زرع الكلى في الفئران ضروري لدراسة آليات رفض اللوغراف الحاد والمزمن. هنا نقدم تقنية جراحية جديدة لمفاغرة الأوعية الدموية وزرع الحالب في نموذج زرع الكلى البطنية في الفئران. في نماذج زراعة الكلى التقليدية للفئران، يتم ربط الجزء العلوي من الشريان الأورطي تقريبا بالشرايين الكلوية.
يتم نقل الوريد الكلوي الأيسر للمتبرع عند الوريد الأجوف ويتم تقسيم الشريان الأورطي المتبرع بالتساوي أسفل الشريان الكلوي ليكون لاحقا مفاغرة إلى الشريان الأورطي البطني للمتلقي. في هذه التقنية المعدلة لزرع كلى الفأر ، يتم أيضا نقل الوريد الكلوي الأيسر للمتبرع في الوريد الأجوف ، ولكن يتم قطع الشريان الأورطي المتبرع فوق نسل الشريان الكلوي ومفاغرته إلى الشريان الأورطي البطني المتلقي. في حين يتم ربط نهاية الشريان الأورطي المانحة ، يتم الحفاظ على الشريان الحالبي عمدا.
الآن نبدأ عرض الإجراء الجراحي. للتخدير ، ضع الماوس في الصندوق لاستنشاق الأيزوفلوران حوالي 40 إلى 60 ثانية من أجل الحث على فقدان الوعي. بمجرد تخدير الماوس ، قم بوزن الماوس.
وفقا لوزن الفأر ، يتم إعطاء الحقن داخل الصفاق من الكيتامين ، زيلازين ، الأسيبرومازين للفأر المخدر. عندما يصبح التخدير ساري المفعول ، قم بقص فرو البطن. ثم قم بإصلاح الماوس وتطهيره على جدول العمليات.
قطع الجلد باستخدام شق البطن المتقاطع. قطع عضلات جدار البطن. بعد ذلك ، قم بتغطية الأحشاء بحذر بعيدا بشاش ملحي مشرب.
كشف الكلى اليسرى والشريان الأورطي والوريد الأجوف السفلي. قم بكي الأوردة القطنية اليسرى ، بما في ذلك فروعها الأساسية والأوعية الصغيرة الأخرى بما في ذلك الأوعية الكظرية اليسرى بعناية. تعبئة المنطقة الأبهرية بين الشرايين الكلوية اليسرى واليمنى حوالي مليمترين في الطول.
افصل الوريد الأجوف السفلي الرقيق والشريان الأورطي. وتمرير ملقط منحني تحت الشريان الأورطي لوضع ربطة عنق فضفاضة من خياطة 7.06 حول هذا الوعاء. عبر المشبك منطقة الشريان الأورطي أسفل الشريان الكلوي الأيمن والوريد الأجوف السفلي باستخدام اثنين من المشابك الوعائية الدقيقة خمسة ملليمتر.
انقل الوريد الكلوي الأيسر من الوريد الأجوف. اغسل الشريان الأورطي بملليلتر واحد من محلول الهيبارين. شد الرباط وقطع الشريان الأورطي أسفل الرباط وكذلك تحت المشبك القريب.
تحضير بعناية ، بحيث يتم الحفاظ على الشريان الحالبي الحساس تماما. حرر الكلى اليسرى والأوعية المرتبطة بها تماما عن طريق كي جميع الأوعية المحيطة بالأنسجة بحذر. إزالة الكلى وتخزينها في محلول خط الخلية في أربع درجات.
تشبه خطوات العملية الأولية تلك الموضحة سابقا للفأر المتبرع ، بما في ذلك التخدير والتطهير. افتح البطن عن طريق شق متوسط ، ثم قم بتغطية أعضاء البطن بشاش رطب باستخدام محلول ملحي. حافظ بعناية على الشريان الأورطي اللعابي وتأكد من كي كل فرع من فروع الأوعية الكبيرة.
استخدم الكي الكهربائي لتشريح الحالب الأيسر بعناية في وضع قريب من حوض الكلى. ثم، قم بإزالة الكلى اليسرى. كشف الوريد الأجوف السفلي والشريان الأورطي البطني وفصلهما عن الأنسجة الدهنية المحيطة التي يزيد طولها عن أربعة ملليمترات تقريبا.
ثم عبر المشبك مع اثنين من المشابك الأوعية الدموية الدقيقة تقريبا وبعيدا عنهم. استخدم حامل إبرة صغير لتوجيه إبرة خياطة أحادية الخيوط 10/0 ، والتي يتم وضعها عبر جدار الشريان الأورطي من الطريقة القريبة إلى البعيدة. يتم تحقيق بضع الشرايين البيضاوي بمقدار ملليمتر واحد تقريبا عن طريق الجر التصاعدي اللطيف للخياطة ، مع القطع مباشرة أسفل الوجه السفلي للإبرة باستخدام مقص منحني دقيق.
إجراء مفاغرة الشريان الأورطي بين المتبرع والمتلقي بطريقة شاملة. غرز الأطراف القريبة والبعيدة من المفاغرة. الغرزة الأخيرة باستخدام اثنين من الغرز 10.0 منفصلة.
بعد الربط ، اترك الغرز الطويلة ، بما في ذلك الإبرة ، في مكانها. خياطة الجانب الأيسر من الجدار الأبهري للمفاغرة باستمرار مع اثنين من الغرز متباعدة بالتساوي في اتجاه بعيد قريب. بعد الغرزة الأخيرة ، قم بتوجيه الخيط من خلال سمك جزئي لجدار الوعاء فوق ربطة الخياطة العلوية ومارس في نفس الوقت الجر اللطيف إلى الطرف القصير من ربطة الخياطة السفلية.
لاحظ ، في هذه التقنية الجديدة بدون عقدة ، لا ترتبط الغرزة الأخيرة بالطرف القصير من ربطة العنق العلوية. اقلب الكلى المزروعة إلى وضعها الطبيعي. الآن خياطة باستمرار الجدار الأيمن من مفاغرة الأبهر بطريقة قريبة إلى بعيدة باستخدام ثلاث غرز بطريقة قريبة إلى بعيدة.
لاحظ ، مقارنة بالتقنية الجراحية التقليدية ، يتم دمج الخيط الأخير مع ربطة العنق البعيدة القريبة. لا تربطه بنهاية الخيط السفلي ، بل اقطعه ليترك طولا حرا يتراوح من حوالي 2 إلى 3 ملليمترات بدلا من ذلك. قطع الوريد الأجوف السفلي طولي بطول كاف يبلغ حوالي 1.5 ملم.
ضع هذا الشق أقل قليلا من نظيره الأبهري. قم بإجراء المفاغرة الوريدية باستخدام نفس إجراء الخياطة كما هو موضح سابقا مع اختلاف الحاجة إلى أربع إلى خمس غرز لكل جانب من جوانب المفاغرة. يتم ترك الغرزة النهائية كنهاية حرة بطول مماثل لمفاغرة الأبهر الموصوفة أعلاه.
وتقنية المفاغرة الجديدة بدون عقدة ، لا يتم ربط الغرزة الأخيرة ولكن تركها حرة. هذا يقصر وقت العملية ويسمح للجراح بزيادة أو تقليل حجم المفاغرة. هذا التحسن يقلل من صعوبة ومضاعفات ما بعد العملية من مفاغرة الأوعية الدموية.
بعد الانتهاء من كل من المفاغرة ، استخدم مسحة جافة لممارسة ضغط لطيف نحو المنطقة المخيطة لمدة 10 إلى 20 ثانية. بعد ذلك ، يمكن إزالة كلا المشابك. اخترق مثانة بول المتلقي باستخدام إبرة مستقيمة مع خياطة 10.0 وأدخلها في تجويف إبرة 21 G للإرشاد.
الآن قم بتوجيه إبرة 21 G لخياطة ثقب في مكان تطبيق الإبرة السابق وسحب الإبرة. قم بخياطة نهاية الحالب المشذبة وثقبت المثانة باستخدام هذه الخياطة 10.0 مرة أخرى في مكان دخولها. اسحب خيوط 10.0 والحالب إلى المثانة البولية من خلال الثقب المبني.
مفاغرة الحالب المتبرع إلى المثانة البول المتلقي. هنا ، قم بتوصيل الغشاء الخارجي للحالب بالغشاء الخارجي لجدار المثانة وإجراء خيوط متقطعة بثلاث إلى أربع غرز. اسحب خياطة الجر.
ضع الأمعاء مرة أخرى في تجويف البطن. إجراء خيوط من طبقتين ، أولا عضلات البطن تليها الجلد لإغلاق جرح البطن. ضع الفئران المزروعة في غرفة الأكسجين والتحكم في درجة الحرارة للتعافي بعد الجراحة.
إعطاء مسكن كاف بعد العملية الجراحية بعد أربعة أيام متتالية من العملية. إجراء استئصال الكلية المعاكس للفأر المتلقي بعد خمسة أيام من تخدير الزرع. رفع وتسجيل حالة الماوس.
قارنا تقنيات الزرع التقليدية والمعدلة من خلال تقييم التغيرات النسيجية للكلى المتساوية الطعم المزروعة مقابل الكلى المعاكسة الأصلية المتلقية. لم يتم العثور على كل من درجة كأس الأنابيب الكلوية والتليف الخلالي الكلوي مختلفة اختلافا كبيرا بعد أربعة أسابيع و 12 أسبوعا من الزرع على التوالي. لقد حققنا سابقا في نتائج هذه التقنية الجديدة الخالية من العقد وقارناها بالنهج الكلاسيكي من حيث الجوانب التقنية للمضاعفات العملية الجراحية وما بعد الجراحة.
ارتبطت التقنية المعدلة الموضحة هنا بانخفاض حدوث أحداث الجلطات الوريدية الشريانية داخل التطعيم. كان الوقت اللازم لإجراء التضيق أقل بكثير وتم تحقيق متساوي الطعم الممتاز للكلى ، والبقاء على قيد الحياة على المدى الطويل. زرع الكلى في الفئران هو إجراء معقد ومتطور.
هذه تقنية جراحية جديدة لمفاغرة الأوعية الدموية وزرع الكلى ملتزمة بتحسين معدل النجاح الكلي ، مما يجعلها أداة موثوقة لدراسة استجابة المناعة الذاتية بعد زرع الكلى.
