وأيده هذا العمل جزئيا أرقام المنح JSPS كاكينهي 24700349، 24659093، 25293239، JP18H02536، و 17 ك 07086، أرقام المنح يأمرون كاكينهي 25110737 و 23110525، JP18ek0109311 عدد المنح أوسطي، ومؤسسة البحوث الطبية سينشين واليابان مؤسسة أبحاث الصرع.

وافق جميع الإجراءات التجريبية بالعناية بالحيوان واستخدام اللجنة لطوكيو متروبوليتان معهد العلوم الطبية. بعد الولادة 8-ينصح الفئران عمرها 16 أسبوع. أي سلالة فطري مقبول للتجربة. الفئران C57BL/6 أكثر قدرة على مقاومة بتز، بينما الفئران ألبينو بالب/ج والسويسرية أكثر حساسية بتز. واستخدمت في هذه الدراسة C57BL/6. مشكلة عدم الحصانة بتز يعتمد أيضا على سن الماوس. بالمقارنة مع الفئران الأصغر سنا، الفئران الأكبر سنا أكثر مقاومة للحرارة إلى بتز35. يمكن أن يختلف عدد الحيوانات المستخدمة لهذا الأسلوب، ولكن مالا يقل عن 6-10 الحيوانات المطلوبة لكل حالة.
1-إعداد بتز
<ol><li>حل 2 مغ/مل بتز العقيمة 0.9% (w/v) كلوريد الصوديوم. إعداد بتز اليوم من الاستخدام.</li>
</ol>2-حقن بتز
<ol><li>القيام بتجارب جميع بين 09:00 ص و 12:00 م (ظهرا).</li>
	<li>قياس وزن الجسم للحيوان.</li>
	<li>وضع الحيوان في دائرة مراقبة التعود.</li>
	<li>وخلال فترة التعود (3 دقائق)، حساب حجم الحل بتز لحقن استناداً إلى وزن جسم الحيوان وجرعة حقن سبق تحديدها. ملاحظة: على سبيل المثال، عند استخدام 35 مغ/كغ بتز، مغ 0.875 من بتز مطلوب لماوس يزن 25 جرام (35 مغ/كغ × 0.025 كغ = 0.875 mg). ولذلك ينبغي أن يكون حقن ميكروليتر 437.5 حل بتز 2 مغ/مل (0.875 مغ/2 مغ/مل = 0.4375 مل). حقن جرعة بتز يعتمد على الماوس النمط الوراثي والسلالة. للفئران البرية من نوع C57BL/6، يوصي بجرعة 30-35 ملغ بتز/كغ من وزن الجسم في المحاكمة الأولى. حساسية بتز يعتمد على الماوس الضغط المستخدمة36،37. أن حقن جرعة يختلف باختلاف غرض التجربة.</li>
	<li>حقن بتز إينترابيريتونيلي بحقنه 1 مل المرفقة بإبرة قياس 27 في الربع الأيمن أو الأيسر من البطن للحيوان. تجنب الحقن في خط الوسط.<ol>
<li>تجنب تكرار الحقن في نفس الموضع.</li>
	</ol>
</li>
	<li>مراقبة سلوك الحيوانات لمدة 30 دقيقة بعد الإدارة بتز (الشكل 1A)، وتصنيف ونقاط السلوك الشاذ كما هو موضح أدناه. إذا كان ذلك ممكناً، الاحتفاظ بالحيوانات تحت الملاحظة 24 ساعة، أو على الأقل إضافية 6-10 ح بعد حقنه، خاصة عندما يصل إلى درجة خطورة مصادرة 3 أو أعلى.<ol>
<li>ملاحظة أي مضبوطات معتدل أو التغيرات السلوكية في الحيوانات بعد فترة 30 دقيقة الملاحظة. وهذا لفترة طويلة المراقبة قد تناول الفترة تأثير أهمية خاصة وكاملة من جرعة سوبكونفولسيفي من بتز الجيل من المضبوطات دون سابق استفزاز المزمن في الصرع.</li>
		<li>وباﻹضافة إلى ذلك، قياس مدة الاستيلاء على كل مصادرة الملاحظة كالتغييرات في مدة الاستيلاء تتصل بشدة الاستيلاء. وعلاوة على ذلك، زمن الوصول إلى مصادرة الأولى بعد حقن بتز تدبيرا هاما آخر لجمع. رصد تواتر الاستيلاء، والمدة، والكمون أمر حاسم لأي دراسات ما بعد الاستيلاء الجزيئية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>حقن بتز كل يوم (الشكل 1A). عدد الحقن يعتمد على هدف التجربة. فيما يلي الأمثلة التمثيلية.<ol>
<li>لتوليد الحيوانات اوقدت تماما، وبمجرد تجارب حيوان من الاستيلاء على النقطة 5 (منشط رمعي الاستيلاء)، الانتهاء من الحقن داخل الإدارات الثلاث الإضافية. وفي هذه الحالة، زيادة جرعة الحقن إذا لم زيادة درجة الاستيلاء لثلاث حكومات متتالية. يمكن أن يتلقى كل الحيوانات رقم مختلف وجرعة من حقن بتز.</li>
		<li>تحديد عدد وجرعة من حقن بتز في كل حالة لتقييم تعرض بتز، بما في ذلك تقييمات للأدوية المضادة الصرع ودراسات للنمط الظاهري للفئران المعدلة وراثيا. تعطي جميع الحيوانات بنفس عدد الحقن بتز؛ ويوصي بمجموعة من 8 إلى 12 الحقن. إذا مات حيوان، ينبغي الإشارة إلى نقاط الاستيلاء ك 6.</li>
		<li>تحديد جرعة الحقن اللازمة للحفاظ على ضبط ارتفاع نقاط (4 أو 5) لحقن 10 أو أكثر دراسة التغيرات التشريحية المرضية التي تحدث نوبات الصرع. في هذه الحالة، عدد الحقن الإجمالي يجب أن تتراوح من 25 إلى 30. إنقاص جرعة الحقن إذا كان الاستيلاء على نقاط يصل إلى 5. إذا انخفضت درجة الاستيلاء على 3 أو أقل، زيادة جرعة الحقن.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3-الاستيلاء على نقاط
<ol><li>مراقبة في سلوك الحيوانات وتسجيل النقاط.<ol>
<li>تصنيف وتسجيل السلوكيات الصرع كالتالي38،39 (الشكل 1B): 0: السلوك العادي، لا شذوذ. 1: التثبيت، الكذب في البطن. 2: رأس التقلصات الإيماء أو الوجه أو فوريليمب أو اللكتات. 3: الهزات المستمرة التقلصات كامل الجسم، رمعيه، عقد ذيل تصنع. 4: الضبط تربية، منشط، تسقط على جانبها. 5: منشط رمعي الاستيلاء، تسقط على ظهرها، البرية التسرع والقفز. 6: الموت.</li>
	</ol>
</li>
	<li>قم بتغيير المعايير السلوكية استناداً إلى رأسين نقاط40، تبعاً لظروف تجريبية.</li>
</ol>4-الاستيلاء على ما بعد التحليل
<ol><li>تحليل إيمونوهيستوباثولوجيكال<ol>
<li>تثبيت التروية<ol>
<li>إعداد<ol>
<li>حل 4% (w/v) بارافورمالدهيد (PFA) في المخزن المؤقت للفوسفات 0.1 M (درجة الحموضة 7.4). الحرارة الحل إلى ما يقارب 70 درجة مئوية بالإضافة إلى قطره من هيدروكسيد الصوديوم 1 متر (حوالي 1 ميليلتر من هيدروكسيد الصوديوم م 1 لحل منهاج العمل 50 مل).</li>
				<li>إعداد المثلج 4% منهاج عمل بيجين والفوسفات مخزنة المالحة (PBS).</li>
				<li>إقامة مضخة تمعجية، مع الأنبوب والإبرة. قم بتشغيل حوالي 20 مل مياه من خلال أنبوب لمسح بقايا. ثم، ضع نهاية الأنبوب مفتوح في برنامج تلفزيوني المثلج.</li>
			</ol>
</li>
			<li>نضح ترانسكارديال وإعداد للدماغ ثابت<ol>
<li>تخدير عميق الماوس مع الإيثانول isoflurane/50% 50% في جرة صغيرة.</li>
				<li>تبقى الماوس في وضع ضعيف بتعلق نصائح الأمامية وهيندليمبس.</li>
				<li>قطع خط الوسط البطني من البطن وكشف الحجاب الحاجز.</li>
				<li>قطع الحجاب الحاجز على طول الهامش الساحلي. ثم قطع الجانبين الأفقي من أضلاعه والجسم. قرصه عملية الرهابه بالملقط تأمين وايفرت القفص الصدري. متمسكة بموقفها عملية الرهابه التي تعلق عليه بإبرة أو معسر فإنه مع الملقط. كشف القلب.</li>
				<li>أدخل الإبرة في البطين الأيسر وقطع في الاذين الأيمن باستخدام مقص. كن على علم لا لدفع الإبرة بعيداً جداً في القلب، كما أنه يمكن بيرس الجدران داخلية.</li>
				<li>بدء تدفق مستمر لبرنامج تلفزيوني المثلج من خلال الإبرة لتغسل الدم (حوالي 15-20 مل/دقيقة).</li>
				<li>عندما تم مسح الدم من الجسم، تحريك الأنبوبة إلى حل بارافورمالدهيد 4% (حوالي 60 مل) دون إضافة فقاعات. ثم قم بإيقاف في التروية.</li>
				<li>قص الرقبة الخلفي والعمود الفقري وتقشر الجلد الرأس والجزء الظهرية الجمجمة مع تشريح المقص.</li>
				<li>قطع عظم بريماكسيلاري بين مدارات العين وإزالة الجزء الظهرية للجمجمة.</li>
				<li>خلق فجوة بين الدماغ والعظام جوجال من الجانب الخلفي وقطع الأعصاب تريجيمينال و chiasm البصرية تحت الدماغ. بعناية إزالة الدماغ ووضعه في قنينة تحتوي على 4% منهاج عمل بيجين. بعد إصلاح الدماغ في 4 درجات مئوية عن ح 12-16.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
		<li>إعداد شريحة الدماغ<ol>
<li>نقل الدماغ ثابت إلى 20% السكروز/برنامج تلفزيوني حتى الدماغ المصارف في حل للسماح كريوبروتيكتيون.</li>
			<li>قص الدماغ الثابتة استناداً إلى اتجاه الشريحة المطلوبة والجزء المطلوب من الدماغ.</li>
			<li>تعيين كريوميكروتومي. تعيين بليد في الموقف والحفاظ على مرحلة مبضع عند درجة حرارة تقل عن-20 درجة مئوية.</li>
			<li>مكان في الدماغ قبل قطع على المسرح ومعطف الدماغ مع السكروز 20%/برنامج تلفزيوني. حل السكروز/برنامج تلفزيوني ستجمد تدريجيا، تغطي الدماغ في المرحلة، حتى الدماغ تماما مضمن في السكروز 20% مجمدة/برنامج تلفزيوني.</li>
			<li>شريحة الدماغ (30 ميكرون سمك) من انزلاق شفرة عن طريق الأنسجة. نقل الشرائح في برنامج تلفزيوني والاحتفاظ بها في 4 درجات مئوية.</li>
		</ol>
</li>
		<li>إيمونوهيستوتشيميستري نيون<ol>
<li>تغسل شرائح اللازمة في 0.1% تريتون العاشر-100/برنامج تلفزيوني (ببست) لمدة 10 دقائق، 3 مرات في درجة حرارة الغرفة (RT).</li>
			<li>كتلة الشرائح التي تفرخ لهم في ببست مع 2% الماعز المصل أو 5% البقري ألبومين المصل (BSA) ح 1-2 في الرايت</li>
			<li>احتضان الشرائح في حلاً جسم مع تركيز مناسب من جسم الأولية في ببست مع 2% الماعز المصل أو 5% جيش صرب البوسنة أوفيرنايتس 1 إلى 7 في 4 درجات مئوية.</li>
			<li>تغسل الشرائح في ببست لمدة 10 دقائق، 3 مرات في الرايت</li>
			<li>احتضان الشرائح في حل جسم ثانوي مع تركيز مناسب لجسم الثانوية في ببست ح 1-2 في الرايت، محمية بالضوء.</li>
			<li>تحميل الشرائح على الشرائح الزجاجية وتغطية مع تصاعد المتوسطة وتغطية الزجاج.</li>
			<li>مراقبة الشرائح مع الفحص المجهري الأسفار.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>3-دائرة الاختبار<ol>
<li>إعداد<ol>
<li>إعداد على الأقل 2 2--الفئران 129/Sv عمره 6 أشهر من نفس الجنس كالفئران هذا الموضوع أن يكون الماوس "غريب". روض جميع الفئران في القفص قبل التحليل. لكل دورة تدريبية، ضع الماوس في القفص واترك الماوس لمدة 15 دقيقة.</li>
			<li>قبل كل مرحلة التعود مع الماوس هذا الموضوع، بتنظيف الجهاز برمته وكل الأقفاص بمسح السطح مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>وضع الأقفاص الفارغة في الدوائر الجانبية على الجهاز 3-الدائرة وفتح الأبواب بين الدوائر.</li>
			<li>روض الماوس الموضوع، ضع ماوس موضوع في قاعة مركز والسماح للماوس للتنقل بحرية في جميع أنحاء الجهاز حتى الماوس وحقق كلا أقفاص، بالإضافة إلى القيام حيوانات موضوع الحد أدنى 5 إضافية قد تكون خوفاً من القفص لا التحقيق في القفص لمدة 20 دقيقة، ولا ينبغي أن تستخدم لهذا التحليل. تجنب القفص مثل هذه الحيوانات ونادراً ما تقترب من القفص.</li>
			<li>بعد انتقال الحيوان في قاعة المركز، إغلاق الأبواب وترك الماوس تتحرك بحرية في قاعة مركز لمدة 5 دقائق. وخلال هذه الفترة، وضع واحد من الفئران 129/Sv في قفص روض إلى القفص.</li>
		</ol>
</li>
		<li>تحليل بالمجتمع<ol>
<li>القيام بهذا التحليل مباشرة بعد فترة التعود الماوس هذا الموضوع.</li>
			<li>ضع القفص الذي يحتوي على ماوس 129/Sv، يطلق عليه "القفص غريب 1"، في واحدة من جانب الدوائر ومكان القفص فارغاً، يطلق عليه "القفص الكائن"، في قاعة جانبية أخرى.</li>
			<li>فتح الباب، ورصد سلوك الماوس هذا الموضوع.</li>
			<li>السماح لهذا الموضوع الماوس للتحرك بحرية لمدة 10 دقائق، وسجل المعلمات السلوكية التالية. إذا كان الماوس الموضوع يخاف من الماوس في القفص 1 غريب، كما هو مبين بالماوس تجنب القفص 1 غريب والمتبقية في الزاوية لإحدى الدوائر، ينبغي عدم استخدام الحيوان للتحليل. أ) الوقت المستغرق في كل دائرة، والدائرة 1 غريب، الدائرة الكائن، ومركز الدائرة. ب) الوقت المستغرق التحقيق في كل قفص والقفص 1 غريب والقفص الكائن. (الماوس تصنف على أنها للالتجلد بالماوس أو قفص أو التحقيق في القفص إذا هو استنشاق الماوس) ج) عدد المداخل في كل دائرة (اختياري) د) سافر مسافة المجموع (اختياري)</li>
			<li>بعد تحريك الماوس في قاعة مركز، قم بإغلاق الأبواب.</li>
		</ol>
</li>
		<li>التحليل الاجتماعي والجدة<ol>
<li>القيام بهذا التحليل بعد التحليل بالمجتمع مباشرة.</li>
			<li>مسح كلا أقفاص مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>مكان آخر 129/Sv الماوس في أحد الأقفاص، يطلق عليه "قفص غريب 2" والقفص مكان 2 غريب في إحدى الدوائر. ضع الماوس 1 غريب في قفص آخر، يسمى "القفص غريب 1"، ووضع القفص 1 شخص غريب في غرفة أخرى.</li>
			<li>فتح الباب، ورصد سلوك الماوس هذا الموضوع.</li>
			<li>السماح لهذا الموضوع الماوس للتحرك بحرية لمدة 10 دقائق، وقياس نفس المعلمات السلوكية ووصف للتحليل بالمجتمع. ملاحظة: ينبغي اختيار الماوس غريب 1 و 2 غريب عشوائياً. وينبغي تحديد الدائرة 1 غريب والدائرة الكائن، فضلا عن الدائرة 1 غريب والدائرة 2 غريب عشوائياً.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>التمييز الخوف السياقية<ol>
<li>تكييف<ol>
<li>قبل كل محاكمة تكييف، تنظيف الجهاز التجريبي بمسح السطح مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>ضع ماوس في جهاز تكييف مع الظروف المحددة (شكل الجهاز لون الجدار، الكلمة، ورائحة، والإضاءة ومواد حجم الضوضاء الخلفية ينبغي أن تحدد مسبقاً). على سبيل المثال، جهاز تكييف، استخدمت هنا كان جهاز مربعة مع الجدران شبكي واضحة وطابق شبكة معدنية، رائحة الإيثانول، وسطوع لوكس 100 والضوضاء البيضاء خلفية 65-dB.</li>
			<li>شرط الماوس بصدمة سيرا على الأقدام مع توقيت شبه عشوائي للصدمات الكهربائية 0.1-اماه 2 s x 3 مرات على مدى 5 دقائق.</li>
			<li>العودة الماوس إلى القفص المنزل بعد تكييف.</li>
		</ol>
</li>
		<li>تقييم الذاكرة<ol>
<li>قبل كل تقييم، بتنظيف الجهاز التجريبي بمسح السطح مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>وفي اليوم التالي تكييف التالي، ضع الماوس في الجهاز نفسه كحالة الصدمة وقياس الوقت بالتجميد على مدى 5 دقائق.</li>
			<li>في وقت لاحق في نفس اليوم، ضع الماوس في جهاز رواية وقياس الوقت تجميد أثناء إجراء تقييم 5-دقيقة. تم استخدام جهاز ثلاثي مع الجدران البيضاء شبكي، والكلمة لوحة، لا رائحة، السطوع لوكس 30 والضوضاء البيضاء 70-dB هنا.</li>
			<li>مقارنة وقت التجميد بين نفس الشرط وشرط الرواية. سوف تجمد الفئران مع قدرة ذاكرة عادي أكثر في نفس الحالة مما في حالة الرواية. التجميد جمود المعرفة من الحيوان لأكثر من 2 ثانية.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>

الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.

نقدم هنا، بروتوكول متاحة على نطاق واسع لإنشاء نموذج الحيوان الدوائي للصرع. بوساطة بتز إشعال الكيميائية لها تاريخ طويل وهو نموذج مقبولة عموما لدراسة باثولوجيا التشريح المرضى والخلوي للصرع41. نموذج إشعال الكيميائية من الصرع وقد استعرضت سابقا سوزداك ويانسن، 199542. ا?...

الصرع هو اضطراب عصبي مزمنة التي تتسم بالنوبات المتكررة، ويؤثر على ما يقرب من 1 في المائة شعب. لا يمكن توضيح الآليات الكامنة من جيل ابيليبتوجينيسيس وضبطها في مرضى الصرع تماما في الدراسات السريرية. ولذلك، مطلوب نموذج حيوان مناسب لدراسة الصرع1.
وقد استخدمت مجموعة متنوعة من نماذج حيوانية للصرع للتحقيق في علم وظائف الأعضاء الصرع وتحديد العقاقير المضادة للصرع2،3. بين هذه النماذج، تحريض الاستيلاء الدوائي طريقة شائعة تستخدم لتوليد نموذج حيوان للتحقيق في علم الأمراض الصرع4. هذا الأسلوب غير مكلفة وبسيطة. قطب كهربائي بوساطة إشعال أيضا طريقة شائعة استخدام، ولكن تكاليف هذا الإجراء أعلى، والأسلوب يتطلب المهارات الكهربائية والعمليات الجراحية للحث على مضبوطات المتكررة5.
التعريفي الدوائية مفيد أيضا لأنه يتم التحكم في توقيت وعدد المضبوطات بسهولة. كما تستخدم نماذج الماوس الوراثية التي يحمل مضبوطات عفوية في الدراسة للصرع. ومع ذلك، قد يكون التنبؤ متى وكيف في كثير من الأحيان المضبوطات تنشأ في هذه النماذج الوراثية المستحيل6. مطلوب نظام رصد مراقبة سلوك الفئران المعدلة وراثيا6الصرع.
حمض كينك وبيلوكاربيني وبينتيلينيتيترازولي (بتز) تستخدم على نطاق واسع كالمخدرات الذي يحفز الاستيلاء على7. حمض كينك مؤثر على مستقبلات الغلوتامات، و pilocarpine ينشط مستقبلات اتروبين. بتز حمض غاما أمينوبوتيريك (GABA)-خصم مستقبلات8. يمنع بتز وظيفة الاشتباكات العصبية المثبطة، مما يؤدي إلى زيادة نشاط الخلايا العصبية. هذه اللائحة يسبب النوبات المعممة في الحيوانات9. حقنه واحدة من حمض كينك وبيلوكاربيني يمكن أن يستحث مضبوطات الحادة، لا سيما مركز epilepticus (جنوب شرق)10،11 وكينك حمض-أو بيلوكاربيني-بوساطة سراج الدين يعزز مضبوطات عفوية والمتكررة المزمنة12 , 13-بينت تسجيلات اليكترونسيفالوجرافيك (EEG) وتحليل السلوك الالتزام بعفوية النوبات المتكررة بعد12،حقنه واحدة13شهر. حقنه واحدة لجرعة التشنجية من بتز يستحث أيضا الاستيلاء على حدة. ومع ذلك، المضبوطات عفوية المزمنة بعد حقنه واحدة من بتز صعبة لتعزيز. الإدارة المزمن من بتز مطلوب للحث على مضبوطات المتكررة14. في أي من الطريقتين، يتم توليد النوبات المتكررة قادرة على حمل علم أمراض أكثر مشابهة للصرع البشرية من جيل مضبوطات الحادة. في حالة بتز، يستحضر كل حقن من الاستيلاء، ويصبح أشد شدة الاستيلاء بطريقة تدريجية مع كل حقن. وأخيراً، يدفع حقنه بتز جرعة منخفضة وحيدة الاستيلاء منشط بهلوانية شديدة. في هذه المرحلة، يستحضر كل حقن مضبوطات الحادة. وباﻹضافة إلى ذلك، الكمون الاستيلاء والمدة أيضا تغيير على مدى الحقن. زمن الوصول للاستيلاء على منشط غالباً ما يصبح أقصر في المرحلة الأخيرة من إشعال15. وعلاوة على ذلك، تفاقم الاستيلاء يرافقه مدة حجز مطول16. التحقيق الآلية الجزيئية تنظيم شدة الاستيلاء، الكمون، ومدة مفيد لفحص العقاقير المضادة للصرع17،،من1819.
المضبوطات هي عادة الناجمة عن إدارة منهجية واحدة من بتز، والانتعاش سريع جداً، في غضون 30 دقيقة4،5. وهكذا، عدد المضبوطات يمكن التحكم أكثر في نموذج إشعال بتز. بيد أن رصد EEG أوضحت أن المسامير المعمم قد يعتبر ما يصل إلى 12 ساعة بعد وساطة بتز مصادرة20. ولذلك، ينبغي أن تظل الحيوانات يفضل أن يكون ذلك تحت المراقبة 24 ساعة بعد الاستيلاء على رمعيه أو منشط21 لتحليل أكثر دقة آليات إشعال.
إدارة العقاقير المضادة للصرع، مثل اثوسوكسيميدي، فالبرويت، الفينوباربيتال، فيجاباترين وريتيجابيني3، قبل أو بعد حقن بتز يخفف من تفاقم الاستيلاء على شدة3،22، 23. وبالمثل، أظهرت الفئران خروج المغلوب أن نقص الجينات متورطة في تفاقم مصادرة، مثل مصفوفة أية-924، 22 صندوق الأجيال القادمة25 ونيوريتين26، يحمل الاستيلاء على انخفاض حدة عقب حقنات متعددة بتز. وباﻹضافة إلى ذلك، مراقبة تغييرات نسيجية بعد نوبات الصرع ممكن مع هذا الأسلوب. في المرضى الذين يعانون من الصرع الفص الصدغي، هناك نموذجي تغييرات نسيجية في الدماغ، مثل الألياف المطحلب تنتشر الخلايا العصبية، أستروجليوسيس3027،28، الحبيبية الشاذ العصبية الهجرة29 الوفاة في قرن آمون31،32والتصلب هيبوكامبال33. ولوحظت تغييرات مماثلة في الحيوانات النموذجية الصرع. بين الأساليب المتاحة، تأجيج الكيميائية بتز بوساطة طريقة جيدة واستنساخه وغير مكلفة لإنتاج نموذج حيوان من الصرع. في طراز SE بيلوكاربيني بوساطة، الاستيلاء على التحكم صعب ويموت العديد من الفئران أو تفشل في وضع سراج الدين34. وفي المقابل، الوفيات وشدة الاستيلاء أكثر السيطرة عليها في نموذج بتز. بالإضافة إلى ذلك، بتز أقل تكلفة من حمض كينك، والمهارات في مجال جراحة الدماغ الماوس غير مطلوبة لإدارة المخدرات.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Pentylenetetrazole</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>MANAC</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse</td>
			<td>CLEA Japan</td>
			<td></td>
			<td>C57Bl/6NJcl, postnatal 8 week, male</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1mL)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle(27G x 3/4&#34;) (0.40 x 19 mm)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN-2719S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing scale</td>
			<td>Mettler</td>
			<td>PE2000</td>
			<td>This item is a discontinued product. Almost equivalent to FX-2000i with FXi-12-JA from A&#38;D company.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>nacalai tesque</td>
			<td>31511-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristatic pump</td>
			<td>ATTO</td>
			<td>SJ1211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>nacalai tesque</td>
			<td>30404-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Yamato</td>
			<td>REM-700</td>
			<td>This item is a discontinued product. Almost equivalent to REM-710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Feather</td>
			<td>S35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-synaptoporin antibody</td>
			<td>Synaptic systems</td>
			<td>102 002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-ZnT3 antibody</td>
			<td>Synaptic systems</td>
			<td>197 002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-doublecortin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-8066</td>
			<td>This item is a discontinued product. We did not test equivalent product (sc-271390).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contextual fear discrimination test apparatus</td>
			<td>O&#39;hara</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Three chamber test apparatus</td>
			<td>Muromachi</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pentylenetetrazole-induced kindling mouse model

بينتيلينيتيترازولي (بتز) خصم مستقبلات GABA A. حقن داخل من بتز في حيوان يدفع مصادرة حادة، شديدة بجرعة عالية، بينما استخدمت حقن متسلسلة من جرعة سوبكونفولسيفي لتطوير مادة كيميائية إشعال، نموذج لصرع. يدفع حقن جرعة منخفضة وحيدة من بتز نوبة خفيفة دون تشنج. بيد المتكررة حقن جرعة منخفضة من بتز انخفاض عتبة تثير نوبة التشنجية. أخيرا، الحث المستمر الإدارة جرعة منخفضة من بتز الاستيلاء منشط بهلوانية شديدة. هذا الأسلوب بسيطة وقابلة للتطبيق على نطاق واسع للتحقيق في الفسيولوجيا المرضية للصرع، الذي يعرف بأنه أمراض مزمنة التي تتضمن نوبات متكررة. هذه المادة الكيميائية إشعال البروتوكول تسبب النوبات المتكررة في الحيوانات. مع هذا الأسلوب، قدرت التأثر بوساطة بتز المضبوطات أو درجة تفاقم نوبات الصرع. وأدت هذه المزايا لاستخدام هذا الأسلوب لفحص العقاقير المضادة للصرع والجينات المتعلقة بالصرع. وبالإضافة إلى ذلك، استخدمت هذا الأسلوب للتحقيق في الأضرار العصبية بعد نوبات الصرع لأن تظهر أيضا التغييرات النسيجي لوحظت في أدمغة مرضى الصرع في أدمغة الحيوانات اوقدت الكيميائية. وهكذا، هذا البروتوكول مفيد لسهولة إنتاج نماذج حيوانية للصرع.

حقن متكررة من بتز الحث على زيادة في شدة الاستيلاء. ستة C57BL/6 الفئران تعامل مع بتز، والفئران 6 آخر تعامل مع المالحة كمجموعة مراقبة. الجرعة بتز 35 مغ/كغ، وكانت تدار من حقن 10. زادت درجة الاستيلاء تدريجيا مع حقن بتز، بينما كانت أثارت لا مضبوطات أو سلوكيات غير طبيعية قبل الحقن الما...

Watch this Scientific Journal Video about Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model at JoVE.com

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

توضح هذه المقالة طريقة لإشعال المواد الكيميائية مع بينتيلينيتيترازولي هذا البروتوكول ويقدم نموذجا ماوس من الصرع. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول للتحقيق في التعرض للاستيلاء على الاستقراء والمرضية بعد نوبات الصرع في الفئران.

نموذج الماوس إشعال الناجمة عن بينتيلينيتيترازولي

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

pentylenetetrazole-induced-kindling-mouse-model

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

Pharmacotherapy of the Epilepsies

SCIENTISTS IN ACTION

32.2K Views.  Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science. توضح هذه المقالة طريقة لإشعال المواد الكيميائية مع بينتيلينيتيترازولي هذا البروتوكول ويقدم نموذجا ماوس من الصرع. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول للتحقيق في التعرض للاستيلاء على الاستقراء والمرضية بعد نوبات الصرع في الفئران.

Video: Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and evaluating mouse models of human disease. MRI is an excellent modality for investigating genetically altered animals. It is capable of whole brain coverage, can be used in vivo, and provides multiple contrast mechanisms for investigating different aspects of neuranatomy and physiology. The advent of high-field scanners along with the ability to scan multiple mice simultaneously allows for rapid phenotyping of novel mutations.
Effective mouse MRI studies require attention to many aspects of experiment design. In this article, we will describe general methods to acquire quality images for mouse phenotyping using a system that images mice concurrently in shielded transmit/receive radio frequency (RF) coils in a common magnet (Bock et al., 2003). We focus particularly on anatomical phenotyping, an important and accessible application that has shown a high potential for impact in many mouse models at our imaging centre. Before we can provide the detailed steps to acquire such images, there are important practical considerations for both in vivo brain imaging (Dazai et al., 2004) and ex vivo brain imaging (Spring et al., 2007) that should be noted. These are discussed below.

Magnetic resonance imaging (MRI) has become an increasingly popular tool for examining the phenotype of genetically altered mice. This article illustrates the methods necessary to achieve high-throughput phenotyping of genetically altered mice using multiple-mouse MRI.

متعددة الماوس تشريحي عصبي التصوير بالرنين المغناطيسي

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks of Alzheimer's disease. The central component of neuritic plaques is a small filamentous protein called amyloid &beta; protein (A&beta;)1, which is derived from sequential proteolytic cleavage of the beta-amyloid precursor protein (APP) by &beta;-secretase and &gamma;-secretase. The amyloid hypothesis entails that A&gamma;-containing plaques as the underlying toxic mechanism in AD pathology2. The postmortem analysis of the presence of neuritic plaque confirms the diagnosis of AD. To further our understanding of A&gamma; neurobiology in AD pathogenesis, various mouse strains expressing AD-related mutations in the human APP genes were generated. Depending on the severity of the disease, these mice will develop neuritic plaques at different ages. These mice serve as invaluable tools for studying the pathogenesis and drug development that could affect the APP processing pathway and neuritic plaque formation. In this protocol, we employ an immunohistochemical method for specific detection of neuritic plaques in AD model mice. We will specifically discuss the preparation from extracting the half brain, paraformaldehyde fixation, cryosectioning, and two methods to detect neurotic plaques in AD transgenic mice: immunohistochemical detection using the ABC and DAB method and fluorescent detection using thiofalvin S staining method.

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer&#039;s Disease Mouse Model

One of the pathological characteristics of AD is the formation of Amyloid &#x03B2; protein positive neuritic plaques. In this protocol we describe two methods to detect neuritic plaques in transgenic AD model mice: immunohistochemical detection using the ABC and DAB method and fluorescent detection using thioflavin S staining method.

الكشف عن لوحات لالتهاب الأعصاب في مرض ألزهايمر النموذجي ماوس

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks ...

Methods for Intravenous Self Administration in a Mouse Model

Animal models have been developed to study the reinforcing effects of drugs, including the intravenous self-administration (IVSA) paradigm. The advantages of using an IVSA paradigm to study the reinforcing properties of drugs of abuse such as cocaine include the fact that the drug is self-administered instead of experimenter-administered, the schedule of reinforcement can be altered, and accurate measurement of the quantities of drug consumed as well as the timing and pattern of IV injections can be obtained. Furthermore, the intravenous route of administration avoids potential confounds related to first pass metabolism or taste, and produces rapid increases in blood and brain drug levels. As outlined in this video, intravenous self-administration can be obtained without prior food restriction or prior drug training following careful catheter placement during surgery and meticulous daily catheter flushing and maintenance. Experimental procedures outlined in this paper include a description of animal housing and acclimation methods, operant training using sweetened milk solutions, and catheter implantation surgery.

The intravenous self-administration (IVSA) paradigm is considered to be the gold standard in examining the reinforcing properties of drugs of abuse in rodents. This manuscript outlines the experimental procedures and surgical techniques necessary to obtain reliable IVSA data. In particular, meticulous catheter implantation and maintenance are highlighted.

أساليب الإدارة الذاتية في الوريد في نموذج الفأر

Animal models have been developed to study the reinforcing effects of drugs, including the intravenous self-administration (IVSA) paradigm. The advantages ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex three-dimensional retinal blood vessels and capillaries by creating a two-dimensional flat-mount of the interconnected vascular channels after digestion of the non-vascular components of the retina. This allows one to study various pathologic vascular changes, such as microaneurysms, capillary degeneration, and abnormal endothelial to pericyte ratios. However, the method is technically challenging, especially in mice, which have become the most widely available animal model to study the retina because of the ease of genetic manipulations 6,7. In the mouse eye, it is particularly difficult to completely remove the non-vascular components while maintaining the overall architecture of the retinal blood vessels. To date, there is a dearth of literature that describes the trypsin digest technique in detail in the mouse. This manuscript provides a detailed step-by-step methodology of the trypsin digest in mouse retina, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

Trypsin digest is one of the most commonly used methods to analyze retinal vasculature. This manuscript describes the method in detail, including key alterations to optimize the technique and remove the non-vascular tissue while preserving the overall architecture of the vessels.

التربسين بروتوكول دايجست لتحليل الأوعية الدموية الشبكية للنموذج الفأر

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets containing specific growth factors that trigger blood vessel growth throughout the naturally avascular cornea, angiogenesis can be measured and quantified. In this assay the angiogenic response is generated over the course of several days, depending on the type and dose of growth factor used. The induction of neovascularization is commonly triggered by either basic fibroblast growth factor (bFGF) or vascular endothelial growth factor (VEGF). By combining these growth factors with sucralfate and hydron (poly-HEMA (poly(2-hydroxyethyl methacrylate))) and casting the mixture into pellets, they can be surgically implanted in the mouse eye. These uniform pellets slowly-release the growth factors over five or six days (bFGF or VEGF respectively) enabling sufficient angiogenic response required for vessel area quantification using a slit lamp. This assay can be used for different applications, including the evaluation of angiogenic modulator drugs or treatments as well as comparison between different genetic backgrounds affecting angiogenesis. A skilled investigator after practicing this assay can implant a pellet in less than 5 min per eye.

The protocol describes the corneal micropocket assay as developed in mice.

والقرنية Micropocket الفحص: نموذج من الأوعية الدموية في العين ماوس

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating disease, with clinical features similar to the progressive forms of multiple sclerosis (MS). The mice show progressive disability with loss of motor and sensory functions, which can be assessed with multiple apparatuses and protocols. Among them, the Rotarod performance test is a very common behavioral test, its advantage being that it provides objective measurements, but it is often used assuming that it is straightforward and simple. In contrast to visual scoring systems used in some models of MS, which are highly subjective, the Rotarod test generates an objective, measurable, continuous variable (i.e., length of time), allowing almost perfect inter-rater concordances. However, inter-laboratory reliability is only achieved if the various testing parameters are replicated. In this manuscript, recommendations of specific testing parameters, such as size, speed, and acceleration of the rod; amount of training given to the animals; and data processing, are presented for the Rotarod test.

An optimized testing protocol is presented in this paper for the Rotarod performance test, used for measuring progressive neurological disability in TMEV-infected mice.

قياس التقدمي العصبية الإعاقة في نموذج الفأر من مرض التصلب العصبي المتعدد

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating ...

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI brain injury by studying neurobehavioral functions in these mice compared to non-operated (i.e., normal) mice. During the study, Rice-Vannucci&#39;s method was used to induce neonatal HI brain damage in postnatal day 7-10 (P7-10) mice. The HI operation was performed on the pups by unilateral carotid artery ligation and exposure to hypoxia (8% O2 and 92% N2 for 90 min). One week after the operation, the damaged brains were evaluated with the naked eye through the semi-transparent skull and were categorized into subgroups based on the absence (&#34;no cortical injury&#34; group) or presence (&#34;cortical injury&#34; group) of cortical injury, such as a lesion in the right hemisphere. On week 6, the following neurobehavioral tests were performed to evaluate the cognitive and motor functions: passive avoidance task (PAT), ladder walking test, and grip strength test. These behavioral tests are helpful in determining the effects of neonatal HI brain injury and are used in other mouse models of neurodegenerative diseases. In this study, neonatal HI brain injury mice showed motor deficits that corresponded to right hemisphere damage. The behavioral test results are relevant to the deficits observed in human neonatal HI patients, such as cerebral palsy or neonatal stroke patients. In this study, a mouse model of neonatal HI brain injury was established and showed different degrees of motor deficits and cognitive impairment compared to non-operated mice. This work provides basic information on the HI mouse model. MRI images demonstrate the different phenotypes, separated according to the severity of brain damage by motor and cognitive tests.

We performed unilateral carotid artery occlusion on postnatal day 7-10 CD-1 mouse pups to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of HI brain injury. We studied neurobehavioral functions in these mice compared to non-operated normal mice.

تقييم السلوك العصبي في نموذج ماوس لإصابة في الدماغ التاكسج الدماغية حديثي الولادة

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this protocol, we aim to guide the reader not simply through the technical considerations of generating laser-induced lesions to trigger neovascular processes, but rather focus on the powerful information that can be obtained from multimodal longitudinal in vivo imaging throughout the follow-up period.
The laser-induced mouse CNV model was generated by a diode laser administration. Multimodal in vivo imaging techniques were used to monitor CNV induction, progression and regression. First, spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) was performed immediately after the lasering to verify a break of Bruch&#39;s membrane. Subsequent in vivo imaging using fluorescein angiography (FA) confirmed successful damage of Bruch&#39;s membrane from serial images acquired at the choroidal level. Longitudinal follow-up of CNV proliferation and regression on days 5, 10, and 14 after the lasering was performed using both SD-OCT and FA. Simple and reliable grading of leaky CNV leasions from FA images is&#160;presented. Automated segmentation for measurement of total retinal thickness, combined with manual caliber application for measurement of retinal thickness at CNV sites, allow unbiased evaluation of the presence of edema. Finally, histological verification of CNV is performed using isolectin GS-IB4 staining on choroidal flatmounts. The staining is thresholded, and the isolectin-positive area is calculated with ImageJ.
This protocol is especially useful in therapeutics studies requiring high-throughput-like screening of CNV pathology as it allows fast, multimodal, and reliable classification of CNV pathology and retinal edema. In addition, high resolution SD-OCT enables the recording of other pathological hallmarks, such as the accumulation of subretinal or intraretinal fluid. However, this method does not provide a possibility to automate CNV volume analysis from SD-OCT images, which has to be performed manually.

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Here, we present the usefulness of longitudinal in vivo imaging in the follow-up of morphological changes of laser-induced choroidal neovascularization in mice.

في فيفو التصوير المتعدد الوسائط، وتحليل للماوس المستحثة بالليزر طراز نيوفاسكولاريزيشن تشورويدال

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

The Mouse Hindbrain As a Model for Studying Embryonic Neurogenesis

The mouse embryo forebrain is the most commonly employed system for studying mammalian neurogenesis during development. However, the highly folded forebrain neuroepithelium is not amenable to wholemount analysis to examine organ-wide neurogenesis patterns. Moreover, defining the mechanisms of forebrain neurogenesis is not necessarily predictive of neurogenesis in other parts of the brain; for example, due to the presence of forebrain-specific progenitor subtypes. The mouse hindbrain provides an alternative model for studying embryonic neurogenesis that is amenable to wholemount analysis, as well as tissue sections to observe the spatiotemporal distribution and behavior of neural progenitors. Moreover, it is easily dissected for other downstream applications, such as cell isolation or molecular biology analysis. As the mouse hindbrain can be readily analyzed in the vast number of cell lineage reporter and mutant mouse strains that have become available, it offers a powerful model for studying the cellular and molecular mechanisms of developmental neurogenesis in a mammalian organism. Here, we present a simple and quick method to use the mouse embryo hindbrain for analyzing mammalian neural progenitor cell (NPC) behavior in wholemount preparations and tissue sections.

This article demonstrates how the mouse embryonic hindbrain can be used as a model for studying developmental neurogenesis in both whole organ and tissue section preparations.

هيندبراين الماوس كنموذج لدراسة الخلايا الجنينية

The mouse embryo forebrain is the most commonly employed system for studying mammalian neurogenesis during development. However, the highly folded ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique VGAT-Cre mice were used in developing spontaneous recurring seizures (SRS) after kindling and a likely mechanism - insertion of Cre into the VGAT gene - disrupted its expression and reduced GABAergic tone. The present study extends these observations to a larger cohort of mice, focusing on key issues such as how long the SRS continues after kindling and the effect of the animal's sex and age. This report describes the protocols for the following key steps: making headsets with hippocampal depth electrodes for electrical stimulation and for reading the electroencephalogram; surgery to affix the headset securely on the mouse's skull so that it does not fall off; and key details of the electrical kindling protocol such as duration of the pulse, frequency of train, duration of train, and amount of current injected. The kindling protocol is robust in that it reliably leads to epilepsy in most VGAT-Cre mice, providing a new model to test for novel antiepileptogenic drugs.

This report describes the methods to generate a model of temporal lobe epilepsy based on the electrical kindling of transgenic VGAT-Cre mice. Kindled VGAT-Cre mice may be useful in determining what causes epilepsy and for screening novel therapies.

تحضير وزرع أقطاب كهربائية لفئران VGAT-cre المشتعلة كهربائيا لتوليد نموذج لصرع الفص الصدغي

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...