פרוטוקול זה מאפשר למשתמש להשיג ביטוי טרנסגני יעיל בשריר הלב החדרי, ומקל על מחקרי ביטוי גנים לבחינת הפרעות קצב לב ותפקוד ברקמת החדר. הטכניקה לביטוי טרנסגנים נגיפיים היא זעיר פולשנית עבור החיה, וגורמת פחות נזק ומקצרת את זמן ההחלמה מאשר גישות קונבנציונליות הכוללות כריתת בית חזה. הטכניקה לגרימת הפרעות קצב בלבבות מכרסמים קטנים שימושית להערכת הרגישות להפרעות קצב במודלים של בעלי חיים קטנים של מחלות לב.
מי שתדגים את ההליך תהיה דוקטור אליס לו, פוסט-דוקטורנטית מהמעבדה. כדי להתחיל, לעקר את אזור החזה התחתון השמאלי של העכבר המרדים עם סיבובים מתחלפים של קרצוף מבוסס יוד או על בסיס כלורהקסידין, באלכוהול, שלוש פעמים בתנועה מעגלית. בהנחיית הדמיית אולטרסאונד, יש להחדיר את מחט המזרק המכיל את הנגיף לחזה של החיה.
מתקרבים לקצה המחט לתוך הקיר החופשי הקדמי של החדר השמאלי ומזריקים באיטיות 10 עד 15 מיקרוליטרים של הנגיף. ודא הזרקה מוצלחת בתמונות אולטרסאונד על ידי הבהירות המשופרת ליד קצה המחט. למשוך את המחט מהלב ולהחדיר לאזורים אחרים של החדר השמאלי עבור זריקה שנייה ושלישית של אותה כמות של הנגיף.
כדי לבצע זלוף לנגנדורף של לב העכבר, הניחו את הלב המשומר בצלחת פלסטיק מצופה סיליקון-אלסטומר, באורך 10 סנטימטרים, כאשר החדר השמאלי פונה כלפי מעלה. ניתן לנטרל את אבי העורקים של הלב עם מחט קהה המחוברת למערכת עירוי Langendorff שונה במצב קצב זרימה קבוע. ללפף את הלב עם תמיסת טירודה מבעבעת חמצן ב 37 מעלות צלזיוס.
בתחילת הזליפה, ודא את cannulation אבי העורקים הנכון על ידי התבוננות שטיפת הדם מהלב במהלך שתיים עד שלוש פעימות הלב הראשונות ושינוי צבע הלב מאדום חיוור. התאם את קצב הזרימה כדי לשמור על לחץ הזלוף על 70 עד 80 מילימטרים של כספית. לאחר האישור, הניחו את האלקטרודות של מערכת א.ק.ג. של בעל חיים קטן סביב הלב על ידי הכנסתן לציפוי הסיליקון-אלסטומר בצלחת.
לאחר מכן, הקלט את האק"ג באמצעות תוכנה תואמת. לאחר מכן, לבצע גירוי קולטן adrenergic ו perfuse הלב עם איזופרוטארנול ותמיסת טיירוד. לאחר 10 דקות, בצע גירוי חשמלי מתוכנת כדי לגרום לטכיאריתמיות חדריות על ידי גירוי הלב בקצה עם שתי אלקטרודות פלטינה המחוברות לגירוי חשמלי.
התחל את הליך הגירוי עם 10 גירויים ראשוניים רצופים, S1, ואחריו גירוי נוסף, S2, עם מרווח ראשוני של 80 אלפיות השנייה. לאחר מכן, הפחת שוב ושוב את מרווח S2 בשתי אלפיות השנייה בכל פעם עד שלא ניתן עוד ללכוד את פעימות הלב או להגיע לתקופת העקשנות האפקטיבית של הלב, או ERP. עקוב אחר כל טכיאריתמיות חדריות המושרות, כולל טכיקרדיה חדרית ופרפור, על ידי אק"ג.
אם אין הפרעות קצב מושרות. הוסף גירוי נוסף, S3, לאחר S2, עם אותם פרמטרים עד להגעה ל- ERP. אם tachyarrhythmias חדרית עדיין לא המושרה, להפסיק את הגירוי החשמלי ולשקול את הלב לא inducible.
במהלך הגירוי החשמלי המתוכנת, הקצב המוצלח של הלב מאומת על ידי לכידה אחד לאחד של פעימות הלב במהלך גירויי S1 רצופים וקומפלקס ה- QRS הממושך במהלך קצב S1. גירויים אדרנרגיים וחשמליים משולבים אלה לא גרמו לשום טאכיאריתמיות חדריות בלבבות עכברים בריאים מסוג פרא המופעלים על ידי בושה, או בשליטה בלבבות חולדות המוזרקים על ידי אדנו-וירוס-GFP. לעומת זאת, אותו פרוטוקול גרם לטכיאריתמיות חדריות ב-77% מלבבות העכברים מסוג בר לאחר אוטם שריר הלב ובשלוש מתוך ארבע חולדות לאחר הזרקת Ad-Wnt3a.
בעת החדרת המחט, ודא כי קצה המחט מוטבע בתוך הקיר החופשי ולא בתוך החדר. כמו כן, אבטחה ושימורים של אבי העורקים של הלב הוא הצעד הקריטי ביותר. בעקבות הליכים אלה, לבבות יכולים לשמש למחקרים היסטולוגיים סטנדרטיים או למבחני ביולוגיה מולקולרית.
לחלופין, ניתן לבודד תאים חיים על מנת לבצע מחקרים אלקטרופיזיולוגיים חד-תאיים.
