Dieses Protokoll beschreibt das Calciumphosphat-induzierte Bauchaortenaneurysma Triple-A-Mausmodell, um die pathologischen Merkmale in den molekularen Mechanismen des Bauchaortenaneurysmas zu untersuchen. Das Calciumphosphat-induzierte Bauchaortenaneurysma-Modell ist ein schnelles und kostengünstiges Modell im Vergleich zu den Modellen der Angiotensin-Röhre und der Elastase-induzierten Bauchaortenaneurysma. Zeyu Cai, Postdoktor hier, ein Mitarbeiter aus unserem Labor, demonstriert das Verfahren.
Zu Beginn schneiden Sie 0,3 Zentimeter breite Streifen aus puderfreien Gummihandschuhen und Gaze. Dann kaufen Sie acht bis zehn Wochen alte C57BL6J Mayo-Mäuse und beherbergen die Tiere in einer klimatisierten Umgebung mit einem 12-stündigen hellen Dunkelzyklus und freiem Zugang zu Nahrung und Wasser. Als nächstes autoklavieren Sie die Gaze, Wattestäbchen, Schere und Pinzette vor der Operation und erhalten Betadin, 70% Ethanol und antiseptische Handwäsche.
Rasieren Sie die Bauchhaare der betäubten Maus mit einem elektrischen Haarschneider oder einer Haarentfernungscreme. Dann tupfen und wischen Sie den rasierten Bereich mit Betadin ab, gefolgt von 70% Ethanol mehrmals in kreisenden Bewegungen. Machen Sie dann einen etwa 1,5 Zentimeter großen Schnitt am Unterbauch entlang der Mittellinie des Bauches mit einer Schere.
Entfernen Sie den Darm vorsichtig mit einem sterilen Wattestäbchen, das mit normaler Kochsalzlösung angefeuchtet ist, bis die infrarenale Aorta sichtbar ist. Als nächstes sezieren Sie das Bindegewebe und das Fett aus der infrarenalen Aorta für einen etwa 0,5 Zentimeter großen Abschnitt und vermeiden Sie ein Reißen in den kleinen Gefäßen zur dorsalen Seite. Dann packen Sie ein Stück des salzgetränkten Gummihandschuhstreifens unter die Bauchaorta und die Bauchhauptvene, während Sie überschüssige Flüssigkeit mit einem Wattestäbchen abwischen.
Danach packen Sie ein Stück Gaze, das mit 0,5 molärem Calciumchlorid getränkt ist, für 10 Minuten auf die Adventitia des infrarenalen Bauchgefäßsystems. Entfernen Sie die Gaze und packen Sie ein weiteres Stück Gaze, das mit PBS-Lösung getränkt ist, für fünf Minuten ein, um Kalziumorthophosphatkristalle in C2 in den Adventitien der Aorta zu erzeugen. Entfernen Sie dann vorsichtig den Gummihandschuhstreifen und die Gaze.
Nach dem Zurücksetzen des Darmtraktes der Maus den Bauchschnitt und die Haut mit einer Fünf-Null-Naht nähen. Als nächstes legen Sie die Maus auf ein Heizkissen, bis die Maus wieder zu Bewusstsein kommt. Beherbergen Sie die Maus für weitere 14 Tage und überwachen Sie die Maus nach der Operation genau und beobachten Sie sie mindestens jeden Tag anschließend.
Nach 14 Tagen der Operation schneiden Sie die eingeschläferten Brust- und Bauchhöhlen der Maus ventral auf und schneiden Sie den rechten Vorhof auf. Überladen Sie die Mäuse mit PBS-Puffer durch den linken Ventrikel des Herzens, um Blut in der Aorta zu entfernen, und perfusionieren Sie dann mit 4% Paraformaldehyd, wie im Manuskript beschrieben. Entfernen Sie Adventivgewebe und Fett vorsichtig unter einem Stereomikroskop.
Dann ernten Sie die Aorta und legen Sie sie für 48 Stunden in ein Röhrchen mit fünf Milliliter 4% Paraformaldehyd. Dann stecken Sie die Aorta mit Insektennadeln auf eine schwarze Wachsplatte und machen Sie Aortenbilder. Nach 14 Tagen Calciumorthophosphat-Applikation wurde die Morphologie der Aorten abgebildet, um die Bildung eines Bauchaortenaneurysmas sichtbar zu machen.
Es wurde beobachtet, dass Calciumorthophosphat zu einer Erweiterung der infrarenalen Bauchaorta führte und zu einem dramatischen Abbau elastischer Fasern führte, wie durch Elastinbrüche veranschaulicht. Mit einem sterilen, mit normaler Kochsalzlösung angefeuchteten Wattestäbchen den Darm entfernen, bis die infrarenale Aorta sichtbar ist, und dann das Bindegewebe und das Fett aus der infrarenalen Aorta extrahieren. Insgesamt ist das Calciumphosphorat-induzierte Maus-Bauchaortenaneurysma-Modell ein schneller und kostengünstiger Ansatz zur Erforschung molekularer Mechanismen und der therapeutischen Strategien des Bauchaortenaneurysmas und könnte parallel zu den anderen Modellen angewendet werden, um die Merkmale des menschlichen Bauchaortenaneurysmas vollständig zu imitieren.
