저자는 기증자의 가족과 전문가의 도움이 연구와 마리아 마티노와 이리나 Kusmartseva에 관련된 장기 조달 기관 감사드립니다. 이 작품은 당뇨병과 췌장 장기 기증자를위한 네트워크를 지원 소아 당뇨병 연구 재단 (MC-T., MA)에 의해 재정 지원되었다.

1. 설정 <ol><li> 연필로, 또는 자동으로 카세트 프린터 수동으로 파라핀 블록에 대한 라벨 카세트. 기증자 식별자 (CaseID), 샘플 종류, 나누어지는 번호 및 추가 고유 식별합니다 (사례 워크시트 등이 <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">부록 1</a> ). </li><li> 영구 마커와 카세트뿐 아니라 라벨 10월 금형. 알루미늄 호일의 5~10센티미터의 직사각형을 잘라 버릴거야. </li><li> 영구 마커 모든 튜브와 튜브와 라벨을 인쇄하거나 수동으로. 신선한 배송의 RPMI 매체와 다진 스냅 냉동 샘플 튜브에 대한 충분한 튜브를 포함합니다. RNAlater과 스냅 냉동 튜브은 각 cryovial 1 ML의 RNAlater를 추가합니다. </li><li> 멸균 절개 악기 (포셉, scalpels, 블레이드, 거즈 패드 (4x4))뿐만 아니라 카세트와 10월 금형과 biosafety 후드 및 카운터 상판의 설정 해부 보드 사용의 순서로 배열. </li><li> 넣어 냉동 목욕 준비건조 적어도 3cm의 깊이로 중간 크기 스티로폼 상자 (10x10 ㎝)에 얼음과 드라이 아이스가 완전히 덮여 때까지 이소펜탄를 추가합니다. </li><li> 옵션 : 액체 질소로 작은 Dewar 컨테이너를 채웁니다. </li><li> 췌장은 전자 현미경 (EM)을 위해 필요한 경우, 1.25 ML 16 % paraformaldehyde, 1.25 ML 8 % 글루 타 알데히드, 그리고 7.5 ML 0.1M PBS를 추가하여 TAAB의 정착액을 준비합니다. 7.5 ML 0.1M PBS에 2.5 ML 16 % paraformaldehyde를 추가하여 Lowicryl 정착액을 준비합니다. </li><li> 세포를 분리에 사용되는 솔루션을 준비합니다. 다음 사항을 추가하는 동안 DMEF 500 ML 병 (글루타민과)에, 무균 기술을 따르십시오 <ol><li> 태아 소 혈청 (FBS) : 추가 50mL, 최종 10 %. </li><li> 페니실린 / 스트렙토 마이신 (펜 / Strep, 10,000 U / ML / 10,000 UG / ML 주식) - 100 U / ML / 100ug/mL의 최종 농도를 위해 RPMI에 5 ML 펜 / Strep 주식을 추가합니다. 또한 림프절이나 비장 샘플을 들고 사용 DPBS의 500 ML 병에 5 ML을 추가합니다. </li></ol></li></ol> 2. 인원 <oL&gt; <li> 절차는 최적의 세 직원 그러나 절차가 하나의 잘 훈련 개별적으로 수행할 수로 수행됩니다. 두 개인은 일반적으로 90 분 이내에 절차를 완료할 수 있습니다. 실제 기간은받은 조직의 숫자에 의존하고 췌장 림프절을 찾는 용이성. 셀 isolations에 대한 샘플이 4 시에 개최됩니다 ° C까지 조직 해부 완료 혈청 샘플을 병렬로 처리하는 동안. </li><li> 병리학자, 병리 조교, 또는 이와 동등한-숙련된 직원들이 조직 취급을 선도하고 췌장의 머리 부문 (들)을 포함하고 췌장 림프절을 수확 주요 절개를 수행합니다. 초기 노력은 임파선에 대한 사망 시에 췌장의 지방 시험이어서 췌장쪽으로 이동합니다. </li><li> 실험실 기술자 또는 동급 - 직원 누구의 일차 책임 고정 및 냉동 블록과 스냅 냉동 V를위한 췌장과 지역 및 트림 조직의 무게를하는 것입니다 트리밍 조직 훈련ials. 병리학 조교에서 십이지장과 비장을 받고 병리의 비서가 췌장을 처리하는 동안 이러한 장기를 처리합니다. </li><li> 블록 및 유리병의 라벨, cryovials위한 닦지 샘플 및 혈청 처리를 포함하여 다른 사람을 도와 실험실 조교 - 직원. </li></ol> 3. 췌장의 해부 <ol><li> 십이지장과 비장을 제거하고 무딘와 날카로운 절개를 사용하는 관계없는 지방, 혈관, 그리고 신경의 췌장을 청소 </li><li> 종이 수건으로 덮여 해부 보드 청소 췌장 놓으십시오. 췌장의 앞부분은 표면에 파란색 잉크 및 확산에 솜 스쳐지나 작은 주걱을 찍어. 초과를 가릴. </li><li> 옵션 : 췌장의 후부 표면에 검정 잉크와 확산에 새로운 작은 주걱을 찍어. 앞부분은 표면이 시체 해부자 직면와 함께 정상적인 방향으로 췌장을 반환합니다. </li><li> 머리, 몸 및 꼬리 (그림 1) : 3 지역으로 췌장을 잘라요. hea의 경계인를 잘라d와 신체 그러면 몸과 꼬리를위한 ~ 동등한 부분으로 남아있는 부분을 나눕니다. </li><li> 췌장 및 기록 중량 (케이스 검사 결과 시트 (각 지역 체중 <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">부록 1</a> )). </li><li> 섹션 (~ 0.5 ㎝) 가로 &quot;빵 고기 &#39;방식 (그림 1)에서 췌장의 각 지역. </li><li> 다진 시료를위한 지역 간의 두 분기점에서 섹션을 사용합니다. 췌장의 크기에 따라 체형이 꼬리 접합 지역에서 샘플 파라핀 블록의 수를 얻을 수 췌장 머리 - 몸 지역에서 다진 시료 또는 유일한 샘플을 얻기 위해 감소시킬 수있는 경우에 얻기 어려울 수 있습니다. 머리 또는 교차점에서 근위 지역을 상징하는 신체로 따라 라벨 cryovials. <ol><li> 조각을 말하다 및 cryovials (유리병 당 ≥ 1g) 사이에 균등하게 나눕니다. 신속하게 액체 질소 또는 드라이 아이스의 RNALater없이 튜브를 고정 - 이소펜탄 슬러리 그러면 T를 전송OA -80 ° C의 냉동고. </li><li> 평균 수 있도록 30 분간 실온에서 RNALater와 튜브를 계속 빠르게 리믹스하고 나서 -80 ° C의 냉동고로 전송 액체 질소 또는 드라이 아이스 이소펜탄 슬러리의 동결. </li></ol></li><li> 파라핀과 파라핀 (그림 1)로 시작하는 10월 블록에 대한 교체 섹션을 제거합니다. </li><li> 오른쪽으로 가로 섹션을 기댈. </li><li> 장소 ~ 1.5 X 1.5 카세트에서 X 0.5 cm 섹션. 가로 부분이 너무 큰 경우, 반은 (그림 2B)로 잘라. &quot;B&quot;로 &quot;&quot;와 후부 반으로 푸른 앞부분 절반 라벨 카세트. </li><li> 조각 아직도 너무 큰 경우, 이전 컷 (그림 2C)로 각 섹션에 수직으로 잘라. 시계 방향 방식으로 라벨 카세트는 광고입니다. 이상과 같은 카세트 이내에 맞게 필요한 부분을 트림. </li><li> 대부분의 중간 섹션으로 시작하는 지역 내에서 순차적으로 번호 블록. </li><li> 파라핀 블록 위치에있다 c라벨이 너무 assettes는 방향을 유지, 카세트로 왼쪽과 장소 조직하는 것입니다. 닫기 카세트 뚜껑과 ~ 500 ML 10% 중립과 컨테이너로 전송 (NBF) 포르말린 버퍼. 마지막으로 카세트가 정착액에 배치되는 타이밍 고정을 시작합니다. </li><li> 10월 블록의 경우 prelabeled 금형에 10월 미디어의 얇은 레이어를 부어 후 오리 엔테이션을 유지하고 10월과 조직을 충당해야되는 금형의 조직을 바칩니다. ~ 1 분 이소펜탄 슬러리 - 급속 드라이 아이스에 10월 금형 젖어. 임시 저장을위한 드라이 아이스 또는 -80에서 슬러리 및 장소에서 제거 장기 저장을위한 ° C 냉동고. </li><li> 전자 현미경 (EM)의 헤드 바디 접합부에서 ~ 0.5 X 0.5 cm의 슬라이스를 구합니다. TAAB의 정착액 및 Lowicryl 정착액의 다른 슬라이스에서 개최 한 조각. 최소 48 시간 및 / 또는 무기한 EM에 대한 처리까지. 대해 4 ° C에서 샘플 고정력있는 두 가지 유형을 저장 </li></ol> 4. 비장, 림프 노드 Dissections 및 십이지장 점막 절개 <ol><li> 지방에서 췌장 림프절 (PLN)를 격리하고 노드 캡슐에 대한 모든 결합 조직을 잘라. DMEF를 포함하는 무균 세포 배양 접시에있는 장소. 격리 총 숫자에 따라, 신선한 출하량, cryopreserved 세포 isolations, 파라핀 및 / 또는 10월 블록 및 튜브에 대한 aliquots으로 PLN을 나눕니다. 0.5 cm보다 큰 조각으로 큰 노드를 말하다. </li><li> 소형 (~ 0.5 ㎝) 큐브에 비 췌장 림프절과 비장을 말하다. 시작하는 재료의 양을에 따라 신선한 샘플 출하 또는 cryopreserved 셀 isolations위한 정착액, 10 월 미디어, 혹은 DMEM의 장소. </li><li> 십이지장을 열고 부드럽게 moistened 거즈 패드와 점액의 십이지장 점막 깨끗하게 닦아냅니다. 와 함께 RNAlater없이 파라핀 및 / 또는 유리병을위한 냉동 10월 블록과 다진 샘플 점막 부분을 잘라 버릴거야. 다른 샘플로 정지해. </li></ol> 5. 사전 분류 알루미늄 호일과 장소 10월 블록과에서 랩 10월 블록<html> -80에서 장기간 저장 상자에 튜브 ° C. 6. 파라핀 처리에 고정 샘플 제출 <ol><li> 자동 파라핀 프로세서를 사용하거나 수동으로 타이밍을 사용 16시간을위한 조직 (범위 : 20 ± 4 시간) 이후의 수정 프로그램입니다. 자동 프로세서 (사용하는 파라핀 블록을 처리 <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix2.doc" target="_blank">부록 2</a> ). </li><li> 왼쪽으로 카세트 레이블 시체 해부자에 의해 배치로 정확한 방향으로 섹션을 포함시킵니다. submucosa에 점막 직각의 심사를 허용하도록 절단 표면과 십이지장 점막을 포함시킵니다. </li></ol> 7. 해부 영역을 청소하고 소독. 절개 악기를 씻고 다시 소독. 생명 의학 폐기물 등의 저장을 위해 포르말린 정착액에 남은 인간의 조직을 놓습니다. 1 개월 이내 현지 규정에 따라 생물 의학 폐기물을 폐기하십시오. 8. 샘플 인벤토리 시스템 업데이트 ve_title &quot;&gt; 9. 대표 결과 이 절차는 3 대 즉 지역, 머리, 몸, 2 시간 이내에 꼬리 경계를 포함하여 장기에 걸쳐 대표적인 샘플링과 함께 그대로 인간의 췌장을 처리합니다. 후부 머리 지역에서 발견 uncinate 지역은, 머리를 절개에 포함되어 있습니다. 당뇨병없이 장기 기증자의 평균 췌장 무게는 82.4 g (- 139.0 g 52.7)였다. 췌장 지역 가중치는 (그림 3)은 약 있었 읍니다. 이 절차는 또한 순차적인 파라핀과 10월 블록에서 스테인드 슬라이드를 사용하여 전체 췌장의 재건을 위해 허용할 수 있습니다. 복합 형식은 현재와 미래 기술의 최대 활용을 위해 허용 가능한 있습니다. 현재 nPOD 사례 워크시트가 (제공되는 <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">부록 1</a> 회복 샘플 및 후속 PROC을 문서화하는 데 사용됩니다)나누어지는 종류와 수량에 의해 essing. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4039/4039fig1.jpg" /> 1 그림. 해부 학적 방향을 유지하면서 절차의 전반적인 계획은. 전체 췌장이 처리됩니다. 머리 지방은 uncinate 지역을 포함 후부 지역의 복부 췌장 엽의 존재로 인해 우수한-열등 축에 더 깁니다. 분기점에서 부화 면적은 cryovials에 다진 샘플에 사용되는 영역을 나타냅니다. P, 파라핀, O, 10월 <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4039/4039fig2.jpg" /> 그림 2. 췌장 섹션을위한 문자 체계. 가로 췌장의 조각은 더욱 반쪽 또는 분기로 나누어 시계 방향 방식으로 글자 수 있습니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/4039/4039fig3.jpg" /> 그림 3. 당뇨병없이 장기 기증자의 췌장의 무게.성인 기증자 (&gt; 17 세)에서 그대로 췌장을 얻어 지역 및 지역의 중량으로 나눈 후 무게되었다. 데이터는 의미가 ± SEM (N = 15).

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	<li>Brissova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+human+pancreatic+islet+architecture+and+composition+by+laser+scanning+confocal+microscopy.">Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy.</a> J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).</li><li>Rahier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pancreatic+polypeptide+cells+in+the+human+pancreas:+the+effects+of+age+and+diabetes.">The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).</li><li>Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+reconstruction+of+the+ventral+and+dorsal+pancreas:+a+new+insight+into+anatomy+and+embryonic+development.">Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development.</a> J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).</li><li>Wittingen, J., Frey, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+concentration+in+the+head,+body,+tail+and+uncinate+process+of+the+pancreas.">Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas.</a> Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).</li><li>Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+composition+of+the+human+diabetic+pancreas.">Cellular composition of the human diabetic pancreas.</a> Diabetologia. 24, 366-371 (1983).</li><li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources.">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).</li><li>Gianani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+results+of+screening+of+nondiabetic+organ+donors+for+expression+of+islet+autoantibodies.">Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).</li><li>Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hy&#246;ty, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collecting+high-quality+pancreatic+tissue+for+experimental+study+from+organ+donors+with+signs+of+&#946;-cell+autoimmunity.">Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of &#946;-cell autoimmunity.</a> Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).</li><li>In't Veld, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+insulitis+in+adult+autoantibody-positive+organ+donors.">Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors.</a> Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).</li><li>T&#246;ns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+human+pancreata+in+perspective+of+the+isolation+of+the+islets+of+langerhans.">Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans.</a> Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).</li></ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

이 절차의 목적은 여러 컬렉션 사이트 전반에 걸쳐 조화가 될 수있는 표준 췌장 처리를 정의하고 있으므로 다른 그룹에 의해 얻은 결과의 비교를 허용하는 것입니다. 절개 방법은 내부 - 지역 제트 연료의 파이프 뒤에 주요 췌장 영역의 주석에 대한 추가 단계와 일반 외과 병리학 관행에 따라 달라집니다. biospecimen 처리 방법의 표준화와 같은 국립 암 연구소 6 등 국가 biobanking 기관 biospecime...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 22 블레이드와 scalpels 포함한 절개 악기 </td><td> 여러 </td><td> 여러 </td><td></td></tr><tr><td> 원심 분리기 튜브 (15 및 50 ML) </td><td> 피셔 과학 </td><td> 05-539-5, 430,828 </td><td> 불모의 </td></tr><tr><td> Cryotubes (1.8 ml) 쇼핑 </td><td> VWR 북미 </td><td> 89004-300 </td><td> 멸균, 바코드 선택 </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> 외과 병리학 잉크 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 카세트 </td><td> 메르세데스 의료 </td><td> CAS ECO109 </td><td></td></tr><tr><td> 일중립 0 % 포르말린 버퍼 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 23-245-685 </td><td></td></tr><tr><td> 10월 냉동 미디어 </td><td> TissueTek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> 금형 </td><td> ThermoScientific </td><td> 58,952 </td><td> 다양한 크기 </td></tr><tr><td> 이소펜탄 </td><td> 피셔 과학 </td><td> O3551-4 </td><td> 10월 추워서 목욕 </td></tr><tr><td> 드라이 아이스 </td><td></td><td></td><td> 10월 추워서 목욕 </td></tr><tr><td> Dewar 플라스크에 액체 질소 </td><td></td><td></td><td> 냉동 cryovials 낚아채 </td></tr><tr><td> 세포 배양 접시 (100mm) </td><td> 코닝 </td><td> 430,167 </td><td> 불모의 </td></tr><tr><td> Hyclone DMEF </td><td> ThermoScientific </td><td> SH30023.01 </td><td> 멸균 가게에 냉장, 글루타민 포함 </td></tr><tr> &lt;TD&gt; 태아 소 혈청 </td><td> Cellgro </td><td> 35-010 - 이력서 </td><td> 멸균, 냉동 저장 aliquots </td></tr><tr><td> 페니실린 / 스트렙토 마이신 / Antifungal </td><td> GIBCO </td><td> 15240-062 </td><td> 멸균, 냉동 저장 aliquots </td></tr><tr><td> 9 파라핀을 입력 </td><td> 리차드 - 앨런 과학 </td><td> 8337 </td><td></td></tr><tr><td> 1X D-PBS </td><td> GIBCO </td><td> 14190-144 </td><td> 불모의 </td></tr><tr><td> 16 % Paraformaldehyde </td><td> EM 과학 </td><td> 15,710 </td><td> 신선 저장소가 냉장하십시오 </td></tr><tr><td> 8 % 글루 타 알데히드 </td><td> EM 과학 </td><td> 16,019 </td><td> 신선 저장소가 냉장하십시오 </td></tr><tr><td> Biosafety 레벨 2 후드 </td><td> 여러 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 초저 냉동고 </td><td> 여러 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 사쿠라 카세트 프린터 </td><td> 사쿠라 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 사쿠라 VIP300 </td><td> 사쿠라 </td><td></td><td> 자동 파라핀 프로세서 </td></tr><tr><td> 파라핀의 임베딩 역 </td><td> ThermoFisher </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 표 1. 특정 시약 및 장비.

collection protocol for human pancreas

이러한 해부 및 샘플링 절차는 시체 같은 장기 기증자에게서 채취한 췌장의 준비을 표준화하기 위해 당뇨병 (nPOD) 프로그램과 췌장 장기 기증자에 대한 네트워크를 위해 개발되었습니다. 췌장은 가로 축에 중간에 걸쳐 일련 가로 섹션에 다음 세 주요 영역 (머리, 몸, 꼬리)으로 나누어져 있습니다. 번갈아 섹션 고정 파라핀 및 신선한 냉동 블록 및 잔여 샘플에 사용되는가 DNA, RNA 또는 단백질 분리를 위해 함께 또는 RNAse 억제제없이도 스냅 냉동 시료 준비에 대한 다진있다. 췌장의 해부 절차의 전반적인 목표는 해부 학적 방향을 유지하면서 전체 췌장을 맛볼 것입니다. 섬 조성, 크기와 숫자의 관점에서 내분비 세포 이질은 쥐 islets 1로 비교해 인간 islets에 대해보고됩니다. 췌장의 머리에서 인간 islets의 대부분은 몸과 꼬리 영역은 인슐린 containin으로 구성되어 있습니다g의 β-세포의 낮은 비율이어서 글루카곤 함유 α-세포 및 δ-세포를 somatostatin 함유합니다. 췌장 폴리펩티드 함유 PP 전지 및 ghrelin 함유 엡실론 세포도 존재하지만, 작은 숫자입니다. 반대로, uncinate 지역은 주로 췌장 폴리펩티드 함유 PP 전지 2로 구성되어있다 islets가 포함되어 있습니다. 이러한 지역 섬 변형은 발달의 차이에서 발생합니다. 췌장 foregut과 위장과 십이지장, 지느러미 3 복부 엽 이동 및 퓨즈의 회전 후 복부와 지느러미 췌장 꽃봉오리에서 개발하고 있습니다. 복부 기억 상실증이 지느러미 엽은 장기 나머지 상승을 제공하면서 uncinate 과정을 포함한 머리의 후부 부분을 형성하고 있습니다. 지역 췌장 편차도 꼬리 지역은 1 형 당뇨병에서 선택적 위축을받은 다른 지역과 지느러미 엽 - 파생 부품에 비해 더 높은 섬 밀도를 갖는으로보고됩니다 <s최대&gt; 4,5. 추가 장기와 조직은 종종 장기 기증자로부터 복구 및 췌장 림프절, 비장 및 비 췌장 림프절을 포함합니다. 이러한 샘플은 cryopreserved 세포 분리의 추가와 췌장에 대한 이와 유사한 형식으로 회복됩니다. 근위 십이지장은 췌장에 포함된 경우, 십이지장 점막은 파라핀 및 냉동 블록과 다진 스냅 냉동 준비를 위해 수집됩니다.

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Collection Protocol for Human Pancreas

이 비디오는 여러 스토리지 형식으로 인간의 췌장을 처리를위한 해부 절차를 보여줍니다. 해부 학적 방향이 지역의 섬 조성 및 밀도의 정의를 허용하도록 췌장 영역에 걸쳐 유지됩니다.

인간의 췌장을위한 컬렉션 프로토콜

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Research

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Medicine

14.7K 조회수.  University of Florida. 이 비디오는 여러 스토리지 형식으로 인간의 췌장을 처리를위한 해부 절차를 보여줍니다. 해부 학적 방향이 지역의 섬 조성 및 밀도의 정의를 허용하도록 췌장 영역에 걸쳐 유지됩니다.

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Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected cells can be used for a variety of investigations, such as transcriptomic or proteomic studies, DNA assessment or chromosomal analysis 2,3. An especially challenging application of LMD is transcriptome analysis, which, due to the lability of RNA 4, can be particularly prominent when cells are dissected from tissues that are rich of RNases, such as the pancreas. A microdissection protocol that enables fast identification and collection of target cells is essential in this setting in order to shorten the tissue handling time and, consequently, to ensure RNA preservation. 
Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic beta cells from surgical specimens to be used for transcriptomic studies 5. Small pieces of pancreas of about 0.5-1 cm3 were cut from the healthy appearing margins of resected pancreas specimens, embedded in Tissue-Tek O.C.T. Compound, immediately frozen in chilled 2-Methylbutane, and stored at -80 &deg;C until sectioning. Forty serial sections of 10 &mu;m thickness were cut on a cryostat under a -20 &deg;C setting, transferred individually to glass slides, dried inside the cryostat for 1-2 min, and stored at -80 &deg;C. 
Immediately before the laser microdissection procedure, sections were fixed in ice cold, freshly prepared 70% ethanol for 30 sec, washed by 5-6 dips in ice cold DEPC-treated water, and dehydrated by two one-minute incubations in ice cold 100% ethanol followed by xylene (which is used for tissue dehydration) for 4 min; tissue sections were then air-dried afterwards for 3-5 min. Importantly, all steps, except the incubation in xylene, were performed using ice-cold reagents - a modification over a previously described protocol 6. utilization of ice cold reagents resulted in a pronounced increase of the intrinsic autofluorescence of beta cells, and facilitated their recognition. For microdissection, four sections were dehydrated each time: two were placed into a foil-wrapped 50 ml tube, to protect the tissue from moisture and bleaching; the remaining two were immediately microdissected. This procedure was performed using a PALM MicroBeam instrument (Zeiss) employing the Auto Laser Pressure Catapulting (AutoLPC) mode. The completion of beta cell/islet dissection from four cryosections required no longer than 40-60 min. Cells were collected into one AdhesiveCap and lysed with 10 &mu;l lysis buffer. Each single RNA specimen for transcriptomic analysis was obtained by combining 10 cell microdissected samples, followed by RNA extraction using the Pico Pure RNA Isolation Kit (Arcturus). This protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their rapid and accurate recognition and collection. Further improvement of this procedure could enable the dissection of phenotypically different beta cells, with possible implications for better understanding the changes associated with type 2 diabetes.

Laser microdissection is a technique that allows the recovery of selected cells from minute amounts of parenchyma. Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic islets from surgical specimens to be used for transcriptomic studies. Our protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their collection.

수술 표본에서 인간 췌장 섬의 레이저 Microdissection을위한 개선 된 프로토콜

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

연구

의학

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

컬렉션, 격리, 인간 자궁 경부 샘플의 유세포 분석

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the patients are unaware of such disorders or are having difficulty expressing their symptoms. Until now, several devices for perspiration monitoring have been developed; however, such devices tend to have a relatively large exterior, considerable power consumption, and/or less sensitivity.
Recently, we developed a small, wireless device for perspiration monitoring. The device consists of a temperature/relative humidity (T/RH) sensor, battery-driven small data logger, and silica gel as a desiccant in a small cylindrical exterior. The T/RH sensor is placed between the detection windows (through which the water vapor from the skin enters) and the silica gel. The underlying principle of the perspiration monitoring device is based on Fick&#39;s law of diffusion, which means that water vapor flux from the skin to the silica gel (i.e.&#160;transepidermal water loss and perspiration) can be captured by change in humidity at the T/RH sensor. In addition, a baseline subtraction method was adopted to distinguish perspiration and transepidermal water loss.
As shown in the previous report, the developed device can monitor the perspiration at any sites of the body in an easy, wireless manner. However, detailed methods of how to use the device have not been disclosed yet. In this article, therefore, we would like to show the point-by-point tutorials of how to use the device for perspiration monitoring, by showing the sympathetic activity test with the sympathetic skin response monitoring as an example.

Recently, we developed a small wireless device for perspiration monitoring. In this article, we present detailed protocols on how to use the device for perspiration monitoring with an example of the sympathetic activity test.

소설을 사용하여 땀 모니터링에 대한 자세한 프로토콜, 소형, 무선 장치

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

췌 장 이식 수정된 팔목 기술을 사용 하 여 마우스 모델

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at the 12 codon (Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+) mouse strain as a model of human pancreatic cancer. The goal of our current studies is to identify novel metabolic biomarkers of pancreatic cancer progression. We have performed metabolic profiling of urine, feces, blood, and pancreas tissue extracts, as well as histological analyses of the pancreas to stage the cancer progression. The mouse pancreas is not a well-defined solid organ like in humans, but rather is a diffusely distributed soft tissue that is not easily identified by individuals unfamiliar with mouse internal anatomy or by individuals that have little or no experience performing mouse organ dissections. The purpose of this article is to provide a detailed step-wise visual demonstration to guide novices in the removal of the mouse pancreas by dissection. This article should be especially valuable to students and investigators new to research that requires harvesting of the mouse pancreas by dissection for metabolic profiling or histological analyses.

This video article provides a detailed demonstration of the procedures required to successfully remove the pancreas from a mouse by dissection for histological analysis and metabolic profiling.

조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 마우스 췌의 해 부

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Robotic Lateral Pancreaticojejunostomy for Chronic Pancreatitis

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The recent rise of robotic and laparoscopic pancreatic surgery has found benefits such as reduced time to functional recovery. Few studies have reported on the feasibility, technique and outcome of robotic LPJ, especially including transection of the gastroduodenal artery. The present study describes the main steps for robotic LPJ in a patient with painful chronic pancreatitis with a dilated main pancreatic duct. The patient underwent robotic LPJ. The LPJ anastomosis is performed using a running suture technique in a longitudinal side-to-side manner. Routinely, the gastroduodenal artery is transected to drain the entire length of the main pancreatic duct. The patient is in French position; 7 trocars are placed (4 robotic, 2 laparoscopic assistants, 1 liver-retractor). After docking of the robot system, the omental bursa is opened, and the right gastroepiploic artery and vein are ligated at their base at the lower border of the pancreas. Intraoperative ultrasonography is performed in order to determine trajectory of the dilated main pancreatic duct which is opened for its entire length after the gastroduodenal artery has been suture ligated both cranially and caudally from the main pancreatic duct. A Roux limb is created, and a latero-lateral PJ is fashioned using several 3-0 barbed sutures. A stapled jejuno-jejunostomy is created at sufficient distance from the pancreatic anastomosis, aided by a 50 cm suture. The described technique for robotic LPJ is a complex but feasible operation for patients with treatment refractory CP and a dilated main pancreatic duct. Due to its complexity, implementation in high volume centers with extensive experience with CP surgery may improve outcomes.

Robotic lateral pancreaticojejunostomy (RLPJ) may be used in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis and a dilated main pancreatic duct. We describe a standardized and reproducible technique for RLPJ, which includes transection of the gastroduodenal artery.

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed in the supine Trendelenburg position. Kidney allografts are provided by a living donor. Before vascular anastomosis, the kidney allograft is prepared by inserting a double-J stent in the ureter, and the temperature for the anastomosis is lowered by wrapping it in an ice-packed gauze. A 12 mm or 8 mm port for the robotic camera and three 8 mm ports for robotic arms are placed. A peritoneal pouch is created for the kidney allograft by raising the peritoneal flaps on both sides over the psoas muscle before dissecting the iliac vessels and bladder. A 6 cm Pfannenstiel incision is made to insert the kidney into the peritoneal pouch, lateral to the right iliac vessels. 
After clamping the external iliac vein with Bulldogs clamps, a venotomy is performed, and the graft renal vein is anastomosed to the external iliac vein in an end-to-side continuous manner with a 6/0 polytetrafluoroethylene suture. After clamping the graft renal vein, the iliac vein is declamped. This is followed by clamping of the external iliac artery, arteriotomy, arterial anastomosis with a 6/0 polytetrafluoroethylene suture, clamping of the graft renal artery, and declamping of the external iliac artery. Reperfusion is then carried out, and ureteroneocystostomy is performed using the Lich-Gregoir technique. The peritoneum is closed at a few locations with polymer locking clips, and a closed-suction drain is placed through one of the working ports. After deflating the pneumoperitoneum, all incisions are closed.

This paper provides technical details for robot-assisted kidney transplantation from a living donor.

로봇 보조 신장 이식

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...

Collection, Expansion, and Differentiation of Primary Human Nasal Epithelial Cell Models for Quantification of Cilia Beat Frequency

Measurements of cilia function (beat frequency, pattern) have been established as diagnostic tools for respiratory diseases such as primary ciliary dyskinesia. However, the wider application of these techniques is limited by the extreme susceptibility of ciliary function to changes in environmental factors e.g., temperature, humidity, and pH. In the airway of patients with Cystic Fibrosis (CF), mucus accumulation impedes cilia beating. Cilia function has been investigated in primary airway cell models as an indicator of CF Transmembrane conductance Regulator (CFTR) channel activity. However, considerable patient-to-patient variability in cilia beating frequency has been found in response to CFTR-modulating drugs, even for patients with the same CFTR mutations. Furthermore, the impact of dysfunctional CFTR-regulated chloride secretion on ciliary function is poorly understood. There is currently no comprehensive protocol demonstrating sample preparation of in vitro airway models, image acquisition, and analysis of Cilia Beat Frequency (CBF). Standardized culture conditions and image acquisition performed in an environmentally controlled condition would enable consistent, reproducible quantification of CBF between individuals and in response to CFTR-modulating drugs. This protocol describes the quantification of CBF in three different airway epithelial cell model systems: 1) native epithelial sheets, 2) air-liquid interface models imaged on permeable support inserts, and 3) extracellular matrix-embedded three-dimensional organoids. The latter two replicate in vivo lung physiology, with beating cilia and production of mucus. The ciliary function is captured using a high-speed video camera in an environment-controlled chamber. Custom-built scripts are used for the analysis of CBF. Translation of CBF measurements to the clinic is envisioned to be an important clinical tool for predicting response to CFTR-modulating drugs on a per-patient basis.

This protocol describes nasal epithelial cell collection, expansion, and differentiation to organotypic airway epithelial cell models and quantification of cilia beat frequency via live-cell imaging and custom-built scripts.

섬모 박동 빈도의 정량화를 위한 1차 인간 비강 상피 세포 모델의 수집, 확장 및 분화

Measurements of cilia function (beat frequency, pattern) have been established as diagnostic tools for respiratory diseases such as primary ciliary ...

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ shortages and increasing numbers of patients being listed for PTx, new strategies are needed to increase the number of available grafts for transplantation. 
Static cold storage (SCS) is considered the gold standard for standard criteria organs. However, standard criteria donors (SCD) are becoming scarce and new strategies that can increase the rate of organ acceptance from extended criteria donors (ECD) are urgently needed. 
Normothermic ex vivo perfusion (NEVP) is one of the strategies that has become increasingly popular over the past couple of decades. This preservation method has already been used successfully in other organs (liver, kidneys, and lungs) but has been minimally explored in pancreas transplantation. The few papers that describe the method for pancreas show little success, edema being one of the major issues. The following manuscript describes the successful NEVP method and setup developed by our group to perfuse swine pancreas.

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Normothermic ex vivo machine perfusion (NEVP) has scarcely been explored for the preservation of pancreas allografts. We present an innovative preservation technique for pancreas allografts before transplantation.

이식 전 췌장 동종이식의 보존을 위한 Normothermic Ex Vivo 췌장 관류

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ ...

Surgical Tips and Tricks for Performing Porcine Pancreas Transplantation

Despite the promising results of pancreas transplantation in type 1 diabetes mellitus and metabolic syndrome, the biggest concern around this state-of-the-art technique remains the paucity of organs deemed fit for transplantation. High intravascular resistance, delicate intraparenchymal capillary framework, and complex lobular anatomy around the mesenteric vasculature are what make this organ more susceptible to injury and less tolerant to trivial trauma compared to organs such as the liver and kidney. Meticulous surgical dissection and judicious tissue handling form the cornerstone of the entire exercise of pancreas transplantation. Owing to morphological similarity between the anatomy of the porcine pancreas to the surrounding mesenteric vessels and the organs when compared to the human anatomy, demonstration of the technique in the porcine model could help to most accurately extrapolate this to a human setting. The present article aims to outline the essential surgical tips and tricks that need to be followed, in order to ensure a higher success rate of transplantation of this highly susceptible organ in a porcine 3-day survival model.

The video article summarizes the technique of pancreatectomy and pancreas allotransplantation in a porcine 3-day survival model with a step-by-step description of the method and emphasis on the surgical tips and tricks to deal with the precarious and delicate porcine visceral anatomy.