وأيده هذا العمل جزئيا أرقام المنح JSPS كاكينهي 24700349، 24659093، 25293239، JP18H02536، و 17 ك 07086، أرقام المنح يأمرون كاكينهي 25110737 و 23110525، JP18ek0109311 عدد المنح أوسطي، ومؤسسة البحوث الطبية سينشين واليابان مؤسسة أبحاث الصرع.

وافق جميع الإجراءات التجريبية بالعناية بالحيوان واستخدام اللجنة لطوكيو متروبوليتان معهد العلوم الطبية. بعد الولادة 8-ينصح الفئران عمرها 16 أسبوع. أي سلالة فطري مقبول للتجربة. الفئران C57BL/6 أكثر قدرة على مقاومة بتز، بينما الفئران ألبينو بالب/ج والسويسرية أكثر حساسية بتز. واستخدمت في هذه الدراسة C57BL/6. مشكلة عدم الحصانة بتز يعتمد أيضا على سن الماوس. بالمقارنة مع الفئران الأصغر سنا، الفئران الأكبر سنا أكثر مقاومة للحرارة إلى بتز35. يمكن أن يختلف عدد الحيوانات المستخدمة لهذا الأسلوب، ولكن مالا يقل عن 6-10 الحيوانات المطلوبة لكل حالة.
1-إعداد بتز
<ol><li>حل 2 مغ/مل بتز العقيمة 0.9% (w/v) كلوريد الصوديوم. إعداد بتز اليوم من الاستخدام.</li>
</ol>2-حقن بتز
<ol><li>القيام بتجارب جميع بين 09:00 ص و 12:00 م (ظهرا).</li>
	<li>قياس وزن الجسم للحيوان.</li>
	<li>وضع الحيوان في دائرة مراقبة التعود.</li>
	<li>وخلال فترة التعود (3 دقائق)، حساب حجم الحل بتز لحقن استناداً إلى وزن جسم الحيوان وجرعة حقن سبق تحديدها. ملاحظة: على سبيل المثال، عند استخدام 35 مغ/كغ بتز، مغ 0.875 من بتز مطلوب لماوس يزن 25 جرام (35 مغ/كغ × 0.025 كغ = 0.875 mg). ولذلك ينبغي أن يكون حقن ميكروليتر 437.5 حل بتز 2 مغ/مل (0.875 مغ/2 مغ/مل = 0.4375 مل). حقن جرعة بتز يعتمد على الماوس النمط الوراثي والسلالة. للفئران البرية من نوع C57BL/6، يوصي بجرعة 30-35 ملغ بتز/كغ من وزن الجسم في المحاكمة الأولى. حساسية بتز يعتمد على الماوس الضغط المستخدمة36،37. أن حقن جرعة يختلف باختلاف غرض التجربة.</li>
	<li>حقن بتز إينترابيريتونيلي بحقنه 1 مل المرفقة بإبرة قياس 27 في الربع الأيمن أو الأيسر من البطن للحيوان. تجنب الحقن في خط الوسط.<ol>
<li>تجنب تكرار الحقن في نفس الموضع.</li>
	</ol>
</li>
	<li>مراقبة سلوك الحيوانات لمدة 30 دقيقة بعد الإدارة بتز (الشكل 1A)، وتصنيف ونقاط السلوك الشاذ كما هو موضح أدناه. إذا كان ذلك ممكناً، الاحتفاظ بالحيوانات تحت الملاحظة 24 ساعة، أو على الأقل إضافية 6-10 ح بعد حقنه، خاصة عندما يصل إلى درجة خطورة مصادرة 3 أو أعلى.<ol>
<li>ملاحظة أي مضبوطات معتدل أو التغيرات السلوكية في الحيوانات بعد فترة 30 دقيقة الملاحظة. وهذا لفترة طويلة المراقبة قد تناول الفترة تأثير أهمية خاصة وكاملة من جرعة سوبكونفولسيفي من بتز الجيل من المضبوطات دون سابق استفزاز المزمن في الصرع.</li>
		<li>وباﻹضافة إلى ذلك، قياس مدة الاستيلاء على كل مصادرة الملاحظة كالتغييرات في مدة الاستيلاء تتصل بشدة الاستيلاء. وعلاوة على ذلك، زمن الوصول إلى مصادرة الأولى بعد حقن بتز تدبيرا هاما آخر لجمع. رصد تواتر الاستيلاء، والمدة، والكمون أمر حاسم لأي دراسات ما بعد الاستيلاء الجزيئية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>حقن بتز كل يوم (الشكل 1A). عدد الحقن يعتمد على هدف التجربة. فيما يلي الأمثلة التمثيلية.<ol>
<li>لتوليد الحيوانات اوقدت تماما، وبمجرد تجارب حيوان من الاستيلاء على النقطة 5 (منشط رمعي الاستيلاء)، الانتهاء من الحقن داخل الإدارات الثلاث الإضافية. وفي هذه الحالة، زيادة جرعة الحقن إذا لم زيادة درجة الاستيلاء لثلاث حكومات متتالية. يمكن أن يتلقى كل الحيوانات رقم مختلف وجرعة من حقن بتز.</li>
		<li>تحديد عدد وجرعة من حقن بتز في كل حالة لتقييم تعرض بتز، بما في ذلك تقييمات للأدوية المضادة الصرع ودراسات للنمط الظاهري للفئران المعدلة وراثيا. تعطي جميع الحيوانات بنفس عدد الحقن بتز؛ ويوصي بمجموعة من 8 إلى 12 الحقن. إذا مات حيوان، ينبغي الإشارة إلى نقاط الاستيلاء ك 6.</li>
		<li>تحديد جرعة الحقن اللازمة للحفاظ على ضبط ارتفاع نقاط (4 أو 5) لحقن 10 أو أكثر دراسة التغيرات التشريحية المرضية التي تحدث نوبات الصرع. في هذه الحالة، عدد الحقن الإجمالي يجب أن تتراوح من 25 إلى 30. إنقاص جرعة الحقن إذا كان الاستيلاء على نقاط يصل إلى 5. إذا انخفضت درجة الاستيلاء على 3 أو أقل، زيادة جرعة الحقن.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3-الاستيلاء على نقاط
<ol><li>مراقبة في سلوك الحيوانات وتسجيل النقاط.<ol>
<li>تصنيف وتسجيل السلوكيات الصرع كالتالي38،39 (الشكل 1B): 0: السلوك العادي، لا شذوذ. 1: التثبيت، الكذب في البطن. 2: رأس التقلصات الإيماء أو الوجه أو فوريليمب أو اللكتات. 3: الهزات المستمرة التقلصات كامل الجسم، رمعيه، عقد ذيل تصنع. 4: الضبط تربية، منشط، تسقط على جانبها. 5: منشط رمعي الاستيلاء، تسقط على ظهرها، البرية التسرع والقفز. 6: الموت.</li>
	</ol>
</li>
	<li>قم بتغيير المعايير السلوكية استناداً إلى رأسين نقاط40، تبعاً لظروف تجريبية.</li>
</ol>4-الاستيلاء على ما بعد التحليل
<ol><li>تحليل إيمونوهيستوباثولوجيكال<ol>
<li>تثبيت التروية<ol>
<li>إعداد<ol>
<li>حل 4% (w/v) بارافورمالدهيد (PFA) في المخزن المؤقت للفوسفات 0.1 M (درجة الحموضة 7.4). الحرارة الحل إلى ما يقارب 70 درجة مئوية بالإضافة إلى قطره من هيدروكسيد الصوديوم 1 متر (حوالي 1 ميليلتر من هيدروكسيد الصوديوم م 1 لحل منهاج العمل 50 مل).</li>
				<li>إعداد المثلج 4% منهاج عمل بيجين والفوسفات مخزنة المالحة (PBS).</li>
				<li>إقامة مضخة تمعجية، مع الأنبوب والإبرة. قم بتشغيل حوالي 20 مل مياه من خلال أنبوب لمسح بقايا. ثم، ضع نهاية الأنبوب مفتوح في برنامج تلفزيوني المثلج.</li>
			</ol>
</li>
			<li>نضح ترانسكارديال وإعداد للدماغ ثابت<ol>
<li>تخدير عميق الماوس مع الإيثانول isoflurane/50% 50% في جرة صغيرة.</li>
				<li>تبقى الماوس في وضع ضعيف بتعلق نصائح الأمامية وهيندليمبس.</li>
				<li>قطع خط الوسط البطني من البطن وكشف الحجاب الحاجز.</li>
				<li>قطع الحجاب الحاجز على طول الهامش الساحلي. ثم قطع الجانبين الأفقي من أضلاعه والجسم. قرصه عملية الرهابه بالملقط تأمين وايفرت القفص الصدري. متمسكة بموقفها عملية الرهابه التي تعلق عليه بإبرة أو معسر فإنه مع الملقط. كشف القلب.</li>
				<li>أدخل الإبرة في البطين الأيسر وقطع في الاذين الأيمن باستخدام مقص. كن على علم لا لدفع الإبرة بعيداً جداً في القلب، كما أنه يمكن بيرس الجدران داخلية.</li>
				<li>بدء تدفق مستمر لبرنامج تلفزيوني المثلج من خلال الإبرة لتغسل الدم (حوالي 15-20 مل/دقيقة).</li>
				<li>عندما تم مسح الدم من الجسم، تحريك الأنبوبة إلى حل بارافورمالدهيد 4% (حوالي 60 مل) دون إضافة فقاعات. ثم قم بإيقاف في التروية.</li>
				<li>قص الرقبة الخلفي والعمود الفقري وتقشر الجلد الرأس والجزء الظهرية الجمجمة مع تشريح المقص.</li>
				<li>قطع عظم بريماكسيلاري بين مدارات العين وإزالة الجزء الظهرية للجمجمة.</li>
				<li>خلق فجوة بين الدماغ والعظام جوجال من الجانب الخلفي وقطع الأعصاب تريجيمينال و chiasm البصرية تحت الدماغ. بعناية إزالة الدماغ ووضعه في قنينة تحتوي على 4% منهاج عمل بيجين. بعد إصلاح الدماغ في 4 درجات مئوية عن ح 12-16.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
		<li>إعداد شريحة الدماغ<ol>
<li>نقل الدماغ ثابت إلى 20% السكروز/برنامج تلفزيوني حتى الدماغ المصارف في حل للسماح كريوبروتيكتيون.</li>
			<li>قص الدماغ الثابتة استناداً إلى اتجاه الشريحة المطلوبة والجزء المطلوب من الدماغ.</li>
			<li>تعيين كريوميكروتومي. تعيين بليد في الموقف والحفاظ على مرحلة مبضع عند درجة حرارة تقل عن-20 درجة مئوية.</li>
			<li>مكان في الدماغ قبل قطع على المسرح ومعطف الدماغ مع السكروز 20%/برنامج تلفزيوني. حل السكروز/برنامج تلفزيوني ستجمد تدريجيا، تغطي الدماغ في المرحلة، حتى الدماغ تماما مضمن في السكروز 20% مجمدة/برنامج تلفزيوني.</li>
			<li>شريحة الدماغ (30 ميكرون سمك) من انزلاق شفرة عن طريق الأنسجة. نقل الشرائح في برنامج تلفزيوني والاحتفاظ بها في 4 درجات مئوية.</li>
		</ol>
</li>
		<li>إيمونوهيستوتشيميستري نيون<ol>
<li>تغسل شرائح اللازمة في 0.1% تريتون العاشر-100/برنامج تلفزيوني (ببست) لمدة 10 دقائق، 3 مرات في درجة حرارة الغرفة (RT).</li>
			<li>كتلة الشرائح التي تفرخ لهم في ببست مع 2% الماعز المصل أو 5% البقري ألبومين المصل (BSA) ح 1-2 في الرايت</li>
			<li>احتضان الشرائح في حلاً جسم مع تركيز مناسب من جسم الأولية في ببست مع 2% الماعز المصل أو 5% جيش صرب البوسنة أوفيرنايتس 1 إلى 7 في 4 درجات مئوية.</li>
			<li>تغسل الشرائح في ببست لمدة 10 دقائق، 3 مرات في الرايت</li>
			<li>احتضان الشرائح في حل جسم ثانوي مع تركيز مناسب لجسم الثانوية في ببست ح 1-2 في الرايت، محمية بالضوء.</li>
			<li>تحميل الشرائح على الشرائح الزجاجية وتغطية مع تصاعد المتوسطة وتغطية الزجاج.</li>
			<li>مراقبة الشرائح مع الفحص المجهري الأسفار.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>3-دائرة الاختبار<ol>
<li>إعداد<ol>
<li>إعداد على الأقل 2 2--الفئران 129/Sv عمره 6 أشهر من نفس الجنس كالفئران هذا الموضوع أن يكون الماوس "غريب". روض جميع الفئران في القفص قبل التحليل. لكل دورة تدريبية، ضع الماوس في القفص واترك الماوس لمدة 15 دقيقة.</li>
			<li>قبل كل مرحلة التعود مع الماوس هذا الموضوع، بتنظيف الجهاز برمته وكل الأقفاص بمسح السطح مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>وضع الأقفاص الفارغة في الدوائر الجانبية على الجهاز 3-الدائرة وفتح الأبواب بين الدوائر.</li>
			<li>روض الماوس الموضوع، ضع ماوس موضوع في قاعة مركز والسماح للماوس للتنقل بحرية في جميع أنحاء الجهاز حتى الماوس وحقق كلا أقفاص، بالإضافة إلى القيام حيوانات موضوع الحد أدنى 5 إضافية قد تكون خوفاً من القفص لا التحقيق في القفص لمدة 20 دقيقة، ولا ينبغي أن تستخدم لهذا التحليل. تجنب القفص مثل هذه الحيوانات ونادراً ما تقترب من القفص.</li>
			<li>بعد انتقال الحيوان في قاعة المركز، إغلاق الأبواب وترك الماوس تتحرك بحرية في قاعة مركز لمدة 5 دقائق. وخلال هذه الفترة، وضع واحد من الفئران 129/Sv في قفص روض إلى القفص.</li>
		</ol>
</li>
		<li>تحليل بالمجتمع<ol>
<li>القيام بهذا التحليل مباشرة بعد فترة التعود الماوس هذا الموضوع.</li>
			<li>ضع القفص الذي يحتوي على ماوس 129/Sv، يطلق عليه "القفص غريب 1"، في واحدة من جانب الدوائر ومكان القفص فارغاً، يطلق عليه "القفص الكائن"، في قاعة جانبية أخرى.</li>
			<li>فتح الباب، ورصد سلوك الماوس هذا الموضوع.</li>
			<li>السماح لهذا الموضوع الماوس للتحرك بحرية لمدة 10 دقائق، وسجل المعلمات السلوكية التالية. إذا كان الماوس الموضوع يخاف من الماوس في القفص 1 غريب، كما هو مبين بالماوس تجنب القفص 1 غريب والمتبقية في الزاوية لإحدى الدوائر، ينبغي عدم استخدام الحيوان للتحليل. أ) الوقت المستغرق في كل دائرة، والدائرة 1 غريب، الدائرة الكائن، ومركز الدائرة. ب) الوقت المستغرق التحقيق في كل قفص والقفص 1 غريب والقفص الكائن. (الماوس تصنف على أنها للالتجلد بالماوس أو قفص أو التحقيق في القفص إذا هو استنشاق الماوس) ج) عدد المداخل في كل دائرة (اختياري) د) سافر مسافة المجموع (اختياري)</li>
			<li>بعد تحريك الماوس في قاعة مركز، قم بإغلاق الأبواب.</li>
		</ol>
</li>
		<li>التحليل الاجتماعي والجدة<ol>
<li>القيام بهذا التحليل بعد التحليل بالمجتمع مباشرة.</li>
			<li>مسح كلا أقفاص مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>مكان آخر 129/Sv الماوس في أحد الأقفاص، يطلق عليه "قفص غريب 2" والقفص مكان 2 غريب في إحدى الدوائر. ضع الماوس 1 غريب في قفص آخر، يسمى "القفص غريب 1"، ووضع القفص 1 شخص غريب في غرفة أخرى.</li>
			<li>فتح الباب، ورصد سلوك الماوس هذا الموضوع.</li>
			<li>السماح لهذا الموضوع الماوس للتحرك بحرية لمدة 10 دقائق، وقياس نفس المعلمات السلوكية ووصف للتحليل بالمجتمع. ملاحظة: ينبغي اختيار الماوس غريب 1 و 2 غريب عشوائياً. وينبغي تحديد الدائرة 1 غريب والدائرة الكائن، فضلا عن الدائرة 1 غريب والدائرة 2 غريب عشوائياً.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>التمييز الخوف السياقية<ol>
<li>تكييف<ol>
<li>قبل كل محاكمة تكييف، تنظيف الجهاز التجريبي بمسح السطح مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>ضع ماوس في جهاز تكييف مع الظروف المحددة (شكل الجهاز لون الجدار، الكلمة، ورائحة، والإضاءة ومواد حجم الضوضاء الخلفية ينبغي أن تحدد مسبقاً). على سبيل المثال، جهاز تكييف، استخدمت هنا كان جهاز مربعة مع الجدران شبكي واضحة وطابق شبكة معدنية، رائحة الإيثانول، وسطوع لوكس 100 والضوضاء البيضاء خلفية 65-dB.</li>
			<li>شرط الماوس بصدمة سيرا على الأقدام مع توقيت شبه عشوائي للصدمات الكهربائية 0.1-اماه 2 s x 3 مرات على مدى 5 دقائق.</li>
			<li>العودة الماوس إلى القفص المنزل بعد تكييف.</li>
		</ol>
</li>
		<li>تقييم الذاكرة<ol>
<li>قبل كل تقييم، بتنظيف الجهاز التجريبي بمسح السطح مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>وفي اليوم التالي تكييف التالي، ضع الماوس في الجهاز نفسه كحالة الصدمة وقياس الوقت بالتجميد على مدى 5 دقائق.</li>
			<li>في وقت لاحق في نفس اليوم، ضع الماوس في جهاز رواية وقياس الوقت تجميد أثناء إجراء تقييم 5-دقيقة. تم استخدام جهاز ثلاثي مع الجدران البيضاء شبكي، والكلمة لوحة، لا رائحة، السطوع لوكس 30 والضوضاء البيضاء 70-dB هنا.</li>
			<li>مقارنة وقت التجميد بين نفس الشرط وشرط الرواية. سوف تجمد الفئران مع قدرة ذاكرة عادي أكثر في نفس الحالة مما في حالة الرواية. التجميد جمود المعرفة من الحيوان لأكثر من 2 ثانية.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>

الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.

نقدم هنا، بروتوكول متاحة على نطاق واسع لإنشاء نموذج الحيوان الدوائي للصرع. بوساطة بتز إشعال الكيميائية لها تاريخ طويل وهو نموذج مقبولة عموما لدراسة باثولوجيا التشريح المرضى والخلوي للصرع41. نموذج إشعال الكيميائية من الصرع وقد استعرضت سابقا سوزداك ويانسن، 199542. ا?...

الصرع هو اضطراب عصبي مزمنة التي تتسم بالنوبات المتكررة، ويؤثر على ما يقرب من 1 في المائة شعب. لا يمكن توضيح الآليات الكامنة من جيل ابيليبتوجينيسيس وضبطها في مرضى الصرع تماما في الدراسات السريرية. ولذلك، مطلوب نموذج حيوان مناسب لدراسة الصرع1.
وقد استخدمت مجموعة متنوعة من نماذج حيوانية للصرع للتحقيق في علم وظائف الأعضاء الصرع وتحديد العقاقير المضادة للصرع2،3. بين هذه النماذج، تحريض الاستيلاء الدوائي طريقة شائعة تستخدم لتوليد نموذج حيوان للتحقيق في علم الأمراض الصرع4. هذا الأسلوب غير مكلفة وبسيطة. قطب كهربائي بوساطة إشعال أيضا طريقة شائعة استخدام، ولكن تكاليف هذا الإجراء أعلى، والأسلوب يتطلب المهارات الكهربائية والعمليات الجراحية للحث على مضبوطات المتكررة5.
التعريفي الدوائية مفيد أيضا لأنه يتم التحكم في توقيت وعدد المضبوطات بسهولة. كما تستخدم نماذج الماوس الوراثية التي يحمل مضبوطات عفوية في الدراسة للصرع. ومع ذلك، قد يكون التنبؤ متى وكيف في كثير من الأحيان المضبوطات تنشأ في هذه النماذج الوراثية المستحيل6. مطلوب نظام رصد مراقبة سلوك الفئران المعدلة وراثيا6الصرع.
حمض كينك وبيلوكاربيني وبينتيلينيتيترازولي (بتز) تستخدم على نطاق واسع كالمخدرات الذي يحفز الاستيلاء على7. حمض كينك مؤثر على مستقبلات الغلوتامات، و pilocarpine ينشط مستقبلات اتروبين. بتز حمض غاما أمينوبوتيريك (GABA)-خصم مستقبلات8. يمنع بتز وظيفة الاشتباكات العصبية المثبطة، مما يؤدي إلى زيادة نشاط الخلايا العصبية. هذه اللائحة يسبب النوبات المعممة في الحيوانات9. حقنه واحدة من حمض كينك وبيلوكاربيني يمكن أن يستحث مضبوطات الحادة، لا سيما مركز epilepticus (جنوب شرق)10،11 وكينك حمض-أو بيلوكاربيني-بوساطة سراج الدين يعزز مضبوطات عفوية والمتكررة المزمنة12 , 13-بينت تسجيلات اليكترونسيفالوجرافيك (EEG) وتحليل السلوك الالتزام بعفوية النوبات المتكررة بعد12،حقنه واحدة13شهر. حقنه واحدة لجرعة التشنجية من بتز يستحث أيضا الاستيلاء على حدة. ومع ذلك، المضبوطات عفوية المزمنة بعد حقنه واحدة من بتز صعبة لتعزيز. الإدارة المزمن من بتز مطلوب للحث على مضبوطات المتكررة14. في أي من الطريقتين، يتم توليد النوبات المتكررة قادرة على حمل علم أمراض أكثر مشابهة للصرع البشرية من جيل مضبوطات الحادة. في حالة بتز، يستحضر كل حقن من الاستيلاء، ويصبح أشد شدة الاستيلاء بطريقة تدريجية مع كل حقن. وأخيراً، يدفع حقنه بتز جرعة منخفضة وحيدة الاستيلاء منشط بهلوانية شديدة. في هذه المرحلة، يستحضر كل حقن مضبوطات الحادة. وباﻹضافة إلى ذلك، الكمون الاستيلاء والمدة أيضا تغيير على مدى الحقن. زمن الوصول للاستيلاء على منشط غالباً ما يصبح أقصر في المرحلة الأخيرة من إشعال15. وعلاوة على ذلك، تفاقم الاستيلاء يرافقه مدة حجز مطول16. التحقيق الآلية الجزيئية تنظيم شدة الاستيلاء، الكمون، ومدة مفيد لفحص العقاقير المضادة للصرع17،،من1819.
المضبوطات هي عادة الناجمة عن إدارة منهجية واحدة من بتز، والانتعاش سريع جداً، في غضون 30 دقيقة4،5. وهكذا، عدد المضبوطات يمكن التحكم أكثر في نموذج إشعال بتز. بيد أن رصد EEG أوضحت أن المسامير المعمم قد يعتبر ما يصل إلى 12 ساعة بعد وساطة بتز مصادرة20. ولذلك، ينبغي أن تظل الحيوانات يفضل أن يكون ذلك تحت المراقبة 24 ساعة بعد الاستيلاء على رمعيه أو منشط21 لتحليل أكثر دقة آليات إشعال.
إدارة العقاقير المضادة للصرع، مثل اثوسوكسيميدي، فالبرويت، الفينوباربيتال، فيجاباترين وريتيجابيني3، قبل أو بعد حقن بتز يخفف من تفاقم الاستيلاء على شدة3،22، 23. وبالمثل، أظهرت الفئران خروج المغلوب أن نقص الجينات متورطة في تفاقم مصادرة، مثل مصفوفة أية-924، 22 صندوق الأجيال القادمة25 ونيوريتين26، يحمل الاستيلاء على انخفاض حدة عقب حقنات متعددة بتز. وباﻹضافة إلى ذلك، مراقبة تغييرات نسيجية بعد نوبات الصرع ممكن مع هذا الأسلوب. في المرضى الذين يعانون من الصرع الفص الصدغي، هناك نموذجي تغييرات نسيجية في الدماغ، مثل الألياف المطحلب تنتشر الخلايا العصبية، أستروجليوسيس3027،28، الحبيبية الشاذ العصبية الهجرة29 الوفاة في قرن آمون31،32والتصلب هيبوكامبال33. ولوحظت تغييرات مماثلة في الحيوانات النموذجية الصرع. بين الأساليب المتاحة، تأجيج الكيميائية بتز بوساطة طريقة جيدة واستنساخه وغير مكلفة لإنتاج نموذج حيوان من الصرع. في طراز SE بيلوكاربيني بوساطة، الاستيلاء على التحكم صعب ويموت العديد من الفئران أو تفشل في وضع سراج الدين34. وفي المقابل، الوفيات وشدة الاستيلاء أكثر السيطرة عليها في نموذج بتز. بالإضافة إلى ذلك، بتز أقل تكلفة من حمض كينك، والمهارات في مجال جراحة الدماغ الماوس غير مطلوبة لإدارة المخدرات.

<table><tbody><tr><td>Pentylenetetrazole</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6500</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>MANAC</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Mouse</td><td>CLEA Japan</td><td></td><td>C57Bl/6NJcl, postnatal 8 week, male</td></tr><tr><td>Syringe (1mL)</td><td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>Needle(27G x 3/4&quot;) (0.40 x 19 mm)</td><td>Terumo</td><td>NN-2719S</td><td></td></tr><tr><td>Weighing scale</td><td>Mettler</td><td>PE2000</td><td>This item is a discontinued product. Almost equivalent to FX-2000i with FXi-12-JA from A&amp;amp;D company.</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydroxide</td><td>nacalai tesque</td><td>31511-05</td><td></td></tr><tr><td>Peristatic pump</td><td>ATTO</td><td>SJ1211</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>nacalai tesque</td><td>30404-45</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Yamato</td><td>REM-700</td><td>This item is a discontinued product. Almost equivalent to REM-710</td></tr><tr><td>Microtome blade</td><td>Feather</td><td>S35</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X-100</td><td></td></tr><tr><td>anti-synaptoporin antibody</td><td>Synaptic systems</td><td>102 002</td><td></td></tr><tr><td>anti-ZnT3 antibody</td><td>Synaptic systems</td><td>197 002</td><td></td></tr><tr><td>anti-doublecortin</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-8066</td><td>This item is a discontinued product. We did not test equivalent product (sc-271390).</td></tr><tr><td>Contextual fear discrimination test apparatus</td><td>O&#039;hara</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Three chamber test apparatus</td><td>Muromachi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

pentylenetetrazole-induced kindling mouse model

بينتيلينيتيترازولي (بتز) خصم مستقبلات GABA A. حقن داخل من بتز في حيوان يدفع مصادرة حادة، شديدة بجرعة عالية، بينما استخدمت حقن متسلسلة من جرعة سوبكونفولسيفي لتطوير مادة كيميائية إشعال، نموذج لصرع. يدفع حقن جرعة منخفضة وحيدة من بتز نوبة خفيفة دون تشنج. بيد المتكررة حقن جرعة منخفضة من بتز انخفاض عتبة تثير نوبة التشنجية. أخيرا، الحث المستمر الإدارة جرعة منخفضة من بتز الاستيلاء منشط بهلوانية شديدة. هذا الأسلوب بسيطة وقابلة للتطبيق على نطاق واسع للتحقيق في الفسيولوجيا المرضية للصرع، الذي يعرف بأنه أمراض مزمنة التي تتضمن نوبات متكررة. هذه المادة الكيميائية إشعال البروتوكول تسبب النوبات المتكررة في الحيوانات. مع هذا الأسلوب، قدرت التأثر بوساطة بتز المضبوطات أو درجة تفاقم نوبات الصرع. وأدت هذه المزايا لاستخدام هذا الأسلوب لفحص العقاقير المضادة للصرع والجينات المتعلقة بالصرع. وبالإضافة إلى ذلك، استخدمت هذا الأسلوب للتحقيق في الأضرار العصبية بعد نوبات الصرع لأن تظهر أيضا التغييرات النسيجي لوحظت في أدمغة مرضى الصرع في أدمغة الحيوانات اوقدت الكيميائية. وهكذا، هذا البروتوكول مفيد لسهولة إنتاج نماذج حيوانية للصرع.

حقن متكررة من بتز الحث على زيادة في شدة الاستيلاء. ستة C57BL/6 الفئران تعامل مع بتز، والفئران 6 آخر تعامل مع المالحة كمجموعة مراقبة. الجرعة بتز 35 مغ/كغ، وكانت تدار من حقن 10. زادت درجة الاستيلاء تدريجيا مع حقن بتز، بينما كانت أثارت لا مضبوطات أو سلوكيات غير طبيعية قبل الحقن الما...

Watch this Scientific Journal Video about Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model at JoVE.com

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

توضح هذه المقالة طريقة لإشعال المواد الكيميائية مع بينتيلينيتيترازولي هذا البروتوكول ويقدم نموذجا ماوس من الصرع. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول للتحقيق في التعرض للاستيلاء على الاستقراء والمرضية بعد نوبات الصرع في الفئران.

نموذج الماوس إشعال الناجمة عن بينتيلينيتيترازولي

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

pentylenetetrazole-induced-kindling-mouse-model

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

Pharmacotherapy of the Epilepsies

SCIENTISTS IN ACTION

32.8K Views.  Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science. توضح هذه المقالة طريقة لإشعال المواد الكيميائية مع بينتيلينيتيترازولي هذا البروتوكول ويقدم نموذجا ماوس من الصرع. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول للتحقيق في التعرض للاستيلاء على الاستقراء والمرضية بعد نوبات الصرع في الفئران.

Video: Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Long-term Potentiation of Perforant Pathway-dentate Gyrus Synapse in Freely Behaving Mice

Studies of long-term potentiation of synaptic efficacy, an activity-dependent synaptic phenomenon having properties that make it attractive as a potential cellular mechanism underlying learning and information storage, have long been used to elucidate the physiology of various neuronal circuits in the hippocampus, amygdala, and other limbic and cortical structures. With this in mind, transgenic mouse models of neurological diseases represent useful platforms to conduct long-term&#160;potentiation (LTP) studies to develop a greater understanding of the role of genes in normal and abnormal synaptic communication in neuronal networks involved in learning, emotion and information processing. This article describes methodologies for reliably inducing LTP in the freely behaving mouse. These methodologies can be used in studies of transgenic and knockout freely&#160;behaving mouse models of neurodegenerative diseases.

Transgenic and knockout mouse models of neurological diseases are useful for studying the role of genes in normal and abnormal neurophysiology. This article describes methodologies which can be used to study long-term potentiation, a cellular mechanism which may underlie learning and memory, in transgenic and knockout freely&#160;behaving mouse models of neuropathology.

التقوية طويلة الأمد من المسار الثاقب-التلفيف المسنن سنبس في يتصرفون بحرية الفئران

Studies of long-term potentiation of synaptic efficacy, an activity-dependent synaptic phenomenon having properties that make it attractive as a potential ...

Behavior

Manipulation of Epileptiform Electrocorticograms (ECoGs) and Sleep in Rats and Mice by Acupuncture

Ancient Chinese literature has documented that acupuncture possesses efficient therapeutic effects on epilepsy and insomnia. There is, however, little research to reveal the possible mechanisms behind these effects. To investigate the effect of acupuncture on epilepsy and sleep, several issues need to be addressed. The first is to identify the acupoints, which correspond between humans, rats, and mice. Furthermore, the depth of insertion of the acupuncture needle, the degree of needle twist in manual needle acupuncture, and the stimulation parameters for electroacupuncture (EA) need to be determined. To evaluate the effects of acupuncture on epilepsy and sleep, a feasible model of epilepsy in rodents is required. We administer pilocarpine into the left central nucleus of the amygdala (CeA) to simulate focal temporal lobe epilepsy (TLE) in rats. Intraperitoneal (IP) injection of pilocarpine induces generalized epilepsy and status epilepticus (SE) in rats. Five IP injections of pentylenetetrazol (PTZ) with a one-day interval between each injection successfully induces spontaneous generalized epilepsy in mice. Recordings of electrocorticograms (ECoGs), electromyograms (EMGs), brain temperature, and locomotor activity are used for sleep analysis in rats, while ECoGs, EMGs, and locomotor activity are employed for sleep analysis in mice. ECoG electrodes are implanted into the frontal, parietal, and contralateral occipital cortices, and a thermistor is implanted above the cerebral cortex by stereotactic surgery. EMG electrodes are implanted into the neck muscles, and an infrared detector determines locomotor activity. The criteria for categorizing vigilance stages, including wakefulness, rapid eye movement (REM) sleep, and non-REM (NREM) sleep are based on information from ECoGs, EMGs, brain temperature, and locomotor activity. Detailed classification criteria are stated in the text.

Manipulation of Epileptiform Electrocorticograms ECoGs and Sleep in Rats and Mice by Acupuncture

This paper demonstrates the performance of acupuncture, epilepsy models, and the analysis of sleep in rodents. The acupuncture procedure and the identification of acupoints are described. Pilocarpine or pentylenetetrazol (PTZ) is used to induce epilepsy. Electrocorticogram (ECoG), electromyogram (EMG), brain temperature, and locomotor activity recordings are employed for sleep analysis.

التلاعب صرعي Electrocorticograms (ECoGs) والنوم في الجرذان والفئران التي الوخز بالإبر

Ancient Chinese literature has documented that acupuncture possesses efficient therapeutic effects on epilepsy and insomnia. There is, however, little ...

Inducing Post-Traumatic Epilepsy in a Mouse Model of Repetitive Diffuse Traumatic Brain Injury

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of acquired epilepsy. TBI can result in a focal or diffuse brain injury. Focal injury is a result of direct mechanical forces, sometimes penetrating through the cranium, creating a direct lesion in the brain tissue. These are visible during brain imaging as areas with contusion, laceration, and hemorrhage. Focal lesions induce neuronal death and glial scar formation and are present in 20%&minus;25% of all people who incur a TBI. However, in the majority of TBI cases, injury is caused by acceleration-deceleration forces and subsequent tissue shearing, resulting in nonfocal, diffuse damage. A subpopulation of TBI patients continues to develop post-traumatic epilepsy (PTE) after a latency period of months or years. Currently, it is impossible to predict which patients will develop PTE, and seizures in PTE patients are challenging to control, necessitating further research. Until recently, the field was limited to only two animal/rodent models with validated spontaneous post-traumatic seizures, both presenting with large focal lesions with massive tissue loss in the cortex and sometimes subcortical structures. In contrast to these approaches, it was determined that diffuse TBI induced using a modified weight drop model is sufficient to initiate development of spontaneous convulsive and non-convulsive seizures, even in the absence of focal lesions or tissue loss. Similar to human patients with acquired post-traumatic epilepsy, this model presents with a latency period after injury before seizure onset. In this protocol, the community will be provided with a new model of post-traumatic epilepsy, detailing how to induce diffuse non-lesional TBI followed by continuous long-term video-electroencephalographic animal monitoring over the course of several months. This protocol will detail animal handling, the weight drop procedure, the electrode placement for two acquisition systems, and the frequent challenges encountered during each of the steps of surgery, postoperative monitoring, and data acquisition.

This systematic protocol describes a new animal model of post-traumatic epilepsy after repetitive mild traumatic brain injury. The first part details steps for traumatic brain injury induction using a modified weight drop model. The second part provides instructions on the surgical approach for single- and multi-channel electroencephalographic data acquisition systems.

تحريض الصرع ما بعد الصدمة في نموذج الماوس من إصابات الدماغ المتكررة منتشر الصدمة

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of acquired epilepsy. TBI can result in a focal or diffuse brain injury. Focal injury is a result of ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status epilepticus (SE) is frequently selected to recapitulate spontaneous recurrent seizures (SRS). Here we present a protocol of SE induction by intraperitoneal (i.p.) injection of pilocarpine and monitoring of chronic recurring seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram (EEG) system. We demonstrated notable behavioral changes that need attention after pilocarpine injection and their correlation with hippocampal neuronal loss at 7 days and 6 weeks post-pilocarpine. We also describe the experimental procedures of electrode implantation for video and EEG recording, and analysis of the frequency and duration of chronic recurrent seizures. Finally, we discuss the possible reasons why the expected results are not achieved in each case. This provides a basic overview of modeling chronic epilepsy in mice and guidelines for troubleshooting. We believe this protocol can serve as a baseline for suitable models of chronic epilepsy and epileptogenesis.

This manuscript describes a method of inducing status epilepticus by systemic pilocarpine injection and of monitoring spontaneous recurrent seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram system. This protocol can be utilized for studying the pathophysiologic mechanisms of chronic epilepsy, epileptogenesis, and acute seizures.

نموذج Pilocarpine صرع الفص الصدغي ورصد EEG باستخدام نظام راديوتيليميتري في الفئران

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

Medicine

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique VGAT-Cre mice were used in developing spontaneous recurring seizures (SRS) after kindling and a likely mechanism - insertion of Cre into the VGAT gene - disrupted its expression and reduced GABAergic tone. The present study extends these observations to a larger cohort of mice, focusing on key issues such as how long the SRS continues after kindling and the effect of the animal's sex and age. This report describes the protocols for the following key steps: making headsets with hippocampal depth electrodes for electrical stimulation and for reading the electroencephalogram; surgery to affix the headset securely on the mouse's skull so that it does not fall off; and key details of the electrical kindling protocol such as duration of the pulse, frequency of train, duration of train, and amount of current injected. The kindling protocol is robust in that it reliably leads to epilepsy in most VGAT-Cre mice, providing a new model to test for novel antiepileptogenic drugs.

This report describes the methods to generate a model of temporal lobe epilepsy based on the electrical kindling of transgenic VGAT-Cre mice. Kindled VGAT-Cre mice may be useful in determining what causes epilepsy and for screening novel therapies.

تحضير وزرع أقطاب كهربائية لفئران VGAT-cre المشتعلة كهربائيا لتوليد نموذج لصرع الفص الصدغي

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few studies have described the experimental protocol in detail. This paper illustrates the whole process of amygdala electrical kindling epilepsy model making, with the introduction of a method of bipolar electrode fabrication. This electrode can both stimulate and record, reducing brain injury caused by implanting separate electrodes for stimulation and recording. For long-term electroencephalogram (EEG) recording purposes, slip rings were used to eliminate the record interruption caused by cable tangles and falling off.
After periodic stimulation (60 Hz, 1 s every 15 min) of the basolateral amygdala (AP: 1.67 mm, L: 2.7 mm, V: 4.9 mm) for 19.83 &plusmn; 5.742 times, full kindling was observed in six mice (defined as induction of three continuous grade V episodes classified by Racine's scale). An intracranial EEG was recorded throughout the entire kindling process, and an epileptic discharge in the amygdala lasting 20-70 s was observed after kindling. Therefore, this is a robust protocol for modeling epilepsy originating from the amygdala, and the method is suitable for revealing the role of the amygdala in temporal lobe epilepsy. This research contributes to future studies on the mechanisms of mesial temporal lobe epilepsy and novel antiepileptogenic drugs.

The amygdala plays a key role in temporal lobe epilepsy, which originates in and propagates from this structure. This article provides a detailed description of the fabrication of deep brain electrodes with both recording and stimulating functions. It introduces a model of medial temporal lobe epilepsy originating from the amygdala.

استخدام قطب كهربائي ثنائي القطب لإنشاء نموذج فأر صرع الفص الصدغي عن طريق إشعال اللوزة كهربائيا

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Handling-Induced Seizures in a Mouse Model

Source: Batot, G., et al. <a href="https://app.jove.com/v/63673">A Model for Epilepsy of Infectious Etiology using Theiler&#39;s Murine Encephalomyelitis Virus.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2022).
This video demonstrates the induction of handling-induced seizures in a mouse infected with Theiler&#39;s Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV). The infected mouse, which has hyperexcitable neurons, is exposed to external physical stimuli. This exposure causes stress, leading to abnormal electrical activity in the neurons, which results in seizures.

Source: Batot, G., et al. A Model for Epilepsy of Infectious Etiology using Theiler&#39;s Murine Encephalomyelitis Virus.&#160;J. Vis. Exp. (2022).
This ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuropathology

Epilepsy and Seizure Disorders

Triggering and Monitoring Heat-Induced Seizures in a Transgenic Mouse Model

Source: Das, A., et al. <a href="https://app.jove.com/v/62846">A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy.</a> J. Vis. Exp. (2021)
This video demonstrates the procedure to induce heat-induced seizures in a transgenic mouse with epilepsy-related gene mutations by gradually increasing body temperature in a controlled chamber. This protocol is used to study seizure mechanisms and potential therapies for epilepsy.

Source: Das, A., et al. A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy. J. Vis. Exp. (2021)
This video demonstrates the ...

Establishing a Pentylenetetrazole-Induced Epileptic Seizure Model in Mice

Source: Shimada, T., et al. <a href="https://app.jove.com/v/56573">Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model.</a> J. Vis. Exp. (2018).
This video demonstrates the process of inducing epilepsy in mice using pentylenetetrazole (PTZ) injections, a GABA-A receptor antagonist. Repeated intraperitoneal administration of PTZ progressively lowers the seizure threshold by inhibiting chloride ion influx, disrupting inhibitory neurotransmission, and leading to hyperexcitability in neurons that trigger seizures. This process results in kindling and the development of spontaneous seizures, mimicking chronic epilepsy.

Source: Shimada, T., et al. Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model. J. Vis. Exp. (2018).
This video demonstrates the process of inducing epilepsy ...

Systemic Pilocarpine Treatment: Mouse Model of Temporal Lobe Epilepsy

Source: Kim, J. E. and Cho, K. O. <a href="https://www.jove.com/video/56831/the-pilocarpine-model-temporal-lobe-epilepsy-eeg-monitoring-using">The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice</a>. J. Vis. Exp. (2018).
This video presents the procedure for inducing status epilepticus (SE) in mice by systemic administration of pilocarpine to model temporal lobe epilepsy.

علاج بيلوكاربين الجهازي: نموذج الفأر لصرع الفص الصدغي

Source: Kim, J. E. and Cho, K. O. The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice. J. Vis. Exp. ...