بدعم جزئي من قبل NEI / EY017885 المعاهد الوطنية للصحة (RMS).

<ol>
	<li>Melles, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+surgical+technique+for+posterior+lamellar+keratoplasty.">A surgical technique for posterior lamellar keratoplasty.</a> Cornea. 17, 618-626 (1998).</li><li>Melles, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+clinical+results+of+posterior+lamellar+keratoplasty+through+a+sclerocorneal+pocket+incision.">Preliminary clinical results of posterior lamellar keratoplasty through a sclerocorneal pocket incision.</a> Ophthal. 107, 1850-1856 (2000).</li><li>Terry, M. A., Ousley, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replacing+the+endothelium+without+corneal+surface+incisions+or+sutures:+the+first+United+States+clinical+series+using+the+deep+lamellar+endothelial+keratoplasty+procedure.">Replacing the endothelium without corneal surface incisions or sutures: the first United States clinical series using the deep lamellar endothelial keratoplasty procedure.</a> Ophthal. 110, 755-764 (2003).</li><li>Price, F. W., Price, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Descemet's+stripping+with+endothelial+keratoplasty+in+50+eyes:+a+refractive+neutral+corneal+transplant.">Descemet's stripping with endothelial keratoplasty in 50 eyes: a refractive neutral corneal transplant.</a> J. Refract Surg. 21, 339-345 (2005).</li><li>Price, M. O., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Descemet's+stripping+with+endothelial+keratoplasty:+comparative+outcomes+with+microkeratome-dissected+and+manually+dissected+donor+tissue.">Descemet's stripping with endothelial keratoplasty: comparative outcomes with microkeratome-dissected and manually dissected donor tissue.</a> Ophthal. 113, 1936-1942 (2006).</li><li>Bahar, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+contralateral+study+comparing+descemet+stripping+automated+endothelial+keratoplasty+with+penetrating+keratoplasty.">Retrospective contralateral study comparing descemet stripping automated endothelial keratoplasty with penetrating keratoplasty.</a> Cornea. 28, 485-488 (2009).</li><li>Rose, L., Briceno, C. A., Stark, W. J., Gloria, D. G., Jun, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Eye+Bank-Prepared+Posterior+Lamellar+Corneal+Tissue+for+Endothelial+Keratoplasty.">Assessment of Eye Bank-Prepared Posterior Lamellar Corneal Tissue for Endothelial Keratoplasty.</a> Ophthal. 115, 279-286 (2008).</li><li>Price, M. O., Baig, K. M., Brubaker, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=prospective+comparison+of+precut+versus+surgeon-dissected+grafts+for+Descemet+stripping+automated+endothelial+keratoplasty.">prospective comparison of precut versus surgeon-dissected grafts for Descemet stripping automated endothelial keratoplasty.</a> Am. J. Ophthalmol. 146, 36-41 (2008).</li><li>Chen, E. S., Terry, M. A., Shamie, N., Hoar, K. L., Friend, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precut+tissue+in+Descemet's+stripping+automated+endothelial+keratoplasty+donor+characteristics+and+early+postoperative+complications.">Precut tissue in Descemet's stripping automated endothelial keratoplasty donor characteristics and early postoperative complications.</a> Ophthalmology. 115, 497-502 (2008).</li><li>Terry, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+Keratoplasty:+A+Comparision+of+Complication+Rates+and+Endothelial+Survival+between+Precut+Tissue+and+Surgeon-cut+Tissue+by+a+Single+DSAEK+Surgeon.">Endothelial Keratoplasty: A Comparision of Complication Rates and Endothelial Survival between Precut Tissue and Surgeon-cut Tissue by a Single DSAEK Surgeon.</a> Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 107, 184-193 (2009).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Reference document E1.710 Corneal Tissue Preparation for Lamellar Procedures. , 1-5 (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Eye Banking Statistical Report. , 1-5 (2009).</li><li>Glasser, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+complications+during+endothelial+keratoplasty.">Tissue complications during endothelial keratoplasty.</a> Cornea. 29, 1428-1429 (2010).</li><li>Kelliher, C., Engler, C., Speck, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+analysis+of+eye+bank-prepared+posterior+lamellar+corneal+tissue+for+use+in+endothelial+keratoplasty.">A comprehensive analysis of eye bank-prepared posterior lamellar corneal tissue for use in endothelial keratoplasty.</a> Cornea. 28, 966-970 (2009).</li><li>Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precut+tissue+for+Descemet+stripping+automated+endothelial+keratoplasty.">Precut tissue for Descemet stripping automated endothelial keratoplasty.</a> Cornea. 27, 630-631 (2008).</li></ol>

دائرة الاستعلام والأمن. وودوارد وShtein ليس لديهم ما يكشف. السيد Mavin وتيتوس السيد هم موظفون من بنوك العيون الغرب الاوسط.

الطبقة الداخلية، أكثر من القرنية، والبطانة، ويحافظ على وضوح بصرية للقرنية من خلال الحفاظ على جفاف القرنية. الولايات مرض عديدة تؤثر بشكل خاص على صحة وسلامة البطانة القرنية بما في ذلك الالتهابات، وضمور، وعمليات التهابات، والإنحطاط. حتى وقت قريب، مطلوب زراعة القرنية لاستبدال بطانة القرنية المريضة كامل زرع سمك القرنية. في العقد الماضي، كانت تستهدف استبدال القرنية الخلفية بواسطة زرع سماكة القرنية الجزئية، مثل جراحة DSAEK، وقادرة على تحقيق نفس الهدف مع وقت أقصر الانتعاش. بغض النظر عن الأسلوب، يجب أن الأنسجة المزروعة تحتفظ بطانة القرنية السليمة للحفاظ على وضوح بصري في القرنية المزروعة، ونتيجة، وكلها تقنيات معالجة الأنسجة لديها خطوات إضافية لحماية بطانة القرنية. الآلي microkeratome تشريح حاليا عشره القياسية لتحضير نسيج القرنية للالقرنية البطانية. وقد تبين من استخدام microkeratome لخفض المانحة ثقب الأنسجة وسرعة انتعاش البصرية مقارنة تشريح دليل 5. اشتريت بعض الجراحين عندما قدم في البداية DSAEK، microkeratome المعدات وتنفيذ تشريح المانحة رقائقية في غرفة العمليات في بداية عملية جراحية. إذا فشل إعداد الأنسجة، فإن عملية جراحية لا بد من إلغاء تسبب إزعاج ونفقة للمريض والجراح. في عام 2006 بدأت بنوك العيون أداء تشريح microkeratome &quot;خارج الموقع&quot; في ظل ظروف متحكم بها في المعمل عين البنك في اليوم قبل الجراحة 12. إذا فشل إعداد الأنسجة في هذا الإطار، هناك متسع من الوقت لإجراء تشريح آخر مع أنسجة جديدة. تشريح Microkeratome من الأنسجة المانحة الخلفي القرنية صفاحي يتطلب تقنية لطيف ودقيق للحد من المضاعفات. يجب أن توضع في القرنية gentlذ في الغرفة الأمامية الاصطناعي (AAC) لتجنب أي ضرر للخلايا البطانية دقيق. مرة واحدة هي التي شنت القرنية والانحياز بشأن الجميح للسيارات، لا بد من وضعه في حلقة القفل وتعديلها للحصول على ختم مشددة للحفاظ على الضغط العالي داخل الغرفة ويقلل من فرص انهيار النسيج خلال تشريح microkeratome. لضمان تشريح موحدة، يتعين على رئيس microkeratome بالتناوب بطريقة مستمرة على نحو سلس. بعد تشريح، يجب مرة أخرى يتم التعامل معها بعناية الأنسجة للحد من تلف الخلايا البطانية. علاوة على ذلك، من الأهمية بمكان التأكيد على أن خفض صفاحي هو محورها وكاملة من أجل ضمان أن تكون الصفيحة الخلفية سوف تكون مناسبة للاستخدام في الجراحة 13. انثقاب القرنية المانحة هو اختلاط اللعين من هذا الإجراء، فإنه يصبح أقل تواترا من ذوي الخبرة. إذا ثقوب متكررة تحدث أثناء مرور microkeratome، فمن المهم للتحقق من خطوات عدة في هذا الإجراء. الذرةعصام يحتاج إلى أن يثبت بشكل صحيح والانحياز بشأن الجميح للسيارات. وينبغي الحصول على ختم ضيقة وارتفاع الضغط قبل مرور microkeratome وحافظت طوال الإجراء. في بعض الأحيان، الملتحمة المتبقي موجود على حافة صلبة، وتحتاج إلى تشريح قبالة قبل التركيب. يجب أن نصل microkeratome تكون حادة ودون الشقوق. وينبغي اختيار رئيس microkeratome الصحيح سمك على أساس سمك القرنية المقدرة. يجب على رئيس microkeratome أن تتأرجح بشكل صحيح قبل مرور. مع مزيد من المشاكل مع هذه التقنية، والرجوع إلى مزود microkeratome للتحقق من أن جميع المعدات تعمل بشكل صحيح. حتى عندما يكون أداؤها تماما، هناك بعض القيود على هذه التقنية. رؤساء Microkeratome المتاحة لقطع نسيج القرنية في سمك مختلف، ولكن العلاقة بين رئيس microkeratome إلى سماكة النسيج النهائية غير دقيقة مع رئيس ذاته توفير مجموعة واسعة من النسيج النهائي سمك7. وبالإضافة إلى ذلك، منحنى التعلم كبيرة موجودة ومضاعفات في إعداد أكثر شيوعا للمستخدمين الجدد. أداء تشريح رقائقية في العين وضع البنك يسمح الفنيين المدربين الذين تنفيذ هذا الإجراء عدة مرات في اليوم الواحد لتحسين تقنيتهم، وبالتالي تقليل المضاعفات الناجمة عن قلة خبرة. تعديلات تقنية لmicrokeratome بمساعدة تشريح القرنية القرنية لالبطانية وجود لها. البعض يفضل استخدام المواد اللزجة أو وسائط التخزين القرنية بدلا من حل متوازن الملح تحت زر القرنية في الغرفة الأمامية اصطناعية بهدف توفير الحماية المتزايدة للبطانة القرنية. وهناك أيضا اختلافات في طريقة لتحديد الموقع الذي ينبغي أن يبدأ في شق microkeratome. يجوز للمصارف العيون المختلفة والجراحين القرنية المختلفة لها أفضليات خاصة فيما يتعلق بكيفية يتم وضع علامة على القرنية لتحديدالغطاء الأمامي القرنية أو التوجه صفاحي الخلفي. تجدر الإشارة إلى أن الشركات المصنعة جعل معدات مماثلة لتلك المستخدمة في هذا البروتوكول. وينبغي اتباع إرشادات الشركة المصنعة خاصة مع أيهما المعدات المستخدمة. وكان يمكن الاعتماد عليها إعداد بنك العيون من نسيج القرنية تشريح لعملية جراحية DSAEK مفيدة للقبول واسع النطاق لهذه التقنية الجراحية الجديدة نسبيا. وقد خفف أي إعداد الأنسجة، والقيود العملية العديد من DSAEK - مرة واحدة الجراحين أصبح على ثقة في بنوك العيون أداء &quot;خطوة أولى&quot; في زراعة القرنية. وكانت بنوك العيون قادرة على الحفاظ على موثوق بها مع الطلب على الأنسجة المصنعة مع امدادات آمنة وفعالة، وفي الوقت المناسب من الأنسجة المانحة. ويمكن الآن عالية الجودة نسيج DSAEK أن يؤمر مقدما والتشغيل مرة غرفة والمضاعفات إعداد الأنسجة انخفضت 9، 14-15. هذا البروتوكول يصف preparatiعلى من الطعوم DSAEK من منظور تجهيز بنك العيون من نسيج القرنية المانحة، ولكن هذه التقنية قابلة للتطبيق مباشرة إلى الجراحين المهتمين في إعداد الخاصة بهم صفاحي الأنسجة القرنية المانحة، فضلا عن المهتمين في إجراء الدراسات المعملية المستندة أو السريرية على القرنية صفاحي تلك زرع. التوجهات المستقبلية لإعداد صفاحي القرنية وتشمل استخدام ليزر الفيمتو ثانية لمعالجة الأنسجة، وإنشاء &quot;رقيقة جدا&quot; DSAEK الأنسجة القرنية، أو إعداد لفائف من البطانية لغشاء القرنية Descemet في بطانة القرنية (DMEK) عملية جراحية. القرنية البطانية هو حقل الجراحة في تطور والعلاقة التكافلية بين بنك العيون وجراح القرنية سوف تستمر في تغيير كما هي الأمثل في التقنيات الجراحية.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم المعدات </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> Microkeratome </td><td> موريا </td><td> 1021174 </td></tr><tr><td> الاصطناعي قاعدة الغرفة الأمامية </td><td> موريا </td><td> 19161-562 </td></tr><tr><td> اصطناعية قبعة الغرفة الأمامية </td><td> موريا </td><td> 19172-220 </td></tr><tr><td> رئيس Microkeratome 300 </td><td> موريا </td><td> O304 </td></tr><tr><td> رئيس Microkeratome 350 </td><td> موريا </td><td> N791 </td></tr><tr><td> تعزية </td><td> موريا </td><td> 19360-3482 </td></tr></tbody></table>

corneal donor tissue preparation for endothelial keratoplasty

على مدى السنوات العشر الماضية، شهدت تقنيات زرع القرنية جراحية ثورية التغييرات 1،2. منذ تأسيسها، وقد تم زرع التقليدية سماكة القرنية لعلاج كامل لاستعادة البصر في تلك محدودة بسبب مرض القرنية. بعض العيوب لهذا النهج وتشمل درجة عالية من الاستجماتيزم بعد العملية الجراحية، وعدم الانكسار نتيجة يمكن التنبؤ بها، واضطراب على سطح العين. لقد تغير وضع القرنية Descemet في البطانية تجريد (DSEK)، زرع فقط ستروما الخلفي القرنية، غشاء Descemet، والبطانة، بشكل كبير علاج مرض بطانة القرنية. يتم تنفيذ DSEK من خلال شق أصغر، وهذا الأسلوب يتجنب عملية جراحية &quot;السماء المفتوحة&quot; مع مخاطرها من نزف أو الطرد، ويقلل من حالات الإصابة تفزر الجرح بعد العملية الجراحية، ويقلل من نتائج لا يمكن التنبؤ بها الانكسار، وربما خفض معدل رفض الزرع 3-6. ove_content &quot;&gt; في البداية، تم تنفيذ القرنية المانحة تشريح صفاحي الخلفي للDSEK يدويا 1 مما أدى إلى سماكة الكسب غير المشروع متغير والأضرار التي لحقت الأنسجة الحساسة بطانة القرنية أثناء معالجة الأنسجة. تم تشريح صفاحي الآلي (Descemet لتجريد القرنية غشائي الآلي، DSAEK) وضعت للتصدي لهذه قضايا. تشريح الآلي يستخدم نفس التقنية كما خلق LASIK القرنية رفرف بشفرة microkeratome الميكانيكية التي تساعد على خلق ترقيع نسيج موحد ورقيقة لجراحة DSAEK مع الحد الأدنى من القرنية فقدان الخلية البطانية في معالجة الأنسجة. وقد تم بنوك العيون وتوفير القرنيات سماكة الكامل لزرع جراحية لسنوات عديدة. في عام 2006، بدأت بنوك العيون لوضع منهجيات لتوريد نسيج القرنية قبل القطع للالقرنية البطانية. مع مدخلات من الجراحين القرنية، وقد وضعت بنوك العيون بروتوكولات شاملة لبأمان وفاعلية إعداد الخلفي و الأنسجة صفاحيأو DSAEK عملية جراحية. لا يمكن أن يؤديها هذا قبل الجراحة في بنك العيون. ويظهر البحث لا يوجد فرق كبير من حيث نوعية نتائج النسيج (7) أو المريض 8،9 باستخدام نسيج العين قبل القطع البنك مقابل الأنسجة الجراح الإعداد لإجراء عملية جراحية DSAEK. للجراحين معظم القرنية، وتوافر الأنسجة DSAEK قبل القطع القرنية يوفر الوقت والمال 10، ويقلل من الإجهاد على أداء تشريح المانحة القرنية في غرفة العمليات. ويرجع ذلك جزئيا من قدرة البنوك العين لتوفير مستوى عال من الجودة صفاحي الخلفي القرنية في الوقت المناسب، فقد أصبح DSAEK مستوى الرعاية لإدارة جراحية من مرض بطانة القرنية. الإجراء الذي نحن اصفا هو إعداد القرنية صفاحي الخلفي في بنك العيون لزرعها في جراحة DSAEK (الشكل 1).

Watch this Scientific Journal Video about Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty at JoVE.com

Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty

زراعة القرنية البطانية هي تقنية جراحية لعلاج أمراض القرنية الخلفية. تشريح microkeratome الميكانيكية لإعداد نتائج النسيج في ترقيع أرق، أكثر متماثل مع خسارة أقل الخلية البطانية وتحسين النتائج. لا يمكن أن يؤديها التشريح في بنك العيون قبل جراحة زرع القرنية.

القرنية تحضير الأنسجة من الجهات المانحة لغشائي keratoplasty

Over the past ten years, corneal transplantation surgical techniques have undergone revolutionary changes1,2. Since its inception, traditional full ...

corneal-donor-tissue-preparation-for-endothelial-keratoplasty

Research

JoVE Journal

Medicine

27.3K Views.  University of Michigan. زراعة القرنية البطانية هي تقنية جراحية لعلاج أمراض القرنية الخلفية. تشريح microkeratome الميكانيكية لإعداد نتائج النسيج في ترقيع أرق، أكثر متماثل مع خسارة أقل الخلية البطانية وتحسين النتائج. لا يمكن أن يؤديها التشريح في بنك العيون قبل جراحة زرع القرنية.

Video: Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty

Single Port Donor Nephrectomy

In 2007, Rane presented the first single port nephrectomy for a small non-functioning kidney at the World Congress of Endourology. Since that time, the use of single port surgery for nephrectomy has expanded to include donor nephrectomy. Over the next two years the technique was adopted for many others types of nephrectomies to include donor nephrectomy. We present our technique for single port donor nephrectomy using the Gelpoint device. We have successfully performed this surgery in over 100 patients and add this experience to our experience of over 1000 laparoscopic nephrectomies. With the proper equipment and technique, single port donor nephrectomy can be performed safely and effectively in the majority of live donors. We have found that our operative times and most importantly our transplant outcomes have not changed significantly with the adoption of the single port donor nephrectomy. We believe that single port donor nephrectomy represents a step forward in the care of living donors.

Single port laparoscopic surgery is changing the standard of care in surgical care like nothing since the laparoscopic technique was introduced 20 years ago. We present out technique of single port donor nephrectomy using the Gelpoint device. We have successfully performed this surgery in 100 patients.

استئصال الكلية ميناء واحد للمتبرعين

In 2007, Rane presented the first single port nephrectomy for a small non-functioning kidney at the World Congress of Endourology.  Since that time, the ...

Corneal Donor Tissue Preparation for Descemet's Membrane Endothelial Keratoplasty

Descemet&#8217;s Membrane Endothelial Keratoplasty (DMEK) is a form of corneal transplantation in which only a single cell layer, the corneal endothelium, along with its basement membrane (Descemet&#39;s membrane) is introduced onto the recipient&#39;s posterior stroma3. Unlike Descemet&#8217;s Stripping Automated Endothelial Keratoplasty (DSAEK), where additional donor stroma is introduced, no unnatural stroma-to-stroma interface is created. As a result, the natural anatomy of the cornea is preserved as much as possible allowing for improved recovery time and visual acuity4. Endothelial Keratoplasty (EK) is the procedure of choice for treatment of endothelial dysfunction. The advantages of EK include rapid recovery of vision, preservation of ocular integrity and minimal refractive change due to use of a small, peripheral incision1. DSAEK utilizes donor tissue prepared with partial thickness stroma and endothelium. The rapid success and utilization of this procedure can be attributed to availability of eye-bank prepared precut tissue. The benefits of eye-bank preparation of donor tissue include elimination of need for specialized equipment in the operating room and availability of back up donor tissue in case of tissue perforation during preparation. In addition, high volume preparation of donor tissue by eye-bank technicians may provide improved quality of donor tissue. DSAEK may have limited best corrected visual acuity due to creation of a stromal interface between the donor and recipient cornea. Elimination of this interface with transplantation of only donor Descemet&#39;s membrane and endothelium in DMEK may improve visual outcomes and reduce complications after EK5. Similar to DSAEK, long term success and acceptance of DMEK is dependent on ease of availability of precut, eye-bank prepared donor tissue. Here we present a stepwise approach to donor tissue preparation which may reduce some barriers eye-banks face in providing DMEK grafts.

Corneal Donor Tissue Preparation for Descemet&#039;s Membrane Endothelial Keratoplasty

Endothelial keratoplasty is a surgical technique continuously evolving as advancements result in transplantation of thinner grafts with each succession1. Here we present a technique for controlled manual tissue dissection to allow safe and repeatable separation of endothelium and Descemet&#39;s membranes from donor corneoscleral buttons for transplantation2.

القرنية تحضير الأنسجة المانحة لديسميه غشاء القرنية غشائي

Descemet&#8217;s Membrane Endothelial Keratoplasty (DMEK) is a form of corneal transplantation in which only a single cell layer, the corneal endothelium, ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene and cell therapies are highly promising alternative approaches for CVD treatment. However, the broad clinical application of gene therapy is greatly limited by the lack of suitable gene delivery systems. The development of appropriate gene delivery vectors can provide a solution to current challenges in cell therapy. In particular, existing drawbacks, such as limited efficiency and low cell retention in the injured organ, could be overcome by appropriate cell engineering (i.e., genetic) prior to transplantation. The presented protocol describes the efficient and safe transient modification of endothelial cells using a polyethyleneimine superparamagnetic magnetic nanoparticle (PEI/MNP)-based delivery vector. Also, the algorithm and methods for cell characterization are defined. The successful intracellular delivery of microRNA (miR) into human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) has been achieved without affecting cell viability, functionality, or intercellular communication. Moreover, this approach was proven to cause a strong functional effect in introduced exogenous miR. Importantly, the application of this MNP-based vector ensures cell magnetization, with accompanying possibilities of magnetic targeting and non-invasive MRI tracing. This may provide a basis for magnetically guided, genetically engineered cell therapeutics that can be monitored non-invasively with MRI.

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

This manuscript describes the efficient, non-viral delivery of miR to endothelial cells by a PEI/MNP vector and their magnetization. Thus, in addition to genetic modification, this approach allows for magnetic cell guidance and MRI detectability. The technique can be used to improve the characteristics of therapeutic cell products.

إعداد و<em&gt; في المختبر</em&gt; توصيف ممغنط مير تعديل الخلايا البطانية

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two dimensional (2D) and three dimensional (3D) culture has generated a wealth of information not only about corneal biology but also about wound healing, myofibroblast biology, and scarring in general. The goal of the protocol is an assay system for quantifying myofibroblast development, which characterizes scarring. We demonstrate a corneal organ culture ex vivo model using pig eyes. In this anterior keratectomy wound, corneas still in the globe are wounded with a circular blade called a trephine. A plug of approximately 1/3 of the anterior cornea is removed including the epithelium, the basement membrane, and the anterior part of the stroma. After wounding, corneas are cut from the globe, mounted on a collagen/agar base, and cultured for two weeks in supplemented-serum free medium with stabilized vitamin C to augment cell proliferation and extracellular matrix secretion by resident fibroblasts. Activation of myofibroblasts in the anterior stroma is evident in the healed cornea. This model can be used to assay wound closure, the development of myofibroblasts and fibrotic markers, and for toxicology studies. In addition, the effects of small molecule inhibitors as well as lipid-mediated siRNA transfection for gene knockdown can be tested in this system.

A protocol for an ex vivo corneal organ culture model useful for wound healing studies is described. This model system can be used to assess the effects of agents to promote regenerative healing or drug toxicity in an organized 3D multicellular environment.

السابقين فيفو الجهاز القرنية الثقافة النموذجية لالتئام الدراسات

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for experimental investigations as they are normally needed for transplantation. Endothelial cell cultures often do not translate well to in vivo situations. Due to the biostructural characteristics of non-human corneas, stromal swelling during cultivation induces substantial corneal endothelial cell loss, which makes it difficult to perform cultivation for an extended period of time. Deswelling agents such as dextran are used to counteract this response. However, they also cause significant endothelial cell loss. Therefore, an ex vivo organ culture model not requiring deswelling agents was established. Pig eyes from a local slaughterhouse were used to prepare split corneal buttons. After partial corneal trephination, the outer layers of the cornea (epithelium, bowman layer, parts of the stroma) were removed. This significantly reduces corneal endothelial cell loss induced by massive stromal swelling and Descemet&#39;s membrane folding throughout longer cultivation periods and improves general preservation of the endothelial cell layer. Subsequent complete corneal trephination was followed by the removal of the split corneal button from the remaining eye bulb and cultivation. Endothelial cell density was assessed at follow-up times of up to 15 days after preparation (i.e., days 1, 8, 15) using light microscopy. The preparation technique used allows a better preservation of the endothelial cell layer enabled by less stromal tissue swelling, which results in slow and linear decline rates in split corneal buttons comparable to human donor corneas. As this standardized organo-typically cultivated research model for the first time allows a stable cultivation for at least two weeks, it is a valuable alternative to human donor corneas for future investigations of various external factors with regards to their effects on the corneal endothelium.

Here, a step-by-step protocol for the preparation and cultivation of porcine split corneal buttons is presented. As this organo-typically cultivated organ culture model shows cell death rates within 15 days, comparable to human donor corneas, it represents the first model allowing long-term cultivation of non-human corneas without adding toxic dextran.

نموذج ثقافة الجهاز البطانية القرنية الخنازير باستخدام أزرار القرنية الانقسام

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...

Development of a Noninvasive, Laser-Assisted Experimental Model of Corneal Endothelial Cell Loss

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the optical breakdown at the laser focus. Acoustic shock waves and cavitation bubbles are generated, causing tissue rupture. Bubble sizes and pressure amplitudes vary with pulse energy and position of the focal point. In this study, enucleated porcine eyes were positioned in front of a commercially available Nd:YAG laser. Variable pulse energies as well as different positions of the focal spots posterior to the cornea were tested. Resulting lesions were evaluated by two-photon microscopy and histology to determine the best parameters for an exclusive detachment of corneal endothelial cells (CEC) with minimum collateral damage. The advantages of this method are the precise ablation of CEC, reduced collateral damage, and above all, the non-contact treatment.

Here, we present a protocol to detach corneal endothelial cells (CEC) from Descemet&#8217;s membrane (DM) using a neodymium:YAG (Nd:YAG) laser as an ex vivo disease model for bullous keratopathy (BK).

تطوير نموذج تجريبي غير باضع بمساعدة الليزر لفقدان الخلايا الانهوفية القرنية

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the ...

An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its transparency. However, due to its external position, the cornea is highly susceptible to a wide variety of injuries that can lead to the loss of corneal transparency and eventual blindness. Efficient corneal wound healing in response to these injuries is pivotal for maintaining corneal homeostasis and preservation of corneal transparency and refractive capabilities. In events of compromised corneal wound healing, the cornea becomes vulnerable to infections, ulcerations, and scarring. Given the fundamental importance of corneal wound healing to the preservation of corneal transparency and vision, a better understanding of the normal corneal wound healing process is a prerequisite to understanding impaired corneal wound healing associated with infection and disease. Toward this goal, murine models of corneal wounding have proven useful in furthering our understanding of the corneal wound healing mechanisms operating under normal physiological conditions. Here, a protocol for creating a central corneal epithelial abrasion in mouse using a trephine and a blunt golf club spud is described. In this model, a 2 mm diameter circular trephine, centered over the cornea, is used to demarcate the wound area. The golf club spud is used with care to debride the epithelium and create a circular wound without damaging the corneal epithelial basement membrane. The resulting inflammatory response proceeds as a well-characterized cascade of cellular and molecular events that are critical for efficient wound healing. This simple corneal wound healing model is highly reproducible and well-published and is now being used to evaluate compromised corneal wound healing in the context of disease.

Here, a protocol for creating a central corneal epithelial abrasion wound in the mouse using a trephine and a blunt golf club spud is described. This corneal wound healing model is highly reproducible and is now being used to evaluate compromised corneal wound healing in the context of diseases.

نموذج التآكل الظهاري لدراسة التئام جروح القرنية

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its ...

A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts and complications such as primary graft dysfunction and graft rejection. The recent clinical use of an ex vivo perfusion device in cardiac transplantation introduces a unique opportunity for treating cardiac allografts with therapeutic interventions to improve function and avoid deleterious recipient responses. Establishing a translational, large-animal model for therapeutic delivery to the entire allograft is essential for testing novel therapeutic approaches in cardiac transplantation. The porcine, heterotopic heart transplantation model in the intraabdominal position serves as an excellent model for assessing the effects of novel interventions and the immunopathology of graft rejection. This model additionally offers long-term survival for the pig, given that the graft is not required to maintain the recipient's circulation. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach for achieving ex vivo delivery of a therapeutic to the entire cardiac allograft prior to transplantation and provide technical details to perform a survival heterotopic transplant of the ex vivo perfused heart.

We present a protocol for utilizing a normothermic ex vivo sanguinous perfusion system for the delivery of therapeutics to an entire cardiac allograft in a porcine heterotopic heart transplant model.

بروتوكول زرع قلب غير متجانس من لحم الخنزير لتوصيل العلاجات إلى ألوغرافت القلب

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...

Preparation of Human Myocardial Tissue for Long-Term Cultivation

Cardiomyocyte cultivation has seen a vast number of developments, ranging from two-dimensional (2D) cell cultivation to iPSC derived organoids. In 2019, an ex vivo way to cultivate myocardial slices obtained from human heart samples was demonstrated, while approaching in vivo condition of myocardial contraction. These samples originate mostly from heart transplantations or left-ventricular assist device placements. Using a vibratome and a specially developed cultivation system, 300 &#181;m thick slices are placed between a fixed and a spring wire, allowing for stable and reproducible cultivation for several weeks. During cultivation, the slices are continuously stimulated according to individual settings. Contractions can be displayed and recorded in real-time, and pharmacological agents can be readily applied. User-defined stimulation protocols can be scheduled and performed to assess vital contraction parameters like post-pause-potentiation, stimulation threshold, force-frequency relation, and refractory period. Furthermore, the system enables a variable pre- and afterload setting for a more physiological cultivation.
Here, we present a step-by-step guide on how to generate a successful long-term cultivation of human left ventricular myocardial slices, using a commercial biomimetic cultivation solution.

We present a protocol for ex vivo cultivation of human ventricular myocardial tissue. It allows for detailed analysis of contraction force and kinetics, as well as the application of pre- and afterload to mimic the in vivo physiological environment more closely.

إعداد أنسجة عضلة القلب البشرية للزراعة على المدى الطويل

Cardiomyocyte cultivation has seen a vast number of developments, ranging from two-dimensional (2D) cell cultivation to iPSC derived organoids. In 2019, ...

زراعة القلب في الجسم الحي لدراسة الانتقال البطاني إلى اللحمة المتوسطة

A Neonatal Heterotopic Rat Heart Transplantation Model for the Study of Endothelial-to-Mesenchymal Transition

Endocardial fibroelastosis (EFE), defined by subendocardial tissue accumulation, has major impacts on the development of the left ventricle (LV) and precludes patients with congenital critical aortic stenosis and hypoplastic left heart syndrome (HLHS) from curative anatomical biventricular surgical repair. Surgical resection is currently the only available therapeutic option, but EFE often recurs, sometimes with an even more infiltrative growth pattern into the adjacent myocardium.
To better understand the underlying mechanisms of EFE and to explore therapeutic strategies, an animal model suitable for preclinical testing was developed. The animal model takes into consideration that EFE is a disease of the immature heart and is associated with flow disturbances, as supported by clinical observations. Thus, the heterotopic heart transplantation of neonatal rat donor hearts is the basis for this model.
A neonatal rat heart is transplanted into an adolescent rat&#39;s abdomen and connected to the recipient&#39;s infrarenal aorta and inferior vena cava. While perfusion of the coronary arteries preserves the viability of the donor heart, flow stagnation within the LV induces EFE growth in the very immature heart. The underlying mechanism of EFE formation is the transition of endocardial endothelial cells to mesenchymal cells (EndMT), which is a well-described mechanism of early embryonic development of the valves and septa but also the leading cause of fibrosis in heart failure. EFE formation can be macroscopically observed within days after transplantation. Transabdominal echocardiography is used to monitor the graft viability, contractility, and the patency of the anastomoses. Following euthanasia, the EFE tissue is harvested, and it shows the same histopathological characteristics as human EFE tissue from HLHS patients.
This in vivo model allows for studying the mechanisms of EFE development in the heart and testing treatment options to prevent this pathological tissue formation and provides the opportunity for a more generalized examination of EndMT-induced fibrosis.

تسليط الضوء على المؤلف: نموذج زرع قلب الفئران غير المتجانسة لحديثي الولادة لدراسة الانتقال البطاني إلى اللحمة المتوسطة  

This work presents an animal model of endothelial-to-mesenchymal transition-induced fibrosis, as seen in congenital cardiac defects such as critical aortic stenosis or hypoplastic left heart syndrome, which allows for detailed histological tissue evaluation, the identification of regulatory signaling pathways, and the testing of treatment options.

نموذج زراعة قلب الفئران غير المتجانسة لحديثي الولادة لدراسة الانتقال البطاني إلى اللحمة المتوسطة

Endocardial fibroelastosis (EFE), defined by subendocardial tissue accumulation, has major impacts on the development of the left ventricle (LV) and ...