المؤلفان بالشكر عائلات المانحين والمنظمات الحصول على الأعضاء المشاركين في هذا البحث ومارتينو وماريا Kusmartseva ايرينا للحصول على مساعدة الخبراء التابعة لها. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة أبحاث السكري الأحداث (MC-T.، MA) لدعم الشبكة للمتبرعين بالأعضاء البنكرياس مع مرض السكري.

1. انشاء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أشرطة التسمية لكتل ​​البارافين يدويا مع قلم رصاص، أو تلقائيا مع طابعة كاسيت. وتشمل المعرف المانحة (CaseID)، ونوع العينة، وعدد قسامة، وتحديد أي إضافية فريدة من نوعها (ورقة حالة، <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">الملحق 1</a> ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية قوالب أكتوبر بالنسبة للأشرطة مع علامة دائمة. قطع مستطيلات 5-10 سم من رقائق الألومنيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طباعة أو يدويا التسمية مع علامة دائمة كل قوارير وأنابيب. وتشمل قوارير بما فيه الكفاية لعينات مبكرة مفروم مجمد ومواسير مع وسائل الاعلام RPMI لشحنات جديدة. لقوارير والمجمدة مبكرة مع RNAlater، إضافة 1 مل RNAlater إلى كل cryovial. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحات تشريح مجموعة المتابعة في غطاء محرك السيارة السلامة البيولوجية وقمم مضادة للصكوك تشريح تعقيمها (ملقط والمشارط والشفرات، ومنصات الشاش (4X4))، فضلا عن أشرطة الكاسيت والقوالب أكتوبر مرتبة في ترتيب استخدامها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حمام التجميد من خلال وضعالثلج الجاف في مربع الستايروفوم متوسطة الحجم (10x10 سم) على عمق لا يقل عن 3 سم وإضافة isopentane حتى يتم تغطيتها بالكامل من الثلج الجاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياري: ملء وعاء ديوار صغير مع النيتروجين السائل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان هناك حاجة للبنكرياس المجهر الإلكتروني (EM)، وإعداد TAAB مثبت بإضافة 1.25 مل بارافورمالدهيد 16٪، 1.25 مل غلوتارالدهيد 8٪، و 7.5 مل PBS 0.1M. إعداد مثبت Lowicryl بإضافة 2.5 مل بارافورمالدهيد 16٪ إلى 7.5 PBS 0.1M مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير المحاليل المستخدمة لعزل الخلايا. على زجاجة 500 مل من DMEF (مع الجلوتامين)، اتبع تقنيات التعقيم في حين اضاف ما يلي: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مصل بقري جنيني (FBS): تضاف 50mL، نهائي 10٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البنسلين / الستربتومايسين عقار (القلم / بكتيريا، 10000 وحدة / مل / 10000 ميكروغرام / مل الأوراق المالية) - إضافة 5 مل القلم / بكتيريا الأوراق المالية إلى RPMI لتركيز النهائي من 100 يو / مل / 100ug/mL. أيضا إضافة إلى 5 مل زجاجة 500 مل من DPBS عندما تستخدم لعقد العقد اللمفاوية أو عينات الطحال. </li></ol></li></ol> 2. أفراد <oL&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم إنجاز إجراءات على النحو الأمثل مع ثلاثة موظفين ومع ذلك، يمكن إجراء هذا الإجراء مع فرد واحد مدربة تدريبا جيدا. يمكن أن شخصين استكمال عموما الإجراء في 90 دقيقة. المدة الفعلية تعتمد على أرقام وردت من الأنسجة وسهولة العثور على الغدد الليمفاوية البنكرياس. وتعقد عينات للالعزلة خلية في 4 درجات مئوية حتى الانتهاء من تشريح الأنسجة في حين تتم معالجة عينات من مصل الدم بصورة متوازية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علم الامراض، علم الأمراض المساعد، أو ما يعادلها-1. موظف من ذوي الخبرة يؤدي التعامل مع الأنسجة ويؤدي التشريح الرئيسية بما في ذلك تقسيم (ق) من رأس البنكرياس والغدد الليمفاوية حصاد البنكرياس ويتم توجيه الجهود الأولية نحو البنكرياس تليها دراسة شبه البنكرياس الدهون للحصول على العقد اللمفاوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقني مختبر أو عضو ما يعادل الموظفين الذين تدربوا في الأنسجة وتقليم مسؤولياته الرئيسية هي على وزن البنكرياس والمناطق والأنسجة تقليم للكتل الثابتة والمجمدة والخامس المفاجئة المجمدةأمية. يستقبل العفج والطحال من مساعد علم الأمراض ومعالجتها في حين أن هذه الأجهزة مساعد الباثولوجيا يتم معالجة البنكرياس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مختبر مساعد الموظف الذي يساعد الآخرين بما في ذلك كتلة ووضع العلامات قارورة، عينة تنميق لcryovials، وتجهيز المصل. </li></ol> 3. تشريح البنكرياس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الاثنى عشر والطحال والبنكرياس تنظيف من الدهون غير الضرورية، والسفن، والأعصاب باستخدام تشريح حادة وحادة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع البنكرياس تنظيفها على لوحة تشريح مغطاة المناشف الورقية. تراجع قضيب من القطن ذات الرؤوس في الحبر الازرق وانتشارها على السطح الأمامي للبنكرياس. لطخة الزائدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياري: يغمس قضيب جديد في الحبر الأسود وانتشارها على السطح الخلفي للبنكرياس. عودة البنكرياس إلى اتجاه طبيعي مع السطح الأمامي للمواجهة مشرح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع البنكرياس إلى 3 مناطق هي: الرأس، والجسم، والذيل (الشكل 1). قطع تقاطع بين هيئة التعليم العاليد والجسم ثم تقسيم الجزء المتبقي إلى ~ أجزاء متساوية للجسم وذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن كل منطقة من الأوزان البنكرياس وسجل (القضية workup ورقة ( <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">الملحق 1</a> )). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسم (~ 0.5 سم) في كل منطقة من البنكرياس في نحو عرضي &quot;الخبز رغيف&quot; (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام أجزاء من كل من تقاطعات بين المناطق لعينات مفروم. اعتمادا على حجم البنكرياس، قد يكون عينة من منطقة تقاطع الجسم الذيل يكون من الصعب الحصول عليها في هذه الحالة يمكن أن انخفض عدد كتل البارافين للحصول على عينات مفروم أو عينات فقط من منطقة الرأس والجسم ويمكن الحصول على البنكرياس. cryovials التسمية وفقا على الرأس أو الجسم للدلالة على المنطقة القريبة على مفترق الطرق. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فرم قطع وتقسيم بالتساوي بين cryovials (≥ 1 غرام لكل قنينة). تجمد بسرعة قارورة من دون RNALater في النتروجين السائل أو في الثلج الجاف - isopentane الطين ثم نقل رالزراعة العضوية -80 الثلاجة درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على قارورة مع RNALater في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة للسماح للموازنة، ريمكس وبسرعة تجميد في النتروجين السائل أو في الطين الجليد isopentane جاف ثم نقل إلى الثلاجة -80 درجة مئوية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أجزاء بالتناوب لالبارافين وكتل أكتوبر بدءا من البارافين (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتكئ جميع قطاعات عرضية إلى اليمين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان ~ 1.5 × 1.5 × 0.5 سم المقاطع في أشرطة الكاسيت. إذا المقاطع العرضية كبيرة جدا، وخفض الى النصف (الشكل 2B). أشرطة التسمية لمدة نصف الأمامي الأزرق كما &quot;A&quot; والنصف الخلفي مثل &quot;ب&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا قطع لا تزال كبيرة جدا، وقطع كل مقطع عمودي على خفض السابقة (الشكل 2C). أشرطة التسمية ميلادي بطريقة عقارب الساعة. تقليم قطعة أخرى حسب الحاجة لتناسب داخل الكاسيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كتل عدد بالتتابع في المنطقة، بدءا من القسم الأكثر وسطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكتل البارافين، ج موقفassettes حتى التسمية إلى اليسار ومكان الأنسجة في الكاسيت، والحفاظ على توجهها. وثيقة مخزنة غطاء الكاسيت ونقلها إلى وعاء مع محايد 500 مل 10٪ ~ الفورمالين (NBF). بدء تثبيت توقيت عندما يتم وضع كاسيت مشاركة في مثبت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكتل أكتوبر، صب طبقة رقيقة من وسائل الاعلام أكتوبر في القالب ثم وضع prelabeled النسيج في قالب يجري التأكد من الحفاظ على اتجاه وتغطية الأنسجة مع أكتوبر تزج بسرعة القوالب أكتوبر في الثلج الجاف - الطين isopentane لمدة دقيقة 1 ~. إزالة من الطين ووضعت على الثلج الجاف للتخزين المؤقت أو -80 درجة مئوية في الثلاجة لتخزين على المدى الطويل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول ~ 0.5 × 0.5 سم شرائح من تقاطع رأس والجسم للالمجهر الإلكتروني (EM). مكان شريحة واحدة في مثبت TAAB وشريحة أخرى في مثبت Lowicryl. تخزين كلا النوعين من مثبت مع العينات في درجة مئوية (4) ل48 ساعة على الأقل و / أو إلى أجل غير مسمى حتى مزيد من المعالجة لEM. </li></ol> 4. الطحال والعقد اللمفية Dissecستعقد والإثنى عشر تشريح الغشاء المخاطي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الغدد الليمفاوية البنكرياس (PLN) من الدهون وتقليم كل النسيج الضام للكبسولة العقدة. في مكان معقم الخلية التي تحتوي على طبق ثقافة DMEF. اعتمادا على أرقام مجموع معزولة، تقسيم PLN إلى aliquots لشحنات جديدة، العزلة خلية cryopreserved، البارافين و / أو كتل أكتوبر، وقوارير. فرم العقد كبير الى قطع لا يزيد حجمها عن 0.5 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فرم الغدد الليمفاوية غير البنكرياس والطحال إلى مكعبات (~ 0.5 سم) صغير. في مكان مثبت وسائل الاعلام أكتوبر، وأو DMEM لشحنات عينة طازجة أو العزلة خلية cryopreserved وفقا لكميات من المواد الأولية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الاثني عشر ويمسح برفق الاثنى عشر الغشاء المخاطي نظيف من المخاطية مع الشاش المبلل. قطع أجزاء من الغشاء المخاطي لالبارافين و / أو المجمدة كتل أكتوبر وعينات مفروم للقارورة، مع وبدون RNAlater. أما بالنسبة لتجميد عينات أخرى. </li></ol> 5. لف القطع أكتوبر في مرحلة ما قبل المسمى رقائق الألومنيوم ومكان كتل أكتوبر و<html> قارورة في صناديق للتخزين على المدى الطويل في -80 درجة مئوية. 6. تقديم عينات الثابتة لمعالجة برافين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الأنسجة لمدة 16 ساعة (مجموعة 20 ± 4 ساعات) باستخدام معالج البارافين التلقائي أو باستخدام توقيت يدوي. معالجة إلى كتل البارافين باستخدام المعالج التلقائي ( <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix2.doc" target="_blank">الملحق 2</a> ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضمين المقاطع في الاتجاه الصحيح كما وضعت من قبل مشرح مع التسمية كاسيت إلى اليسار. تضمين الغشاء المخاطي الإثنى عشر مع سطح تخفض للسماح للفحص عمودي الغشاء المخاطي للمخاطية. </li></ol> 7. تنظيف وتطهير المناطق تشريح. غسل أدوات تشريح وإعادة تعقيم. وضع بقايا أنسجة الإنسان في مثبت الفورمالين لتخزين النفايات والطب الحيوي. تجاهل النفايات الطبية طبقا للقوانين المحلية خلال شهر واحد. 8. تحديث نظام الجرد عينة ve_title &quot;&gt; النتائج الممثل 9. وهذا الإجراء معالجة 1 البنكرياس السليم للإنسان مع عينة تمثيلية في جميع أنحاء الجهاز بما في ذلك ترسيم الحدود في ثلاث مناطق رئيسية، وهي: الرأس، الجسم والذيل في حدود 2 ساعة. يتم تضمين منطقة الكلابي، وجدت في منطقة رأس الخلفي، في تشريح الرأس. وكان متوسط ​​وزن البنكرياس في المتبرعين بالأعضاء من دون مرض السكري 82.4 غرام (52،7-139،0 غراما). وكانت الأوزان البنكرياس الإقليمية متساوية تقريبا (الشكل 3). ويمكن هذا الإجراء يسمح أيضا لإعادة الإعمار في البنكرياس بأكملها باستخدام الشرائح الملون من البارافين متتابعة وكتل أكتوبر بأشكال متعددة قابلة للتنفيذ مما يسمح الاستفادة القصوى للتكنولوجيات الحالية والمستقبلية. وتقدم ورقة العمل الحالية حالة nPOD ( <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">الملحق 1</a> ) الذي يستخدم لتوثيق العينات تعافى وبروك لاحقessing من أنواع وكميات قسامة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/4039/4039fig1.jpg" /> الشكل 1. الخطة الشاملة للالإجراء. تتم معالجة البنكرياس كامل مع الحفاظ على التوجهات التشريحية. منطقة رأس أطول في محور متفوقة-أدنى نظرا لوجود من الفص البنكرياس بطني في المنطقة الخلفية التي تشمل المنطقة الكلابي. منطقة تحاك في تقاطعات دلالة على المناطق المستخدمة للعينات مفروم في cryovials. ف، برافين، O، أكتوبر <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/4039/4039fig2.jpg" /> الشكل 2. ويمكن كتابة مخطط لمقاطع البنكرياس. شرائح عرضية البنكرياس كذلك تنقسم الى نصفين أو أرباع وبالحروف بطريقة عقارب الساعة. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/4039/4039fig3.jpg" /> الشكل 3. الأوزان البنكرياس من المتبرعين من دون مرض السكري.وكان وزنه البنكرياس سليمة من المانحين الكبار (&gt; 17 سنة) ثم تقسيمها إلى مناطق والأوزان الإقليمية التي تم الحصول عليها. بيانات وسائل ± SEM (N = 15).

<ol>
	<li>Brissova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+human+pancreatic+islet+architecture+and+composition+by+laser+scanning+confocal+microscopy.">Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy.</a> J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).</li><li>Rahier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pancreatic+polypeptide+cells+in+the+human+pancreas:+the+effects+of+age+and+diabetes.">The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).</li><li>Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+reconstruction+of+the+ventral+and+dorsal+pancreas:+a+new+insight+into+anatomy+and+embryonic+development.">Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development.</a> J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).</li><li>Wittingen, J., Frey, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+concentration+in+the+head,+body,+tail+and+uncinate+process+of+the+pancreas.">Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas.</a> Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).</li><li>Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+composition+of+the+human+diabetic+pancreas.">Cellular composition of the human diabetic pancreas.</a> Diabetologia. 24, 366-371 (1983).</li><li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources.">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).</li><li>Gianani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+results+of+screening+of+nondiabetic+organ+donors+for+expression+of+islet+autoantibodies.">Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).</li><li>Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hy&#246;ty, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collecting+high-quality+pancreatic+tissue+for+experimental+study+from+organ+donors+with+signs+of+&#946;-cell+autoimmunity.">Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of &#946;-cell autoimmunity.</a> Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).</li><li>In't Veld, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+insulitis+in+adult+autoantibody-positive+organ+donors.">Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors.</a> Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).</li><li>T&#246;ns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+human+pancreata+in+perspective+of+the+isolation+of+the+islets+of+langerhans.">Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans.</a> Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الهدف من هذا الإجراء هو لتحديد معالجة البنكرياس القياسية التي يمكن أن تكون منسقة عبر مواقع جمع متعددة، وبالتالي تسمح بإجراء مقارنات للنتائج التي تم الحصول عليها من قبل مجموعات مختلفة. وتستند هذه الطريقة على معايير وممارسات تشريح الأمراض الجراحية مع خطوات إضافية لش?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> الصكوك بما في ذلك تشريح المشارط مع 22 ريش </td><td> مختلف </td><td> مختلف </td><td></td></tr><tr><td> أنابيب الطرد المركزي (15 و 50 مل) </td><td> فيشر العلمية </td><td> 05-539-5، 430828 </td><td> عقيم </td></tr><tr><td> Cryotubes (1.8 مل) </td><td> VWR أمريكا الشمالية </td><td> 89004-300 </td><td> معقم الرموز الشريطية، اختياري </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> علم الأمراض الجراحية الحبر </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> أشرطة الكاسيت </td><td> مرسيدس الطبية </td><td> CAS ECO109 </td><td></td></tr><tr><td> 1التخزين المؤقت 0٪ محايد الفورمالين </td><td> فيشر العلمية </td><td> 23-245-685 </td><td></td></tr><tr><td> وسائل الإعلام أكتوبر التجميد </td><td> TissueTek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> قوالب </td><td> ThermoScientific </td><td> 58952 </td><td> مختلف الأحجام </td></tr><tr><td> Isopentane </td><td> فيشر العلمية </td><td> O3551-4 </td><td> أكتوبر حمام تقشعر لها الأبدان </td></tr><tr><td> الثلج الجاف </td><td></td><td></td><td> أكتوبر حمام تقشعر لها الأبدان </td></tr><tr><td> النيتروجين السائل في قارورة ديوار </td><td></td><td></td><td> المفاجئة cryovials تجميد </td></tr><tr><td> خلية طبق ثقافة (100mm) </td><td> كورنينج </td><td> 430167 </td><td> عقيم </td></tr><tr><td> Hyclone DMEF </td><td> ThermoScientific </td><td> SH30023.01 </td><td> وشملت الجلوتامين العقيمة، وتخزين المبرد، </td></tr><tr> &lt;TD&gt; مصل بقري جنيني </td><td> Cellgro </td><td> 35-010-CV </td><td> ، متجر معقم aliquots المجمدة </td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتومايسين عقار / مضاد </td><td> GIBCO </td><td> 15240-062 </td><td> ، متجر معقم aliquots المجمدة </td></tr><tr><td> نوع 9 برافين </td><td> ريتشارد ألان، والعلم </td><td> 8337 </td><td></td></tr><tr><td> 1X D-PBS </td><td> GIBCO </td><td> 14190-144 </td><td> عقيم </td></tr><tr><td> 16٪ لامتصاص العرق </td><td> EM العلوم </td><td> 15710 </td><td> جعل الطازجة والمبردة مخزن </td></tr><tr><td> 8٪ غلوتارالدهيد </td><td> EM العلوم </td><td> 16019 </td><td> جعل الطازجة والمبردة مخزن </td></tr><tr><td> السلامة البيولوجية المستوى 2 غطاء محرك السيارة </td><td> مختلف </td><td></td><td></td></tr><tr><td> منخفضة للغاية الفريزر </td><td> مختلف </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ساكورا كاسيت طابعة </td><td> ساكورا </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ساكورا VIP300 </td><td> ساكورا </td><td></td><td> التلقائي البارافين المعالج </td></tr><tr><td> البارافين تضمينها محطة </td><td> ThermoFisher </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> الجدول رقم 1. كواشف ومعدات معينة.

collection protocol for human pancreas

وقد تم تطوير هذا التشريح وإجراء المعاينة للشبكة لالمتبرعين البنكرياس مع برنامج (nPOD) مرض السكري لتوحيد إعداد البنكرياس تعافى من المتبرعين جثي. يتم تقسيم البنكرياس إلى 3 مناطق رئيسية (رأس والجسم، والذيل)، يليه المقاطع العرضية المسلسل في جميع أنحاء الإنسي إلى محور الأفقي. ومفروم تستخدم المقاطع بالتناوب لالبارافين ثابتة وكتل الطازجة والمجمدة وعينات من بقايا لاستعدادات مبكرة عينة مجمدة، سواء مع أو بدون ريبونوكلياز مثبطات، لDNA، RNA، أو عزل بروتين. الهدف العام المتمثل في البنكرياس إجراء تشريح هو لأخذ عينات من بنكرياس كامل مع الحفاظ على اتجاه التشريحية. وتفيد التقارير الغدد الصماء خلية التجانس من حيث التكوين جزيرة، والحجم، وأرقام عن الجزر الإنسان بالمقارنة مع الجزر القوارض 1. غالبية الجزر الإنسان من رأس البنكرياس، وتتكون الجسم والذيل مناطق containin على الأنسولينز β خلايا يليه انخفاض نسب الجلوكاجون α التي تحتوي على خلايا والسوماتوستاتين المحتوية على δ خلايا. ببتيد البنكرياس التي تحتوي على خلايا PP وخلايا إبسيلون جريلين المحتوية موجودة أيضا ولكن بأعداد صغيرة. في المقابل، فإن منطقة الكلابي يحتوي على الجزر التي تتألف أساسا من خلايا البنكرياس PP ببتيد التي تحتوي على 2. هذه الاختلافات جزيرة الإقليمية تنشأ عن الاختلافات التنموية. البنكرياس يطور من براعم البنكرياس بطني وظهري في المعى الأمامي، وبعد التناوب على المعدة والاثني عشر، ينتقل الفص بطني والصمامات مع 3 ظهري. الفص بطني تشكل الجزء الخلفي من الرأس بما في ذلك عملية الكلابي في حين أن الفص الظهرية يؤدي إلى بقية الأعضاء. وأفادت التقارير أيضا الإقليمية اختلاف البنكرياس مع منطقة الذيل وجود أعلى كثافة جزيرة بالمقارنة مع مناطق أخرى، وظهري المكونات المشتقة من الفص تمر ضمور انتقائي في مرض السكري نوع 1 <sيصل&gt; 4،5. في كثير من الأحيان يتم استرداد أجهزة إضافية والأنسجة من المتبرعين، وتشمل الغدد الليمفاوية البنكرياس والطحال والغدد الليمفاوية غير البنكرياس. يتم استرداد هذه العينات مع تنسيقات مماثلة بالنسبة للبنكرياس مع إضافة عزل الخلايا cryopreserved. عندما يتم تضمين مع الاثني عشر القريبة من البنكرياس، قد يتم جمعها الغشاء المخاطي الاثنى عشر للكتل البارافين والمجمدة والاستعدادات المبكرة المفروم المجمدة.

Watch this Scientific Journal Video about Collection Protocol for Human Pancreas at JoVE.com

Collection Protocol for Human Pancreas

هذا الفيديو يشرح كيفية إجراء تشريح لمعالجة البنكرياس الإنسان إلى صيغ تخزين متعددة. ويحتفظ التوجه التشريحية في جميع أنحاء المناطق البنكرياس للسماح للتعريف تكوين جزيرة الإقليمية وكثافة.

بروتوكول لجمع البنكرياس الإنسان

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Research

JoVE Journal

Medicine

14.7K Views.  University of Florida. هذا الفيديو يشرح كيفية إجراء تشريح لمعالجة البنكرياس الإنسان إلى صيغ تخزين متعددة. ويحتفظ التوجه التشريحية في جميع أنحاء المناطق البنكرياس للسماح للتعريف تكوين جزيرة الإقليمية وكثافة.

Video: Collection Protocol for Human Pancreas

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected cells can be used for a variety of investigations, such as transcriptomic or proteomic studies, DNA assessment or chromosomal analysis 2,3. An especially challenging application of LMD is transcriptome analysis, which, due to the lability of RNA 4, can be particularly prominent when cells are dissected from tissues that are rich of RNases, such as the pancreas. A microdissection protocol that enables fast identification and collection of target cells is essential in this setting in order to shorten the tissue handling time and, consequently, to ensure RNA preservation. 
Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic beta cells from surgical specimens to be used for transcriptomic studies 5. Small pieces of pancreas of about 0.5-1 cm3 were cut from the healthy appearing margins of resected pancreas specimens, embedded in Tissue-Tek O.C.T. Compound, immediately frozen in chilled 2-Methylbutane, and stored at -80 &deg;C until sectioning. Forty serial sections of 10 &mu;m thickness were cut on a cryostat under a -20 &deg;C setting, transferred individually to glass slides, dried inside the cryostat for 1-2 min, and stored at -80 &deg;C. 
Immediately before the laser microdissection procedure, sections were fixed in ice cold, freshly prepared 70% ethanol for 30 sec, washed by 5-6 dips in ice cold DEPC-treated water, and dehydrated by two one-minute incubations in ice cold 100% ethanol followed by xylene (which is used for tissue dehydration) for 4 min; tissue sections were then air-dried afterwards for 3-5 min. Importantly, all steps, except the incubation in xylene, were performed using ice-cold reagents - a modification over a previously described protocol 6. utilization of ice cold reagents resulted in a pronounced increase of the intrinsic autofluorescence of beta cells, and facilitated their recognition. For microdissection, four sections were dehydrated each time: two were placed into a foil-wrapped 50 ml tube, to protect the tissue from moisture and bleaching; the remaining two were immediately microdissected. This procedure was performed using a PALM MicroBeam instrument (Zeiss) employing the Auto Laser Pressure Catapulting (AutoLPC) mode. The completion of beta cell/islet dissection from four cryosections required no longer than 40-60 min. Cells were collected into one AdhesiveCap and lysed with 10 &mu;l lysis buffer. Each single RNA specimen for transcriptomic analysis was obtained by combining 10 cell microdissected samples, followed by RNA extraction using the Pico Pure RNA Isolation Kit (Arcturus). This protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their rapid and accurate recognition and collection. Further improvement of this procedure could enable the dissection of phenotypically different beta cells, with possible implications for better understanding the changes associated with type 2 diabetes.

Laser microdissection is a technique that allows the recovery of selected cells from minute amounts of parenchyma. Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic islets from surgical specimens to be used for transcriptomic studies. Our protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their collection.

تحسين بروتوكول للتسليخ مجهري ليزر من الجزر البنكرياسية الإنسان من عينات جراحية

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

جمع وعزل، وتحليل تدفق Cytometric العينات باطن عنق الرحم الإنسان

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the patients are unaware of such disorders or are having difficulty expressing their symptoms. Until now, several devices for perspiration monitoring have been developed; however, such devices tend to have a relatively large exterior, considerable power consumption, and/or less sensitivity.
Recently, we developed a small, wireless device for perspiration monitoring. The device consists of a temperature/relative humidity (T/RH) sensor, battery-driven small data logger, and silica gel as a desiccant in a small cylindrical exterior. The T/RH sensor is placed between the detection windows (through which the water vapor from the skin enters) and the silica gel. The underlying principle of the perspiration monitoring device is based on Fick&#39;s law of diffusion, which means that water vapor flux from the skin to the silica gel (i.e.&#160;transepidermal water loss and perspiration) can be captured by change in humidity at the T/RH sensor. In addition, a baseline subtraction method was adopted to distinguish perspiration and transepidermal water loss.
As shown in the previous report, the developed device can monitor the perspiration at any sites of the body in an easy, wireless manner. However, detailed methods of how to use the device have not been disclosed yet. In this article, therefore, we would like to show the point-by-point tutorials of how to use the device for perspiration monitoring, by showing the sympathetic activity test with the sympathetic skin response monitoring as an example.

Recently, we developed a small wireless device for perspiration monitoring. In this article, we present detailed protocols on how to use the device for perspiration monitoring with an example of the sympathetic activity test.

بروتوكول مفصل لرصد العرق عن طريق رواية والصغيرة، جهاز لاسلكي

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

نموذج الماوس لزرع البنكرياس باستخدام تقنية تعديل الكفة

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at the 12 codon (Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+) mouse strain as a model of human pancreatic cancer. The goal of our current studies is to identify novel metabolic biomarkers of pancreatic cancer progression. We have performed metabolic profiling of urine, feces, blood, and pancreas tissue extracts, as well as histological analyses of the pancreas to stage the cancer progression. The mouse pancreas is not a well-defined solid organ like in humans, but rather is a diffusely distributed soft tissue that is not easily identified by individuals unfamiliar with mouse internal anatomy or by individuals that have little or no experience performing mouse organ dissections. The purpose of this article is to provide a detailed step-wise visual demonstration to guide novices in the removal of the mouse pancreas by dissection. This article should be especially valuable to students and investigators new to research that requires harvesting of the mouse pancreas by dissection for metabolic profiling or histological analyses.

This video article provides a detailed demonstration of the procedures required to successfully remove the pancreas from a mouse by dissection for histological analysis and metabolic profiling.

تشريح البنكرياس الماوس للتحليل النسيجي والتنميط الأيضية

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Robotic Lateral Pancreaticojejunostomy for Chronic Pancreatitis

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The recent rise of robotic and laparoscopic pancreatic surgery has found benefits such as reduced time to functional recovery. Few studies have reported on the feasibility, technique and outcome of robotic LPJ, especially including transection of the gastroduodenal artery. The present study describes the main steps for robotic LPJ in a patient with painful chronic pancreatitis with a dilated main pancreatic duct. The patient underwent robotic LPJ. The LPJ anastomosis is performed using a running suture technique in a longitudinal side-to-side manner. Routinely, the gastroduodenal artery is transected to drain the entire length of the main pancreatic duct. The patient is in French position; 7 trocars are placed (4 robotic, 2 laparoscopic assistants, 1 liver-retractor). After docking of the robot system, the omental bursa is opened, and the right gastroepiploic artery and vein are ligated at their base at the lower border of the pancreas. Intraoperative ultrasonography is performed in order to determine trajectory of the dilated main pancreatic duct which is opened for its entire length after the gastroduodenal artery has been suture ligated both cranially and caudally from the main pancreatic duct. A Roux limb is created, and a latero-lateral PJ is fashioned using several 3-0 barbed sutures. A stapled jejuno-jejunostomy is created at sufficient distance from the pancreatic anastomosis, aided by a 50 cm suture. The described technique for robotic LPJ is a complex but feasible operation for patients with treatment refractory CP and a dilated main pancreatic duct. Due to its complexity, implementation in high volume centers with extensive experience with CP surgery may improve outcomes.

Robotic lateral pancreaticojejunostomy (RLPJ) may be used in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis and a dilated main pancreatic duct. We describe a standardized and reproducible technique for RLPJ, which includes transection of the gastroduodenal artery.

بانكريتيكوجيجونوستومي الجانبية الروبوتية للتهاب البنكرياس المزمن

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological resection of left-sided pancreatic cancer. Several surgical techniques have been described in recent years, but few were specifically designed for minimally invasive approaches. This study describes and demonstrates a standardized and reproducible technique for an adequate oncological resection of pancreatic cancer: laparoscopic radical left pancreatectomy (LRLP).
A 61-year-old woman presented with an incidental finding of a 3 cm mass in the left pancreas suspect for malignancy. Imaging did not reveal distant metastases, central vascular involvement, or morbid obesity, hence the patient was suitable for LRLP. This study describes the main steps of LRLP for pancreatic cancer. First, the lesser sac is opened by transecting the gastrocolic ligament. The splenic flexure of the colon is mobilized and the inferior border of the pancreas including Gerota&#39;s fascia is dissected down to the inferior border of the spleen. The pancreas is tunneled and hung, including Gerota&#8217;s fascia with a vessel loop. At the pancreatic neck, a tunnel is created between the pancreas and the portal vein, likewise a vessel loop is passed. The pancreas is then transected using the graded compression technique with an endostapler. Both the splenic vein and artery are transected before completing the resection. The entire specimen is extracted in a retrieval bag via a small Pfannenstiel incision.
Duration of the surgery was 210 min with 250 mL blood loss. Pathology revealed a R0-resection (&#62;1 mm) of a well-to-moderately differentiated adenocarcinoma originating from an intraductal papillary mucinous neoplasm. A total of 15 tumor-negative lymph nodes were resected. This is a detailed description of LRLP for left-sided pancreatic cancer as is currently being used within the international, multicenter randomized DIPLOMA (Distal Pancreatectomy Minimally Invasive or Open for PDAC) trial.

Oncologically safe left pancreatectomy requires radical resection (R0), Gerota&#8217;s (perirenal) fascia resection, and adequate lymph node dissection. This study describes the technical details of laparoscopic radical left pancreatectomy (LRLP), used in the first international multicenter randomized trial comparing minimally invasive with open left pancreatectomy for pancreatic cancer, the DIPLOMA trial.

المنظار الراديكالي ة الراديكالية استئصال البنكرياس لسرطان البنكرياس: استراتيجية جراحية وتقنية فيديو

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed in the supine Trendelenburg position. Kidney allografts are provided by a living donor. Before vascular anastomosis, the kidney allograft is prepared by inserting a double-J stent in the ureter, and the temperature for the anastomosis is lowered by wrapping it in an ice-packed gauze. A 12 mm or 8 mm port for the robotic camera and three 8 mm ports for robotic arms are placed. A peritoneal pouch is created for the kidney allograft by raising the peritoneal flaps on both sides over the psoas muscle before dissecting the iliac vessels and bladder. A 6 cm Pfannenstiel incision is made to insert the kidney into the peritoneal pouch, lateral to the right iliac vessels. 
After clamping the external iliac vein with Bulldogs clamps, a venotomy is performed, and the graft renal vein is anastomosed to the external iliac vein in an end-to-side continuous manner with a 6/0 polytetrafluoroethylene suture. After clamping the graft renal vein, the iliac vein is declamped. This is followed by clamping of the external iliac artery, arteriotomy, arterial anastomosis with a 6/0 polytetrafluoroethylene suture, clamping of the graft renal artery, and declamping of the external iliac artery. Reperfusion is then carried out, and ureteroneocystostomy is performed using the Lich-Gregoir technique. The peritoneum is closed at a few locations with polymer locking clips, and a closed-suction drain is placed through one of the working ports. After deflating the pneumoperitoneum, all incisions are closed.

This paper provides technical details for robot-assisted kidney transplantation from a living donor.

زراعة الكلى بمساعدة الروبوت

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ shortages and increasing numbers of patients being listed for PTx, new strategies are needed to increase the number of available grafts for transplantation. 
Static cold storage (SCS) is considered the gold standard for standard criteria organs. However, standard criteria donors (SCD) are becoming scarce and new strategies that can increase the rate of organ acceptance from extended criteria donors (ECD) are urgently needed. 
Normothermic ex vivo perfusion (NEVP) is one of the strategies that has become increasingly popular over the past couple of decades. This preservation method has already been used successfully in other organs (liver, kidneys, and lungs) but has been minimally explored in pancreas transplantation. The few papers that describe the method for pancreas show little success, edema being one of the major issues. The following manuscript describes the successful NEVP method and setup developed by our group to perfuse swine pancreas.

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Normothermic ex vivo machine perfusion (NEVP) has scarcely been explored for the preservation of pancreas allografts. We present an innovative preservation technique for pancreas allografts before transplantation.

نضح البنكرياس خارج الجسم الحي للحفاظ على الطعم الخيفي للبنكرياس قبل الزرع

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ ...

Surgical Tips and Tricks for Performing Porcine Pancreas Transplantation

Despite the promising results of pancreas transplantation in type 1 diabetes mellitus and metabolic syndrome, the biggest concern around this state-of-the-art technique remains the paucity of organs deemed fit for transplantation. High intravascular resistance, delicate intraparenchymal capillary framework, and complex lobular anatomy around the mesenteric vasculature are what make this organ more susceptible to injury and less tolerant to trivial trauma compared to organs such as the liver and kidney. Meticulous surgical dissection and judicious tissue handling form the cornerstone of the entire exercise of pancreas transplantation. Owing to morphological similarity between the anatomy of the porcine pancreas to the surrounding mesenteric vessels and the organs when compared to the human anatomy, demonstration of the technique in the porcine model could help to most accurately extrapolate this to a human setting. The present article aims to outline the essential surgical tips and tricks that need to be followed, in order to ensure a higher success rate of transplantation of this highly susceptible organ in a porcine 3-day survival model.

The video article summarizes the technique of pancreatectomy and pancreas allotransplantation in a porcine 3-day survival model with a step-by-step description of the method and emphasis on the surgical tips and tricks to deal with the precarious and delicate porcine visceral anatomy.