Bu yöntem, lezyonları doğrulamak ve elektrot konumlarını bulmak için daha basit, daha az hataya yatkın ve daha nicel bir yöntem sağlayarak nöroloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, kesite gerek kalmadan tüm beyindeki lezyonların ve elektrot bölgelerinin doğrulanmasına olanak sağlamasıdır. Son ürün beynin dijital bir 3D hacmi ve birden fazla beyin paralel olarak işlenebilir.
Bu yöntem sıçanda gösterilecek olsa da, fareler ve zebra ispinozları gibi diğer organizmalara da uygulanabilir. Bazı adımlar en iyi sonuçları sağlamak için özel bakım gerektirdiğinden, genellikle, bu yönteme yeni bireyler mücadele edecektir. Başlamak için, 50 mililitrelik konik tüp profüzyon çözeltisi bir çıkarılan beyin yerleştirin.
Dört santigrat derecede hafif sallayarak iki ila üç gün boyunca örnek saklayın. Osmiyum suda seyreltilmiş değil, bir tampon olduğundan emin olun. Su hafif bir deterjan olarak hareket edecek, osmiyum doku içine derin nüfuz sağlayan olmasıdır.
Çift distile suda %2 osmiyum tetroksit 50 mililitre hazırlayın. Sonra yeni bir 50 mililitre konik tüp beyin yerleştirin ve osmiyum tetroksit çözeltisi ekleyin. Tüpü kapatın ve sızıntıları önlemek için parafin filmi ile kapatın.
İki hafta boyunca hafifçe sallayarak dört derece santigrat de mühürlü tüp saklayın. Tüpün yatay olarak yerleştirildiğinden emin olun. Beyin çok kalın ve difüzyon ile seyahat etmek için uzun bir yol.
Tüpü yatay olarak yerleştirmek osmiyumun dokuya daha derinden girmesini sağlayacaktır. Numune iki hafta boyunca incubates sonra, numuneden tüm bağlanmamış osmiyum tetroksit kaldırmak için beş kez çift distile su ile yıkayın. Daha sonra, dört santigrat derece 30 dakika boyunca çift distile su ile örnek yıkayın.
Numuneyi susuz leştirmek için çift distile suyu dört seyreltme etanol ile değiştirin. Rekarn infiltrasyon işlemine başlamak için, numuneyi üç aseton ve üç aseton rezorn seyreltme yoluyla hareket ettirin, ardından infiltrasyon işlemine devam etmek için numuneyi oda sıcaklığında %100 rezorna batırın. Bundan sonra, tek kullanımlık bir kalıp için örnek aktarın.
Numuneyi oda sıcaklığında dört saat boyunca taze %100 reşin ile aşılayın. Numuneyi vakumlu fırında 15 dakika 45 derecede gazdan arındırın. Sonra 60 santigrat derece 48 saat boyunca bir fırında örnek tedavi.
Son olarak, numune kürleme tamamlandığında, tek kullanımlık kalıbı soyup Micro-CT makinesiyle tarayabilirsiniz. Geleneksel kesitlerde, beynin oryantasyonu önceden belirlenmelidir. Bu Mikro-CT yöntemi kullanılarak, örnek beynin dijital hacmi üç boyutlu olarak manipüle edilebilir ve neredeyse herhangi bir yönde dilimlenebilir.
Hazırlanan sıçan beyninin taramalı elektron mikroskobu, dokunun Mikro-BT görüntüleme amacıyla önemli ölçüde zarar görmediğini doğrulamaktadır. Bir zebra ispinoz beyin de hazırlandı ve diğer küçük hayvan beyinleri üzerinde bu yöntemin yarar test etmek için bu protokole göre tarandı. Bu teknik beyinde yüzey lezyonları bulmak için kullanılabilir, yanı sıra beyin içinde derin lezyonlar.
Bu teknik aynı zamanda yerinde tek tetrodların konumuna, elektrolitik lezyonlara, elektrot izlerine, yerinde tetrode dizilerine ve silikon probların yerinde ki konumuna da uygulanabilir. Bu işlemi denerken, beynin yeterince uzun süre kuluçkaya yatmasını ve yeterince ajitasyon la kuluçkaya yatmasını unutmamak önemlidir. Bu işlemin ardından, farklı beyin bölgelerinin farklı davranışlarda oynadığı rol hakkında ek soruları cevaplamak için optogenetik ve iki foton görüntüleme gibi diğer yöntemler de uygulanmaktadır.
Bu teknik, nöroloji alanında araştırmacılar daha iyi sıçanlar, fareler, ötücü kuşlar ve diğer küçük hayvanlarda beyin ve davranış arasındaki yapı-fonksiyon ilişkilerini keşfetmek için izin verebilir. Osmiyum ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve eldiven takmak ve vakum kaputunda çalışmak gibi önlemlerin her zaman bu işlemi gerçekleştirirken alınması gerektiğini unutmayın.
