أخذ عينات الدم المتكررة من الوريد تحت الترقوة للفأر الواعي

في دراسات الحرائك الدوائية والحركية السمية ، نحتاج إلى جمع كمية معينة من الدم في نقاط زمنية محددة في الفئران للكشف عن التعرض للأدوية. تصف هذه الدراسة طريقة بسيطة وفعالة لجمع الدم من الوريد تحت الترقوة في الفئران في هذا البروتوكول. تتيح هذه التقنية أخذ عينات متكررة وفي الوقت المناسب ويمكن التعرف عليها بسهولة دون تخدير ، والحصول على دم عالي الجودة من خلال جمع العينات المتكررة.

يجب أن تعرف تشريح الوريد تحت الترقوة ، وضبط النفس الفئران قادرة ونقطة الإبرة. الطريقة محفوفة بالمخاطر ، وتتطلب محترفا مؤهلا. للبدء ، ابحث عن أدنى نقطة في الحفرة المثلثة تحت الترقوة بين الرقبة والطرف الأمامي في الفئران.

حرك ما يقرب من مليمترين إلى ثلاثة ملليمترات باتجاه الرأس والوصول إلى نقطة الإبرة في موقع جمع الدم. قم بإزالة الشعر باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. للحفاظ على رأس الجرذ ورقبته وثديه في وضع مستقيم ، أمسك الجلد الموجود على مؤخرة الرقبة بيد واحدة وفضح موقع الحقن.

قم بتصويب الطرف الأمامي على جانب موقع الحقن للحفاظ على مستواه. حافظ على المحقنة موازية لرأس الجرذ باليد الأخرى وقم بإمالة المحقنة للخارج من خمس إلى 10 درجات ، بحيث يميل الطرف نحو الاتجاه البطني. أدخل الإبرة بالكامل في التجويف الأمامي.

اسحب المحقنة للحفاظ على الضغط السلبي مع الأنبوب. حرك الإبرة ببطء من العمق إلى الضحلة وقم بعمل نسخة احتياطية من نفس المسار. عندما يدخل الدم إبرة المحقنة ، حدد موضع الإبرة.

اعتمادا على وزن وصحة الفئران ، راقب الحد الأقصى لكمية الدم التي سيتم سحبها وفقا للمعايير التي وضعتها لجنة رعاية واستخدام الحيوانات في المؤسسة. في حالة عدم وجود متطلبات أخرى ، لا تقم بإزالة أكثر من 20 ٪ من إجمالي حجم الدم للحيوان في غضون 24 ساعة. عندما يتم جمع عينة دم كافية ، اسحب المحقنة على الفور ، واستعد لعلاج الدم.

اضغط على موقع حقن الفئران لمدة دقيقة إلى دقيقتين لوقف النزيف. نظرا لأن موقع التجميع يقع في الجزء السفلي من الرقبة ، قم بقرص جلد الوريد تحت الترقوة لوقف النزيف بالضغط عليه. أخرج الإبرة من المحقنة ، وتخلص منها في حاوية الأدوات الحادة.

نقل الدم ببطء من المحقنة إلى أنبوب 1.5 ملليلتر. اضغط على المحقنة على الحائط لتجنب تكوين الفقاعات. أغلق غطاء أنبوب الطرد المركزي الدقيق وانقر فوقه برفق.

امزج الدم مع مضاد التخثر جيدا عن طريق قلبه رأسا على عقب خمس مرات على الأقل. في غضون 120 دقيقة بعد جمع البلازما ، قم بالطرد المركزي لعينة الدم الكاملة عند 2،000 RCF لمدة 10 إلى 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. استخدم مسدس ماصة لنقل البلازما العلوية إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد.

لا تلمس رأس الماصة بالدم الكامل السفلي. تخلص من البلازما الملوثة بخلايا الدم الحمراء أو أعد تنظيفها. كانت عينات البلازما التي تم جمعها بدقة من الوريد تحت الترقوة صفراء شاحبة شفافة.

أدى جمع الدم غير السليم أو التلاعب به إلى انحلال الدم. خلال العينة الأولى ، كان وزن جسم الحيوان الذكر بين 268 إلى 297 جراما ، وحوالي 214 إلى 239 جراما للإناث. خلال العينة الأخيرة ، كان وزن جسم الحيوان الذكر بين 376 إلى 462 جراما ، وحوالي 254 إلى 300 جرام للإناث.

كانت هناك فجوة مدتها 28 يوما بين جمع الدم السمي الحركي. زاد وزن جسم الحيوان بشكل مطرد كل أسبوع ، وكانت الملاحظة السريرية طبيعية. يمكن أن تضمن طريقة وزاوية إدخال الإبرة الدقيقة جمع الدم بسلاسة وتجنب المخاطر.

تتطلب هذه العملية ممارسة متكررة.