Este protocolo describe el modelo de ratón triple A de aneurisma aórtico abdominal inducido por fosfato de calcio para estudiar las características patológicas en los mecanismos moleculares del aneurisma aórtico abdominal. El modelo de aneurisma aórtico abdominal inducido por fosfato de calcio es un modelo rápido y rentable en comparación con el tubo de angiotensina y los modelos de aneurisma aórtico abdominal inducido por elastasa. Demostrando el procedimiento estará Zeyu Cai, post-doctor aquí, un compañero de nuestro laboratorio.
Para empezar, corte tiras de 0,3 centímetros de ancho de guantes de goma sin polvo y gasa. Luego compre ratones Mayo C57BL6J de ocho a diez semanas de edad, y aloje a los animales en un ambiente con aire acondicionado con un ciclo de oscuridad clara de 12 horas y acceso gratuito a alimentos y agua. A continuación, autoclave la gasa, los hisopos de algodón, las tijeras y los fórceps antes de la cirugía, y obtenga Betadine, etanol al 70% y lavado de manos antiséptico.
Afeitar el vello abdominal del ratón anestesiado con un cortapelos eléctrico o crema depilatoria. Luego frote y limpie el área afeitada con Betadine, seguido de etanol al 70% varias veces con un movimiento circular. Luego haga una incisión de aproximadamente 1,5 centímetros en la parte inferior del abdomen a lo largo de la línea media del abdomen con tijeras.
Usando un hisopo de algodón estéril humedecido con solución salina normal, retire cuidadosamente el intestino hasta que la aorta infrarrenal sea visible. A continuación, diseccione el tejido conectivo y la grasa de la aorta infrarrenal durante una sección de aproximadamente 0,5 centímetros mientras evita cualquier desgarro en los vasos pequeños del lado dorsal. Luego, empaque un trozo de la tira de guante de goma empapada en solución salina debajo de la aorta abdominal y la vena principal abdominal mientras limpia el exceso de líquido con un hisopo de algodón.
Después, empaque un trozo de gasa empapado con cloruro de calcio molar 0.5 en la adventicia de la vasculatura abdominal infrarrenal durante 10 minutos. Retire la gasa y empaque otra pieza de gasa empapada con solución de PBS durante cinco minutos para generar cristales de ortofosfato de calcio en C2 en la adventicia de la aorta. Luego retire con cuidado la tira del guante de goma y la gasa.
Después de restablecer el tracto intestinal del ratón, suture la incisión abdominal y la piel con una sutura de cinco ceros. A continuación, coloque el mouse en una almohadilla térmica hasta que el mouse recupere la conciencia. Aloje al ratón durante otros 14 días y monitoree el ratón de cerca después de la cirugía y observe al menos todos los días posteriormente.
Después de 14 días de la cirugía, abra ventralmente las cavidades torácicas y abdominales del ratón sacrificado y abra la aurícula derecha. Profundir a los ratones con tampón PBS a través del ventrículo izquierdo del corazón para eliminar la sangre en la aorta y luego perfundir con paraformaldehído al 4% como se describe en el manuscrito. Retire el tejido adventicio y la grasa cuidadosamente bajo un microscopio estéreo.
Luego cosecha la aorta y colócala en un tubo que contenga cinco mililitros de paraformaldehído al 4% durante 48 horas. Luego fije la aorta en una placa de cera negra con agujas de insectos y proceda a adquirir imágenes aórticas. Después de 14 días de aplicación de ortofosfato de calcio, se obtuvo una imagen de la morfología de las aortas para visualizar la formación de aneurismas aórticos abdominales.
Se observó que el ortofosfato de calcio condujo a la dilatación de la aorta abdominal infrarrenal y dio lugar a una degradación dramática de las fibras elásticas como se ilustra por las roturas de elastina. Usar un hisopo de algodón estéril humedecido con solución salina normal para extraer el intestino hasta que la aorta infrarrenal sea visible y luego extraer el tejido conectivo y la grasa de la aorta infrarrenal. En general, el modelo de aneurisma aórtico abdominal inducido por fosforato de calcio en ratones es un enfoque rápido y rentable para explorar los mecanismos moleculares y las estrategias terapéuticas del aneurisma aórtico abdominal y podría aplicarse en paralelo con los otros modelos para imitar completamente las características del aneurisma aórtico abdominal humano.
