بتمويل من منحة مقدمة من مؤسسة العلوم الوطنية لMF

وOMT هو تكييف نظام الحبل المغناطيسي 1 المصممة لدمج جهاز محاكاة افتراضية عمود 2. والبروتوكولات التالية تشرح كيفية الاستفادة المثلى من صور الفيديو المكتسب (جزء 1) وتشغيل نوعين من التجارب visuo - الشمية الأساسية (الجزء 2 و 3). الجزء 1 : اقتناء فيديو تحسين صورة الفيديو هو أمر حاسم لجودة البيانات المكتسبة. اتبع هذه الخطوات لنظافة الصور. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان ذبابة المربوطة حديثا في الساحة باستخدام زوج من الملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موقف الكاميرا مجلس فايرواير (النار 1394store.com - I) تحت فراغ الغرفة الاكريليك واضحة على ان يكون عرض الكاميرا التصاعدي مباشرة من خلال الغرفة ، من خلال أنبوب زجاجي ، إلى الجانب البطني من ذبابة المربوطة. ومن المؤكد أنه لا يوجد مرشح طلاء IR على العدسة لنظام الفيديو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتسليط الضوء على الطيران ، واستخدام مجموعة من المصابيح الدائرية الأشعة تحت الحمراء (أجزاء صغيرة المؤتمر الوطني العراقي) وضعه مباشرة تحت الألواح الصمام. يركز كل LED على جسد الذبابة بشكل فردي لإضاءة موحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحد من الوهج من لوحة النظام وتقليل الاشارات المرئية التي لاحظها يطير ، فمن المفيد أن معطف جميع السطوح العاكسة في عرض الكاميرا بطلاء أسود مسطح. وينبغي أن تحول أضواء قبالة غرفة للحد من الوهج والسطوع التحويرات كشفها بالعين الذبابة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفقد البصر صورة الكاميرا. وينبغي أن تكون ذبابة بيضاء مشرقة على خلفية سوداء. إذا كان عدم وضوح الصورة قد تحتاج إلى عدسة مركزة. إذا كان يطير مظلمة ، قد تكون مجموعة LED أو غير مركزة بشكل كاف لإنارة تعمل بالطاقة المناسبة. إذا كان يحتوي على كائنات خلفية ساطعة ، جبل قرص من الورق قطيع أسود فقط فوق الذبابة للحد من انعكاس الخلفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علينا الحصول على فيديو مع الوظائف الفرعية المخصصة مكتوبة في Matlab باستخدام الأدوات الحصول على الصور. </li></ol> جزء 2 : العثور على سحابة تطير رائحة تجربة واحدة بسيطة في السياحة العالمية ويتابعون الجياع (التجويع) ، ثم يطير تحديد تتبع بنشاط الى تصاعد اعمدة من رائحة الطعام جذابة. التلاعب في محيطه التأثيرات البصرية قدرة الذبابة لتعقب بقوة رائحة الطعام الشهية. لاحظ أنه يتم عادة تشغيل التجارب في شكل كتلة عشوائية لتقليل أي تحيز في النظام التجريبي. يتم التحكم في كافة الأجهزة الخارجية (الإرسال الغاز ، ساحة الصمام ، واقتناء الفيديو) عن طريق برامج مخصصة إجراءات مكتوبة في Matlab (Mathworks). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان ذبابة المربوطة حديثا في الساحة باستخدام زوج من الملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل كل تجربة ، وذلك باستخدام العرض المرئي ، وتناوب على الطيران لعدة ثورات 3 لضمان سلاسة الحركة حول محور كامل ياو 360. إذا كان لا يطير تدور بسلاسة تجاهل ذلك. إذا استمرت المشكلة ، والسبب المرجح هو المغناطيس المنحرفة. ملاحظة : إذا كان توزيع الساحة متوجها الى مسارات عدة أثناء المحاكمة تدور معارض قمم كبيرة (أي ليست مسطحة أكثر من 360 درجة) ، هناك على الارجح بسبب التحيز اتجاه المغناطيس المنحرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عرض يطير مع الشروط التالية عينة تجريبية في ترتيب عشوائي : ط) عالية على النقيض من نمط شريطية مع بخار الماء المنبثقة من ميناء رائحة ؛ الثاني) عالية على النقيض من نمط شريطية مع بخار رائحة جذابة ؛ الثالث) شريط واحد إزاحة رأسية 90 درجة من فوهة بخار الماء ، والرابع) 90 درجة واحدة يقابلها شريطية مع بخار الرائحة. في تجربتنا ، 30 فترات ثاني أكبر عمل جيد للتجارب حيث تحدى الذباب لتحديد مصدر الرائحة وحدها. علينا الحصول على شريط فيديو في 30 هرتز لمدة كل حالة تجريبية وتحليل الصور الرمزية باستخدام برامج مخصصة إجراءات مكتوبة في Matlab (واحد من أكثر من المفيد المدمج في وظائف هي مطلب regionprops.m الذي يحلل الخصائص الهندسية للقطع ناقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند استخدام تركيزات عالية رائحة ، قد يتم الافراج رائحة المتبقية من ميناء رائحة بعد تحول قبالة رائحة. للحد من أي آثار هذا قد يكون من المفيد أن تدور ذبابة لبضع ثوان مع بانوراما الدورية للسماح للنظام لطرد أي رائحة المتبقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ومن المفيد أيضا لتدوير البصر يطير بين علاجات تجريبية إلى (ط) الحفاظ على الذباب تشارك بنشاط في التجربة ، وإلى (ب) الحفاظ على ما تبقى من الذباب في بقعة واحدة. قد يكون تجربة المثال الترتيب التالي : أ) 22 تدور التشخيص الأولي ؛ ب) خمسة تدور المتوسطة الثانية ؛ الثالث) عشرين الزوج الشرط الثاني # 1 ؛ رابعا) خمسة تدور المتوسطة الثانية ؛ ت) عشرين الزوج الشرط الثاني # 2. </li></ol> الجزء 3 : يطير المتبقية ضمن عمود رائحة والتجربة الثانية الأساسية في السياحة العالمية هو جر البصر يطير الى عمود رائحة ، وتغير الظروف على الفور البصرية ، وقياس ذلك على قدرتها على البقاء في السحابة. مرة أخرى ، لاحظ أن جميع التجارب التي تتم في كتلة المبدئية عشوائيةر للحد من أي تحيز في النظام التجريبي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان ذبابة المربوطة حديثا في الساحة باستخدام زوج من الملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدوير بصريا (دورة) مرات عدة يطير حول الحلبة قبل كل تجربة وفحص تشخيصي للتأكد من أن الحيوانات لديها القدرة على توجيه في كل اتجاه (انظر الجزء 2.2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل كل حالة ، بدوره على رائحة التجريبية (الماء أو الخل) وبصريا &quot;سحب&quot; ذبابة في السحابة التي تتأرجح شريط عمودي صغير في موقف السحابة. يستفيد من هذا السلوك شريط التثبيت القوية التي لوحظت في الذباب [4]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآن أن يطير موجه نحو السحابة ، وإزالة الشريط تتأرجح والحاضر الشروط التالية عينة البصرية : أ) المشارب بانورامية عالية التباين مع بخار الماء (الشكل 1A) ؛ ب) خلفية موحدة مع بخار الماء (الشكل 1B) ؛ ثالثا) المشارب بانورامية عالية التباين مع رائحة بخار (الشكل 1C) ؛ خلفية موحدة الرابع) مع رائحة بخار (شكل 1D). كما هو الحال في الحصول على الفيديو 2.3. قد يكون المثال تجربة النظام المتدفقة : ط) 22 تدور التشخيص الأولي ؛ ب) خمسة شريطية عمود second التذبذب ؛ الثالث) عشرين الزوج الشرط الثاني # 1 ؛ رابعا) خمسة شريطية عمود second التذبذب ؛ ت) عشرين الزوج الشرط الثاني # 2 . </li></ol> ممثل النتائج : <img src="/files/ftp_upload/old/1110_2009_1_22_1/Fig 1.png" alt="الشكل 1" width="600" height="195" /> الشكل 1 الجزء 1 يوضح كيفية الاستفادة المثلى من صور الفيديو السياحة العالمية. يجب على صورة الفيديو لديك رؤية واضحة للذبابة مضيئة على خلفية سوداء داكنة. ويمكن أن تتحسن بشكل مفرط صورا مشرقة عن طريق الحد من التدخل الخلفية ، والحد من شدة المصابيح الحمراء ، أو من خلال إطفاء الأضواء الغرفة. إذا تم بشكل غير صحيح مضيئة تطير ، قد ضبط تركيز الأضواء الحمراء أو تحوير شدة المصابيح الحمراء إصلاح المشكلة. أجزاء 2 و 3 تصف تجارب بسيطة لإجراء للتحقق من التشغيل السليم لOMT. في جميع الحالات ، ينبغي أن يكون ذبابة بصريا &quot;القسري&quot; (عبر ردود optomotor) لتدوير ثورات عدة في الساحة لضمان سلاسة ومجموعة كاملة من الاقتراح. في الجزء 2 هو تحدى ذبابة العثور على عمود رائحة من تلقاء نفسه. للحفاظ على الطيران العاملة في هذه التجربة ، للحد من تأثير اطلاق سراح رائحة المتبقية ، والحفاظ على الذباب واحد من الحفاظ على البند في كافة مراحل التجربة ، فمن المفيد لتدوير البصر يطير لبضع ثوان بين التجارب. وينبغي أن تطير أبدا توطين سحابة بخار الماء إلى درجة كبيرة ، وينبغي توطين دائما رائحة عمود في وجود اشارات بصرية غنية بانورامية. في الجزء 3 يتم سحب البصر يطير مباشرة إلى عمود رائحة وتحدى للحفاظ على رأس عمود في غضون ضد مجموعة متنوعة من الخلفيات المرئية الثابتة. إذا تم سحب يطير إلى سحابة بخار الماء ، فإنه ينبغي أن تتحول بسرعة بعيدا. إذا تم سحب يطير الى عمود الرائحة ، وهناك ما يكفي من الإشارات البصرية للتوسط تعقب قوية ، وسوف يطير البقاء في السحابة.

<ol>
	<li>Bender, J. A., Dickinson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+stimulation+of+saccades+in+magnetically+tethered+Drosophila.">Visual stimulation of saccades in magnetically tethered Drosophila.</a> J Exp Biol. 209, 3170-3182 (2006).</li><li>Duistermars, B. J., Frye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossmodal+visual+input+for+odor+tracking+during+fly+flight.">Crossmodal visual input for odor tracking during fly flight.</a> Curr Biol. 18, 270-275 (2008).</li><li>Reiser, M. B., Dickinson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modular+display+system+for+insect+behavioral+neuroscience.">A modular display system for insect behavioral neuroscience.</a> J Neurosci Methods. 167, 127-139 (2008).</li><li>G&#246;tz, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Course-control,+metabolism+and+wing+interference+during+ultralong+tethered+flight+in+Drosophila+melanogaster.">Course-control, metabolism and wing interference during ultralong tethered flight in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 128, 35-46 (1987).</li></ol>

لالتقاط صور لهذا النظام يستخدم لوحة الكاميرا فايرواير رخيصة والبرامج المكتوبة في Matlab. صور واضحة وحاسمة من أجل الحصول على بيانات دقيقة عن آثار. الاستراتيجيات المذكورة أعلاه هي مفيدة لتنظيف الصور في هذا النظام. وقد وصفت إجراءات أخرى تتبع الفيديو لهذا النظام 1. وع...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Firewire camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1394store.com</td>
<td>Fire-I board camera BW</td>
<td>4.3mm lens no IR coating</td>
</tr>
<tr>
<td>IR LEDs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Small Parts</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Black spray paint</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rustoleum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Flat black</td>
</tr>
<tr>
<td>Black flock paper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Edmund Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Panel system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caltech</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Matlab 2006a</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mathworks</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Image acquisition toolbox</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

visually mediated odor tracking during flight in drosophila

الحشرات الطائرة استخدام الإشارات البصرية لتحقيق الاستقرار في البند في تيار الرياح. بالإضافة إلى العديد من الحيوانات تتبع الروائح نفذت في مهب الريح. مثل الاستقرار البصري عكس الريح تتبع مساعدات مباشرة في تتبع الرائحة. ولكن لا تؤثر تأثيرا مباشرا الاشارات البصرية الشمية السلوك تتبع بشكل مستقل عن إشارات الريح؟ بالإضافة إلى ذلك ، بدافع التطورات الحديثة في مجال علم الوراثة الجزيئي وعلم وظائف الأعصاب الشمية رواية التحليلات السلوكية الكمية لتقييم تأثير السلوكية (على سبيل المثال) تعطيل دوائر محددة وراثيا تنشيط حاسة الشم. نحن تعديل نظام الحبل المغناطيسي وضعت أصلا لتجارب الرؤية من خلال تجهيز الساحة الضيقة مع أعمدة رائحة تدفق الصفحي. هنا نركز على التجارب التي يمكن القيام بها بعد المربوطة ذبابة ويكون قادرا على التنقل في الساحة المغناطيسية. نعرض كيفية الحصول على صور فيديو الأمثل لقياس زاوية الجسم ، وكيفية القاضي مستقرة تتبع الرائحة ، ونحن لتوضيح تجربتين لدراسة تأثير الاشارات البصرية على تتبع الرائحة.

Watch this Scientific Journal Video about Visually Mediated Odor Tracking During Flight in Drosophila at JoVE.com

Visually Mediated Odor Tracking During Flight in Drosophila

هنا نحن تصف كيفية تحسين صورة الفيديو المكتسبة لحاسة الشم الحبل المغناطيسي (OMT) الجهاز. كما وصفنا بروتوكولات عينتين التجريبية لدراسة visuo - الشمية الانصهار.

تتبع الرائحة بصريا وساطة خلال الطيران في ذبابة الفاكهة

Flying insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals additionally track odors carried in the wind. As such, visual ...

visually-mediated-odor-tracking-during-flight-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

9.8K Views.  University of California, Los Angeles. هنا نحن تصف كيفية تحسين صورة الفيديو المكتسبة لحاسة الشم الحبل المغناطيسي (OMT) الجهاز. كما وصفنا بروتوكولات عينتين التجريبية لدراسة visuo - الشمية الانصهار.

Video: Visually Mediated Odor Tracking During Flight in Drosophila

High-resolution Measurement of Odor-Driven Behavior in Drosophila Larvae

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral paradigm, the experimenter usually assumes that the rapid diffusion of odorant molecules from the source leads to the creation of a stable gradient in the dish. To establish a quantitative correlation between sensory inputs and behavioral responses, it is necessary to achieve a more thorough characterization of the odorant stimulus conditions. In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

عالية الدقة قياس سلوك رائحة يحركها يرقات ذبابة الفاكهة في

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral ...

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. As such, visual stabilization of upwind tracking directly aids in odor tracking. But do olfactory signals directly influence visual tracking behavior independently from wind cues? Also, the recent deluge of research on the neurophysiology and neurobehavioral genetics of olfaction in Drosophila has motivated ever more technically sophisticated and quantitative behavioral assays. Here, we modified a magnetic tether system originally devised for vision experiments by equipping the arena with narrow laminar flow odor plumes. A fly is glued to a small steel pin and suspended in a magnetic field that enables it to yaw freely. Small diameter food odor plumes are directed downward over the fly s head, eliciting stable tracking by a hungry fly. Here we focus on the critical mechanics of tethering, aligning the magnets, devising the odor plume, and confirming stable odor tracking.

Here we describe how to tether a fly in an olfactory magnetic-tether (OMT) apparatus. We describe how to align the rare-earth magnets and odor ports, and how to set mass flow rates for both the stimulus delivery and vacuum suction to achieve optimal odor tracking.

: نظام الحبل المغناطيسي بالتحقيق البصرية والشمية التحكم الطيران توسط في ذبابة الفاكهة

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

عالية الدقة تعقب الفيديو للتنقل في الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions

The Drosophila larval neuromuscular preparation has proven to be a useful tool for studying synaptic physiology1,2,3. Currently, the only means available to evoke excitatory junctional potentials (EJPs) in this preparation involves the use of suction electrodes. In both research and teaching labs, students often have difficulty maneuvering and manipulating this type of stimulating electrode. In the present work, we show how to remotely stimulate synaptic potentials at the larval NMJ without the use of suction electrodes. By expressing channelrhodopsin2 (ChR2) 4,5,6 in Drosophila motor neurons using the GAL4-UAS system 7, and making minor changes to a basic electrophysiology rig, we were able to reliably evoke EJPs with pulses of blue light. This technique could be of particular use in neurophysiology teaching labs where student rig practice time and resources are limited.

Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions

This procedure uses a blue light-activated algal channel and cell-specific genetic expression tools to evoke synaptic potentials with light pulses at the neuromuscular junction (NMJ) in Drosophila larvae. This technique is an inexpensive and easy-to-use alternative to suction electrode stimulation for synaptic physiology studies in research and teaching laboratories.

Channelrhodopsin2 تحفيز ساطة من الإمكانيات في متشابك ذبابة الفاكهة العضلية المفارق

The Drosophila larval neuromuscular preparation has proven to be a useful tool for studying synaptic physiology1,2,3. Currently, the only means available ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells (HSCs) differentiate into oligopotent progenitors, committed precursors and mature red blood cells 1. This process is regulated for a large part at the level of gene expression, whereby specific transcription factors activate lineage-specific genes while concomitantly repressing genes that are specific to other cell types 2. Studies on transcription factors regulating erythropoiesis are often performed using human and murine cell lines that represent, to some extent, erythroid cells at given stages of differentiation 3-5. However transformed cell lines can only partially mimic erythroid cells and most importantly they do not allow one to comprehensibly study the dynamic changes that occur as cells progress through many stages towards their final erythroid fate. Therefore, a current challenge remains the development of a protocol to obtain relatively homogenous populations of primary HSCs and erythroid cells at various stages of differentiation in quantities that are sufficient to perform genomics and proteomics experiments.
Here we describe an ex vivo cell culture protocol to induce erythroid differentiation from human hematopoietic stem/progenitor cells that have been isolated from either cord blood, bone marrow, or adult peripheral blood mobilized with G-CSF (leukapheresis). This culture system, initially developed by the Douay laboratory 6, uses cytokines and co-culture on mesenchymal cells to mimic the bone marrow microenvironment. Using this ex vivo differentiation protocol, we observe a strong amplification of erythroid progenitors, an induction of differentiation exclusively towards the erythroid lineage and a complete maturation to the stage of enucleated red blood cells. Thus, this system provides an opportunity to study the molecular mechanism of transcriptional regulation as hematopoietic stem cells progress along the erythroid lineage. 
Studying erythropoiesis at the transcriptional level also requires the ability to over-express or knockdown specific factors in primary erythroid cells. For this purpose, we use a lentivirus-mediated gene delivery system that allows for the efficient infection of both dividing and non-dividing cells 7. Here we show that we are able to efficiently knockdown the transcription factor TAL1 in primary human erythroid cells. In addition, GFP expression demonstrates an efficiency of lentiviral infection close to 90%. Thus, our protocol provides a highly useful system for characterization of the regulatory network of transcription factors that control erythropoiesis.

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

An ex vivo protocol to generate mature human red blood cells from hematopoietic stem/progenitors is described. Additionally we describe an efficient lentiviral-delivery method to knockdown the transcription factor TAL1 in primary erythroid cells. The efficiency of lentivirus mediated gene delivery is demonstrated using GFP expressing viruses.

Lentiviral بوساطة خلال ضربة قاضية السابقين فيفو تكون الكريات الحمر في الإنسان خلايا الجذعية المكونة للدم

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an attractive model system to study organ development and tissue-specific signaling. Although hair follicle development is genetically tractable, fast and reproducible analysis of factors essential for this process remains a challenge. Here we describe a procedure to generate targeted overexpression or shRNA-mediated knockdown of factors using lentivirus in a tissue-specific manner. Using a modified version of a hair regeneration model 5, 6, 11, we can achieve robust gain- or loss-of-function analysis in primary mouse keratinocytes or dermal cells to facilitate study of epithelial-mesenchymal signaling pathways that lead to hair follicle morphogenesis. We describe how to isolate fresh primary mouse keratinocytes and dermal cells, which contain dermal papilla cells and their precursors, deliver lentivirus containing either shRNA or cDNA to one of the cell populations, and combine the cells to generate fully formed hair follicles on the backs of nude mice. This approach allows analysis of tissue-specific factors required to generate hair follicles within three weeks and provides a fast and convenient companion to existing genetic models.

Tissue-specific analysis of a hair follicle regeneration model using lentivirus to mediate gain- or loss-of-function.

تحليل سريع لالوراثية طلائي-الوسيطة اشارة خلال تجديد الشعر

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of genetically-encoded fluorescent proteins has proven a valuable strategy for elucidating dynamic morphogenetic processes as they occur in the intact organism. During the past decade, the development of photoactivatable and photoconvertible fluorescent proteins has opened the possibility to investigate the fate of discrete subpopulations of tagged proteins1. Unlike photoactivatable proteins, photoconvertible fluorescent proteins (PCFPs) are readily tracked and imaged in their native emission state prior to photoconversion, making it easier to identify and select regions by optical inspection. PCFPs, such as Kaede2, KikGR3, Dendra4 and EosFP5, can be shifted from green to red upon exposure to UV or blue light due to a His-Tyr-Gly tripeptide sequence which forms a green chromophore that can be photoconverted to a red one by a light-catalyzed &beta;-elimination and subsequent extension of a &pi;-conjugated system3. PCFPs and their monomeric variants are useful tools for tracking cells6-10 and studying protein dynamics11-14, respectively. During recent years, PCFPs have been expressed in different animal model, such as zebrafish6, chicken7,8 and mouse9,10 for cell fate tracking. Here we report a protocol for cell-specific photoconversion of PCFPs in the living zebrafish embryo and further tracking of photoconverted proteins at later developmental stages. This methodology allows studying, in a tissue-specific manner, cell biological events underlying morphogenesis in the zebrafish animal model.

Here, we present a method for the photoactivated switch of photoconvertible fluorescent proteins (PCFPs) in the living zebrafish embryo and further tracking of photoconverted protein at specific time points during development. This methodology allows monitoring of cell biological events underlying different developmental processes in a live vertebrate organism.

تتبع الخلية عن طريق البروتينات Photoconvertible خلال التنمية اسماك الزرد

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

The proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal development in all metazoan organisms. Apoptotic cell clearance is a highly dynamic process intimately associated with cell death; unengulfed apoptotic cells are barely seen in vivo under normal conditions. In order to understand the different steps of apoptotic cell clearance and to compare 'professional' phagocytes - macrophages and dendritic cells to 'non-professional' - tissue-resident neighboring cells, in vivo live imaging of the process is extremely valuable. Here we describe a protocol for studying apoptotic cell clearance in live Drosophila embryos. To follow the dynamics of different steps in phagocytosis we use specific markers for apoptotic cells and phagocytes. In addition, we can monitor two phagocyte systems in parallel: 'professional' macrophages and 'semi-professional' glia in the developing central nervous system (CNS). The method described here employs the Drosophila embryo as an excellent model for real time studies of apoptotic cell clearance.

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Here we describe an effective method for studying dynamics of apoptotic cell clearance in vivo. This method employs live Drosophila embryos as a powerful model for monitoring phagocytosis of apoptotic cells using specific labeling of apoptotic cells and phagocytes.

يعيش التصوير من تخليص الخلية أفكارك أثناء<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; مرحلة التطور الجنيني

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an oil-coated graduated cylinder; landing height provided a measure of flight performance by assessing how far flies will fall before producing enough thrust to make contact with the wall of the cylinder. Here we describe an updated version of the flight tester with four major improvements. First, we added a &#34;drop tube&#34; to ensure that all flies enter the flight cylinder at a similar velocity between trials, eliminating variability between users. Second, we replaced the oil coating with removable plastic sheets coated in Tangle-Trap, an adhesive designed to capture live insects. Third, we use a longer cylinder to enable more accurate discrimination of flight ability. Fourth we use a digital camera and imaging software to automate the scoring of flight performance. These improvements allow for the rapid, quantitative assessment of flight behavior, useful for large datasets and large-scale genetic screens.

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Here we describe a method for rapid and accurate measurement of flight performance in Drosophila, enabling high-throughput screening.

لتحسين طريقة لقياس دقة وسرعة الأداء في الطيران<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an ...

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

Muscle mass wasting, known as muscle atrophy, is a common phenotype in Drosophila models of neuromuscular diseases. We have used the indirect flight muscles (IFMs) of flies, specifically the dorso-longitudinal muscles (DLM), as the experimental subject to measure the atrophic phenotype brought about by different genetic causes. In this protocol, we describe how to embed fly thorax muscles for semi thin sectioning, how to obtain a good contrast between muscle and the surrounding tissue, and how to process optical microscope images for semiautomatic acquisition of quantifiable data and analysis. We describe three specific applications of the methodological pipeline. First, we show how the method can be applied to quantify muscle degeneration in a myotonic dystrophy fly model; second, measurement of muscle cross-sectional area can help to identify genes that either promote or prevent muscle atrophy and/or muscle degeneration; third, this protocol can be applied to determine whether a candidate compound is able to significantly modify a given atrophic phenotype induced by a disease-causing mutation or by an environmental trigger.

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

We report a method to quantify muscle area, which is an indirect method to determine muscle mass in Drosophila adults. We demonstrate the application of our methodology by analyzing the indirect flight muscles in a Drosophila model of Myotonic Dystrophy disease.

تحديد منطقة عضلة مستعرضة الضوئية عضلات الطيران غير المباشر الكبار Melanogaster المورفولوجية

Muscle mass wasting, known as muscle atrophy, is a common phenotype in Drosophila models of neuromuscular diseases. We have used the indirect flight ...