Este protocolo descreve o modelo de camundongo triplo A do aneurisma da aorta abdominal induzido por fosfato de cálcio para estudar as características patológicas nos mecanismos moleculares do aneurisma da aorta abdominal. O modelo de aneurisma da aorta abdominal induzido por fosfato de cálcio é um modelo rápido e custo-efetivo em comparação com os modelos de tubo de angiotensina e aneurisma da aorta abdominal induzido por elastase. Demonstrando o procedimento estará Zeyu Cai, pós-médico aqui, um colega do nosso laboratório.
Para começar, corte tiras de 0,3 centímetro de largura de luvas de borracha e gaze sem pó. Em seguida, compre de oito a dez semanas de idade com ratos C57BL6J Mayo e abrigue os animais em um ambiente com ar condicionado, com um ciclo escuro claro de 12 horas e acesso gratuito a comida e água. Em seguida, autoclave a gaze, cotonetes, tesouras e fórceps antes da cirurgia e obtenha Betadine, etanol a 70% e lavagem antisséptica das mãos.
Raspe os pelos abdominais do rato anestesiado usando um cortador elétrico ou creme de depilação. Em seguida, esfregue e limpe a área raspada com Betadine, seguido de etanol a 70% várias vezes em um movimento circular. Em seguida, faça uma incisão de aproximadamente 1,5 centímetro no abdômen inferior ao longo da linha média do abdômen usando uma tesoura.
Usando um cotonete estéril umedecido com solução salina normal, remova cuidadosamente o intestino até que a aorta infrarrenal esteja visível. Em seguida, disseque o tecido conjuntivo e a gordura da aorta infrarrenal por uma seção de aproximadamente 0,5 centímetro, evitando qualquer ruptura nos pequenos vasos para o lado dorsal. Em seguida, embale um pedaço da tira de luva de borracha embebida em solução salina sob a aorta abdominal e a veia principal abdominal enquanto limpa o excesso de líquido usando um cotonete.
Depois, embale um pedaço de gaze embebido com cloreto de cálcio 0,5 molar na adventícia da vasculatura abdominal infrarrenal por 10 minutos. Retire a gaze e embale outro pedaço de gaze embebido com solução de PBS por cinco minutos para gerar cristais de ortofosfato de cálcio em C2 na adventícia da aorta. Em seguida, remova cuidadosamente a tira de luva de borracha e a gaze.
Depois de redefinir o trato intestinal do rato, suture a incisão abdominal e a pele com uma sutura de cinco zero. Em seguida, coloque o mouse em uma almofada de aquecimento até que o mouse recupere a consciência. Abrigue o rato por mais 14 dias e monitore o rato de perto após a cirurgia e observe pelo menos todos os dias subsequentemente.
Após 14 dias da cirurgia, abra as cavidades torácica e abdominal do rato eutanasiado ventralmente e abra o átrio direito. Profuse os camundongos com tampão PBS através do ventrículo esquerdo do coração para remover o sangue na aorta e, em seguida, perfundir com 4% de paraformaldeído, conforme descrito no manuscrito. Remova o tecido adventício e a gordura cuidadosamente sob um microscópio estéreo.
Em seguida, colha a aorta e coloque-a em um tubo contendo cinco mililitros de paraformaldeído a 4% por 48 horas. Em seguida, prenda a aorta em uma placa de cera preta com agulhas de insetos e prossiga para adquirir imagens da aorta. Após 14 dias de aplicação do ortofosfato de cálcio, a morfologia das aortas foi fotografada para visualizar a formação do aneurisma da aorta abdominal.
Observou-se que o ortofosfato de cálcio levou à dilatação da aorta abdominal infrarrenal e resultou em uma degradação dramática das fibras elásticas, como ilustrado pelas quebras de elastina. Usando um cotonete estéril umedecido com solução salina normal para remover o intestino até que a aorta infrarrenal seja visível e, em seguida, extraindo o tecido conjuntivo e a gordura da aorta infrarrenal. No geral, o modelo de aneurisma da aorta abdominal induzido por fósforo de cálcio em camundongos é uma abordagem rápida e econômica para explorar mecanismos moleculares e as estratégias terapêuticas do aneurisma da aorta abdominal e poderia ser aplicado em paralelo com os outros modelos para imitar totalmente as características do aneurisma da aorta abdominal humana.
