Этот протокол описывает индуцированную фосфатом кальция аневризму брюшной аорты тройной А мышиной модели для изучения патологических особенностей в молекулярных механизмах аневризмы брюшной аорты. Модель аневризмы брюшной аорты, индуцированная фосфатом кальция, является быстрой и экономически эффективной моделью по сравнению с моделями аневризмы брюшной аорты, индуцированной эластазой. Демонстрировать процедуру будет Зэю Кай, пост-врач здесь, сотрудник из нашей лаборатории.
Для начала нарежьте полоски шириной 0,3 сантиметра из свободных от порошка резиновых перчаток и марли. Затем купите восьми-десятинедельных мышей C57BL6J Mayo и поместите животных в кондиционированную среду с 12-часовым световым темным циклом и свободным доступом к пище и воде. Затем автоклавируйте марлю, ватные тампоны, ножницы и щипцы перед операцией и получите бетадин, 70% этанол и антисептическое средство для мытья рук.
Сбрить волосы в животе анестезированной мыши с помощью электрической машинки для стрижки или крема для удаления волос. Затем смажьте и протрите выбритый участок бетадином, а затем 70% этанолом несколько раз круговыми движениями. Затем сделайте примерно 1,5-сантиметровый разрез внизу живота по средней линии живота с помощью ножниц.
Используя стерильный ватный тампон, смоченный нормальным физиологическим раствором, осторожно удалите кишечник до тех пор, пока не будет видна инфраренальная аорта. Затем рассекните соединительную ткань и жир от инфраренальной аорты на участок примерно на 0,5 сантиметра, избегая при этом любого разрыва мелких сосудов до спинной стороны. Затем упакуйте кусочек пропитанной физиологическим раствором резиновой перчаточной полоски под брюшную аорту и брюшную основную вену, вытирая лишнюю жидкость с помощью ватного тампона.
После этого упакуйте кусочек марли, пропитанный 0,5 молярным хлоридом кальция на адвентиции инфраренальной брюшной сосудистой системы в течение 10 минут. Снимите марлю и упакуйте еще один кусочек марли, пропитанный раствором PBS, в течение пяти минут, чтобы получить кристаллы ортофосфата кальция в C2 в адвентиции аорты. Затем аккуратно снимите резиновую полоску перчатки и марлю.
После сброса кишечного тракта мыши зашить брюшной разрез и кожу пятинулевым швом. Далее поместите мышь на грелку, пока мышь не придет в сознание. Размещайте мышь еще 14 дней и внимательно следите за мышью после операции и наблюдайте, по крайней мере, каждый день впоследствии.
После 14 дней операции разрезайте усыпленную грудную и брюшную полости мыши вентрально и разрезайте правое предсердие. Обижают мышей буфером PBS через левый желудочек сердца, чтобы удалить кровь в аорте, а затем перфузируют с 4% параформальдегидом, как описано в рукописи. Аккуратно удалите адвентициальную ткань и жир под стереомикроскопом.
Затем собирают аорту и помещают ее в трубку, содержащую пять миллилитров 4% параформальдегида в течение 48 часов. Затем прикрепите аорту к черной восковой пластине с помощью игл насекомых и приступайте к получению изображений аорты. После 14 дней применения ортофосфата кальция была изображена морфология аорты для визуализации формирования аневризмы брюшной аорты.
Было отмечено, что ортофосфат кальция приводит к расширению инфраренальной брюшной аорты и приводит к резкой деградации эластических волокон, о чем свидетельствуют разрывы эластина. Использование стерильного ватного тампона, смоченного нормальным физиологическим раствором, для удаления кишечника до тех пор, пока не будет видна инфраренальная аорта, а затем извлечение соединительной ткани и жира из инфраренальной аорты. В целом, модель аневризмы брюшной аорты, индуцированная фосфоратом кальция, является быстрым и экономически эффективным подходом к изучению молекулярных механизмов и терапевтических стратегий аневризмы брюшной аорты и может применяться параллельно с другими моделями для полной имитации особенностей аневризмы брюшной аорты человека.
