هناك حاجة إلى نماذج باستمرار لتقليد الانبثاث السرطان من خلال التفاعل مع العقد الليمفاوية. في المرضى الذين يعانون من سرطان القولون والمستقيم وسرطان الخلايا البولية في المثانة. يمكن أن تساعد نماذجنا xenographic التقويمية الموصوفة في هذه الورقة في الإجابة على هذه الأسئلة البيولوجية المهمة واختبار العلاجات الجديدة بكفاءة وبطريقة ذات صلة سريريًا.
لدينا أورام xenograft العظام المنتجة في الفئران تشبه المرضى'ورم. في وجود الخلايا اللمفية stromal كلا النموذجين لديهم زرع أعلى الورم ومعدلات الانبثاث الجهاز البعيدة والمواقع التي تحاكي أنماط النقيلي البشرية. كما أن كلا النموذجين الحيوانيين لا يُعدلان وفيات ذات صلة إجرائية.
بعد إزالة الأورام المستمدة من المريض من الفئران القتل الرحيم، واستخدام مقص الجراحية المعقمة لmince لوسيفراز قطع الورم إيجابية صغيرة قدر الإمكان في طبق بتري تحت غطاء محرك تدفق لارينار. نقل قطع الورم إلى أنبوب مخروطي معقم 50 مل. لإعداد حل هضم، إضافة 10 مل من نوع الكولاجيناز 4، 80 ميكرولترات من الهيالورونيداسي و 160 ميكرولترات من نوع deoxyribonuclease 1 إلى 40 مل من HBSS ومزيج عن طريق عكس.
إضافة 35-40 مل من الحل هضم إلى ورم مفروم واحتضان في 37 درجة مئوية مع دوران مستمر لمدة 2 ساعة مع اهتزاز قوي الدوري. لإزالة الحطام بعد الهضم، تصفية الورم المهضم من خلال مصفاة خلية 100 ميكرومتر معقم تليها الترشيح من خلال مصفاة خلية 40 ميكرومتر إنقاذ تدفق من خلال في أنبوب 50 مل في كل مرة والتخلص من الحطام. لغسل الخلايا الحرة، إضافة 20 مل من HBSS إلى تدفق من خلال والطرد المركزي في 329 مرة الجاذبية لمدة 5 دقائق.
التعرق وssuspend بيليه في 30 مل من HBSS. نقل 100،000 الخلايا السرطانية إلى أنبوب مخروطي معقم 15 مل وإضافة 300،000 خلايا هونج كونج الطازجة المعدة سابقا. الطرد المركزي الخلايا في 329 مرة الجاذبية لمدة 5 دقائق والتخلص من مُطَعَرِع بالطموح.
إعادة تعليق الخلايا في متوسطة كاملة RPMI والحفاظ على الجليد حتى جاهزة للاستخدام. لإعداد الحيوان لحقن خلية UCC استخدام كريم إزالة الشعر لحلاقة أسفل الظهر من 6-8 أسابيع أنثى الماوس NOD-SCID. لإدارة خلايا UCC في المثانة، أول إعداد آلة كهربائي monopolar إلى قوة 4 واط.
بعد تخدير الماوس، وضعه في موقف سوبين مع خطم في مخروط الأنف isoflurane وعارية إلى الوراء على أساس ثابت على قطب مشتت. تليين angiocatheter قياس 24 مع هلام التشحيم ومن ثم إدراج أنجيوكاثيتر بلطف ولكن بحزم من خلال مجرى البول الماوس. إذا انحنى القسطرة عند الدخول، أدخل سلكًا إرشاديًا في منتصف الطريق إلى القسطرة لتوفير الاستقرار.
ثم، إدراج كامل 0.64 ملليمتر ثابت الأساسية الأسلاك دليل مستقيم 1 ملليمتر الماضي نهاية angiocatheter. عقد دبوس monopolar إلى السلك دليل لثانية واحدة مما يسمح لتهيج كهربائي من الغشاء المخاطي المثانة. نعلق الطازجة, العقيمة أنجيوكاثيتير إلى 1 مل جنيه قفل حقنة ورسم ما يصل إلى 200 ميكرولترات من خلايا UCC أعدت في الخطوات السابقة.
إزالة سلك دليل وعنيو أوعية من مجرى البول ثم أدخل angiocatheter مع حقنة من الخلايا المرفقة به. حقن 50 ميكرولترات من الخلايا إلى المثانة الماوس والسماح للخلايا للتمسك جدار المثانة، والانتظار بضع ثوان قبل إزالة angiocatheter. وأخيرا، إزالة الماوس من مخروط الأنف isoflurane ومنصة التأريض ومراقبة ذلك لمدة 1 ساعة بعد الإجراء لعلامات الضيق.
لإنشاء نموذج الماوس CRC، وضع تخدير 6-8 الأسبوع الذكور القديمة NOD-SCID الماوس في موقف سوبين تحت مجهر تشريح تأمين خطم إلى ومخروط الأنف isoflurane والأطراف الأمامية مع الشريط للاستقرار. وضع كائن صغير مثل قسم الشاش صغيرة تحت قاعدة الذيل رفع فتحة الشرج لتحسين القدح والزاوية. استخدام ملقط مقللة مُزحمة المنحنية لتمدد القناة الشرجية وفضح الغشاء المخاطي الشرجي والمستقيم وإزالة البراز.
قم بتوصيل إبرة معقم 30 قياس القابلة للإزالة إلى حقنة زجاجية 50 ميكرولتر. رسم 10 ميكرولترات من الورم وخلايا هونج كونج تعليق الخلايا المعدة في الخطوات السابقة في الحقنة. حقن 10 ميكرولترات في المستقيم الخلفي القاصي submucosa 1-2 ملليمتر فوق القناة الشرجية مع التأكد من عدم المرور إلى تجويف الحوض.
وأخيرا، إزالة الماوس من مخروط الأنف isoflurane ومراقبته لمدة ساعة واحدة بعد الإجراء لعلامات الضيق. لمراقبة الأسبوعية الورم الأساسي, الكبد والرئة عبء النقيلي في أي نموذج الماوس, أولا, تزن الماوس. حقن 150 ملغ / كغ لوسيفيرين داخل البريتونية وانتظر 5 دقائق لركيزة لتعميم في الجسم.
ضع الفأر المُجَدَّد في نظام تصوير بيولوجي الإضاءة مع أنف ثابت في مخروط الأنف مع التأكد من أن منطقة الاهتمام، وهي الجانب البطني للحيوان تواجه الكاميرا لكل صورة. الماوس الصورة في موقف سوبين الأسبوعية لنشاط لوسيفرايز. بعد تشريح وتلطيخ الأنسجة المعزولة المضمّنة من البارافين، راقبها باستخدام مجهر عالي الطاقة.
في نموذج الماوس UCC، ولدت 83.3 في المئة من الحيوانات الأورام الأولية وعرض نمو الورم الأساسي المعتمد على الوقت على أساس قياسات التخمة الحيوية الأسبوعية. في نموذج الماوس CRC, 96.9٪ من الفئران نمت الأورام الأولية. اعتمادا على ورم المريض، وكان نمو ورم الماوس فترة الكمون مختلفة، مما يعكس الفرق في الخصائص المرضية السريرية.
في كل من داخل الحويساء وفيما بين المستقيم النماذج, حقن الخلايا الورم ولدت الأورام الأولية العظام. وعلاوة على ذلك، 33.3٪ و 53.1٪ من الفئران غرست مع خلايا UCC و CRC الخلايا مع خلايا هونج كونج، على التوالي، وضعت الانبثاث الجهاز البعيد. مقارنة علم الأنسجة من xenografts في نموذج UCC إلى سرطان المثانة المريض الابتدائي.
وكانت نتائج تلطيخ من xenografts مماثلة لتلك الموجودة في الخزعات الجراحية الأصلية، مما يؤكد مورفولوجيا الأنسجة مماثلة. يظهر الجسم المضاد لـ Ki67 ، وهو علامة انتشار الخلايا البشرية ، تلطيخًا نوويًا إيجابيًا يشير إلى خلايا ورم بشرية سريعة الانتشار وسريعة النمو. وبالمثل ، في نموذج لجنة حقوق الطفل ، يشير تلطيخ H & E إلى تشابه العمارة بين xenografts وأورام المرضى.
كما أظهرت تلطيخ الأجسام المضادة ضد السيتوكيراتين 20 نمط نمو ورم مماثل في كلا نموذجي CRC. مفتاح هذه الإجراءات هو التعامل مع الحيوانات بلطف، ولكن بحزم. الممارسة مع اليد ثابتة هو أفضل وسيلة لأداء هذه التقنيات بأمان وتحقيق أفضل النتائج.
وبمجرد أن يتم إجراء هذه النماذج، يمكن اختبار أشكال مختلفة متعددة من علاجات السرطان، بما في ذلك مجموعات من الأدوية الحالية وكذلك العلاجات المطورة حديثا قبل التجارب السريرية في المرضى. من المهم أن نتذكر أن التعامل مع كل من الخلايا السرطانية والإبر ينبغي أن يؤديها الموظفين ذوي الخبرة لسلامتهم وكذلك لتحقيق النتائج المثلى.
