يسمح هذا البروتوكول للمستخدم بتحقيق تعبير جيني محوري فعال في عضلة القلب البطينية ، مما يسهل دراسات التعبير الجيني لفحص عدم انتظام ضربات القلب ووظيفته في أنسجة البطين. تعتبر تقنية التعبير الجيني المحورة الفيروسية طفيفة التوغل بالنسبة للحيوان ، مما يتسبب في ضرر أقل وتقليل وقت الشفاء من الأساليب التقليدية التي تنطوي على بضع الصدر. تقنية إحداث عدم انتظام ضربات القلب في قلوب القوارض الصغيرة مفيدة لتقييم قابلية عدم انتظام ضربات القلب في نماذج الحيوانات الصغيرة لأمراض القلب.
ستوضح الإجراء الدكتورة أليس لو ، زميلة ما بعد الدكتوراه من المختبر. للبدء ، قم بتعقيم منطقة الصدر السفلية اليسرى للفأر المخدر بجولات متناوبة من فرك قائم على اليود أو الكلورهيكسيدين ، في الكحول ، ثلاث مرات في حركة دائرية. تحت توجيه التصوير بالموجات فوق الصوتية ، أدخل إبرة المحقنة التي تحتوي على الفيروس في صدر الحيوان.
اقترب من طرف الإبرة في الجدار الأمامي الأيسر الحر وحقن ببطء 10 إلى 15 ميكرولتر من الفيروس. تحقق من نجاح الحقن في صور الموجات فوق الصوتية من خلال السطوع المحسن بالقرب من طرف الإبرة. اسحب الإبرة من القلب وأدخلها في مناطق أخرى من البطين الأيسر للحصول على حقنة ثانية وثالثة من نفس الكمية من الفيروس.
لإجراء نضح Langendorff لقلب الفأر ، ضع القلب المقنن في طبق بلاستيكي مطلي بالسيليكون المطاط الصناعي يبلغ طوله 10 سم ، مع توجيه البطين الأيسر لأعلى. قنية الشريان الأورطي للقلب بإبرة حادة متصلة بنظام وفرة Langendorff المعدل في وضع معدل التدفق الثابت. قم بتخلل القلب بمحلول Tyrode ذو الفقاعات الأكسجينية عند 37 درجة مئوية.
في بداية التروية ، تحقق من قنية الأبهر الصحيحة من خلال مراقبة غسل الدم من القلب خلال أول نبضتين إلى ثلاث نبضات قلب وتغيير لون القلب من الأحمر إلى الشحوب. اضبط معدل التدفق للحفاظ على ضغط التروية عند 70 إلى 80 ملم من الزئبق. بعد التأكيد ، ضع أقطاب نظام تخطيط القلب لحيوان صغير حول القلب عن طريق إدخالها في طلاء السيليكون والمطاط الصناعي في الطبق.
بعد ذلك ، قم بتسجيل مخطط كهربية القلب باستخدام برنامج متوافق. بعد ذلك ، قم بإجراء تحفيز للمستقبلات الأدرينالية وقم بتزويد القلب بمحلول الأيزوبروتيرينول والتيرودي. بعد 10 دقائق ، قم بإجراء تحفيز كهربائي مبرمج للحث على عدم انتظام ضربات القلب البطيني عن طريق تحفيز القلب في القمة باستخدام قطبين كهربائيين من البلاتين متصلين بمحفز كهربائي.
ابدأ إجراء التحفيز ب 10 محفزات أولية متتالية ، S1 ، متبوعة بحافز إضافي ، S2 ، بفاصل أولي قدره 80 مللي ثانية. بعد ذلك ، قم بتقليل الفاصل الزمني S2 بشكل متكرر بمقدار ميلي ثانية في كل مرة حتى لا يمكن التقاط نبضات القلب أو الوصول إلى فترة المقاومة الفعالة للقلب ، أو ERP. راقب أي تسرع القلب البطيني المستحث، بما في ذلك تسرع القلب البطيني والرجفان، عن طريق تخطيط كهربية القلب.
إذا لم يتم إحداث عدم انتظام ضربات القلب. أضف حافزا إضافيا آخر ، S3 ، بعد S2 ، بنفس المعلمات حتى يتم الوصول إلى ERP. إذا كان عدم انتظام ضربات القلب البطيني لا يزال غير مستحث ، فتوقف عن التحفيز الكهربائي واعتبر القلب غير محرضا.
أثناء التحفيز الكهربائي المبرمج ، يتم التحقق من سرعة القلب الناجحة من خلال التقاط نبضات القلب بشكل فردي أثناء محفزات S1 المتتالية ومجمع QRS المطول أثناء سرعة S1. لم تتسبب هذه المحفزات الأدرينالية والكهربائية مجتمعة في عدم حدوث عدم انتظام ضربات القلب البطيني في قلوب الفئران البرية الصحية التي تعمل بالخداع ، أو في السيطرة على قلوب الفئران المحقونة بالفيروس الغدي GFP. في المقابل ، تسبب نفس البروتوكول في عدم انتظام ضربات القلب البطيني في 77٪ من قلوب الفئران من النوع البري بعد احتشاء عضلة القلب وفي ثلاثة من كل أربعة فئران بعد حقن Ad-Wnt3a داخل عضلة القلب.
أثناء إدخال الإبرة، تأكد من أن طرف الإبرة مضمن داخل الجدار الحر وليس داخل البطين. كما أن تأمين الشريان الأورطي للقلب وقنيته هو الخطوة الأكثر أهمية. باتباع هذه الإجراءات ، يمكن استخدام القلوب للدراسات النسيجية القياسية أو فحوصات البيولوجيا الجزيئية.
بدلا من ذلك ، يمكن عزل الخلايا الحية من أجل إجراء دراسات الفيزيولوجيا الكهربية أحادية الخلية.
