국립 과학 재단 (National Science Foundation)에서 MF로 부여로 투자

OMT는 가상 플륨 시뮬레이터 2를 통합할 수 있도록 설계된 자기 테더 시스템 1의 적응이다. 다음 프로토콜은 취득 비디오 이미지를 (1 부) 최적화 및 기본 visuo - 후각 실험의 두 종류 (파트 2 &amp; 3)를 실행하는 방법을 설명합니다. 1 부 : 비디오 수집 비디오 이미지를 최적화하면 획득한 데이터의 품질을 매우 중요합니다. 깨끗한 이미지에 대한 다음 단계를 수행하십시오. <ol><li> 포셉 한 켤레를 사용하여 무대에 갓 닿는 파리를 놓습니다. </li><li> 곁에 비행의 복부 측면에 카메라보기가 유리관을 통해 직접적으로 상향 챔버 통해 그러한 명확한 아크릴 진공 챔버 아래에 위치 FireWire를 보드 카메라 (화재 - I 1394store.com). 비디오 시스템의 렌즈에는 적외선 필터 코팅이 없다는 것을 확인하십시오. </li><li> 파리를 조명하려면 LED 패널 아래에 위치 적외선 발광 다이오드 (LED)의 원형 배열 (소형 부품 병원)을 사용합니다. 균일한 조명을위한 개별적으로 파리의 시체에서 LED를 각각 중점을두고 있습니다. </li><li> 패널 시스템에서 섬광을 감소하고 비행 의해 관찰된 영상 신호를 최소화하기 위해, 그것은 평평한 검은 페인트와 카메라보기 내에있는 코트 다 반사 표면을하는 데 유용합니다. 객실 조명은 파리의 눈으로 감지 섬광 및 밝기 modulations을 줄이기 위해 꺼질해야합니다. </li><li> 시각 카메라 이미지를 검사합니다. 파리가 검은 배경 밝은 흰색해야합니다. 이미지가 흐리게되면 렌즈는 초점을해야 할 수도 있습니다. 파리가 어두운 경우, LED 배열은 산만하거나 충분 적절한 조명을위한 구동 수 있습니다. 배경이 밝은 개체를 포함하는 경우, 배경 반사율을 최소화하기 위해 막 날아 위의 검은 무리 종이의 디스크를 탑재합니다. </li><li> 우리는 이미지 수집 도구 상자를 사용하여 Matlab로 작성된 사용자 정의 서브루틴과 영상을 획득. </li></ol> 2 부 : 악취 플륨를 찾는 비행 OMT에서 한 간단한 실험 위치 배고픈 (굶주린) 비행을 준수하고 적극적으로 매력적인 음식 냄새의 깃털을 추적합니다. 시각 환경을 조작하는 것은 견고 appetitive 음식 냄새를 추적하는 비행의 능력에 영향을 미칩니다. 실험 일반적으로 실험 순서에 편견을 최소화하기 위해 임의의 블록 형식으로 실행됩니다. 모든 외부 하드웨어 (가스 멀티플렉서, LED 투기장, 비디오 취득) Matlab (Mathworks)로 작성된 맞춤 소프트웨어 루틴에 의해 제어됩니다. <ol><li> 포셉 한 켤레를 사용하여 무대에 갓 닿는 파리를 놓습니다. </li><li> 모든 실험을하기 전에, 시각 디스플레이를 사용하여 전체 360 편주 축 주위에 부드러운 움직임을 보장하기 위해 여러 가지 회전을 위해 파리 3 회전. 파리가 회전하지 않는 경우 원활하게 그것을 폐기. 문제가 지속되면, 원인이 고르지 자석입니다. 참고 : 스핀 재판 동안 여러 궤도로 가고 경기장의 배포가 큰 봉우리를 (즉, 360도 이상의 평면이 아니다) 표시되면 고르지 자석에 의한 방향 바이어스 가능성이있다. </li><li> 무작위 순서로 아래의 예제 실험 조건과 파리를 제시 : 나는 수증기가 악취 포트에서 냄새가 나는데 포함) 높은 콘트라스트 줄무늬 패턴, II) 매력적인 냄새 수증기와 높은 대비 줄무늬 패턴, 3) 한 세로 줄무늬가 90도 오프셋 수증기 노즐에서, 그리고 4) 한 90도이 냄새 증기와 스트 라이프를 오프셋. 우리의 경험에서는, 30 초 간격으로 파리가 자신의 냄새 소스를 찾을 수 도전 아르 실험 잘 작동합니다. 우리는 각 실험 조건의 기간 동안 30 Hz에서에서 비디오를 취득하고 (한 Matlab 작성된 맞춤 소프트웨어 루틴을 사용하여 오프라인 이미지를 분석하는 가장 유용한 내장 Matlab 함수 타원의 기하학적 특성을 분석 regionprops.m입니다. </li><li> 냄새가 꺼져 후 높은 악취 농도를 사용하면 잔류 냄새가 악취 포트에서 공개 수 있습니다. 이것은 그것이 시스템은 잔여 냄새를 제거 수 있도록 회전 파노라마로 몇 초 동안 비행을 회전하는 데 유용합니다 미칠 수있는 영향을 최소화합니다. </li><li> 그것은 유지은 (i) 시각으로 실험 트리 트먼트를 사이에 파리를 회전하는 것도 도움이됩니다 적극적으로 실험에서 그리고 (ii) 어떤 한 지점에 남아에서 파리를 유지하는 약혼 날아. ; II) 오초 중간 회전, 3) 스물두번째 조건 쌍 # 1, 4) 오초 중간 스핀, V) 스물두번째 조건 쌍 # 2 I) 스물두번째 초기 진단 스핀 : 예제 실험이 다음 순서가있을 수 있습니다. </li></ol> 파트 3 : 악취 플륨 내에 남아있는 비행 OMT의 두 번째 기본적인 실험을 시각적으로 악취 플륨에 파리를 드래그하는 것입니다, 즉시 시각 조건을 변경한 다음 플륨에 남아있는 그 능력을 측정합니다. 다시 말하지만, 모든 실험은 무작위 블록 견적에서 수행됩니다t는 실험 순서에 편견을 최소화하기 위해. <ol><li> 포셉 한 켤레를 사용하여 무대에 갓 닿는 파리를 놓습니다. </li><li> 시각 동물 (파트 2.2를 참조) 모든 방향으로 방향으로 능력을 가지고 있는지 확인하는 진단 검사로 모든 실험을하기 전에 (스핀), 경기장 주변의 비행을 여러 번 돌린다. </li><li> 각 조건하기 전에 실험 냄새 (물 또는 식초)에 설정 시각 깃털의 위치에 작은 수직 줄무늬가 진동하여 깃털로 파리를 &quot;드래그&quot;. 이것은 파리 [4]에서 관찰 강력한 스트 라이프 고정 동작을 활용합니다. </li><li> 이제 비행이 플륨쪽으로 방향 즉, 진동 스트 라이프를 제거하고 다음 예제 Visual 조건을 제시 : 수증기 (그림 1A)와 전) 고대비 파노라마 줄무늬, II) 수증기 (그림의 1B)와 유니폼을 배경; 3) 냄새 증기 (그림 1C)와 높은 대비 파노라마 줄무늬, 냄새 증기 (그림의 1D)와 4) 균일한 배경. 2.3에서와 같이 동영상을 습득. 스물두번째 조건 쌍 # 2 V), II) 오초 플륨 스트 라이프 진동,, 3) 스물두번째 조건 쌍 # 1, 4) 오초 플륨 스트 라이프 진동 I) 스물두번째 초기 진단 스핀 : 예제 실험이 흐르는 순서가있을 수 있습니다 . </li></ol> 대표 결과 : <img src="/files/ftp_upload/old/1110_2009_1_22_1/Fig 1.png" alt="그림 1" width="600" height="195" /> 그림 1 파트 1은 OMT 비디오 이미지를 최적화하는 방법에 대해 설명합니다. 비디오 이미지는 어두운 검정색 배경에 조명 비행을 확연히 볼 수 있어야합니다. 과도하게 밝은 이미지, 배경 간섭을 감소 IR LED가의 강도를 줄이고, 또는 방 조명을 해제에 의해 향상시킬 수 있습니다. 파리가 부적절하게 켜져있는 경우, IR LED가 또는 IR LED가의 modulating 강도의 초점을 조정하면 문제를 해결할 수 있습니다. 파트 2 &amp; 3 OMT의 적절한 작동을 확인하기 위해 수행하는 간단한 실험을 설명합니다. 모든 경우에, 파리는 시각 운동의 원활하고 완전한 범위를 보장하기 위해 경기장에 몇 회전을 회전 (optomotor 응답을 통해) &quot;강제로&quot;한다. 2 부에서는 파리는 자체에 악취 플륨을 찾는 도전이다. , 실험에 참여 비행을 유지하기 위해 잔여 냄새 릴리스의 효과를 감소하고, 실험을 통해 제목 하나를 유지에서 파리를 유지하기 위해, 그것은 시각적으로 실험 사이에 몇 초 동안 비행을 회전하는 데 유용합니다. 파리가 상당한 정도로 수증기 플륨를​​ 집중해서는 안됩니다, 항상 풍부한 파노라마 영상 신호의 면전에서 냄새 플륨을 집중해야합니다. 제 3 비행은 시각 냄새 플륨로 직접 끌어와 정지 영상 배경의 다양한 반대 플륨 이내에 표제를 유지하는 도전이다. 비행가 수증기 플륨에 끌어 경우, 신속하게 발길을 돌리한다. 파리가 냄새 플륨에 끌려하고 강력한 추적을 중재하기 위해 충분한 시각적 단서가있는 경우, 즉시이 플륨를 유지합니다.

<ol>
	<li>Bender, J. A., Dickinson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+stimulation+of+saccades+in+magnetically+tethered+Drosophila.">Visual stimulation of saccades in magnetically tethered Drosophila.</a> J Exp Biol. 209, 3170-3182 (2006).</li><li>Duistermars, B. J., Frye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossmodal+visual+input+for+odor+tracking+during+fly+flight.">Crossmodal visual input for odor tracking during fly flight.</a> Curr Biol. 18, 270-275 (2008).</li><li>Reiser, M. B., Dickinson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modular+display+system+for+insect+behavioral+neuroscience.">A modular display system for insect behavioral neuroscience.</a> J Neurosci Methods. 167, 127-139 (2008).</li><li>G&#246;tz, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Course-control,+metabolism+and+wing+interference+during+ultralong+tethered+flight+in+Drosophila+melanogaster.">Course-control, metabolism and wing interference during ultralong tethered flight in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 128, 35-46 (1987).</li></ol>

이 시스템에 대한 이미지 인수는 Matlab으로 작성된 저렴한 FireWire를 보드 카메라와 소프트웨어를 활용합니다. 지우기 이미지가 정확한 데이터 추적을 얻기위한 열쇠입니다. 위에서 설명한 전략이 시스템의 이미지를 정리하는 데 유용합니다. 이 시스템에 대한 기타 비디오 추적 절차 1 설명하고 있습니다. 또한이 시스템은 쉽게 실시간 비디오 추적을 포함하도록 수정이 될 수 있습니다. 예?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Firewire camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1394store.com</td>
<td>Fire-I board camera BW</td>
<td>4.3mm lens no IR coating</td>
</tr>
<tr>
<td>IR LEDs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Small Parts</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Black spray paint</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rustoleum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Flat black</td>
</tr>
<tr>
<td>Black flock paper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Edmund Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Panel system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caltech</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>3</td>
</tr>
<tr>
<td>Matlab 2006a</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mathworks</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Image acquisition toolbox</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

visually mediated odor tracking during flight in drosophila

비행 곤충들은 바람 스트림의 제목을 안정화시키기 위해 시각적 단서를 사용합니다. 많은 동물은 또한 바람에 실시 냄새를 추적할 수 있습니다. 맞바람의 등, 영상 안정화는 냄새 추적에 직접 에이즈 추적. 그러나 후각 신호를 직접 바람의 단서에서 독립적으로 시각 추적 행동에 영향을합니까? 또한, 후각 분자 유전학 및 neurophysiology 최근 발전 (예) 유전자 특정 후각 활성화 회로의 운영을 중지시키지 행동 영향을 평가하기 위해 새로운 정량 분석​​을 행동 동기가있다. 우리는 원래 좁은 층류의 냄새 plumes과 무대를 갖춘하여 시력 실험 고안 자기 테더 시스템을 수정했습니다. 여기는 파리가 닿는 후 수행과 자기 분야에서 탐색할 수있는 수있는 실험에 중점을두고 있습니다. 우리는 얼마나 안정적인 냄새 추적을 판단하는 신체 각도 측정에 최적화된 영상 이미지를 획득하는 방법을 보여줍니다, 우리는 냄새 추적에 대한 시각적 단서의 영향을 검토하는 방법은 두 실험을 보여줍니다.

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Visually Mediated Odor Tracking During Flight in Drosophila

여기서 우리는 후각 자기 - 밧줄 (OMT) 장치에 대한 취득 비디오 이미지를 최적화하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 또한 visuo - 후각 융합을 공부 두 가지 샘플 실험 프로토콜을 설명합니다.

Drosophila의 비행 중 시각 인한 악취 추적

Flying insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals additionally track odors carried in the wind. As such, visual ...

visually-mediated-odor-tracking-during-flight-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

9.8K 조회수.  University of California, Los Angeles. 여기서 우리는 후각 자기 - 밧줄 (OMT) 장치에 대한 취득 비디오 이미지를 최적화하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 또한 visuo - 후각 융합을 공부 두 가지 샘플 실험 프로토콜을 설명합니다.

비디오: Visually Mediated Odor Tracking During Flight in Drosophila

High-resolution Measurement of Odor-Driven Behavior in Drosophila Larvae

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral paradigm, the experimenter usually assumes that the rapid diffusion of odorant molecules from the source leads to the creation of a stable gradient in the dish. To establish a quantitative correlation between sensory inputs and behavioral responses, it is necessary to achieve a more thorough characterization of the odorant stimulus conditions. In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

Drosophila의 유충에서 냄새 기반 행동의 고해상도 측정

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral ...

연구

생물학

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. As such, visual stabilization of upwind tracking directly aids in odor tracking. But do olfactory signals directly influence visual tracking behavior independently from wind cues? Also, the recent deluge of research on the neurophysiology and neurobehavioral genetics of olfaction in Drosophila has motivated ever more technically sophisticated and quantitative behavioral assays. Here, we modified a magnetic tether system originally devised for vision experiments by equipping the arena with narrow laminar flow odor plumes. A fly is glued to a small steel pin and suspended in a magnetic field that enables it to yaw freely. Small diameter food odor plumes are directed downward over the fly s head, eliciting stable tracking by a hungry fly. Here we focus on the critical mechanics of tethering, aligning the magnets, devising the odor plume, and confirming stable odor tracking.

Here we describe how to tether a fly in an olfactory magnetic-tether (OMT) apparatus. We describe how to align the rare-earth magnets and odor ports, and how to set mass flow rates for both the stimulus delivery and vacuum suction to achieve optimal odor tracking.

Drosophila에서 Visual과 강한 중재 플라이트 컨트롤을 맡은 이후로 자기 테더 시스템

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

성인 Drosophila Melanogaster의 로코의 고해상도 비디오 추적

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions

The Drosophila larval neuromuscular preparation has proven to be a useful tool for studying synaptic physiology1,2,3. Currently, the only means available to evoke excitatory junctional potentials (EJPs) in this preparation involves the use of suction electrodes. In both research and teaching labs, students often have difficulty maneuvering and manipulating this type of stimulating electrode. In the present work, we show how to remotely stimulate synaptic potentials at the larval NMJ without the use of suction electrodes. By expressing channelrhodopsin2 (ChR2) 4,5,6 in Drosophila motor neurons using the GAL4-UAS system 7, and making minor changes to a basic electrophysiology rig, we were able to reliably evoke EJPs with pulses of blue light. This technique could be of particular use in neurophysiology teaching labs where student rig practice time and resources are limited.

Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions

This procedure uses a blue light-activated algal channel and cell-specific genetic expression tools to evoke synaptic potentials with light pulses at the neuromuscular junction (NMJ) in Drosophila larvae. This technique is an inexpensive and easy-to-use alternative to suction electrode stimulation for synaptic physiology studies in research and teaching laboratories.

에서 시냅틱 후보의 Channelrhodopsin2 중재 ​​자극 Drosophila 신경근육학 분기점

The Drosophila larval neuromuscular preparation has proven to be a useful tool for studying synaptic physiology1,2,3. Currently, the only means available ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells (HSCs) differentiate into oligopotent progenitors, committed precursors and mature red blood cells 1. This process is regulated for a large part at the level of gene expression, whereby specific transcription factors activate lineage-specific genes while concomitantly repressing genes that are specific to other cell types 2. Studies on transcription factors regulating erythropoiesis are often performed using human and murine cell lines that represent, to some extent, erythroid cells at given stages of differentiation 3-5. However transformed cell lines can only partially mimic erythroid cells and most importantly they do not allow one to comprehensibly study the dynamic changes that occur as cells progress through many stages towards their final erythroid fate. Therefore, a current challenge remains the development of a protocol to obtain relatively homogenous populations of primary HSCs and erythroid cells at various stages of differentiation in quantities that are sufficient to perform genomics and proteomics experiments.
Here we describe an ex vivo cell culture protocol to induce erythroid differentiation from human hematopoietic stem/progenitor cells that have been isolated from either cord blood, bone marrow, or adult peripheral blood mobilized with G-CSF (leukapheresis). This culture system, initially developed by the Douay laboratory 6, uses cytokines and co-culture on mesenchymal cells to mimic the bone marrow microenvironment. Using this ex vivo differentiation protocol, we observe a strong amplification of erythroid progenitors, an induction of differentiation exclusively towards the erythroid lineage and a complete maturation to the stage of enucleated red blood cells. Thus, this system provides an opportunity to study the molecular mechanism of transcriptional regulation as hematopoietic stem cells progress along the erythroid lineage. 
Studying erythropoiesis at the transcriptional level also requires the ability to over-express or knockdown specific factors in primary erythroid cells. For this purpose, we use a lentivirus-mediated gene delivery system that allows for the efficient infection of both dividing and non-dividing cells 7. Here we show that we are able to efficiently knockdown the transcription factor TAL1 in primary human erythroid cells. In addition, GFP expression demonstrates an efficiency of lentiviral infection close to 90%. Thus, our protocol provides a highly useful system for characterization of the regulatory network of transcription factors that control erythropoiesis.

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

An ex vivo protocol to generate mature human red blood cells from hematopoietic stem/progenitors is described. Additionally we describe an efficient lentiviral-delivery method to knockdown the transcription factor TAL1 in primary erythroid cells. The efficiency of lentivirus mediated gene delivery is demonstrated using GFP expressing viruses.

Lentiviral - 중재 최저 동안 예 VIVO</em인간 조혈 줄기 세포의> 적혈구 조혈

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an attractive model system to study organ development and tissue-specific signaling. Although hair follicle development is genetically tractable, fast and reproducible analysis of factors essential for this process remains a challenge. Here we describe a procedure to generate targeted overexpression or shRNA-mediated knockdown of factors using lentivirus in a tissue-specific manner. Using a modified version of a hair regeneration model 5, 6, 11, we can achieve robust gain- or loss-of-function analysis in primary mouse keratinocytes or dermal cells to facilitate study of epithelial-mesenchymal signaling pathways that lead to hair follicle morphogenesis. We describe how to isolate fresh primary mouse keratinocytes and dermal cells, which contain dermal papilla cells and their precursors, deliver lentivirus containing either shRNA or cDNA to one of the cell populations, and combine the cells to generate fully formed hair follicles on the backs of nude mice. This approach allows analysis of tissue-specific factors required to generate hair follicles within three weeks and provides a fast and convenient companion to existing genetic models.

Tissue-specific analysis of a hair follicle regeneration model using lentivirus to mediate gain- or loss-of-function.

헤어 재생시 상피 - 중간 엽 시그널링의 빠른 유전 분석

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of genetically-encoded fluorescent proteins has proven a valuable strategy for elucidating dynamic morphogenetic processes as they occur in the intact organism. During the past decade, the development of photoactivatable and photoconvertible fluorescent proteins has opened the possibility to investigate the fate of discrete subpopulations of tagged proteins1. Unlike photoactivatable proteins, photoconvertible fluorescent proteins (PCFPs) are readily tracked and imaged in their native emission state prior to photoconversion, making it easier to identify and select regions by optical inspection. PCFPs, such as Kaede2, KikGR3, Dendra4 and EosFP5, can be shifted from green to red upon exposure to UV or blue light due to a His-Tyr-Gly tripeptide sequence which forms a green chromophore that can be photoconverted to a red one by a light-catalyzed &beta;-elimination and subsequent extension of a &pi;-conjugated system3. PCFPs and their monomeric variants are useful tools for tracking cells6-10 and studying protein dynamics11-14, respectively. During recent years, PCFPs have been expressed in different animal model, such as zebrafish6, chicken7,8 and mouse9,10 for cell fate tracking. Here we report a protocol for cell-specific photoconversion of PCFPs in the living zebrafish embryo and further tracking of photoconverted proteins at later developmental stages. This methodology allows studying, in a tissue-specific manner, cell biological events underlying morphogenesis in the zebrafish animal model.

Here, we present a method for the photoactivated switch of photoconvertible fluorescent proteins (PCFPs) in the living zebrafish embryo and further tracking of photoconverted protein at specific time points during development. This methodology allows monitoring of cell biological events underlying different developmental processes in a live vertebrate organism.

Zebrafish 개발하는 동안 Photoconvertible 단백질을 사용하여 셀 추적

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

The proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal development in all metazoan organisms. Apoptotic cell clearance is a highly dynamic process intimately associated with cell death; unengulfed apoptotic cells are barely seen in vivo under normal conditions. In order to understand the different steps of apoptotic cell clearance and to compare 'professional' phagocytes - macrophages and dendritic cells to 'non-professional' - tissue-resident neighboring cells, in vivo live imaging of the process is extremely valuable. Here we describe a protocol for studying apoptotic cell clearance in live Drosophila embryos. To follow the dynamics of different steps in phagocytosis we use specific markers for apoptotic cells and phagocytes. In addition, we can monitor two phagocyte systems in parallel: 'professional' macrophages and 'semi-professional' glia in the developing central nervous system (CNS). The method described here employs the Drosophila embryo as an excellent model for real time studies of apoptotic cell clearance.

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Here we describe an effective method for studying dynamics of apoptotic cell clearance in vivo. This method employs live Drosophila embryos as a powerful model for monitoring phagocytosis of apoptotic cells using specific labeling of apoptotic cells and phagocytes.

사멸 세포 간극의 이미지를하는 동안 라이브<em&gt; 초파리</em&gt; 배아

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an oil-coated graduated cylinder; landing height provided a measure of flight performance by assessing how far flies will fall before producing enough thrust to make contact with the wall of the cylinder. Here we describe an updated version of the flight tester with four major improvements. First, we added a &#34;drop tube&#34; to ensure that all flies enter the flight cylinder at a similar velocity between trials, eliminating variability between users. Second, we replaced the oil coating with removable plastic sheets coated in Tangle-Trap, an adhesive designed to capture live insects. Third, we use a longer cylinder to enable more accurate discrimination of flight ability. Fourth we use a digital camera and imaging software to automate the scoring of flight performance. These improvements allow for the rapid, quantitative assessment of flight behavior, useful for large datasets and large-scale genetic screens.

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Here we describe a method for rapid and accurate measurement of flight performance in Drosophila, enabling high-throughput screening.

비행 성능의 정확하고 빠른 측정을위한 개선 된 방법에<em&gt; 초파리</em

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex signaling mechanisms underlying filopodial initiation, elongation and subsequent stabilization or retraction, it is crucial to determine the spatio-temporal protein activity in these dynamic structures. To analyze protein function in filopodia, we recently developed a semi-automated tracking algorithm that adapts to filopodial shape-changes, thus allowing parallel analysis of protrusion dynamics and relative protein concentration along the whole filopodial length. Here, we present a detailed step-by-step protocol for optimized cell handling, image acquisition and software analysis. We further provide instructions for the use of optional features during image analysis and data representation, as well as troubleshooting guidelines for all critical steps along the way. Finally, we also include a comparison of the described image analysis software with other programs available for filopodia quantification. Together, the presented protocol provides a framework for accurate analysis of protein dynamics in filopodial protrusions using image analysis software.

We present a software solution for semi-automated tracking of relative protein concentration along the length of dynamic cellular protrusions.

동적 세포 돌출부에서 소프트웨어를 이용한 단백질 농도 추적을위한 그래픽 사용자 인터페이스

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...