يصف هذا البروتوكول نموذج تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني الناجم عن فوسفات الكالسيوم الثلاثي لدراسة السمات المرضية في الآليات الجزيئية لتمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني. يعد نموذج تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني الناجم عن فوسفات الكالسيوم نموذجا سريعا وفعالا من حيث التكلفة مقارنة بأنبوب الأنجيوتنسين ونماذج تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني الناجم عن الإيلاستاز. سيوضح الإجراء Zeyu Cai ، ما بعد الطبيب هنا ، زميل من مختبرنا.
للبدء في قطع شرائح بعرض 0.3 سم من القفازات المطاطية الخالية من المسحوق والشاش. ثم قم بشراء فئران C57BL6J Mayo التي يبلغ عمرها ثمانية إلى عشرة أسابيع ، وقم بإيواء الحيوانات في بيئة مكيفة الهواء مع دورة مظلمة خفيفة لمدة 12 ساعة وحرية الوصول إلى الطعام والماء. بعد ذلك ، قم بتعقيم الشاش ومسحات القطن والمقص والملقط قبل الجراحة ، واحصل على Betadine و 70٪ إيثانول وغسول اليدين المطهر.
حلق شعر البطن من الفأر المخدر باستخدام ماكينة قص كهربائية أو كريم إزالة الشعر. ثم مسحة ومسح المنطقة المحلوقة مع Betadine ، تليها 70 ٪ من الإيثانول عدة مرات في حركة دائرية. ثم قم بعمل شق حوالي 1.5 سم في أسفل البطن على طول خط الوسط من البطن باستخدام المقص.
باستخدام قطعة قطن معقمة مبللة بمحلول ملحي طبيعي ، قم بإزالة الأمعاء بعناية حتى يصبح الشريان الأورطي تحت الكلوي مرئيا. بعد ذلك ، قم بتشريح النسيج الضام والدهون من الشريان الأورطي تحت الكلوي لقسم يبلغ طوله حوالي 0.5 سم مع تجنب أي تمزق في الأوعية الصغيرة إلى الجانب الظهري. ثم قم بتعبئة قطعة من شريط القفازات المطاطية المبللة بالمحلول الملحي تحت الشريان الأورطي البطني والوريد الرئيسي البطني أثناء مسح السائل الزائد باستخدام قطعة قطن.
بعد ذلك ، قم بتعبئة قطعة من الشاش المنقوع ب 0.5 كلوريد الكالسيوم المولي على أدفنتيتيا الأوعية الدموية البطنية تحت الكلوية لمدة 10 دقائق. قم بإزالة الشاش وقم بتعبئة قطعة أخرى من الشاش المنقوع بمحلول PBS لمدة خمس دقائق لتوليد بلورات فوسفات الكالسيوم أورثو في C2 في ظهور الشريان الأورطي. ثم قم بإزالة شريط القفازات المطاطي والشاش بعناية.
بعد إعادة ضبط القناة المعوية للماوس ، قم بخياطة شق البطن والجلد بخياطة خمسة صفر. بعد ذلك ، ضع الماوس على وسادة التدفئة حتى يستعيد الماوس وعيه. ضع الفأر لمدة 14 يوما أخرى وراقب الماوس عن كثب بعد الجراحة وراقبه كل يوم على الأقل بعد ذلك.
بعد 14 يوما من الجراحة ، قم بقطع تجاويف الفأر الصدري والبطني الرحيم وافتح الأذين الأيمن. غزير الفئران مع العازلة PBS من خلال البطين الأيسر للقلب لإزالة الدم في الشريان الأورطي ومن ثم peruse مع 4٪ بارافورمالدهيد كما هو موضح في المخطوطة. قم بإزالة الأنسجة العرضية والدهون بعناية تحت مجهر ستيريو.
ثم حصاد الشريان الأورطي ووضعه في أنبوب يحتوي على خمسة ملليلتر من 4 ٪ بارافورمالدهيد لمدة 48 ساعة. ثم قم بتثبيت الشريان الأورطي على صفيحة شمعية سوداء مع إبر الحشرات وانتقل إلى الحصول على صور الأبهر. بعد 14 يوما من تطبيق أورثوفوسفات الكالسيوم ، تم تصوير مورفولوجيا الأبهر لتصور تكوين تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني.
لوحظ أن أورثوفوسفات الكالسيوم أدى إلى تمدد الشريان الأورطي البطني تحت الكلوي وأدى إلى تدهور كبير في الألياف المرنة كما يتضح من فواصل الإيلاستين. استخدام مسحة قطنية معقمة مبللة بمحلول ملحي عادي لإزالة الأمعاء حتى يصبح الشريان الأورطي تحت المرئي ثم استخراج النسيج الضام والدهون من الشريان الأورطي تحت الكلوي. بشكل عام ، يعد نموذج تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني الناجم عن فوسفورات الكالسيوم نهجا سريعا وفعالا من حيث التكلفة لاستكشاف الآليات الجزيئية والاستراتيجيات العلاجية لتمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني ويمكن تطبيقه بالتوازي مع النماذج الأخرى لتقليد ميزات تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني البشري بشكل كامل.
