Modeller sürekli lenf düğümleri ile etkileşim yoluyla kanser metastazı taklit etmek için gerekli olan. Hem kolorektal kanser li hem de mesanenin ürotelyal hücreli kanseri olan hastalarda. Bu yazıda açıklanan ortotopik knenografik modellerimiz bu önemli biyolojik soruların cevapılmasına ve yeni tedavilerin etkin ve klinik olarak uygun bir şekilde test edilebilebilir.
Farelerde üretilen ortotopik ksenogreft tümörlerimiz hastaların tümörüne benzer. Lenf nodu stromal hücrelerinin varlığında her iki modelde de daha yüksek tümör implantasyonu ve uzak organ metastazı oranları ve insan metastatik desenleri taklit eden konumlar vardır. Ayrıca, her iki hayvan modelinde de usule bağlı mortalite sıfırdır.
Ötenazi li farelerden hasta kaynaklı tümörleri çıkardıktan sonra, laminaakış kaputunun altındaki petri kabında mümkün olduğunca küçük olan pozitif tümör parçalarını kıymak için steril cerrahi makas kullanın. Tümör parçalarını steril 50 mL konik tüpe aktarın. Sindirim çözeltisi hazırlamak için, kollajenaz tip 4 10 mL, hyaluronidaz 80 mikrolitre ve deoksiribonükle azm 1 ila 40 mL HBSS ve ters karıştırarak 160 mikrolitre ekleyin.
Kıyılmış tümöre 35-40 mL sindirim çözeltisi ekleyin ve periyodik güçlü sallayarak 2 saat boyunca sürekli rotasyon ile 37 santigrat derecede kuluçka. Sindirim sonrası enkaz kaldırmak için, steril 100 mikrometre hücre süzgeci ile sindirilmiş tümör filtre 40 mikrometre hücresüz ile filtrasyon her zaman bir 50 mL tüp üzerinden akışı kaydederek ve enkaz atarak. Serbest hücreleri yıkamak için, akışa 20 mL HBSS ekleyin ve 5 dakika boyunca 329 kez yer çekiminde santrifüj edin.
Supernatant aspire ve HBSS 30 mL pelet resuspend. Transfer 100, 000 tümör hücreleri steril 15 mL konik tüp ve eklemek 300, 000 önceden hazırlanmış taze HK hücreleri. Hücreleri 5 dakika boyunca 329 kez yer çekiminde santrifüj edin ve aspirasyonla süpernatant'ı atın.
Hücreleri tam RPMI ortamında yeniden askıya alın ve kullanıma hazır olana kadar buzda tutun. UCC hücre enjeksiyonu için hayvan hazırlamak için 6-8 haftalık kadın NOD-SCID fare alt sırt tıraş için epilasyon kremi kullanın. Bir mesane içine UCC hücreleri yönetmek için, ilk 4 watt bir güç için bir monopolar elektrokoter makinesi kurmak.
Fareyi anestezi ettikten sonra, burnu yla burun haline getirin ve dağınık bir elektrot üzerine sıkıca topraklanmış çıplak sırt. 24 gauge anjiyokateteri yağlayıcı jöle ile yağlayın ve anjiyokateteri fare üretrasına hafifçe ama sıkıca takın. Kateter girişte bükülürse, stabilite sağlamak için kılavuz teli katetere yarıya kadar takın.
Daha sonra, anjiyokateterin ucunun 1 milimetre uzamasına 1 mm geçmiş 0,64 milimetrelik sabit çekirdekli düz kılavuz teli tam olarak takın. Mesane mukozasının elektriksel tahrişine izin veren monopolar pimi kılavuz teliçin bir saniye tutun. 1 mL leur kilit şırıngasına taze, steril anjiyokateter takın ve önceki adımlarda hazırlanan 200 mikrolitre ye kadar UCC hücresi çizin.
Kılavuz teli ve anjiyokateterüretyişten çıkarın ve sonra ona bağlı hücrelerin şırınga ile anjiyokateter takın. Fare mesane sine hücrelerin 50 mikrolitre enjekte ve hücrelerin mesane duvarına uymak için izin vermek için, anjiyokateter çıkarmadan önce birkaç saniye bekleyin. Son olarak, fareyi izoflurane burun konisi ve topraklama pedinden çıkarın ve sıkıntı belirtileri için prosedürü takip eden 1 saat boyunca gözlemleyin.
CRC fare modeli oluşturmak için, bir diseksiyon mikroskop altında supine pozisyonda anestezi 6-8 haftalık erkek NOD-SCID fare yerleştirin ve isoflurane burun konisi ve istikrar için bant ile ön ekstremite güvenliğini sağlar. Vizite ve açıyı iyileştirmek için anüs yükselterek kuyruk tabanının altına küçük bir gazlı bez bölümü gibi küçük bir nesne yerleştirin. Anal kanalı dizmek ve distal anal ve rektal mukozayı ortaya çıkarmak ve dışkı çıkarmak için kavisli yünlenmiş künt uçlu forceps kullanın.
Steril 30 gauge çıkarılabilir iğneyi 50 mikrolitrelik cam şırıngaya bağlayın. Şırınga içine önceki adımlarda hazırlanan tümör ve HK hücre süspansiyon 10 mikrolitre çizin. 10 mikrolitreyi anal kanalın 1-2 milimetre yukarısındaki distal posterior rektal submukozaya enjekte edin ve pelvik kaviteye geçmemesini unutmayın.
Son olarak, izoflurane burun konisi fare çıkarın ve sıkıntı belirtileri için işlem den sonra bir saat gözlemleyin. Her iki fare modelinde birincil tümör, karaciğer ve akciğer metastatik yükü haftalık izlemek için, ilk, fare tartmak. Periton içi 150 mg/kg luciferin enjekte edin ve substratın vücutta dolaşmasını 5 dakika bekleyin.
Burun koni sabit burun ile bir biyolüminesans görüntüleme sistemi içinde anestezili fare yerleştirin ilgi alanı, hangi hayvanın ventral tarafı her görüntü için kamera karşı karşıya olduğundan emin olun. Luciferase etkinliği için haftalık supine konumunda görüntü fare. Parafin gömülü izole dokuları dilimleyip boyandan sonra, yüksek güçlü bir mikroskop kullanarak gözlemleyin.
UCC fare modelinde hayvanların yüzde 83.3'ü primer tümör üretti ve haftalık biyolüminesans ölçümlerine göre zamana bağlı primer tümör büyümesi gösterdi. CRC fare modelinde farelerin %96.9'u primer tümör olarak yetişmiştir. Hasta tümörüne bağlı olarak, fare tümörü büyümesi farklı bir gecikme süresine sahipti ve bu da hastaların klinik özelliklerindeki farkı yansıtıyordu.
Hem intra-vezikül hem de intra-rektal modellerde tümör hücre enjeksiyonu ortotopik primer tümörler üretti. Ayrıca, ucc hücreleri ve HK hücreleri ile CRC hücreleri ile aşılanan farelerin% 33.3 ve% 53.1, sırasıyla, uzak organ metastazı gelişti. UCC modelinde ksenogreftlerin histopatolojisi primer hasta mesane karsinomu ile karşılaştırıldı.
Ksenogreftlerden elde edilen boyama sonuçları orijinal cerrahi biyopsilerde benzerdi ve benzer doku morfolojisini doğruladı. Ki67 antikor, bir insan hücre çoğalma belirteci, pozitif nükleer boyama gösteren son derece çoğalan, hızlı büyüyen insan tümör hücreleri. Benzer şekilde, CRC modelinde, H&E boyama ksenogreftler ve hasta tümörleri arasındaki mimari benzerliğini gösterir.
Sitokatin 20'ye karşı antikor boyama da her iki CRC modelinde de benzer tümör büyüme paterni gösterdi. Bu prosedürlerin anahtarı hayvanlara nazik ama sıkıca davranmaktır. Sabit bir el ile uygulama güvenli bir şekilde bu teknikleri gerçekleştirmek ve en iyi sonuçları elde etmek için en iyi yoldur.
Bu modeller yapıldıktan sonra, kanser tedavilerinin birden fazla farklı formları test edilebilir, mevcut ilaçların kombinasyonları da dahil olmak üzere yanı sıra hastalarda klinik çalışmalar öncesinde yeni geliştirilen tedaviler. Hem kanser hücrelerinin hem de iğnelerin kullanımının hem de en iyi sonuçları elde etmek için deneyimli personel tarafından yapılması gerektiğini unutmamak gerekir.
