يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأعصاب من خلال توفير طريقة أبسط وأقل عرضة للخطأ وأكثر كميًا للتحقق من الآفات وتحديد مواقع القطب الكهربائي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بالتحقق من الآفات ومواقع القطب في الدماغ بأكمله دون الحاجة إلى القطاعات. المنتج النهائي هو حجم 3D الرقمية من الدماغ وأدمغة متعددة يمكن معالجتها بالتوازي.
على الرغم من أن هذه الطريقة سوف تظهر في الفئران، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على الكائنات الحية الأخرى، مثل الفئران وحمار وحشي. عموما، سوف الأفراد جديدة لهذه الطريقة النضال لأن بعض الخطوات تتطلب عناية خاصة لضمان أفضل النتائج. للبدء، وضع الدماغ المستخرج في محلول الوفرة في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر.
تخزين العينة لمدة يومين إلى ثلاثة أيام مع اهتزاز لطيف في أربع درجات مئوية. تأكد من أن يتم تخفيف أوسميوم في الماء وليس عازلة. وذلك لأن الماء سيكون بمثابة المنظفات خفيفة، والسماح للosmium لاختراق عمق الأنسجة.
إعداد 50 ملليلتر من 2٪ أوسميوم تتروكسيد في الماء المقطر المزدوج. ثم ضع الدماغ في أنبوب مخروطي جديد 50 ملليلتر وأضف محلول أوزميوم تتروكسيد. أغلق الأنبوب وختمه بفلم البارافين لمنع التسرب.
تخزين أنبوب مختومة في أربع درجات مئوية مع اهتزاز لطيف لمدة أسبوعين. تأكد من وضع الأنبوب أفقياً. الدماغ سميك جدا وطرق طويلة للسفر عن طريق الانتشار.
وضع أنبوب أفقيا سوف تسمح osmium للسفر أعمق في الأنسجة. بعد العينة يحضن لمدة أسبوعين، وغسلها بالماء المقطر مزدوجة خمس مرات لإزالة جميع التيتروكسي أوزميوم غير منضم من العينة. بعد ذلك، قم بغسل العينة بالماء المقطر المزدوج لمدة 30 دقيقة عند أربع درجات مئوية.
استبدل الماء المقطر المزدوج بأربعة تمييعات من الإيثانول لتجفيف العينة. لبدء عملية تسلل الراتنج، نقل العينة من خلال ثلاثة الأسيتون وثلاثة تخفيفات راتنج الأسيتون، ثم تزج العينة في 100٪ الراتنج في درجة حرارة الغرفة لمواصلة عملية التسلل. بعد ذلك، نقل العينة إلى قالب المتاح.
ضخ العينة مع 100٪ راتنج الطازجة لمدة أربع ساعات في درجة حرارة الغرفة. Degas العينة في فراغ الفرن لمدة 15 دقيقة في 45 درجة مئوية. ثم علاج العينة في الفرن لمدة 48 ساعة في 60 درجة مئوية.
وأخيرا، عندما انتهت العينة من العلاج، قشر قبالة القالب المتاح ومسحه مع آلة الأشعة المقطعية الدقيقة. في القطاعات التقليدية ، يجب أن يكون اتجاه الدماغ محددًا مسبقًا. باستخدام هذه الطريقة الدقيقة CT، يمكن التلاعب في حجم الرقمية من الدماغ عينة في ثلاثة أبعاد وشرائح تقريبا في أي اتجاه.
يؤكد المسح المجهري الإلكتروني لدماغ الفئران المعد أن الأنسجة لم تتضرر بشكل كبير لأغراض التصوير المقطعي المجهري. كما تم إعداد دماغ حمار وحشي وفحصه ضوئيًا وفقًا لهذا البروتوكول لاختبار فائدة هذه الطريقة على أدمغة الحيوانات الصغيرة الأخرى. يمكن استخدام هذه التقنية للعثور على الآفات السطحية في الدماغ ، وكذلك الآفات في عمق الدماغ.
ويمكن أيضا تطبيق هذه التقنية على موقع tetrodes واحد في الموقع، والآفات الكهالكية، ومسارات القطب، صفائف tetrode في الموقع، ومسبار السيليكون في الموقع. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر أن تسمح للدماغ بالاحتضان لفترة طويلة بما فيه الكفاية ومع ما يكفي من الانفعالات. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل optogenetics والتصوير الفوتون من أجل الإجابة على أسئلة إضافية حول الدور الذي تلعبه مناطق الدماغ المختلفة في سلوكيات مختلفة.
هذه التقنية يمكن أن تسمح للباحثين في مجال علم الأعصاب لاستكشاف أفضل العلاقات بين الهيكل والوظائف بين الدماغ والسلوك في الفئران والفئران والطيور المغردة وغيرها من الحيوانات الصغيرة. لا تنسى أن العمل مع osmium يمكن أن تكون خطرة للغاية والاحتياطات، مثل ارتداء القفازات والعمل في غطاء محرك السيارة فراغ ينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.
