La pancreatite cronica è una malattia complessa che coinvolge l'infiammazione pancreatica, la fibrosi, il dolore addominale e altri sintomi. Il modello di infusione TNBS del dotto biliare replica il dolore neuropatico osservato nei pazienti con pancreatite cronica. Questo protocollo di infusione TNBS del dotto biliare è stato ottimizzato per indurre la generazione di un modello di pancreatite cronica nei topi.
Poiché la fusione di farmaci per i dotti biliari nei topi è tecnicamente impegnativa, la sua visualizzazione sarà utile ai ricercatori nuovi al metodo. Prima e due e tre settimane dopo l'intervento chirurgico, utilizzare i monofili di Von Frey per applicare diversi livelli di forza in ordine crescente alla zona addominale superiore di un topo da otto a 10 settimane, C57 nero sei, 10 volte per uno o due secondi per applicazione. Considera di aumentare la retrazione o la leccatura dell'addome come risposta positiva.
Quindi, caricare una siringa da insulina dotata di un ago calibro 31 con 50 microlitri di una soluzione TNBS al 0,75% appena preparata. Caricare una seconda siringa con 50 microlitri di etanolo al 10% in soluzione salina come controllo del veicolo e posizionare entrambe le siringhe sul ghiaccio al riparo dalla luce. Dopo aver confermato una mancanza di risposta al riflesso del pedale, rimuovere i peli dalla regione addominale del topo anestetizzato radendosi o applicando la crema per la depilazione e posizionare il mouse su un pad chirurgico riscaldato sotto un microscopio sezionante.
Applicare un unguento veterinario su ciascun occhio e disinfettare il sito chirurgico con tre salviette sequenziali al due percento di iodio e tre salviette al 70 percento di etanolo utilizzare micro forbici per praticare un'incisione da 0,5 a un centimetro in un movimento continuo e utilizzare tamponi di cotone per esporre delicatamente il duodeno e per individuare il dotto biliare comune. Per impedire il flusso del trattamento nel fegato e nella cistifellea, utilizzare il microscopio per posizionare una micro emoclip diritta sul dotto comune prossimale e inserire l'ago della siringa caricata TNBS attraverso la papilla di vater nel dotto pancreatico. Utilizzare una micro emoclip curva per fissare l'ago e infondere la soluzione nel dotto pancreatico nel corso di un minuto.
Quando tutta la soluzione è stata consegnata, rimuovere con attenzione i micro morsetti e confermare che il duodeno è tornato nella sua posizione originale. Prima della chiusura della cavità addominale, aggiungere 500 microlitri da 36 a 37 gradi Celsius soluzione salina sterile per aiutare il duodeno a tornare nella sua posizione originale e per aiutare con il recupero della peristalsi. Utilizzare una sutura continua con un punto cinque O per chiudere l'incisione nello strato muscolare e chiudere la pelle usando una sutura interrotta con un punto quattro-O.
Quindi posizionare il mouse in una gabbia di recupero su una piastra riscaldante con monitoraggio fino alla completa reclinenza. Monitorare la salute e il comportamento del topo ogni giorno durante la prima settimana post-operatoria per segni di disagio, come vocalizzazione, una postura della schiena curva o ridurre la locomozione e misurare il peso corporeo a giorni alterni. Come osservato, l'iniezione di 50 microlitri di inchiostro come dimostrato provoca l'infiltrazione dell'intero pancreas, consentendo l'induzione di un fenotipo di malattia più omogeneo.
In questa analisi rappresentativa, nei primi tre giorni dopo l'intervento chirurgico, i topi nel gruppo di controllo hanno perso circa il sei percento del loro peso corporeo originale prima di recuperare gradualmente e guadagnare oltre il 100% del loro peso corporeo originale entro il giorno 21. Al contrario, i topi che hanno ricevuto TNBS hanno perso circa il 15% del loro peso corporeo originale durante i primi cinque giorni dopo l'intervento chirurgico e hanno riacquistato poco meno del 100% del loro peso corporeo originale entro il giorno 21. Rispetto ai topi di controllo, gli animali iniettati con TNBS hanno mostrato un aumento dell'ipersensibilità meccanica addominale durante la seconda e la terza settimana dopo l'intervento chirurgico.
Le dimensioni e il peso per peso corporeo dei pancreas sono stati significativamente ridotti nei topi TNBS rispetto ai pancreas raccolti da animali di controllo, suggerendo una marcata atrofia pancreatica negli animali trattati con TNBS coerente con i risultati negli esseri umani con pancreatite cronica grave e a lungo termine. L'analisi istologica delle sezioni di tessuto pancreatico di topi trattati con etanolo di controllo ha mostrato una morfologia normale, mentre le sezioni di tessuto di topi trattati con TNBS hanno mostrato una realizzazione vacua con una massiccia perdita di cellule acinari che sono state sostituite da infiltrazione di cellule adipose e fibrosi. Impedire al TNBS iniettato di entrare nella vescica gal e nell'intestino è importante in quanto un TNBS ha effetti dannosi per i tessuti.
Durante l'infusione, mantenere la mano il più stabile possibile per evitare di agire in puntura sul dotto biliare. Oltre a indurre lo sviluppo di pancreatite cronica, questa arte dei topi per infusione del dotto biliare può essere utilizzata per lo sviluppo di altri modelli di malattia pancreatica. Questo modello murino di pancreatite cronica TNBS può essere utilizzato per studiare sia la patogenesi che il trattamento della pancreatite cronica e di altre malattie pancreatiche.
