Bu protokol, abdominal aort anevrizmasının moleküler mekanizmalarındaki patolojik özellikleri incelemek için kalsiyum fosfata bağlı abdominal aort anevrizması üçlü A fare modelini tanımlar. Kalsiyum fosfat kaynaklı abdominal aort anevrizması modeli, anjiyotensin tüpü ve elastaz kaynaklı abdominal aort anevrizması modellerine kıyasla hızlı ve uygun maliyetli bir modeldir. Prosedürü gösteren, burada doktora sonrası doktor, laboratuvarımızdan bir arkadaş olan Zeyu Cai olacak.
Başlamak için 0,3 santimetre genişliğinde pudrasız lastik eldiven ve gazlı bez şeritleri kesin. Daha sonra sekiz ila on haftalık C57BL6J Mayo fareleri satın alın ve hayvanları 12 saatlik açık karanlık döngü ve yiyecek ve suya ücretsiz erişim ile klimalı bir ortamda barındırın. Daha sonra, ameliyattan önce gazlı bez, pamuklu çubuklar, makas ve forseps otoklav yapın ve Betadine,% 70 etanol ve antiseptik el yıkama elde edin.
Anestezi uygulanan farenin karın kıllarını elektrikli kesme makinesi veya epilasyon kremi kullanarak tıraş edin. Daha sonra tıraş edilen bölgeyi Betadine ile silin ve silin, ardından dairesel bir hareketle birkaç kez% 70 etanol alın. Daha sonra makas kullanarak karnın orta çizgisi boyunca alt karın bölgesinde yaklaşık 1,5 santimetrelik bir kesi yapın.
Normal salin ile nemlendirilmiş steril bir pamuklu çubuk kullanarak, infrarenal aort görünene kadar bağırsağı dikkatlice çıkarın. Daha sonra, bağ dokusunu ve yağını infrarenal aorttan yaklaşık 0.5 santimetrelik bir bölüm boyunca diseke ederken, küçük damarlarda dorsal tarafa herhangi bir yırtılmayı önleyin. Ardından, pamuklu çubukla fazla sıvıyı silerken abdominal aort ve abdominal ana damarın altına tuzlu su batırılmış kauçuk eldiven şeridinin bir parçasını paketleyin.
Daha sonra, 10 dakika boyunca infrarenal abdominal vaskülatürün adventitisi üzerine 0.5 molar kalsiyum klorür ile ıslatılmış bir parça gazlı bez paketleyin. Gazlı bezi çıkarın ve aortun adventitisinde C2'de kalsiyum ortofosfat kristalleri üretmek için beş dakika boyunca PBS çözeltisi ile ıslatılmış başka bir gazlı bez parçası paketleyin. Ardından lastik eldiven şeridini ve gazlı bezi dikkatlice çıkarın.
Farenin bağırsak sistemini sıfırladıktan sonra, karın insizyonunu ve cildi beş sıfır dikişle dikin. Ardından, fare bilincini yeniden kazanana kadar fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin. Fareyi 14 gün daha bekletin ve ameliyattan sonra fareyi yakından izleyin ve daha sonra en az her gün gözlemleyin.
Ameliyattan 14 gün sonra, ötenazi fare torasik ve abdominal boşluklarını ventralal olarak kesin ve sağ atriyumu açın. PBS tamponlu fareleri aorttaki kanı çıkarmak için kalbin sol ventrikülünden bolca kullanın ve daha sonra makalede açıklandığı gibi% 4 paraformaldehit ile perfüze edin. Adventitial doku ve yağları stereo mikroskop altında dikkatlice çıkarın.
Daha sonra aortu hasat edin ve 48 saat boyunca beş mililitre% 4 paraformaldehit içeren bir tüpe yerleştirin. Daha sonra aortu böcek iğneleriyle siyah bir balmumu plakasına sabitleyin ve aort görüntüleri elde etmeye devam edin. 14 günlük kalsiyum ortofosfat uygulamasından sonra abdominal aort anevrizması oluşumunu görselleştirmek için aortların morfolojisi görüntülendi.
Kalsiyum ortofosfatın infrarenal abdominal aortun genişlemesine yol açtığı ve elastin kırılmaları ile gösterildiği gibi elastik liflerin dramatik bir şekilde bozulmasına neden olduğu gözlendi. İnfrarenal aort görünene kadar bağırsağı çıkarmak için normal salin ile nemlendirilmiş steril bir pamuklu çubuk kullanmak ve daha sonra bağ dokusunu ve yağını infrarenal aorttan çıkarmak. Genel olarak, kalsiyum fosforata bağlı fareler abdominal aort anevrizması modeli, abdominal aort anevrizmasının moleküler mekanizmalarını ve terapötik stratejilerini araştırmak için hızlı ve uygun maliyetli bir yaklaşımdır ve insan abdominal aort anevrizmasının özelliklerini tam olarak taklit etmek için diğer modellerle paralel olarak uygulanabilir.
