Apoiado em parte pelo NIH NEI / EY017885 (RMS).

1. Setup: uma técnica asséptica 11 <ol><li> Ligue capa Fluxo Laminar (LFH). </li><li> Ligar a unidade de controlo de azoto gasoso. Certifique-se que a mangueira está conectado entre a unidade de console e tanque de nitrogênio. Transformar gás em. Configuração do gás deve ser definido para 50-60 PSI em tanque do regulador. Pressão da turbina da unidade deve ler 3,3 a 3,4 Bars. </li><li> Pressione o botão de teste. A pressão atmosférica vai ler nos 700s e bombas 1 e 2 deve ser abaixo de 200. A unidade emite um sinal sonoro quando o teste é completo. Don máscara com proteção para os olhos, conforme o caso, e cap. Lavar as mãos e don não estéreis luvas. Coloque kits estéreis dentro envoltórios LFH e aberto para estabelecer campo esterilizado. </li><li> Coloque um copo medicina estéril e uma bacia de plástico estéril com gaze estéril ao lado do campo estabelecido estéril. Despeje álcool isopropílico estéril em copo medicina. Limpe sonda paquimetria com algodão embebido em álcool / almofada e sonda lugar, a ponta para baixo, no copo de medicina. A ponta da sonda deve embeber em álcool isopropílico para 10 minutos. Depois de sonda paquimetria tem embebido durante 10 minutos, lavar a ponta da sonda com água estéril a partir da seringa pré-carregada para remover o álcool e sonda lugar na bacia de plástico. </li><li> Utilizando uma técnica asséptica, abrir e soltar itens estéreis (Blade, luvas estéreis e córnea câmaras de visualização) em campo estéril, a menos que já faz parte do pacote pré-fabricados. </li><li> Obter tecido corneano em meios de preservação e colocar no interior LFH (Figura 2). </li><li> Abra frasco (s) e dispor da tampa (s) em um receptáculo apropriado de risco biológico. Descarte as luvas não estéreis. </li><li> Don luvas estéreis. Coloque pré-embalados bacia de plástico para o lado do campo onde paquímetro está localizado. Ligue linha de perfusão para torneira e final lugar espiga de linha de perfusão fora do capuz assegurar a linha, de tal modo a evitar que a linha exterior do exaustor de entrar novamente no capuz e tocar o campo esterilizado. </li><li> Realizar a transferência de tecido da córnea. Derramar delicadamente o tecido e médias empresas, em um simovimento ngle, a partir do frasco existente para uma câmara de visualização estéril. Certifique-se de manter o lado endotelial up. Colocar a tampa sobre a câmara. Mantenha câmaras com tecido e meios de comunicação em campo estéril. Remover o frasco (s) de LFH. Retire e descarte as luvas estéreis. </li><li> Espiga solução salina balanceada (BSS) frasco com linha de infusão. Pendure frasco de solução salina de aproximadamente quatro metros de área de superfície de trabalho. </li><li> Abra dois pares de luvas estéreis e avental estéril com uma toalha. </li><li> Execute seis minutos cirúrgico e esfrega as mãos secas. </li><li> Coloque em avental estéril, em seguida, dois pares de luvas esterilizadas. </li><li> Abrir caixas de instrumentos e colocar o conteúdo no campo esterilizado. </li><li> Dispensar 10-20 cc de solução BSS em metal bacia ou copo medicina. Preencha pipeta estéril com solução BSS. Ligue torneira e linha de perfusão para a porta de perfusão da câmara anterior e lavar com BSS de modo que uma pequena quantidade é visível na parte superior do pistão. </li><li> Câmara de posição artificial na LFH emtop de gaze. Pistão inferior rodando o anel de aperto enxerto sentido anti-horário. </li></ol> 2. Procedimento <ol><li> Usando uma pinça, suavemente agarrar córnea, rim escleral. Abrir a torneira para lavar sistema com BSS enquanto cuidadosamente centragem córnea no topo do êmbolo com o lado endotelial para baixo. Se as bolhas são visíveis por baixo da córnea, continuar infusão com BSS e ligeiramente mover a córnea para removê-los. Suspender a infusão de uma vez bolhas de ar são removidos. Assegure-se que a córnea é centrado sobre o pistão (Figura 3a). </li><li> Posição tampa da câmara anterior em anel de travamento de base de modo que as abas da capa encaixe para os espaços abertos na base. Trava da tampa na base, girando no sentido horário cobertura de 15 °. Elevar êmbolo para cima e aperte completamente (Figura 3b). </li><li> Com um dedo estéril enluvada, tocar topo da córnea para assegurar que existe uma pressão suficiente para realizar procedimento. </li><li> Verifique paquimetria, colocando sonda na superfície of córnea para obter leitura de espessura (Figura 4). O desvio padrão deve ser inferior a 10. Se não, retomar medição. Com a mão enluvada estéril que não foi usado para executar a paquimetria, passe a mangueira da turbina para a mão que realizou paquimetria e aperte a mangueira da turbina na unidade de controle. Ter a assistência técnico leitura paquimetria registro. </li><li> Remova as luvas contaminadas. </li><li> Usando caneta marcação estéril, desenhe uma linha 4 milímetros de limbo em direção ao centro da córnea (ou não marcar se cirurgião prefere não marcar). Use pipeta para colocar cinco gotas de BSS no topo da córnea. </li><li> A menos que instruções específicas são fornecidas pelo cirurgião, a cabeça de corte 300 uM vai ser usado se a medição paquimetria pré-corte é inferior a 600 uM. Se mais de 600 mM, a 350 mM cabeça de corte será usado. </li><li> Com rosca de frente para você e número para cima, coloque a lâmina para o lado direito da cabeça do microcerátomo, apontou primeira extremidade, evitando o contato with a lâmina. </li><li> Segurando a cabeça de cada lado, cabeça do parafuso para turbina. Aperte a câmara artificial com os dedos. </li><li> Parafuso turbina para mangueira da turbina. </li><li> Testar a oscilação da lâmina, pressionando o pedal de vácuo uma vez, submergindo a cabeça de corte em água estéril e pulso da turbina durante 5 segundos. </li><li> Reapertar pistão. </li><li> Microcerátomo Coloque-a na base com pós montagem e posição menos cinco horas. Pressione e segure pedal de turbina a oscilar lâmina (Figura 5a). </li><li> Usando o dedo indicador eo polegar, mantenha microquerotomia a meio caminho entre a base ea parte superior da turbina. Gire o pulso para fazer um bom, até mesmo cortar e em toda a córnea. Turbina Lançamento pedalar e levantar microcerátomo em linha reta fora da unidade. Pressione pedal de vácuo para desligar vácuo (Figura 5b). </li><li> Vestir uma luva estéril e leitura recheck paquimetria da córnea após a tampa é removida através da colocação da sonda na superfície da córnea para obter leitura de espessura segundo sendoconsciente de que o tecido é muito fino e facilmente danificada. Remover luva contaminada. Ter auxiliar técnico de registro de leitura paquimetria segundo. </li><li> Usando caneta marcação estéril, colocar uma marca, se solicitado pelo cirurgião, à beira mid-periférica do leito estromal residual na câmara artificial. Coloque algumas gotas de BSS estéril em leito estromal residual. </li><li> Remova a tampa córnea anterior a partir da microquerotomia (Figura 6) e substituí-la sobre a córnea antes de remover a partir da câmara anterior da córnea artificial. Cap deve ser centrada na córnea utilizando periférica marcação para alinhar a tampa corretamente, se aplicável. Use lança swab suavemente para reposicionar a tampa sobre a córnea. Use lança fresco para absorver qualquer BSS debaixo tampa anterior. </li><li> Abrir a torneira, desligue câmara de cabeça para baixo e pistão inferior lento o suficiente para evitar córnea de deformar-se. Desbloquear base e permitir que a pressão do fluxo de BSS para empurrar a taça câmara artificial a partir da base. Com uma pinça, puxe umat da borda da córnea em 9, 12 e 3 horas para soltá-lo do copo. Uma vez afrouxado, utilize uma pinça na posição das 12 horas para remover córnea. Coloque a córnea na câmara de visualização, para cima do lado endotelial (Figura 7). Colocar a tampa sobre a câmara de visualização. Remover luva estéril. </li><li> Aperte vendo tampa da câmara. </li><li> Realizar pós-corte avaliação lâmpada de fenda e microscopia especular de córnea e de resultados recorde. </li><li> Câmara local (s) na secção apropriada do refrigerador. </li><li> Pacote de transporte para cirurgião (Figura 8). </li></ol> 3. Os resultados representativos Dissecção microcerátomo mecânico adequado dos resultados de doadores de córnea em suave tecido do doador, uniforme lamelar de córnea. Isto é mostrado por uma tomografia de coerência óptica da imagem (OCT) da córnea em secção transversal (Figura 9). O tecido da córnea posterior final, deverá ser de espessura adequada tal como medido por pachymetry. Durante os últimos 6 meses no Banco Eye Michigan, a espessura média de pré-processamento da córnea foi 558 microns, e pós-processamento espessura do tecido posterior da córnea foi de 158 microns. Oitenta e sete por cento de microquerotomia-dissecados tecido do doador, medida entre 100-200 microns, 10,9% medida mais de 200 micra, e 2,1% medido inferior a 100 microns. O tecido posterior da córnea deve reter alta densidade celular endotelial (ECD) para proporcionar a função endotelial melhorado ao receptor de transplante. Microscopia especular é usado para medir ECD. Nos últimos 6 meses, todo o tecido da córnea considerado elegível para ceratoplastia endotelial do olho Michigan Banco tinha um ECD de&gt; 2200 células / mm 2. Noventa e nove por cento do tecido DSAEK pré-cortada tinha um pós-processamento ECD&gt; 2400 células / mm 2, e 19% tinham um ECD&gt; 3000 células / mm 2. A alteração média na pré-para pós-processamento ECD foi negligenciável em 1,2% (p = 0,0003, emparelhado bicaudal t-teste).Complicações que podem ocorrer durante o procedimento incluem a perda de pressão, dissecção assimétrica, e recuo tecido significativa (resultando em perda de células da córnea endotelial). Dissecção inadequado pode também resultar na perfuração do tecido. <img alt="A Figura 1" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig1.jpg" /> Figura 1. Esquema geral de Preparação para o tecido da córnea Ceratoplastia endotelial Figuras 1a a 1e são transversais representações da preparação das córneas de doadores. Figuras 1f para 1i são transversais representações de córnea do receptor de transplante durante a cirurgia DSAEK. <ol class="lalpha"><li> A córnea doadora é montado em uma câmara anterior artificial e dissecados com a cabeça do microcerátomo. </li><li> Após a dissecção dos tecidos, as duas lamelas são distintos, mas a lamela anterior (cap) é posicionado de costas na cama permaneceu córnea para o transporte até o cirurgião. </li><li> Nosala de operações, o cirurgião utiliza uma trefina para cortar o tecido central da córnea verticalmente através lamela anterior e posterior. </li><li> Após o corte trefina, a córnea do doador periférica é removido do campo. </li><li> A lamela posterior é suavemente removido da lamela anterior com uma espátula. O doador lamela posterior (tecido DSAEK) substitui a parte doente da córnea receptora (1-I). </li><li> O paciente tem uma córnea doente posterior a ser removido. </li><li> A córnea doente posterior é marcado com um instrumento intra-ocular (reversa Sinsky gancho) num círculo de diâmetro grande. </li><li> Depois de marcar a córnea doente, a membrana posterior da córnea é removido. </li><li> O doador de lamela posterior (tecido DSAEK) é colocada no olho do destinatário. </li></ol><img alt="A Figura 2" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig2.jpg" /> Figura 2. Tecido da córnea em Mídia. Tecido da córnea é em media de preservação depois harvesting do doador. <img alt="A Figura 3" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig3.jpg" /> Figura 3. Tecido da córnea em Câmara Anterior Artificial. <ol class="lalpha"><li> Tecido da córnea é montado na câmara anterior artificial anel de travamento antes de base ou dissecção de tecidos. </li><li> O tecido córneo é montado na câmara anterior artificial com anel de base de travamento selado sobre o tecido. </li></ol><img alt="A Figura 4" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig4.jpg" /> Figura 4. Espessura do tecido da córnea Confira. A espessura da córnea é verificada com sonda paquimetria na superfície da córnea. <img alt="A Figura 5" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig5.jpg" /> Figura 5. Dissecção do tecido da córnea. <ol class="lalpha"><li> Lâmina de microquerotomia é colocada sobre a base com pós de montagem e posição em cinco horas. </li><li> Microkeratomeé passada através de córnea para fazer a dissecção lamelar. </li></ol><img alt="A Figura 6" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig6.jpg" /> Figura 6. Cap anterior da córnea após a dissecação. A tampa córnea anterior é livre após a dissecção microcerátomo é completa. <img alt="A Figura 7" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig7.jpg" /> Figura 7. Dissecados Córnea Vendo Câmara. Após a dissecção estiver concluída, a córnea é retornado para a câmara de visualização para o transporte. <img alt="A Figura 8" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig8.jpg" /> Figura 8. Córnea em Embalagens de Transporte. A córnea na câmara de visualização é, então, embalados de forma segura para o transporte até o cirurgião. <img alt="A Figura 9" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig9.jpg" /> Figura 9. Aparência outubro de Córnea. A outubro docórnea dissecados final (em secção transversal) mostra que a córnea é dividido em duas metades. A interface é mais intensamente reflectora do que o tecido circundante, como indicado pela seta.

<ol>
	<li>Melles, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+surgical+technique+for+posterior+lamellar+keratoplasty.">A surgical technique for posterior lamellar keratoplasty.</a> Cornea. 17, 618-626 (1998).</li><li>Melles, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+clinical+results+of+posterior+lamellar+keratoplasty+through+a+sclerocorneal+pocket+incision.">Preliminary clinical results of posterior lamellar keratoplasty through a sclerocorneal pocket incision.</a> Ophthal. 107, 1850-1856 (2000).</li><li>Terry, M. A., Ousley, P. 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Drs. Woodward e Shtein não tem nada a revelar. Sr. Mavin eo Sr. Tito são funcionários de Banco de Olhos Centro-Oeste.

A camada interna-a maior parte da córnea, o endotélio, mantém a claridade óptica da córnea através da manutenção de desidratação da córnea. Numerosos estados de doença especificamente afectar a saúde ea viabilidade do endotélio corneal incluindo distrofias, infecções, processos inflamatórios, e degenerações. Até recentemente, o transplante da córnea para substituir endotélio corneano doente necessário transplante espessura total da córnea. Na última década, a substituição alvo da córnea posterior por transplante de espessura parcial da córnea, como a cirurgia DSAEK, tem sido capaz de atingir o mesmo objetivo com um menor tempo de recuperação. Independentemente da técnica, os tecidos transplantados deve reter um endotélio corneano saudável para manter a claridade óptica na córnea transplantado, como resultado, todas as técnicas de processamento de tecidos têm passos adicionais para proteger o endotélio corneano. Dissecção microcerátomo automatizado é atualmente ªe padrão para a preparação do tecido da córnea por ceratoplastia endotelial. A utilização do microcerátomo foi mostrado para diminuir a perfuração do tecido do doador e acelerar a recuperação visual, em comparação com dissecção manual de 5. Quando DSAEK foi inicialmente introduzido, alguns cirurgiões comprado equipamento de microquerotomia e realizaram a dissecação doador lamelar na sala de operações no início da cirurgia. Se a preparação de tecido falhou, a cirurgia teria de ser cancelado inconveniente causando e despesa para o paciente e do cirurgião. Em 2006, bancos de olhos começaram a realizar dissecção microcerátomo &quot;off site&quot; sob condições controladas em laboratório banco de olhos um dia antes da cirurgia 12. Se a preparação do tecido não neste cenário, não há tempo para executar outra dissecção com tecido fresco. Dissecção microcerátomo de doador tecido lamelar posterior da córnea exige técnica suave e precisa para minimizar as complicações. A córnea deve ser colocado gently na câmara anterior artificial (AAC) para evitar qualquer dano para as células endoteliais delicadas. Uma vez que a córnea é montada e alinhada com a AAC, o anel de bloqueio deve ser posicionado e ajustado para uma vedação estanque para manter a pressão elevada dentro da câmara e diminuir as hipóteses de colapso do tecido durante a dissecção de microquerotomia. Para assegurar a dissecção uniforme, a cabeça de microquerotomia deve ser rodada de um modo constante e suave. Após a dissecção, o tecido deve ser novamente tratada com cuidado para minimizar os danos das células endoteliais. Além disso, é crítica para confirmar que o corte lamelar é centrada e completa, a fim de assegurar que a lamela posterior será apropriado para uso em cirurgia 13. Perfuração da córnea do doador é uma complicação temida deste procedimento, torna-se menos freqüentes com a experiência. Se as perfurações repetidas ocorrer durante as passagens microcerátomo, é importante verificar várias etapas do processo. O milhoEA tem de ser devidamente montado e alinhada com a AAC. Uma vedação estanque e de alta pressão deve ser obtida antes da passagem de microquerotomia e mantida durante todo o procedimento. Na ocasião, conjuntiva residual existente no rebordo esclerótica e precisa de ser dissecado fora antes da montagem. A lâmina de microcerátomo deve ser afiada e sem ranhuras. A espessura cabeça correta microcerátomo devem ser selecionados com base na espessura estimada da córnea. A cabeça de microcerátomo deve estar oscilando corretamente antes da passagem. Com mais problemas com esta técnica, consulte o fornecedor microcerátomo para verificar se todo o equipamento está funcionando corretamente. Mesmo quando realizado perfeitamente, existem algumas limitações para esta técnica. Cabeças microcerátomo estão disponíveis para cortar os tecidos da córnea com espessuras diferentes, no entanto, a relação da cabeça de microquerotomia a espessura do tecido final é imprecisa com a mesma cabeça fornecendo uma ampla gama de tecido espessura final7. Além disso, existe aprendizagem significativa curva e complicações em preparação são mais freqüentes para novos usuários. Executando a dissecção lamelar na configuração banco de olhos permite que os técnicos treinados que realizam este procedimento várias vezes por dia para optimizar a sua técnica, minimizando as complicações devido à inexperiência. Modificações da técnica para microcerátomo assistida dissecção da córnea ceratoplastia endotelial para existir. Alguns preferem usar material viscoelástico ou mídia de armazenamento da córnea ao invés de solução salina balanceada abaixo do botão de córnea na câmara anterior artificial com o intuito de proporcionar maior proteção ao endotélio da córnea. Há também variações no método para a determinação da localização em que a incisão microquerotomia deve ser iniciado. Bancos de olhos e diferentes cirurgiões da córnea pode ter preferências específicas quanto à forma como a córnea é marcada para a identificação dea tampa anterior da córnea ou orientação lamelar posterior. Deve notar-se que os fabricantes de equipamento de fazer semelhante ao utilizado neste protocolo. As instruções do fabricante em particular devem ser seguidas com qualquer equipamento é utilizado. Preparação banco confiável olho dissecado o tecido corneano para a cirurgia DSAEK tem sido benéfica para a aceitação generalizada desta técnica cirúrgica relativamente nova. Uma vez que os cirurgiões se tornou confiante em bancos de olhos do espectáculo o &quot;primeiro passo&quot; em transplante de córnea - ou seja, preparação do tecido, muitas limitações práticas para DSAEK foram aliviados. Bancos de olhos foram capazes de forma confiável manter-se com a demanda de tecido processado com fonte segura, eficaz e atempada do tecido doador. DSAEK tecido de alta qualidade já podem ser encomendados com antecedência e tempo cirúrgico e complicações de preparação de tecidos diminuíram 9, 14-15. Este protocolo descreve a preparatiem enxertos de DSAEK a partir da perspectiva do processamento de Banco de Olhos de tecido corneano doador, no entanto, esta técnica é directamente aplicável aos cirurgiões interessados ​​em preparar o seu próprio tecido do doador lamelar de córnea, bem como aqueles interessados ​​em fazer estudos em laboratório ou clínica de córnea lamelar transplante. Direções futuras para a preparação lamelar de córnea incluem o uso do laser de femtossegundos para processamento de tecidos, a criação de &quot;ultra-fino&quot; tecido DSAEK da córnea, ou na preparação de córnea rola endoteliais para a membrana de Descemet endotelial ceratoplastia cirurgia (DMEK). Ceratoplastia endotelial é um campo cirúrgico em evolução ea relação simbiótica entre o banco de olhos e cirurgião de córnea vai continuar a mudar à medida que as técnicas cirúrgicas são otimizados.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do Equipamento </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Microkeratome </td><td> Moria </td><td> 1021174 </td></tr><tr><td> Base de câmara anterior artificial </td><td> Moria </td><td> 19161-562 </td></tr><tr><td> Cap câmara anterior artificial </td><td> Moria </td><td> 19172-220 </td></tr><tr><td> Microkeratome Cabeça 300 </td><td> Moria </td><td> O304 </td></tr><tr><td> Microkeratome Cabeça 350 </td><td> Moria </td><td> N791 </td></tr><tr><td> Console </td><td> Moria </td><td> 19360-3482 </td></tr></tbody></table>

corneal donor tissue preparation for endothelial keratoplasty

Nos últimos dez anos, as técnicas cirúrgicas de transplante de córnea foram submetidos a 1,2 mudanças revolucionárias. Desde a sua criação, o transplante de espessura total da córnea tradicional tem sido o tratamento para restaurar a visão em pessoas limitadas por doenças da córnea. Algumas desvantagens para esta abordagem incluem um elevado grau de pós-operatório astigmatismo, a falta de resultado de refracção previsíveis, e perturbação à superfície ocular. O desenvolvimento de ceratoplastia de extracção de Descemet endotelial (DSEK), transplantando apenas estroma posterior à córnea, a membrana de Descemet, e endotélio, mudou dramaticamente o tratamento da doença do endotélio corneano. DSEK é realizado através de incisão menor, esta técnica evita a cirurgia &quot;céu aberto&quot; com o seu risco de hemorragia ou expulsão, diminui a incidência de deiscência da ferida pós-operatória, reduz os resultados refrativos imprevisíveis, e podem diminuir a taxa de rejeição do transplante 3-6. ove_content &quot;&gt; Inicialmente, a córnea do doador dissecção posterior lamelar para DSEK foi realizada manualmente 1, resultando em espessura do enxerto variável e danos ao tecido corneal delicado endotelial durante o processamento do tecido. dissecção lamelar automatizada (ceratoplastia automatizado de Descemet extracção endotelial, DSAEK) foi desenvolvido para tratar estes questões. dissecção automatizada utiliza a mesma tecnologia LASIK flap criação de córnea com uma lâmina de microcerátomo mecânico que ajuda a criar enxertos de tecidos uniformes e finos para a cirurgia DSAEK com perda celular endotelial corneana mínima de processamento de tecidos. Bancos de olhos têm vindo a fornecer córneas de espessura total para transplante cirúrgico por muitos anos. Em 2006, bancos de olhos começaram a desenvolver metodologias para o fornecimento de tecido da córnea ceratoplastia endotelial pré-cortada para. Com a entrada dos cirurgiões da córnea, bancos de olhos têm desenvolvido protocolos exaustivas de forma segura e eficaz preparar f tecido posterior lamelarou cirurgia DSAEK. Isto pode ser realizado no pré-operatório, no banco de olhos. A pesquisa mostra nenhuma diferença significativa em termos da qualidade dos resultados de tecido 7 ou 8,9 paciente usando olho tecido precut banco contra o cirurgião-tecido preparado para a cirurgia DSAEK. Para a maioria dos cirurgiões da córnea, a disponibilidade de pré-cortada tecido corneano DSAEK poupa tempo e dinheiro 10, e reduz a tensão de realizar a dissecção doador de córnea na sala de operação. Em parte por causa da capacidade dos bancos de olhos para fornecer lamelar de alta qualidade posterior da córnea em tempo hábil, DSAEK tornou-se o padrão de atendimento para tratamento cirúrgico da doença endotelial da córnea. O procedimento que estamos a descrever é a preparação da córnea posterior lamelar no banco de olhos para transplante em DSAEK cirurgia (Figura 1).

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Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty

O transplante da córnea do endotélio é uma técnica cirúrgica para o tratamento de doenças da córnea posteriores. Dissecção microcerátomo mecânico para preparar resultados de tecidos mais finos, enxertos mais simétrica com perda de células endoteliais e menos resultados melhores. Dissecações pode ser realizada no banco de olhos antes da cirurgia de transplante da córnea.

Preparação do tecido da córnea Doadores de ceratoplastia endotelial

Over the past ten years, corneal transplantation surgical techniques have undergone revolutionary changes1,2. Since its inception, traditional full ...

corneal-donor-tissue-preparation-for-endothelial-keratoplasty

Research

JoVE Journal

Medicine

27.4K visualizações.  University of Michigan. O transplante da córnea do endotélio é uma técnica cirúrgica para o tratamento de doenças da córnea posteriores. Dissecção microcerátomo mecânico para preparar resultados de tecidos mais finos, enxertos mais simétrica com perda de células endoteliais e menos resultados melhores. Dissecações pode ser realizada no banco de olhos antes da cirurgia de transplante da córnea.

Vídeo: Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty

Single Port Donor Nephrectomy

In 2007, Rane presented the first single port nephrectomy for a small non-functioning kidney at the World Congress of Endourology. Since that time, the use of single port surgery for nephrectomy has expanded to include donor nephrectomy. Over the next two years the technique was adopted for many others types of nephrectomies to include donor nephrectomy. We present our technique for single port donor nephrectomy using the Gelpoint device. We have successfully performed this surgery in over 100 patients and add this experience to our experience of over 1000 laparoscopic nephrectomies. With the proper equipment and technique, single port donor nephrectomy can be performed safely and effectively in the majority of live donors. We have found that our operative times and most importantly our transplant outcomes have not changed significantly with the adoption of the single port donor nephrectomy. We believe that single port donor nephrectomy represents a step forward in the care of living donors.

Single port laparoscopic surgery is changing the standard of care in surgical care like nothing since the laparoscopic technique was introduced 20 years ago. We present out technique of single port donor nephrectomy using the Gelpoint device. We have successfully performed this surgery in 100 patients.

Nefrectomia Single Port

In 2007, Rane presented the first single port nephrectomy for a small non-functioning kidney at the World Congress of Endourology.  Since that time, the ...

Medicina

Corneal Donor Tissue Preparation for Descemet's Membrane Endothelial Keratoplasty

Descemet&#8217;s Membrane Endothelial Keratoplasty (DMEK) is a form of corneal transplantation in which only a single cell layer, the corneal endothelium, along with its basement membrane (Descemet&#39;s membrane) is introduced onto the recipient&#39;s posterior stroma3. Unlike Descemet&#8217;s Stripping Automated Endothelial Keratoplasty (DSAEK), where additional donor stroma is introduced, no unnatural stroma-to-stroma interface is created. As a result, the natural anatomy of the cornea is preserved as much as possible allowing for improved recovery time and visual acuity4. Endothelial Keratoplasty (EK) is the procedure of choice for treatment of endothelial dysfunction. The advantages of EK include rapid recovery of vision, preservation of ocular integrity and minimal refractive change due to use of a small, peripheral incision1. DSAEK utilizes donor tissue prepared with partial thickness stroma and endothelium. The rapid success and utilization of this procedure can be attributed to availability of eye-bank prepared precut tissue. The benefits of eye-bank preparation of donor tissue include elimination of need for specialized equipment in the operating room and availability of back up donor tissue in case of tissue perforation during preparation. In addition, high volume preparation of donor tissue by eye-bank technicians may provide improved quality of donor tissue. DSAEK may have limited best corrected visual acuity due to creation of a stromal interface between the donor and recipient cornea. Elimination of this interface with transplantation of only donor Descemet&#39;s membrane and endothelium in DMEK may improve visual outcomes and reduce complications after EK5. Similar to DSAEK, long term success and acceptance of DMEK is dependent on ease of availability of precut, eye-bank prepared donor tissue. Here we present a stepwise approach to donor tissue preparation which may reduce some barriers eye-banks face in providing DMEK grafts.

Corneal Donor Tissue Preparation for Descemet&#039;s Membrane Endothelial Keratoplasty

Endothelial keratoplasty is a surgical technique continuously evolving as advancements result in transplantation of thinner grafts with each succession1. Here we present a technique for controlled manual tissue dissection to allow safe and repeatable separation of endothelium and Descemet&#39;s membranes from donor corneoscleral buttons for transplantation2.

Preparação tecido doador de córnea para Membrana de Descemet endotelial Keratoplasty

Descemet&#8217;s Membrane Endothelial Keratoplasty (DMEK) is a form of corneal transplantation in which only a single cell layer, the corneal endothelium, ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene and cell therapies are highly promising alternative approaches for CVD treatment. However, the broad clinical application of gene therapy is greatly limited by the lack of suitable gene delivery systems. The development of appropriate gene delivery vectors can provide a solution to current challenges in cell therapy. In particular, existing drawbacks, such as limited efficiency and low cell retention in the injured organ, could be overcome by appropriate cell engineering (i.e., genetic) prior to transplantation. The presented protocol describes the efficient and safe transient modification of endothelial cells using a polyethyleneimine superparamagnetic magnetic nanoparticle (PEI/MNP)-based delivery vector. Also, the algorithm and methods for cell characterization are defined. The successful intracellular delivery of microRNA (miR) into human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) has been achieved without affecting cell viability, functionality, or intercellular communication. Moreover, this approach was proven to cause a strong functional effect in introduced exogenous miR. Importantly, the application of this MNP-based vector ensures cell magnetization, with accompanying possibilities of magnetic targeting and non-invasive MRI tracing. This may provide a basis for magnetically guided, genetically engineered cell therapeutics that can be monitored non-invasively with MRI.

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

This manuscript describes the efficient, non-viral delivery of miR to endothelial cells by a PEI/MNP vector and their magnetization. Thus, in addition to genetic modification, this approach allows for magnetic cell guidance and MRI detectability. The technique can be used to improve the characteristics of therapeutic cell products.

preparação e<em&gt; In Vitro</em&gt; Caracterização de magnetizado miR-modificado Células Endoteliais

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two dimensional (2D) and three dimensional (3D) culture has generated a wealth of information not only about corneal biology but also about wound healing, myofibroblast biology, and scarring in general. The goal of the protocol is an assay system for quantifying myofibroblast development, which characterizes scarring. We demonstrate a corneal organ culture ex vivo model using pig eyes. In this anterior keratectomy wound, corneas still in the globe are wounded with a circular blade called a trephine. A plug of approximately 1/3 of the anterior cornea is removed including the epithelium, the basement membrane, and the anterior part of the stroma. After wounding, corneas are cut from the globe, mounted on a collagen/agar base, and cultured for two weeks in supplemented-serum free medium with stabilized vitamin C to augment cell proliferation and extracellular matrix secretion by resident fibroblasts. Activation of myofibroblasts in the anterior stroma is evident in the healed cornea. This model can be used to assay wound closure, the development of myofibroblasts and fibrotic markers, and for toxicology studies. In addition, the effects of small molecule inhibitors as well as lipid-mediated siRNA transfection for gene knockdown can be tested in this system.

A protocol for an ex vivo corneal organ culture model useful for wound healing studies is described. This model system can be used to assess the effects of agents to promote regenerative healing or drug toxicity in an organized 3D multicellular environment.

Ex Vivo modelo de cultura órgão da córnea para cicatrização de feridas estudos

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for experimental investigations as they are normally needed for transplantation. Endothelial cell cultures often do not translate well to in vivo situations. Due to the biostructural characteristics of non-human corneas, stromal swelling during cultivation induces substantial corneal endothelial cell loss, which makes it difficult to perform cultivation for an extended period of time. Deswelling agents such as dextran are used to counteract this response. However, they also cause significant endothelial cell loss. Therefore, an ex vivo organ culture model not requiring deswelling agents was established. Pig eyes from a local slaughterhouse were used to prepare split corneal buttons. After partial corneal trephination, the outer layers of the cornea (epithelium, bowman layer, parts of the stroma) were removed. This significantly reduces corneal endothelial cell loss induced by massive stromal swelling and Descemet&#39;s membrane folding throughout longer cultivation periods and improves general preservation of the endothelial cell layer. Subsequent complete corneal trephination was followed by the removal of the split corneal button from the remaining eye bulb and cultivation. Endothelial cell density was assessed at follow-up times of up to 15 days after preparation (i.e., days 1, 8, 15) using light microscopy. The preparation technique used allows a better preservation of the endothelial cell layer enabled by less stromal tissue swelling, which results in slow and linear decline rates in split corneal buttons comparable to human donor corneas. As this standardized organo-typically cultivated research model for the first time allows a stable cultivation for at least two weeks, it is a valuable alternative to human donor corneas for future investigations of various external factors with regards to their effects on the corneal endothelium.

Here, a step-by-step protocol for the preparation and cultivation of porcine split corneal buttons is presented. As this organo-typically cultivated organ culture model shows cell death rates within 15 days, comparable to human donor corneas, it represents the first model allowing long-term cultivation of non-human corneas without adding toxic dextran.

Um modelo de cultura de órgão endotelial corneano porcina usando Split córnea botões

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...

Development of a Noninvasive, Laser-Assisted Experimental Model of Corneal Endothelial Cell Loss

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the optical breakdown at the laser focus. Acoustic shock waves and cavitation bubbles are generated, causing tissue rupture. Bubble sizes and pressure amplitudes vary with pulse energy and position of the focal point. In this study, enucleated porcine eyes were positioned in front of a commercially available Nd:YAG laser. Variable pulse energies as well as different positions of the focal spots posterior to the cornea were tested. Resulting lesions were evaluated by two-photon microscopy and histology to determine the best parameters for an exclusive detachment of corneal endothelial cells (CEC) with minimum collateral damage. The advantages of this method are the precise ablation of CEC, reduced collateral damage, and above all, the non-contact treatment.

Here, we present a protocol to detach corneal endothelial cells (CEC) from Descemet&#8217;s membrane (DM) using a neodymium:YAG (Nd:YAG) laser as an ex vivo disease model for bullous keratopathy (BK).

Desenvolvimento de um modelo experimental não invasivo, assistido a laser de perda de células endoteliais córneas

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the ...

An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its transparency. However, due to its external position, the cornea is highly susceptible to a wide variety of injuries that can lead to the loss of corneal transparency and eventual blindness. Efficient corneal wound healing in response to these injuries is pivotal for maintaining corneal homeostasis and preservation of corneal transparency and refractive capabilities. In events of compromised corneal wound healing, the cornea becomes vulnerable to infections, ulcerations, and scarring. Given the fundamental importance of corneal wound healing to the preservation of corneal transparency and vision, a better understanding of the normal corneal wound healing process is a prerequisite to understanding impaired corneal wound healing associated with infection and disease. Toward this goal, murine models of corneal wounding have proven useful in furthering our understanding of the corneal wound healing mechanisms operating under normal physiological conditions. Here, a protocol for creating a central corneal epithelial abrasion in mouse using a trephine and a blunt golf club spud is described. In this model, a 2 mm diameter circular trephine, centered over the cornea, is used to demarcate the wound area. The golf club spud is used with care to debride the epithelium and create a circular wound without damaging the corneal epithelial basement membrane. The resulting inflammatory response proceeds as a well-characterized cascade of cellular and molecular events that are critical for efficient wound healing. This simple corneal wound healing model is highly reproducible and well-published and is now being used to evaluate compromised corneal wound healing in the context of disease.

Here, a protocol for creating a central corneal epithelial abrasion wound in the mouse using a trephine and a blunt golf club spud is described. This corneal wound healing model is highly reproducible and is now being used to evaluate compromised corneal wound healing in the context of diseases.

Um modelo de abrasão epitelial para estudar a cicatrização da ferida córnea

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its ...

A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts and complications such as primary graft dysfunction and graft rejection. The recent clinical use of an ex vivo perfusion device in cardiac transplantation introduces a unique opportunity for treating cardiac allografts with therapeutic interventions to improve function and avoid deleterious recipient responses. Establishing a translational, large-animal model for therapeutic delivery to the entire allograft is essential for testing novel therapeutic approaches in cardiac transplantation. The porcine, heterotopic heart transplantation model in the intraabdominal position serves as an excellent model for assessing the effects of novel interventions and the immunopathology of graft rejection. This model additionally offers long-term survival for the pig, given that the graft is not required to maintain the recipient's circulation. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach for achieving ex vivo delivery of a therapeutic to the entire cardiac allograft prior to transplantation and provide technical details to perform a survival heterotopic transplant of the ex vivo perfused heart.

We present a protocol for utilizing a normothermic ex vivo sanguinous perfusion system for the delivery of therapeutics to an entire cardiac allograft in a porcine heterotopic heart transplant model.

Um Protocolo de Transplante de Coração Heterotópico Porcino para Entrega de Terapêutica a um Aoenxerto Cardíaco

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...

Preparation of Human Myocardial Tissue for Long-Term Cultivation

Cardiomyocyte cultivation has seen a vast number of developments, ranging from two-dimensional (2D) cell cultivation to iPSC derived organoids. In 2019, an ex vivo way to cultivate myocardial slices obtained from human heart samples was demonstrated, while approaching in vivo condition of myocardial contraction. These samples originate mostly from heart transplantations or left-ventricular assist device placements. Using a vibratome and a specially developed cultivation system, 300 &#181;m thick slices are placed between a fixed and a spring wire, allowing for stable and reproducible cultivation for several weeks. During cultivation, the slices are continuously stimulated according to individual settings. Contractions can be displayed and recorded in real-time, and pharmacological agents can be readily applied. User-defined stimulation protocols can be scheduled and performed to assess vital contraction parameters like post-pause-potentiation, stimulation threshold, force-frequency relation, and refractory period. Furthermore, the system enables a variable pre- and afterload setting for a more physiological cultivation.
Here, we present a step-by-step guide on how to generate a successful long-term cultivation of human left ventricular myocardial slices, using a commercial biomimetic cultivation solution.

We present a protocol for ex vivo cultivation of human ventricular myocardial tissue. It allows for detailed analysis of contraction force and kinetics, as well as the application of pre- and afterload to mimic the in vivo physiological environment more closely.

Preparação do tecido miocárdio humano para cultivo a longo prazo

Cardiomyocyte cultivation has seen a vast number of developments, ranging from two-dimensional (2D) cell cultivation to iPSC derived organoids. In 2019, ...

Transplante de coração in vivo para estudar a transição endotelial para mesenquimal

A Neonatal Heterotopic Rat Heart Transplantation Model for the Study of Endothelial-to-Mesenchymal Transition

Endocardial fibroelastosis (EFE), defined by subendocardial tissue accumulation, has major impacts on the development of the left ventricle (LV) and precludes patients with congenital critical aortic stenosis and hypoplastic left heart syndrome (HLHS) from curative anatomical biventricular surgical repair. Surgical resection is currently the only available therapeutic option, but EFE often recurs, sometimes with an even more infiltrative growth pattern into the adjacent myocardium.
To better understand the underlying mechanisms of EFE and to explore therapeutic strategies, an animal model suitable for preclinical testing was developed. The animal model takes into consideration that EFE is a disease of the immature heart and is associated with flow disturbances, as supported by clinical observations. Thus, the heterotopic heart transplantation of neonatal rat donor hearts is the basis for this model.
A neonatal rat heart is transplanted into an adolescent rat&#39;s abdomen and connected to the recipient&#39;s infrarenal aorta and inferior vena cava. While perfusion of the coronary arteries preserves the viability of the donor heart, flow stagnation within the LV induces EFE growth in the very immature heart. The underlying mechanism of EFE formation is the transition of endocardial endothelial cells to mesenchymal cells (EndMT), which is a well-described mechanism of early embryonic development of the valves and septa but also the leading cause of fibrosis in heart failure. EFE formation can be macroscopically observed within days after transplantation. Transabdominal echocardiography is used to monitor the graft viability, contractility, and the patency of the anastomoses. Following euthanasia, the EFE tissue is harvested, and it shows the same histopathological characteristics as human EFE tissue from HLHS patients.
This in vivo model allows for studying the mechanisms of EFE development in the heart and testing treatment options to prevent this pathological tissue formation and provides the opportunity for a more generalized examination of EndMT-induced fibrosis.

Autor em destaque: Um modelo de transplante cardíaco de rato heterotópico neonatal para o estudo da transição endotelial para mesenquimal  

This work presents an animal model of endothelial-to-mesenchymal transition-induced fibrosis, as seen in congenital cardiac defects such as critical aortic stenosis or hypoplastic left heart syndrome, which allows for detailed histological tissue evaluation, the identification of regulatory signaling pathways, and the testing of treatment options.

Modelo de Transplante Cardíaco Heterotópico Neonatal em Rato para Estudo da Transição Endotelial-Mesenquimal

Endocardial fibroelastosis (EFE), defined by subendocardial tissue accumulation, has major impacts on the development of the left ventricle (LV) and ...