Ce protocole décrit le modèle murin d’anévrisme de l’aorte abdominale triple A induit par le phosphate de calcium pour étudier les caractéristiques pathologiques des mécanismes moléculaires de l’anévrisme de l’aorte abdominale. Le modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale induit par le phosphate de calcium est un modèle rapide et rentable par rapport au tube d’angiotensine et aux modèles d’anévrisme de l’aorte abdominale induite par l’élastase. La démonstration de la procédure sera Zeyu Cai, post-médecin ici, un membre de notre laboratoire.
Pour commencer, coupez des bandes de 0,3 centimètre de large de gants en caoutchouc sans poudre et de gaze. Ensuite, achetez des souris C57BL6J Mayo âgées de huit à dix semaines et hébergez les animaux dans un environnement climatisé avec un cycle d’obscurité légère de 12 heures et un accès gratuit à la nourriture et à l’eau. Ensuite, autoclavez la gaze, les cotons-tiges, les ciseaux et les forceps avant la chirurgie, et obtenez de la bétadine, de l’éthanol à 70% et un lavage antiseptique des mains.
Rasez les poils abdominaux de la souris anesthésiée à l’aide d’une tondeuse électrique ou d’une crème dépilatoire. Ensuite, écouvillonnez et essuyez la zone rasée avec de la bétadine, suivie de 70% d’éthanol plusieurs fois dans un mouvement circulaire. Ensuite, faites une incision d’environ 1,5 centimètre au bas de l’abdomen le long de la ligne médiane de l’abdomen à l’aide de ciseaux.
À l’aide d’un coton-tige stérile humidifié avec une solution saline normale, retirez délicatement l’intestin jusqu’à ce que l’aorte infrarénale soit visible. Ensuite, disséquez le tissu conjonctif et la graisse de l’aorte infrarénale sur une section d’environ 0,5 centimètre tout en évitant toute déchirure dans les petits vaisseaux du côté dorsal. Ensuite, emballez un morceau de la bande de gants en caoutchouc imbibée de solution saline sous l’aorte abdominale et la veine principale abdominale tout en essuyant l’excès de liquide à l’aide d’un coton-tige.
Ensuite, emballez un morceau de gaze imbibé de chlorure de calcium 0,5 molaire sur l’adventice du système vasculaire abdominal infrarénal pendant 10 minutes. Retirez la gaze et emballez un autre morceau de gaze imbibé de solution de PBS pendant cinq minutes pour générer des cristaux d’orthophosphate de calcium en C2 dans l’adventice de l’aorte. Ensuite, retirez délicatement la bande de gants en caoutchouc et la gaze.
Après avoir réinitialisé le tractus intestinal de la souris, suturez l’incision abdominale et la peau avec une suture cinq zéro. Ensuite, placez la souris sur un coussin chauffant jusqu’à ce qu’elle reprenne conscience. Hébergez la souris pendant encore 14 jours et surveillez-la de près après la chirurgie et observez-la au moins tous les jours par la suite.
Après 14 jours de chirurgie, ouvrez les cavités thoracique et abdominale de la souris euthanasiée ventralement et ouvrez l’oreillette droite. Analysez les souris avec un tampon PBS à travers le ventricule gauche du cœur pour éliminer le sang dans l’aorte, puis perfuse avec 4% de paraformaldéhyde comme décrit dans le manuscrit. Retirez soigneusement le tissu adventice et la graisse au microscope.
Ensuite, récoltez l’aorte et placez-la dans un tube contenant cinq millilitres de paraformaldéhyde à 4% pendant 48 heures. Ensuite, épinglez l’aorte sur une plaque de cire noire avec des aiguilles d’insectes et procédez à l’acquisition d’images aortiques. Après 14 jours d’application d’orthophosphate de calcium, la morphologie des aortes a été imagée pour visualiser la formation d’anévrisme de l’aorte abdominale.
Il a été observé que l’orthophosphate de calcium entraînait une dilatation de l’aorte abdominale infrarénale et entraînait une dégradation spectaculaire des fibres élastiques, comme l’illustrent les cassures de l’élastine. Utiliser un coton-tige stérile humidifié avec une solution saline normale pour enlever l’intestin jusqu’à ce que l’aorte infrarénale soit visible, puis extraire le tissu conjonctif et la graisse de l’aorte infrarénale. Dans l’ensemble, le modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale induit par le phosphorate de calcium est une approche rapide et rentable pour explorer les mécanismes moléculaires et les stratégies thérapeutiques de l’anévrisme de l’aorte abdominale et pourrait être appliqué en parallèle avec les autres modèles pour imiter pleinement les caractéristiques de l’anévrisme de l’aorte abdominale humaine.
