慢性胰腺炎是一种复杂的疾病,涉及胰腺炎症、纤维化、腹痛和其他症状。胆管TNBS输液模型复制慢性胰腺炎患者观察到的神经病变疼痛。这种胆管TNBS输液方案经过优化,在小鼠中诱导慢性胰腺炎模型的产生。
由于小鼠的胆管药物融合在技术上具有挑战性,其可视化将有助于研究人员对该方法的新发现。手术前两周和手术后三周,使用冯弗雷单体施加不同程度的力,以提升顺序对上腹部区域的8至10周大,C57黑6小鼠,10次,每次应用1至2秒。考虑提高腹部的缩回或舔作为积极的反应。
接下来,装载装有 31 量针的胰岛素注射器,该注射器配有 50 微升新制备的 0.75% TNBS 溶液。将第二个注射器与 50 微升 10% 乙醇一起装在盐水中作为车辆控制,并将两个注射器放在冰上,防止光线照射。在确认对踏板反射缺乏反应后,通过剃须或涂抹脱毛霜将麻醉小鼠的腹部区域的头发取出,并将鼠标放在解剖显微镜下的加热手术垫上。
将兽药膏涂在每只眼睛上,用三个连续的2%碘和3个70%的乙醇湿巾对手术部位进行消毒,使用微型剪刀连续运动0.5至1厘米,并用棉签轻轻地暴露十二指肠,定位普通胆管。为了防止治疗流入肝脏和胆囊,使用显微镜在近界普通导管上放置一个直的微血球,并通过桶的将 TNBS 装载的注射器的针头插入胰腺导管。使用弯曲的微血球固定针头,并在一分钟内将溶液注入胰腺导管。
当所有溶液都交付时,小心地取下微夹,并确认十二指肠已恢复到原来的位置。在腹腔关闭之前,加入500微升36至37摄氏度的无菌盐水,以帮助十二指肠恢复其原来的位置,并协助恢复永久性。使用连续缝合与五O缝合,以关闭肌肉层的切口,并关闭皮肤使用中断的缝合与四O缝合。
然后将鼠标放在加热垫上的回收笼中,进行监控,直到完全恢复。在手术后的第一周,每天监测小鼠的健康和行为,以发现不适的迹象,如发声、驼背姿势或减少运动,每隔一天测量一次体重。观察到,注射50微升墨水,证明结果导致整个胰腺的渗透,允许诱导一个更同质的疾病表型。
在这个具有代表性的分析中,在手术后的头三天,对照组的小鼠在逐渐恢复之前减掉了原体重的6%左右,到第21天体重增加了100%以上。相比之下,接受TNBS治疗的老鼠在手术后的头五天里减掉了原体重的15%,到第21天体重恢复到原来的100%以下。与对照小鼠相比,TNBS注射的动物在手术后的第二周和第三周表现出腹部机械过敏性增加。
与从对照动物身上采集的胰腺相比,TNBS小鼠的胰腺体型和体重显著减少,这表明TNBS治疗的动物的胰腺萎缩明显,与患有严重和长期慢性胰腺炎的人类发现一致。对控制乙醇治疗小鼠胰腺组织部分的组织学分析显示,其形态正常,而TNBS治疗小鼠的组织部分则表现出空隙实现,大量丧失了被脂肪细胞渗透和纤维化所取代的细胞。防止注射的 TNBS 进入膀胱和肠道很重要,因为 TNBS 具有组织破坏性影响。
输液期间,保持手尽可能稳定,以避免胆管穿刺作用。除了诱导慢性胰腺炎的发展,这种胆管输液小鼠艺术可用于其他胰腺疾病模型的发展。这种TNBS慢性胰腺炎小鼠模型可用于研究慢性胰腺炎的发病机制和治疗以及其他胰腺疾病。