwKCAiAyJS7BhBiEiwAy S9uNUjnbkNIYNUco6YaZYHcFT 2tqBac23MU4Qx3FaMXjl_UifJ_ k8as3BoCeVkQAvD_BwE	Ultimaker Cura 4.9.0
Springs	YIXISI	https://www.amazon.it/sspa/click?ie =UTF8&spc=MTo4NDAzNDQ1MzM 0OTUyODQzOjE3MzQ3MDQ4MD c6c3BfYXRmOjMwMDM5MDQzMz kzODAzMjo6MDo6&url=%2FYIXIS I-Assortimento-Estensione-Compre ssione-Dispositivi%2Fdp%2FB0DD T3KTBF%2Fref%3Dsr_1_1_sspa% 3F__mk_it_IT%3D%25C3%2585M %25C3%2585%25C5%25BD%25 C3%2595%25C3%2591%26crid% 3D1NT7CA1YJGWK4%26dib%3D eyJ2IjoiMSJ9.IhFmevq0fXTGGwE cGvfUxxLOudQqQcPjSGXlWklXO HY2Ahr2XxWSg6MaNBgZ71N1pQ h9Wkp5c2ary4Hm2xVi4dTH8Ny4 4-OhlcrTn0G8emvX66Zu7U0LGm xGYKyKCGxzlhwYC4EnlmTSH_O JnA5oG-BQzuxFBdCrce0txErCEm S40xONaaYp2R5yMiPDw2PqsPP jLmoSCYs4XctxEvAwn_5rp71t0U QsZNku6-jDiiuh5klpC9DsnjipLFP unRCbITWnw6wslENLdJtPDOGF 8vbO5WFf7PnUy4BZ7tUPt7I.B6j eUKwx1_t0sPaxmSHYVbRd1MG w-kosEYkHuKlPtpQ%26dib_tag% 3Dse%26keywords%3Dmolle%2B YIXISI%26nsdOptOutParam%3Dtr ue%26qid%3D1734704807%26spr efix%3Dmolle%2Byixisi%252Caps %252C137%26sr%3D8-1-spons%2 6sp_csd%3Dd2lkZ2V0TmFtZT1zcF 9hdGY%26psc%3D1
Stepper motor	Twotrees 1234	17HS4401	Stepper motor bipolar NEMA 17 42 Ncm 1.5 A
Stepper motor	STEPPERONLINE	UL1007AWG6	Stepper motor bipolar NEMA 17 42 Ncm 1.5 A
Stepper motor fixing bracket	YOTINO	https://www.amazon.it/gp/product/ B07D7XH97T/ref=ppx_yo_dt_b_ search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
Threaded nut M2	RS-components	281-984
Threaded nut M3	RS-components	281-984
Threaded nut M4	RS-components	281-984
Threaded nut M5	RS-components	281-984
Threaded nut M6	RS-components	281-984
TRAMP - C1 cell line	ATCC	CRL-2730	Epithelial cell line isolated from the prostate of an adult male transgenic mouse with adenocarcinoma
Trypan blue	Gibco Thermofisher	15250061
Trypsin	Gibco Thermofisher	15400054	Sterile