الغرض الرئيسي من هذه الدراسة هو استخدام نموذج الفأر لربط cecal والإنتان الناجم عن البزل لتقييم المؤشرات الحيوية الموثوقة للدم للإنتان. ربط وثقب Cecal ، أو CLP باختصار ، هو نموذج ذو صلة سريريا للإنتان. CLP هو نموذج شائع الاستخدام في أبحاث الإنتان.
هيستون سيترولين H3 ، أو CitH3 ، ينشأ من NETosis الناجم عن الإنتان. توضح دراستنا السابقة أن CitH3 هو مؤشر حيوي تشخيصي موثوق به للإنتان. حدد ذكور C57BL / 6 فئران.
وزن الماوس ، وتخدير الماوس عن طريق استنشاق 1.5 ٪ إيزوفلوران. ثبت الماوس على وسادة التدفئة. ضع كريم مزيل الشعر على البطن واتركه لمدة لا تزيد عن دقيقة واحدة قبل إزالة الكريم والشعر.
إعداد أدوات جراحية معقمة مناسبة لجراحة القوارض. تطهير جلد البطن باليود ثلاث مرات على الأقل. قم بتغطية المنطقة الجراحية الجراحية بالستائر الجراحية المعقمة المناسبة.
استخدم مقصا جراحيا معقما لعمل شق بطول سنتيمترين تقريبا في جدار البطن ، على طول خط ألبا. تحديد وعزل الأعور من التجويف البريتوني مع ملاقط معقمة. Ligate 75 حجم الأعور مع 4-0 خياطة الحرير.
لا تقم بربط الأوعية الدموية المساريقية. تجدر الإشارة إلى أن نسبة مختلفة من الأعور المربوط تحدد شدة الإنتان. 25٪ يؤدي إلى تعفن الدم منخفض الدرجة ، و 50٪ يؤدي إلى تعفن الدم من الدرجة المتوسطة ، و 75٪ يؤدي إلى تعفن الدم عالي الدرجة.
ثقب الأعور بواسطة ثقب واحد من خلال ومن خلال إبرة قياس 21 في نقطة المنتصف بين نهاية الذيل وربط. اضغط برفق على البراز من الأعور من خلال ثقوب الاختراق. تجدر الإشارة إلى أن كمية البراز التي يتم ضغطها في التجويف البريتوني يجب أن تكون متسقة ، لأن البراز يحدد أيضا شدة الإنتان.
استبدل الأعور وكذلك البراز في تجويف البطن بلطف. أغلق طبقة عضلات البطن وطبقة الجلد بخياطة حريرية 6-0. تطهير شق مع اليود.
يجب إجراء حقن الكيتوبروفين ، خمسة ملليغرام لكل كيلوغرام ، في الربع السفلي الأيسر من البطن لتجنب الأعور. ضع الماوس على وسادة التدفئة حتى الشفاء التام. يتم وضع الماوس في غرفة يتم التحكم في درجة حرارتها ويتم منحه حرية الوصول إلى الطعام والماء.
سيتم القتل الرحيم للحيوانات عن طريق جرعة زائدة من ثاني أكسيد الكربون مع أعراض الإنتان ، ذات الصلة بنقاط النهاية المحددة مسبقا بناء على دراستنا المقدمة. تنقسم الفئران عشوائيا إلى مجموعة وهمية ومجموعة CLP ومجموعة علاج CLP بالإضافة إلى Cl-amidine أو YW3-56. تتلقى الفئران في المجموعة الوهمية جميع إجراءات CLP باستثناء ربط الأعور والبزل.
حصاد الدم المحيطي في 24 ساعة بعد الجراحة وإعداد المصل من خلال الطرد المركزي. تم تحديد تركيز CitH3 عن طريق النشاف الغربي ومجموعة ELISA المطورة ذاتيا. كما هو موضح في الشكل الثاني ، لم يتم اكتشاف CitH3 في المجموعة الوهمية.
تم رفع مستويات CitH3 بعد إدخال CLP ، والذي تم تخفيفه بواسطة تثبيط PAD بشكل ملحوظ. بناء على بياناتنا ، نستنتج أن تعميم CitH3 هو مؤشر حيوي تشخيصي موثوق به للإنتان.
